马铃薯种苗复合感染病毒多重RT-PCR同步快速检测 被引量：24

1

作者 王中康 夏玉先 +2 位作者 袁青 谭万忠 殷幼平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期109-115,共7页

基于马铃薯病毒ssRNA的快速制备方法,根据马铃薯病毒CP基因序列设计PVX、PVS、PVY和PLRV特异性引物对、P1基因序列设计PVA特异性引物对,建立了多重RT-PCR快速检测体系,可以同步检出复合侵染马铃薯种苗主要病毒,灵敏度比传统的ELISA至少... 基于马铃薯病毒ssRNA的快速制备方法,根据马铃薯病毒CP基因序列设计PVX、PVS、PVY和PLRV特异性引物对、P1基因序列设计PVA特异性引物对,建立了多重RT-PCR快速检测体系,可以同步检出复合侵染马铃薯种苗主要病毒,灵敏度比传统的ELISA至少高100倍.结合生物活性稳定剂研制的固相化检测试剂盒,已用于四川和重庆等省区的15个县市田间与苗圃248个马铃薯显症或无症样品的实际检测,表明四川和重庆地区2～3种马铃薯病毒往往复合侵染(PVX、PVA和PVS三种病毒复合侵染或PLRV和PVY二种病毒复合侵染). 展开更多

关键词 多重RT-PCR 检测 马铃薯种苗 ssRNA

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马铃薯病毒一步法多重RT-PCR检测技术的构建 被引量：31

2

作者 董代幸 张祥林 +4 位作者 罗明 韩剑 冯世强 唐德贤 岳仲海 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期131-137,共7页

根据马铃薯病毒PVX、PVY、PVA、PLRV的CP基因序列设计4对特异性引物,通过对试剂浓度和反应条件进行优化,建立了能够同步检测PVX、PVY、PVA、PLRV的一步法多重RT-PCR检测方法。该方法对PVX、PVY、PVA、PLRV扩增出的靶带大小分别为732、42... 根据马铃薯病毒PVX、PVY、PVA、PLRV的CP基因序列设计4对特异性引物,通过对试剂浓度和反应条件进行优化,建立了能够同步检测PVX、PVY、PVA、PLRV的一步法多重RT-PCR检测方法。该方法对PVX、PVY、PVA、PLRV扩增出的靶带大小分别为732、422、132和336 bp,凝胶电泳易辨别区分。病毒RNA最低检测限度为7.8 pg/μL,对PVM、PVS、AMV、TMV及PSTVd的扩增为阴性。研究结果表明,该方法特异、灵敏,比两步法多重RT-PCR检测更加快速、简便,提高了检测效率,降低检测成本,为马铃薯病毒的高效检测提供了有效手段。 展开更多

关键词 一步法 多重RT-PCR 病毒检测 马铃薯

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大明胶囊对高脂血症大鼠心肌M受体各亚型mRNA表达的影响 被引量：4

3

作者 邢妍 岳朋 +5 位作者 李惠 张勇 林道红 董德利 吕延杰 杨宝峰 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1362-1366,共5页

目的通过检测M受体各亚型在心肌上的mRNA表达量,研究大明胶囊对高脂血症大鼠降血脂作用的分子机制。方法制备高脂血症大鼠模型,尾静脉取血测血清中的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、游离脂肪酸(FFA... 目的通过检测M受体各亚型在心肌上的mRNA表达量,研究大明胶囊对高脂血症大鼠降血脂作用的分子机制。方法制备高脂血症大鼠模型,尾静脉取血测血清中的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、游离脂肪酸(FFA)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)等血脂指标;Trizol法提取心肌总RNA,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定M2、M3、M4、M54种M受体亚型mRNA的表达,观察其在高脂、正常和给药3种条件下的差异。结果高脂血症时血清中的TC、TG、LDL、FFA及MDA水平升高(P<0.05),HDL与SOD降低(P<0.05),经大明胶囊治疗后TC、TG、LDL、FFA及MDA水平降低(P<0.05),HDL与SOD水平上调(P<0.05)至近正常水平;比较高脂模型组与正常组M受体各亚型mRNA表达,结果M2、M4、M5受体亚型表达减弱,M3受体亚型表达增强,差别有统计学意义(P<0.05)。给大明胶囊后与高脂模型组比较M3受体亚型mRNA表达增强,M2受体亚型表达减弱,且具有显著差异(P<0.05),M4、M5受体亚型mRNA表达无显著差异(P>0.05)。结论高脂血症大鼠模型建立成功,大明胶囊具有降血脂作用,并且M3受体的水平上调是大明胶囊降血脂作用的分子机制之一。 展开更多

