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猫上呼吸道疾病四重荧光定量PCR检测方法的建立与应用
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作者 惠宇韬 胡文佳 +5 位作者 孙亚琪 于永乐 杨海燕 薄惠文 马清霞 张传美 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1217-1225,共9页
本研究旨在建立一种四重荧光定量PCR的检测方法,用于鉴别和诊断猫上呼吸道疾病(Feline upper respiratory tract disease,FURTD)中四种常见的病原。针对猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)的VP1基因、猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesviru... 本研究旨在建立一种四重荧光定量PCR的检测方法,用于鉴别和诊断猫上呼吸道疾病(Feline upper respiratory tract disease,FURTD)中四种常见的病原。针对猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)的VP1基因、猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus type-1,FHV-1)的TK基因、衣原体(Chlamydophila felis,C.felis)的OmpA基因和支原体(Mycoplasma felis,M.felis)的16s rDNA的特异性序列,设计并合成引物和探针。采用矩阵法优化引物探针的浓度和退火温度;根据优化好的反应条件建立标准曲线,并对该检测方法进行敏感性、特异性和重复性检验。用建立的方法检测128份猫上呼吸道感染样本,并对检出的结果做病原感染情况分析。结果表明:建立的PCR标准曲线的相关系数(R2)>0.98,具有良好的线性关系。能特异性检出FCV、FHV-1、C.felis、M.felis,其他病原均未检出。FCV、FHV-1、C.felis的最低检测限为10拷贝/μL,M.felis的最低检测限为100拷贝/μL。重复性试验结果的变异系数均<2%。128份有上呼吸道症状的拭子中,有76份样本存在混合感染,占比59.38%,二重感染和三重感染构成主要感染模式,表明猫上呼吸道病原感染以混合感染为主要特征。本研究所建立的方法对四种病原的鉴别诊断和早期筛查提供了可靠的技术支持。 展开更多
关键词 FCV FHV-1 C.felis m.felis 荧光定量PCR 检测方法
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