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猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的克隆及原核表达 被引量：3
1
作者 赵光辉 王秋霞 +6 位作者 鲁琨 张改平 宁长申 王选年 张龙现 菅复春 宋海涛 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第10期749-753,共5页
目的研究猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的克隆及原核表达。方法利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴中扩增排泄分泌抗原M13h蛋白去除信号肽序列的基因,对其进行序列分析,并亚克隆至原核表达载体pET43a上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导重... 目的研究猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的克隆及原核表达。方法利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴中扩增排泄分泌抗原M13h蛋白去除信号肽序列的基因,对其进行序列分析,并亚克隆至原核表达载体pET43a上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组菌株表达融合蛋白,并用Western blot对纯化后的融合蛋白进行鉴定。结果从猪囊尾蚴中克隆到去除信号肽序列的M13h的基因,其序列长度为204 bp,包含198 bp的编码区,与GenBank中西班牙分离株的核苷酸和氨基酸序列的同源性均为100%,与韩国的M13h蛋白的核苷酸与氨基酸序列同源性分别为95.7%和95.3%;经SDS-PAGE电泳鉴定,重组质粒表达产物分子质量单位约74 ku,其中M13h基因表达蛋白的分子质量单位为7.87 ku,与预期结果一致;经Western blot检测,纯化后的复性蛋白质可与兔抗全囊囊尾蚴血清发生特异性反应。结论pET43M13h重组质粒表达产物具有较高的保守性和特异性,可用于猪囊尾蚴病的免疫诊断。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 m13h 克隆 原核表达
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基于猪囊尾蚴M13h蛋白的ELISA方法的优化 被引量：1
2
作者 王秋霞 马景周 +2 位作者 宁长申 张龙现 菅复春 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期72-76,共5页
利用纯化的猪囊尾蚴重组蛋白M13h作为抗原包被酶标板,通过棋盘滴定方法筛选最佳反应条件,初步建立了猪囊尾蚴病间接ELISA检测方法。确定最佳包被量为1μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,酶标二抗的稀释倍数为1∶1 000,二者的作用时... 利用纯化的猪囊尾蚴重组蛋白M13h作为抗原包被酶标板,通过棋盘滴定方法筛选最佳反应条件,初步建立了猪囊尾蚴病间接ELISA检测方法。确定最佳包被量为1μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,酶标二抗的稀释倍数为1∶1 000,二者的作用时间均为45 min;与猪弓形虫病、猪旋毛虫病、细颈囊尾蚴病、猪蛔虫病、包虫病阳性血清均不发生反应,且具有较好的重复性。为囊虫病的流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 m13h蛋白 间接ELISA
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猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h蛋白原核表达条件的优化
3
作者 王秋霞 鲁琨 +4 位作者 张改平 宁长申 赵光辉 张丽萍 冯丽丽 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第12期7-9,共3页
为了提高猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ES Ag)M13h蛋白基因在大肠杆菌中的表达量,试验研究了培养基、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对pET32a-M13h融合蛋白表达量的影响。结果:使用TB培养基于37℃培养3 h后,采用终浓度为0.4... 为了提高猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ES Ag)M13h蛋白基因在大肠杆菌中的表达量,试验研究了培养基、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对pET32a-M13h融合蛋白表达量的影响。结果:使用TB培养基于37℃培养3 h后,采用终浓度为0.4 mmol/L的IPTG在37℃、100 r/min诱导培养4小时时,pET32a-M13h融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-M13h融合蛋白的分子质量与预计大小一致,约为30 ku;Western-blot检测结果表明pET32a-M13h融合蛋白能与猪囊尾蚴多克隆抗体发生特异性反应。 展开更多
关键词 排泄分泌抗原 m13h蛋白 原核表达
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热疲劳对B/M复相H13钢组织及力学性能的影响 被引量：2
4
作者 李洋城 程晓农 +3 位作者 罗锐 韦家波 张洁 高天明 《金属热处理》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期17-21,共5页
为提高其热疲劳性能,对H13钢进行了贝氏体-马氏体(B/M)复相热处理,使其得到了由回火索氏体和贝氏体组成的复相组织。利用OM、SEM、TEM、洛氏硬度计、万能拉伸试验机等设备研究了热疲劳对B/M复相H13钢微观组织、碳化物及力学性能的影响... 为提高其热疲劳性能,对H13钢进行了贝氏体-马氏体(B/M)复相热处理,使其得到了由回火索氏体和贝氏体组成的复相组织。利用OM、SEM、TEM、洛氏硬度计、万能拉伸试验机等设备研究了热疲劳对B/M复相H13钢微观组织、碳化物及力学性能的影响。结果表明:较传统H13钢硬度随疲劳次数增加而迅速降低的现象,B/M复相H13钢的硬度随疲劳次数的增加呈先下降后上升再下降的趋势。拉伸试验表明,较传统H13钢,B/M复相H13钢的强塑性配合更加优异,且在热疲劳后,其断面收缩率反而有所增大。通过显微组织观察发现力学性能变化的主要原因是B/M复相H13钢在热疲劳过程中存在贝氏体板条合并及碳化物析出并长大粗化的行为。 展开更多
关键词 B/M复相H13钢 热疲劳 碳化物 力学性能
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