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靶向不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6重组M13噬菌体疫苗的构建及其免疫效果评价
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作者 王财 常月立 +4 位作者 胡楠 李唯峰 赵子红 安晶 张玉妥 《中国生物制品学杂志》 2025年第2期129-136,142,共9页
目的构建靶向不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6的重组M13噬菌体疫苗,并评价其免疫原性,以期为NTHi疫苗的进一步研发提供新思路。方法通过基因重组技术将NTHi外模蛋白P6基因整合至载体pMECS Pha... 目的构建靶向不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6的重组M13噬菌体疫苗,并评价其免疫原性,以期为NTHi疫苗的进一步研发提供新思路。方法通过基因重组技术将NTHi外模蛋白P6基因整合至载体pMECS Phagemid,获得重组P6-M13噬菌体单克隆,经包装及纯化后,制备为重组P6-M13噬菌体疫苗。Western blot法检测疫苗中P6-M13 PⅢ融合蛋白的表达情况,双层琼脂平板法测定疫苗滴度,透射电镜下观察重组P6-M13噬菌体形态。将90只5周龄BALB/c雌性小鼠随机分为PBS、M13噬菌体、重组P6-M13噬菌体疫苗组,每组30只,分别于0、14、28 d经腹腔注射PBS(500μL/只)、M13噬菌体[1×10^(12)pfu/(500μL·只)]、重组P6-M13噬菌体疫苗[1×10^(12)pfu/(500μL·只)]。末次免疫2周后,ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG水平及脾淋巴细胞培养上清中IFNγ、IL-2、IL-4、IL-5和IL-17A水平,CCK-8法分析脾淋巴细胞的增殖情况;末次免疫3周后,用1.5×108cfu/mL NTHi经小鼠鼻腔进行攻毒,攻毒1周后,HE染色法观察小鼠鼻黏膜和肺组织病理变化;末次免疫4周后,称量小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏质量,计算脏器系数,并制备组织病理切片,进行病理学观察。结果制备的重组P6-M13噬菌体疫苗可正确表达P6-M13 PⅢ融合蛋白,滴度为5.5×10^(14)pfu/mL,镜下观察可见形态规则的重组P6-M13噬菌体。与M13噬菌体及PBS组比较,重组P6-M13噬菌体疫苗组小鼠血清特异性抗体IgG水平显著升高(F=71.489,P<0.05);脾细胞分泌IFNγ、IL-2、IL-4、IL-5水平明显降低(F分别为8.315、16.986、39.204、6.291,P均<0.05),3组间IL-17水平差异无统计学意义(F=0.863,P>0.05);脾细胞刺激指数明显升高(F=22.952,P<0.05)。攻毒后,PBS和M13噬菌体组小鼠鼻黏膜及肺组织结构严重受损,炎性细胞增多;重组P6-M13噬菌体疫苗组小鼠鼻黏膜及肺组织结构正常,少见炎性细胞。各组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏脏器系数差异均无统计学意义(F分别为1.012、1.642、0.300、2.079、0.405,P均>0.05),主要脏器大体形态色泽及病理切片检查均未发现病理改变。结论构建的靶向NTHi外膜蛋白P6的重组P6-M13噬菌体疫苗在小鼠体内可引起有效的体液免疫和细胞免疫应答,具有一定的免疫保护能力及良好的安全性。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 外膜蛋白P6 噬菌体展示技术 m13噬菌体疫苗 免疫原性
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功能化M13噬菌体在食品安全检测中的应用研究进展 被引量:1
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作者 马小勇 余丽萍 +2 位作者 姜颖 熊颖 任佳丽 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第19期165-172,共8页