关键词 大明胶囊 M受体 高脂血症 RT—PCR

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猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法建立及初步应用研究 被引量：17

4

作者 吴学敏 陈如敬 +5 位作者 王隆柏 车勇良 刘玉涛 庄向生 严山 周伦江 《中国农学通报》 CSCD 2012年第26期59-62,共4页

为建立一种特异、敏感的PEDV的检测方法。根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒CV777株的M基因序列,设计了一对特异性引物,扩增长度为680bp的片段。将PCR产物进行测序,与CV777株、SH5株M基因的同源性分别为99.2%和97.6%。试验表明:该方... 为建立一种特异、敏感的PEDV的检测方法。根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒CV777株的M基因序列,设计了一对特异性引物,扩增长度为680bp的片段。将PCR产物进行测序,与CV777株、SH5株M基因的同源性分别为99.2%和97.6%。试验表明:该方法具有较好的特异性和敏感性,并能检测到PEDV的RNA浓度下限为100pg/μL。从福建省的3个地区共采集58份哺乳仔猪腹泻样品,并应用此方法进行检测,其阳性检出率为87.9%。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 RT-PCR M基因

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野桑蚕羧酸酯酶基因cDNA片段的克隆及序列分析 被引量：3

5

作者 宋宏图 李兵 +3 位作者 王东 赵华强 王文兵 沈卫德 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第14期4112-4114,共3页

利用反转录-多聚酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术克隆了野桑蚕羧酸酯酶基因cDNA片段,片段长427 bp,共编码142个氨基酸残基;对来自同一发育时期的不同组织分别进行PCR扩增。结果显示:除了丝腺... 利用反转录-多聚酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术克隆了野桑蚕羧酸酯酶基因cDNA片段,片段长427 bp,共编码142个氨基酸残基;对来自同一发育时期的不同组织分别进行PCR扩增。结果显示:除了丝腺外其他组织均有目的条带。经与其他昆虫酯酶氨基酸同源性比较发现:野桑蚕羧酸酯酶与家蚕羧酸酯酶同源性最高,达98.6%;与赤拟谷盗同源性较低,为23.4%～30.7%。 展开更多

关键词 野桑蚕 羧酸酯酶 克隆 RT-PCR

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抑瘤素McDNA的克隆及表达研究 被引量：2

6

作者 段海清 张兆山 +2 位作者 董自正 曹勇 黄翠芬 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第3期259-263,共5页

抑瘤素M（onecostatinM，OSM）是一种多功能的细胞生长调节因子．从PMA刺激后的U937细胞系提取总RNA，采用逆转录-PCR方法分离到了抑瘤素M的cDNA；将抑瘤素M的cDNA克隆到质粒pUC19中，筛选三个阳性克隆进行序列分析，与国外报导序列完... 抑瘤素M（onecostatinM，OSM）是一种多功能的细胞生长调节因子．从PMA刺激后的U937细胞系提取总RNA，采用逆转录-PCR方法分离到了抑瘤素M的cDNA；将抑瘤素M的cDNA克隆到质粒pUC19中，筛选三个阳性克隆进行序列分析，与国外报导序列完全一致；将抑癌素M的cDNA克隆到质粒pBV220后再转化DH5a进行模拟表达，SDS-PAGE分析表明有OSM表达，表达量约占细菌总蛋白5％，经过初步纯化的OSM能明显抑制A375细胞的生长． 展开更多

关键词 抑瘤素M 基因表达 CDNA 基因克隆

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RT-PCR检测16S rRNA基因片段对麻风菌活性的评价 被引量：5

