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甲基营养菌M.sp.MB200中serA基因功能初探
被引量：
1
1
作者
蒋琼
马晟
+5 位作者
周侃
李献
唐咸来
李俊芳
张敏
申佩弘
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期551-555,共5页
serA基因编码3-磷酸甘油酸脱氢酶(PGDH),此酶在合成L-丝氨酸的第一步起催化作用。利用质粒pCM80分别与野生型基因serA、缺失了C末端ACT功能域的突变基因serA△77构建了重组体表达菌MB200/pCM80serA和MB200/pCM80serA△77。通过分析发现...
serA基因编码3-磷酸甘油酸脱氢酶(PGDH),此酶在合成L-丝氨酸的第一步起催化作用。利用质粒pCM80分别与野生型基因serA、缺失了C末端ACT功能域的突变基因serA△77构建了重组体表达菌MB200/pCM80serA和MB200/pCM80serA△77。通过分析发现野生型基因重组表达菌的PGDH酶活受L-丝氨酸浓度影响较大,当反应体系中的L-丝氨酸浓度为40μmol/L时,酶活减少了约1/3;缺失了ACT功能域的基因表达菌的PGDH酶活基本不变,不受L-丝氨酸浓度的影响。进一步在静息细胞反应条件下,对重组菌和野生菌株MB200进行发酵产L-丝氨酸的研究,实验发现MB200/pCM80serA产L-丝氨酸的量为13.6mg/mL,MB200/pCM80serA△77产L-丝氨酸的量为16.8 mg/mL,而野生型菌株M.sp MB200的产量为6.4 mg/mL,重组菌的L-丝氨酸产量都有所提高,且MB200/pCM80serA△77的产量提高更多。结果证实了甲基营养菌MB200中serA基因与产L-丝氨酸具有反馈抑制关系,为进一步解除反馈抑制并发酵产L-丝氨酸奠定了基础。
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关键词
甲基营养菌MB200
SERA
L-丝氨酸
反馈抑制
原文传递
甲基营养菌Methylobacterium sp.MB200中与L-丝氨酸耐受性相关基因的克隆与分析
被引量：
1
2
作者
周侃
唐咸来
+4 位作者
蒋承建
宋修鹏
李俊芳
田丹丹
申佩弘
《工业微生物》
CAS
CSCD
2011年第6期38-42,共5页
甲基营养菌MB200,能利用非C-C键低碳化合物生长并合成L-丝氨酸,对L-丝氨酸耐受浓度低,提高其在静息细胞反应系统中对L-丝氨酸的耐受能力可更好的提高L-丝氨酸的产量。利用质粒转座子pTnMod-RKm'构建了甲基营养菌MB200的突变体库,往...
甲基营养菌MB200,能利用非C-C键低碳化合物生长并合成L-丝氨酸,对L-丝氨酸耐受浓度低,提高其在静息细胞反应系统中对L-丝氨酸的耐受能力可更好的提高L-丝氨酸的产量。利用质粒转座子pTnMod-RKm'构建了甲基营养菌MB200的突变体库,往培养基中添加20 mg/mLL-丝氨酸对突变体库中的突变体进行平板筛选,共筛选到177株耐受L-丝氨酸的突变体,以10mg/mL的浓度梯度复筛,发现某些突变体能最高耐受40 mg/mL L-丝氨酸。分别提取突变体总DNA,用BamHI酶随机酶切后连接到克隆载体pMD18-T上,导入到大肠杆菌感受态细胞DH5α中,利用双抗性在(转座子抗性与T载体上的抗性)平板上挑取转化子,并提取质粒,酶切验证后进一步测序。共克隆到了17个基因,为提高甲基营养菌对L-丝氨酸的耐受能力提供了可研究的基因资源。
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关键词
METHYLOBACTERIUM
sp.MB200
突变体
L-丝氨酸
耐受性
基因克隆
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职称材料
甲基营养菌MB200中mutL基因的突变及高耐甲醇菌株的筛选
被引量：
2
3
作者
闻东明
黄罗冬
+1 位作者
杨青山
申佩弘
《工业微生物》
CAS
2020年第4期15-20,共6页
甲基营养菌M.sp.MB200是本实验室保存的一株可以利用甲醇为碳源的甲基营养菌,具有利用甲醇作为底物生产L-丝氨酸的能力。提高其耐底物浓度的能力,有利于L-丝氨酸的转化。以M.sp.MB200野生菌株作为出发菌株,通过三亲本结合进行同源单交...