食品中各类风险因子是威胁其安全性的主要因素,构筑生物传感方法快速检测各类风险因子对保障食品安全至关重要。M13噬菌体是一种特异性识别、浸染大肠杆菌的病毒,与抗体、功能核酸、分子印记聚合物等识别元件相比,噬菌体更易获得、性质... 食品中各类风险因子是威胁其安全性的主要因素,构筑生物传感方法快速检测各类风险因子对保障食品安全至关重要。M13噬菌体是一种特异性识别、浸染大肠杆菌的病毒,与抗体、功能核酸、分子印记聚合物等识别元件相比,噬菌体更易获得、性质稳定、耐受性强。通过基因或化学修饰对M13噬菌体进行功能化修饰,赋予其生物识别和信号传输双重功能,用以构筑各种生物传感器平台,具有操作简单、检测时间短、特异性好以及灵敏度高等优点,在食品安全检测中具有重要的应用价值。因此,本文综述了M13噬菌体的功能化方法,介绍了功能化的M13噬菌体检测食品样品中各类风险因子(食源性致病微生物、真菌孢子、过敏原、真菌毒素、农药残留等)的最新研究进展(2019年—至今),并展望了以M13噬菌体为代表的功能化噬菌体应用在食品安全领域的发展趋势,将为拓展M13噬菌体在食品安全领域的应用提供理论参考价值。 展开更多
关键词 食品安全检测 m13噬菌体 基因修饰 化学修饰
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兔抗M13噬菌体酶标抗体的制备 被引量:3
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作者 胡巍 刘文 宋晓国 《淄博学院学报(自然科学与工程版)》 2002年第4期9-11,共3页
M13噬菌体已被广泛地应用于噬菌体展示技术.M13的酶标抗体,是在噬菌体展示技术筛选结果ELISA检测中不可缺少的试剂.我们制备了兔抗M13抗血清,其效价高于1:6000;经两步饱和硫酸铵沉淀,初步纯化了兔抗M13抗体;用过碘酸钠法对抗体进行了辣... M13噬菌体已被广泛地应用于噬菌体展示技术.M13的酶标抗体,是在噬菌体展示技术筛选结果ELISA检测中不可缺少的试剂.我们制备了兔抗M13抗血清,其效价高于1:6000;经两步饱和硫酸铵沉淀,初步纯化了兔抗M13抗体;用过碘酸钠法对抗体进行了辣根过氧化酶的标记,酶标记抗体活性为1:6400. 展开更多
关键词 m13噬菌体 酶标抗体 辣根过氧化酶 制备 兔抗m13抗体
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湖北枣阳郭家庙墓地曹门湾墓区(2014)M10、M13、M22发掘简报 被引量:17
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作者 张天宇 姜波 +18 位作者 刘小华 耿壮壮 李凯 邓蔚蓝 黄文广 王茂文 余乐 胡刚 余成龙 符德明 曾令斌 张丙舟 刘娜 陈丽莹 魏付丽 熊燕 余霜 凡国栋 方勤 《江汉考古》 CSSCI 北大核心 2016年第5期13-35,共23页
2014年10月至2015年1月,湖北省文物考古研究所、湖北荆州文物保护中心等单位组成联合考古队,对湖北枣阳郭家庙墓地曹门湾墓区进行了发掘,清理春秋早期墓葬二十五座、车坑一座、马坑二座、车马坑一座,通过发掘确认曹门湾墓区是春秋早期... 2014年10月至2015年1月,湖北省文物考古研究所、湖北荆州文物保护中心等单位组成联合考古队,对湖北枣阳郭家庙墓地曹门湾墓区进行了发掘,清理春秋早期墓葬二十五座、车坑一座、马坑二座、车马坑一座,通过发掘确认曹门湾墓区是春秋早期曾国墓地,其中,曹门湾M10、M13、M22保存完整,本简报将主要报道这三座墓葬的发掘情况。 展开更多
关键词 郭家庙 曹门湾 曾国 M10 m13 M22 春秋早期
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利用TP-M13-SSR标记构建苹果栽培品种的分子身份证 被引量:23
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作者 高源 王昆 +3 位作者 王大江 龚欣 刘立军 刘凤之 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期25-37,共13页