甲基营养菌M.sp.MB200是本实验室保存的一株可以利用甲醇为碳源的甲基营养菌,具有利用甲醇作为底物生产L-丝氨酸的能力。提高其耐底物浓度的能力,有利于L-丝氨酸的转化。以M.sp.MB200野生菌株作为出发菌株,通过三亲本结合进行同源单交换构建突变修复基因mutL插入突变菌株MB200mTB,该突变株无法修复菌体在繁殖传代过程中产生的各种随机突变,以甲醇为碳源进行环境压力筛选,具有甲醇耐受突变的菌株可以在甲醇浓度不断升高的环境中生长,而其余突变方向菌株在高甲醇环境下不能生长,进而筛选出甲醇耐受方向的突变株。对耐高浓度甲醇的菌株使用三亲本结合回补mut L基因,得到了7株可以在甲醇浓度为7%的基础培养基中生长性状优异的突变株。在含7%甲醇的基础培养基中,MB200mHB1号突变株较出发菌株M.sp.MB200甲醇耐受性提升近4倍,菌体生长量增加2.2倍。
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关键词
M.sp
MB200
mutL插入突变
甲醇耐受
三亲本结合
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职称材料
题名
甲基营养菌M.sp.MB200中serA基因功能初探
被引量：
1
1
作者
蒋琼
马晟
周侃
李献
唐咸来
李俊芳
张敏
申佩弘
机构
广西大学生命科学与技术学院
广西壮族自治区科学技术厅
亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室
微生物及植物遗传工程教育部重点实验室
出处
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期551-555,共5页
基金
国家自然基金项目(31160022)资助
文摘
serA基因编码3-磷酸甘油酸脱氢酶(PGDH),此酶在合成L-丝氨酸的第一步起催化作用。利用质粒pCM80分别与野生型基因serA、缺失了C末端ACT功能域的突变基因serA△77构建了重组体表达菌MB200/pCM80serA和MB200/pCM80serA△77。通过分析发现野生型基因重组表达菌的PGDH酶活受L-丝氨酸浓度影响较大,当反应体系中的L-丝氨酸浓度为40μmol/L时,酶活减少了约1/3;缺失了ACT功能域的基因表达菌的PGDH酶活基本不变,不受L-丝氨酸浓度的影响。进一步在静息细胞反应条件下,对重组菌和野生菌株MB200进行发酵产L-丝氨酸的研究,实验发现MB200/pCM80serA产L-丝氨酸的量为13.6mg/mL,MB200/pCM80serA△77产L-丝氨酸的量为16.8 mg/mL,而野生型菌株M.sp MB200的产量为6.4 mg/mL,重组菌的L-丝氨酸产量都有所提高,且MB200/pCM80serA△77的产量提高更多。结果证实了甲基营养菌MB200中serA基因与产L-丝氨酸具有反馈抑制关系,为进一步解除反馈抑制并发酵产L-丝氨酸奠定了基础。
关键词
甲基营养菌MB200
SERA
L-丝氨酸
反馈抑制
Keywords
m.sp.mb200
serA
L-serine
Feedback inhibition
分类号
TQ922 [轻工技术与工程—发酵工程]
原文传递
题名
甲基营养菌Methylobacterium sp.MB200中与L-丝氨酸耐受性相关基因的克隆与分析
被引量：
1
2
作者
周侃
唐咸来
蒋承建
宋修鹏
李俊芳
田丹丹
申佩弘
机构
广西大学生命科学与技术学院
微生物及植物遗传工程教育部重点实验室
广西亚热带生物资源保护利用重点实验室
广西壮族自治区科学技术厅
出处
《工业微生物》
CAS
CSCD
2011年第6期38-42,共5页
基金
第四十九批中国博土后基金(20110490866)
国家自然科学基金(31160022)