以国家果树种质兴城梨、苹果圃保存的314份来自19个国家的苹果栽培品种为试材,利用TP-M13-SSR标记,基于TP-M13-SSR指纹图谱构建苹果种质分子身份证。16对SSR引物在供试种质间共检测出等位基因357个,平均每对引物检测到22.3个。根据引物... 以国家果树种质兴城梨、苹果圃保存的314份来自19个国家的苹果栽培品种为试材,利用TP-M13-SSR标记,基于TP-M13-SSR指纹图谱构建苹果种质分子身份证。16对SSR引物在供试种质间共检测出等位基因357个,平均每对引物检测到22.3个。根据引物扩增等位基因数和Shannon’s指数,从1对引物开始逐步增加引物数量筛选可将供试材料全部区分的引物组合,最终确定6对核心引物可以区分全部供试苹果种质。基于供试苹果种质在6个SSR位点的指纹图谱,将等位基因编码成字符串获得分子身份证,利用条码技术其进一步转化成可被机器快速扫描的条码分子身份证,使每份种质具有可辨的分子身份证,达到利用最少、最特异引物区分最多苹果种质的目的。 展开更多
关键词 苹果 栽培品种 TP-m13-SSR 指纹图谱 分子身份证
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应用TP-M13-SSR技术鉴定苹果品种 被引量:15
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作者 高源 王昆 +2 位作者 田路明 曹玉芬 刘凤之 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期833-837,共5页
研究利用在SSR扩增产物检测过程中的一种基于荧光测序技术的高通量低成本分析技术体系TP-M13-SSR(simple sequence repeat with tailed primer M13)对苹果种质资源的26份材料进行了SSR标记的鉴定,5对引物共获得52个等位基因,平均10.4个... 研究利用在SSR扩增产物检测过程中的一种基于荧光测序技术的高通量低成本分析技术体系TP-M13-SSR(simple sequence repeat with tailed primer M13)对苹果种质资源的26份材料进行了SSR标记的鉴定,5对引物共获得52个等位基因,平均10.4个。引物对CH04h02可区分全部的供试品种,5对引物多态性好。26份材料5个SSR位点的遗传多样性、多态性信息含量和位点杂合度的变化为0.6620~0.9149、0.6326~0.9086和0.6538~1.0000。这种方法具有经济、灵敏、高效等优点,在苹果品种鉴定中得到成功应用。 展开更多
关键词 苹果 TP—m13-SSR 品种鉴定
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适宜加工用苹果品种TP-M13-SSR指纹图谱构建及遗传关系分析 被引量:11
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作者 高源 王昆 +4 位作者 刘凤之 聂继云 王大江 龚欣 刘立军 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期946-956,共11页
采用TP-M13-SSR荧光标记方法,构建19个适宜加工脆片和25个适宜制汁的苹果品种在11个SSR位点的指纹图谱,并通过聚类分析研究其遗传关系。仅利用两对引物CH04h02和CH05d04即可区分44个供试品种,各品种的TP-M13-SSR指纹图谱互不相同。构建... 采用TP-M13-SSR荧光标记方法,构建19个适宜加工脆片和25个适宜制汁的苹果品种在11个SSR位点的指纹图谱,并通过聚类分析研究其遗传关系。仅利用两对引物CH04h02和CH05d04即可区分44个供试品种,各品种的TP-M13-SSR指纹图谱互不相同。构建的适宜加工苹果品种的SSR指纹图谱可以作为品种特异指纹图谱为品种鉴别提供重要依据。44个苹果品种的相似系数在0.7259~0.9704之间,在相似系数0.798处划分供试品种,除瑞光、马空、红月、蜜脆、珍宝、赤阳和短枝金冠,其余适宜制汁的品种均聚到了一起,而适宜加工脆片的品种聚类比较分散。适宜加工苹果品种遗传基础广泛,适宜加工特性与亲本相关。在制订和完善制汁用和加工脆片用苹果品质评价体系时,需要兼顾遗传关系与加工特性的相关性。金冠、红玉、国光、富士和元帅等为较好的加工苹果品种的育种亲本,应加强育种利用。 展开更多
关键词 苹果 加工品种 TP-m13-SSR 指纹图谱 遗传关系
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TP-M13-SSR技术及其在苹果种质资源遗传多样性研究中的应用 被引量:17
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作者 高源 王昆 +2 位作者 田路明 曹玉芬 刘凤之 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期228-233,共6页
利用在SSR扩增产物检测过程中的一种基于荧光测序技术的高通量低成本分析技术体系TP-M13-SSR,对苹果种质资源的25份地方品种进行了遗传多样性研究,得到其遗传多样性、多态性信息含量和位点杂合度的变化范围分别为0.5032~0.8448、0.3952... 利用在SSR扩增产物检测过程中的一种基于荧光测序技术的高通量低成本分析技术体系TP-M13-SSR,对苹果种质资源的25份地方品种进行了遗传多样性研究,得到其遗传多样性、多态性信息含量和位点杂合度的变化范围分别为0.5032~0.8448、0.3952~0.8268和0.4400~0.9600。UPGMA法聚类分析将25个苹果品种分为2大类,与地理起源和亲缘关系相关。这种方法具有经济、灵敏、高效等优点,在苹果遗传多样性研究中得到成功应用。本文讨论了TP-M13-SSR技术的优缺点,以及在果树种质资源遗传多样性研究中的应用潜力。 展开更多
关键词 苹果 TP-m13-SSR 遗传多样性
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基于TP-M13-SSR指纹图谱的中国原产苹果属植物分子身份证的建立 被引量:16
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作者 高源 刘凤之 +3 位作者 王昆 王大江 龚欣 刘立军 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1290-1297,共8页
利用TP-M13-SSR分子标记方法,构建27份中国原产苹果属植物在12个SSR位点的指纹图谱,并运用条码技术生成其分子身份证。12对引物共获得251个等位基因,平均21个。引物多态性好,仅用引物CH05b06即可区分全部供试材料。27份苹果材料在12个SS... 利用TP-M13-SSR分子标记方法,构建27份中国原产苹果属植物在12个SSR位点的指纹图谱,并运用条码技术生成其分子身份证。12对引物共获得251个等位基因,平均21个。引物多态性好,仅用引物CH05b06即可区分全部供试材料。27份苹果材料在12个SSR位点遗传多样性、多态性信息含量和位点杂合度的变化范围分别为0.6620~0.9455、0.6327~0.9211和0.6538~0.9319。基于CH05b06位点处获得的指纹谱图即可得到每份供试材料独有的分子身份证。TP-M13-SSR分子标记技术适用于苹果属植物种质资源的指纹图谱构建,利于分子基础数据库的积累。基于苹果种质资源TP-M13-SSR指纹图谱可获得每份苹果种质资源独有的分子身份证。 展开更多
关键词 中国原产 苹果属 TP-m13-SSR 分子身份证
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TP-M13-SSR技术及其在玉米遗传多样性研究中的应用 被引量:18
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作者 刘志斋 王天宇 黎裕 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期10-15,31,共7页
遗传多样性分析是种质资源研究的重要组成部分。由于研究群体通常都较大,简便可靠的高通量分析技术显得尤为重要。本文概述了在SSR扩增产物检测过程中的一种基于荧光测序技术的高通量低成本分析技术体系TP-M13-SSR(simple sequence repe... 遗传多样性分析是种质资源研究的重要组成部分。由于研究群体通常都较大,简便可靠的高通量分析技术显得尤为重要。本文概述了在SSR扩增产物检测过程中的一种基于荧光测序技术的高通量低成本分析技术体系TP-M13-SSR(simple sequence repeat with tailed primer M13)的发展历程、反应原理和应用,并比较了它与普通银染、琼脂糖检测以及常规荧光检测体系在SSR扩增产物检测上的优劣,讨论了该技术在植物遗传多样性研究中的应用潜力。 展开更多
关键词 TP—m13-SSR 高通量 遗传多样性
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TP-M13-SSR技术在梨遗传多样性研究中的应用 被引量:11