文摘
甲基营养菌MB200,能利用非C-C键低碳化合物生长并合成L-丝氨酸,对L-丝氨酸耐受浓度低,提高其在静息细胞反应系统中对L-丝氨酸的耐受能力可更好的提高L-丝氨酸的产量。利用质粒转座子pTnMod-RKm'构建了甲基营养菌MB200的突变体库,往培养基中添加20 mg/mLL-丝氨酸对突变体库中的突变体进行平板筛选,共筛选到177株耐受L-丝氨酸的突变体,以10mg/mL的浓度梯度复筛,发现某些突变体能最高耐受40 mg/mL L-丝氨酸。分别提取突变体总DNA,用BamHI酶随机酶切后连接到克隆载体pMD18-T上,导入到大肠杆菌感受态细胞DH5α中,利用双抗性在(转座子抗性与T载体上的抗性)平板上挑取转化子,并提取质粒,酶切验证后进一步测序。共克隆到了17个基因,为提高甲基营养菌对L-丝氨酸的耐受能力提供了可研究的基因资源。
关键词
METHYLOBACTERIUM
sp.MB200
突变体
L-丝氨酸
耐受性
基因克隆
Keywords
Methylobacterium sp. MB200
mutants
L-serine
tolerance
gene clone
分类号
TQ922 [轻工技术与工程—发酵工程]
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职称材料
题名
甲基营养菌MB200中mutL基因的突变及高耐甲醇菌株的筛选
被引量：
2
3
作者
闻东明
黄罗冬
杨青山
申佩弘
机构
广西大学生命科学与技术学院
出处
《工业微生物》
CAS
2020年第4期15-20,共6页
文摘
甲基营养菌M.sp.MB200是本实验室保存的一株可以利用甲醇为碳源的甲基营养菌,具有利用甲醇作为底物生产L-丝氨酸的能力。提高其耐底物浓度的能力,有利于L-丝氨酸的转化。以M.sp.MB200野生菌株作为出发菌株,通过三亲本结合进行同源单交换构建突变修复基因mutL插入突变菌株MB200mTB,该突变株无法修复菌体在繁殖传代过程中产生的各种随机突变,以甲醇为碳源进行环境压力筛选,具有甲醇耐受突变的菌株可以在甲醇浓度不断升高的环境中生长,而其余突变方向菌株在高甲醇环境下不能生长,进而筛选出甲醇耐受方向的突变株。对耐高浓度甲醇的菌株使用三亲本结合回补mut L基因,得到了7株可以在甲醇浓度为7%的基础培养基中生长性状优异的突变株。在含7%甲醇的基础培养基中,MB200mHB1号突变株较出发菌株M.sp.MB200甲醇耐受性提升近4倍,菌体生长量增加2.2倍。
关键词
M.sp
MB200
mutL插入突变
甲醇耐受
三亲本结合
Keywords
m.sp.mb200
mutL insertion mutation
methanol tolerance
triparental mating
分类号
Q939.9 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
甲基营养菌M.sp.MB200中serA基因功能初探
蒋琼
马晟
周侃
李献
唐咸来
李俊芳
张敏
申佩弘
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
原文传递
2
甲基营养菌Methylobacterium sp.MB200中与L-丝氨酸耐受性相关基因的克隆与分析
周侃
唐咸来
蒋承建
宋修鹏
李俊芳
田丹丹
申佩弘
《工业微生物》
CAS
CSCD
2011
1
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职称材料
3
甲基营养菌MB200中mutL基因的突变及高耐甲醇菌株的筛选
闻东明
黄罗冬
杨青山
申佩弘
《工业微生物》
CAS
2020
2
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