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作者 高源 田路明 +1 位作者 刘凤之 曹玉芬 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期394-399,共6页
利用在SSR扩增产物检测过程中的一种基于荧光测序技术的高通量低成本分析技术体系TP-M13-SSR(simple sequence repeat with tailed primer M13)对5个种25份梨种质资源材料进行了SSR标记的遗传多样性研究。利用NH013a和NH007b 2对引物即... 利用在SSR扩增产物检测过程中的一种基于荧光测序技术的高通量低成本分析技术体系TP-M13-SSR(simple sequence repeat with tailed primer M13)对5个种25份梨种质资源材料进行了SSR标记的遗传多样性研究。利用NH013a和NH007b 2对引物即可区分所有供试品种,5对引物的区分率平均为76%。25份材料在5个SSR位点的遗传多样性、多态性信息含量和位点杂合度的变化分别为0.656 0~0.834 60、0.639 8~0.814 9和0.434 8~1.000 0。新疆梨的遗传多样性水平和多态性信息含量最低,平均值分别为0.716 0和0.681 2;秋子梨最高,平均值分别为0.772 0和0.737 9。TP-M13-SSR方法具有经济、灵敏、高效等优点,在梨遗传多样性研究中应用效果好。 展开更多
关键词 TP-m13-SSR 遗传多样性
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TP-M13-SSR技术在枸杞遗传多样性研究中的应用 被引量:9
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作者 樊云芳 尹跃 +4 位作者 安巍 赵建华 李彦龙 王亚军 曹有龙 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期890-896,共7页
利用在SSR扩增产物检测过程中的一种基于荧光测序技术的高通量低成本分析技术体系TP-M13-SSR对29份枸杞种质资源进行遗传多样性研究。13对引物共检测到78个等位基因,平均每个位点6个等位基因。群体平均的主等位基因频率(MAF)、有效等位... 利用在SSR扩增产物检测过程中的一种基于荧光测序技术的高通量低成本分析技术体系TP-M13-SSR对29份枸杞种质资源进行遗传多样性研究。13对引物共检测到78个等位基因,平均每个位点6个等位基因。群体平均的主等位基因频率(MAF)、有效等位基因数(NE)、观测杂合度(HO)、期望杂合度(HE)、Shannon’s信息指数(I)和多态信息含量(PIC)分别为0.625、2.684、0.401、0.514、1.103和0.487。聚类分析表明:29份枸杞种质间相似系数为0.66~0.97,平均相似系数为0.81;供试材料可分为5大类7亚类。研究表明,供试材料的遗传相似性较高,遗传多样性较低。TP-M13-SSR方法具有经济、灵敏、高效等优点,在枸杞遗传多样性研究中应用效果好。 展开更多
关键词 枸杞 TP-m13-SSR 遗传多样性
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基于TP-M13-SSR分子标记技术的133份薄皮甜瓜种质资源遗传多样性分析 被引量:5
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作者 解华云 高崇敏 +7 位作者 叶云峰 覃斯华 李桂芬 黄金艳 何毅 李天艳 柳唐镜 洪日新 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2547-2556,共10页
【目的】分析我国不同省(区)的薄皮甜瓜种质资源遗传多样性,为今后薄皮甜瓜的种质资源收集及遗传改良和高效利用提供理论依据。【方法】以来自我国不同省(区)的133份薄皮甜瓜种质为材料,从98对SSR引物中筛选得到12对多态性较高的引物,利... 【目的】分析我国不同省(区)的薄皮甜瓜种质资源遗传多样性,为今后薄皮甜瓜的种质资源收集及遗传改良和高效利用提供理论依据。【方法】以来自我国不同省(区)的133份薄皮甜瓜种质为材料,从98对SSR引物中筛选得到12对多态性较高的引物,利用TP-M13-SSR分子标记技术对133份薄皮甜瓜种质材料进行遗传多样性分析,并根据Nei’s遗传距离(D)进行聚类分析,以Structure软件的混合模型聚类法分析其群体遗传结构。【结果】利用12对引物从133份薄皮甜瓜种质材料中共扩增出的等位基因数(Na)为54个,平均每对引物4.5个,有效等位基因数(Ne)为1.120~2.234,平均为1.533;观测杂合度(Ho)为0.023~0.466,平均为0.217;期望杂合度(He)为0.107~0.552,平均为0.319,香农信息指数(I)范围为0.267~1.237,平均为0.642;各位点的多态性信息含量(PIC)为0.104~0.531,平均为0.295,大多数位点表现为中度多态性。聚类分析结果显示,133份薄皮甜瓜种质材料被分为两大类群,第Ⅰ类群为4份厚薄皮甜瓜材料,第Ⅱ类群为129份薄皮甜瓜材料。群体遗传结构分析结果显示,当K=4时,△K出现明显的峰值,说明133份薄皮甜瓜种质材料分为4个组群较合适;133份材料中大部分材料的Q值大于0.6。【结论】供试的12对SSR引物表现为中度多态性,需要用更多的分子标记才能有效鉴别薄皮甜瓜材料。133份薄皮甜瓜种质材料遗传结构较为单一,遗传多样性较低,可能存在同物异名的材料,今后应加强对遗传背景差异大、亲缘关系远的种质资源的发掘利用。 展开更多
关键词 薄皮甜瓜 TP-m13-SSR 遗传多样性 聚类分析
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猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的克隆及原核表达 被引量:3
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作者 赵光辉 王秋霞 +6 位作者 鲁琨 张改平 宁长申 王选年 张龙现 菅复春 宋海涛 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第10期749-753,共5页
目的研究猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的克隆及原核表达。方法利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴中扩增排泄分泌抗原M13h蛋白去除信号肽序列的基因,对其进行序列分析,并亚克隆至原核表达载体pET43a上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导重... 目的研究猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的克隆及原核表达。方法利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴中扩增排泄分泌抗原M13h蛋白去除信号肽序列的基因,对其进行序列分析,并亚克隆至原核表达载体pET43a上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组菌株表达融合蛋白,并用Western blot对纯化后的融合蛋白进行鉴定。结果从猪囊尾蚴中克隆到去除信号肽序列的M13h的基因,其序列长度为204 bp,包含198 bp的编码区,与GenBank中西班牙分离株的核苷酸和氨基酸序列的同源性均为100%,与韩国的M13h蛋白的核苷酸与氨基酸序列同源性分别为95.7%和95.3%;经SDS-PAGE电泳鉴定,重组质粒表达产物分子质量单位约74 ku,其中M13h基因表达蛋白的分子质量单位为7.87 ku,与预期结果一致;经Western blot检测,纯化后的复性蛋白质可与兔抗全囊囊尾蚴血清发生特异性反应。结论pET43M13h重组质粒表达产物具有较高的保守性和特异性,可用于猪囊尾蚴病的免疫诊断。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 m13h 克隆 原核表达
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用M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达HIV-1 gp41抗原表位 被引量:1
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作者 冯福民 李敬云 +3 位作者 鲍作义 刘思杨 李林 庄道民 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2006年第12期2313-2315,2319,共4页
目的:探讨M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达融合蛋白的可行性。方法:以纯化的HIV-1感染者血清多克隆抗体为配体,在噬菌体展示随机十二肽库中进行生物淘洗,经ELISA鉴定阳性克隆,DNA测序,确定优势表位。将优势表位及两个优势表位的串联体... 目的:探讨M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达融合蛋白的可行性。方法:以纯化的HIV-1感染者血清多克隆抗体为配体,在噬菌体展示随机十二肽库中进行生物淘洗,经ELISA鉴定阳性克隆,DNA测序,确定优势表位。将优势表位及两个优势表位的串联体分别与M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域连接,克隆入PQE30载体进行蛋白表达,再以表达蛋白为抗原检测HIV-1感染者血清中的抗体。结果:成功筛选到位于HIV-1 gp41蛋白上的3组优势抗原表位(HGPKDAETTAIW;AAFKDNQLLRIW;AAFKDNQLTRIW),3组优势表位及表位串联体(YGPKDAETTAIW-GGGS-SCSAKFTCTTQI)在PQE30载体中实现可溶性融合表达。重组蛋白具有良好的抗原性,能与不同的HIV-1抗体阳性血清呈特异反应。结论:用M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达HIV-1 gp41抗原表位是可行的。 展开更多
关键词 m13噬菌体 PⅢ蛋白 HIV-1 GP41 表位 基因表达
暂未订购
TP-M13自动荧光法的改进及在美国山核桃品种鉴定上的应用 被引量:4
16
作者 金群英 徐燕丽 +4 位作者 叶华琳 彭华正 赵彩芳 沈建军 朱汤军 《浙江林业科技》 北大核心 2015年第5期41-46,共6页
用TP-M13自动荧光法检测了常用10个美国山核桃品种中的8个SSR位点,发现原有直接使用三引物方法扩增的有效性和可靠性较低,而经过改进的间接三引物法则有较大的实用价值,在此基础上进一步研究后认为混合三引物法在适当控制混合引物的对... 用TP-M13自动荧光法检测了常用10个美国山核桃品种中的8个SSR位点,发现原有直接使用三引物方法扩增的有效性和可靠性较低,而经过改进的间接三引物法则有较大的实用价值,在此基础上进一步研究后认为混合三引物法在适当控制混合引物的对数和提高特异性后,在提高间接三引物法的扩增效率方面是可行的。 展开更多
关键词 自动荧光检测 TP-m13 美国山核桃 SSR
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基于M13噬菌体展示单链抗体文库的新型蛋白质均衡器的研制及其在肾病患者尿蛋白分析中的应用 被引量:1
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作者 赵鹏 陶定银 +2 位作者 梁振 张丽华 张玉奎 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期249-253,共5页
通过将展示单链抗体(scFv)文库的M13噬菌体固定于冷凝胶整体柱表面制备了一种新型蛋白质均衡器。由于展示的scFv片段具有种类多、数目大以及与蛋白质结合的特异性强等优点,因此其非常适合用于复杂蛋白质样品的预处理。将肾病患者尿蛋白... 通过将展示单链抗体(scFv)文库的M13噬菌体固定于冷凝胶整体柱表面制备了一种新型蛋白质均衡器。由于展示的scFv片段具有种类多、数目大以及与蛋白质结合的特异性强等优点,因此其非常适合用于复杂蛋白质样品的预处理。将肾病患者尿蛋白在平衡器上反复上样5次后,依次使用2mol/LNaCl、50mmol/LGly-HCl(pH2.5)和凝血酶溶液洗脱与均衡器结合的蛋白质,收集各馏分,并采用串联微柱反相液相色谱-电喷雾质谱进行蛋白质的分离鉴定。与未经均衡器处理的样品相比,鉴定的蛋白质数目由142个提高到396个。此外,凝胶电泳的分析结果显示,在上样流出液中蛋白质的浓度差异明显变小,大量的高丰度蛋白质存在于NaCl洗脱液中。上述结果表明,基于M13噬菌体展示scFv文库的新型蛋白质均衡器能够有效减小样品中蛋白质的浓度差异,有利于发现更多的低丰度蛋白质。 展开更多
关键词 蛋白质均衡器 m13噬菌体展示单链抗体文库 串联微柱反相液相色谱-电喷雾质谱 蛋白质 肾病患者 尿
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利用TP-M13-SSR技术分析我国两个地方猪种的遗传多样性 被引量:2
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作者 牛俊巍 李红然 +5 位作者 段恋 蒋忠荣 冯卫东 余先琼 黄建忠 段子渊 《动物分类学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期413-420,共8页
采用TP-M13-SSR技术,检测了我国地方猪品种柯乐猪和藏猪近交群体在18个微卫星位点的遗传多样性。结果如下:1)TP-M13-SSR方法简单、准确、高效,优于聚丙烯酰胺凝胶电泳;2)18个微卫星座位在柯乐猪封闭群和藏猪近交群体中的平均有效等位基... 采用TP-M13-SSR技术,检测了我国地方猪品种柯乐猪和藏猪近交群体在18个微卫星位点的遗传多样性。结果如下:1)TP-M13-SSR方法简单、准确、高效,优于聚丙烯酰胺凝胶电泳;2)18个微卫星座位在柯乐猪封闭群和藏猪近交群体中的平均有效等位基因数分别为3.5092±1.0545、2.6097±0.8811,平均观察杂合度分别为0.7597±0.1672、0.5966±0.2194,平均期望杂合度分别为0.7000±0.1138、0.5781±0.1522,平均多态信息含量分别为0.6413±0.1252、0.5086±0.1535,表明两个群体具有较高的遗传多样性和较大的遗传潜力,柯乐猪封闭群可作为保种群使用。结论:将TP-M13-SSR技术应用于我国地方猪品种的遗传多样性,为快速、大规模评估我国地方猪种遗传资源提供了新的方法。 展开更多
关键词 TP-m13-SSR 遗传多样性
原文传递
用正交设计优化M13mp18RFDNA转染大肠杆菌TG_1的条件 被引量:1
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作者 龚炎长 李奎 +2 位作者 彭中镇 师守坤 赵书红 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期386-388,共3页
采用正交设计(L9(34))对影响M13mp18转染其宿主大肠杆菌TG1的3个因素:热激温度、时间和DNA量各设3个水平进行优化。直观分析表明:热激温度是主要的,其次是DNA量,最后是热激时间。直观分析确定的较优转染... 采用正交设计(L9(34))对影响M13mp18转染其宿主大肠杆菌TG1的3个因素:热激温度、时间和DNA量各设3个水平进行优化。直观分析表明:热激温度是主要的,其次是DNA量,最后是热激时间。直观分析确定的较优转染条件为:热激温度44℃、时间120s、DNA量600pg。验证转染试验表明:在该条件下M13mp18对TG1的转染效率较高。 展开更多
关键词 畜牧 m13mp18噬菌体 转染 正交设计
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M13分子标记快速区分树木溃疡病原真菌的种类 被引量:1
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作者 王庆灵 崔建州 赵嘉平 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期74-79,共6页
树木溃疡病菌具有寄主多样性、危害症状复杂且分布广泛的特点,快速简便地区分真菌类别是杨树溃疡病研究及防治中需要解决的重要问题。在对树木溃疡病菌的遗传多样性研究,发现以M13为引物的PCR扩增可以在不同的种类之间产生稳定分化的带... 树木溃疡病菌具有寄主多样性、危害症状复杂且分布广泛的特点,快速简便地区分真菌类别是杨树溃疡病研究及防治中需要解决的重要问题。在对树木溃疡病菌的遗传多样性研究,发现以M13为引物的PCR扩增可以在不同的种类之间产生稳定分化的带型。因此,本研究分离了43株18种树木溃疡病相关真菌,并且对这些菌株进行rDNA-ITS序列测定及M13-PCR。结果显示,M13带型差异与真菌的特定种类相对应。因此,认为M13分子标记可以准确快速地鉴定、区分树木溃疡病菌。 展开更多
关键词 树木溃疡病 引物m13 分子标记 rDNA内转录间隔区
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