7

作者 温艳 翁小满 +6 位作者 陈小华 刘健 汪顺泉 蒋永祥 范建英 陈康林 李桓英 《中国麻风皮肤病杂志》 2007年第9期745-748,共4页

目的:探讨麻风病患者皮损组织中麻风菌16S rRNA基因片段判断麻风菌活性的应用价值。方法:根据BI值和联合化疗(MDT)的疗期对27例麻风患者分组,以RT-PCR法检测皮损组织中麻风菌16S rRNA的特异性片段。结果:(1)无论BI高低,未经治疗的患者16... 目的:探讨麻风病患者皮损组织中麻风菌16S rRNA基因片段判断麻风菌活性的应用价值。方法:根据BI值和联合化疗(MDT)的疗期对27例麻风患者分组,以RT-PCR法检测皮损组织中麻风菌16S rRNA的特异性片段。结果:(1)无论BI高低,未经治疗的患者16S rRNA均为阳性。(2)MDT治疗、BI≥3～6者的11例患者中:有9例16SrRNA为阳性,MDT疗期小于和大于6个月的两组中均各有1例患者16S rRNA阴性。(3)MDT治疗、BI≤2的6例患者:有1例MDT小于6个月病人其16S rRNA阳性,其余5例患者16SrRNA均为阴性。结论:随MDT治疗的进行,麻风菌16S rRNA阳性患者比例减少;诊断时BI值越低的患者中,经治疗后皮损中麻风菌16S rRNA阴转的比例增大,提示麻风菌16S rRNA与患者皮损中麻风菌活性具有相关性。 展开更多

关键词 麻风菌 RT-PCR 16S RRNA

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一步法多重RT-PCR禽流感病毒分型诊断法的建立与应用 被引量：3

8

作者 吕长荣 乔海莲 +3 位作者 杨增岐 陈杰 顾节清 李晓成 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第4期63-67,共5页

根据禽流感病毒(AIV)的M基因序列设计合成了1对AIVM基因的通用诊断引物AMDI／AMD2,针对H5N1、H9N2两种亚型的HA基因分型设计合成了2对分型诊断引物H15D1／H5D2,H9D1／H9D2。采用一步法多重RT-PcR技术建立了一种禽流感病毒快速分型诊断方... 根据禽流感病毒(AIV)的M基因序列设计合成了1对AIVM基因的通用诊断引物AMDI／AMD2,针对H5N1、H9N2两种亚型的HA基因分型设计合成了2对分型诊断引物H15D1／H5D2,H9D1／H9D2。采用一步法多重RT-PcR技术建立了一种禽流感病毒快速分型诊断方法,并对其特异性和灵敏度进行验证。结果表明,该诊断方法速度快,一般只需要28～30 h即可鉴定出结果,比病毒分离鉴定(5～7 d)至少缩短4～6 d;特异性强,试验组53株AIV全部扩增出与预期同样长度的目的条带,与病毒分离及血清学鉴定方法的检测结果完全一致。对照组中新城疫病毒(NDV)、减蛋综合征病毒(EDS76V)、传染性支气管炎病毒(IBV)均未扩增出特异性基因条带,;灵敏度高,试验组将AIV接种SPF鸡胚,培养后的鸡胚尿囊液(AAF)进行10-2稀释后,仍可以检测到其中的AIV。 展开更多

关键词 禽流感病毒 M基因 HA基因 RT-PCR 诊断方法

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小反刍兽疫病毒的N、M、F及H基因的序列测定和分析 被引量：8

9

作者 赵文华 杨仕标 +4 位作者 蒋梅 朱建波 李华春 肖雷 张念祖 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期8-11,共4页

小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科麻疹病毒属,为有囊膜的单股负链RNA病毒。以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据GenBank下载的序列及进行原核表达载体的要求,设计可扩增小反刍兽疫病毒N、M、F及H4个基因的全长读码框(ORF... 小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科麻疹病毒属,为有囊膜的单股负链RNA病毒。以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据GenBank下载的序列及进行原核表达载体的要求,设计可扩增小反刍兽疫病毒N、M、F及H4个基因的全长读码框(ORF)的引物,进行RT-PCR扩增及扩增片段的T载体克隆、序列分析。结果显示,均有预期大小的片段扩增出。扩增片段经核苷酸序列测定、分析,N、M、F及H基因ORF全长分别为1578、1008、1641、1830nt;4个基因均与疫苗株Nigeria75/1(X74443)有100%的同源性,说明所购试剂盒用的检测抗原应该是用此疫苗株制备,也证明了设计用于原核表达的4对引物扩增片段的正确性。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 N M F及H基因 逆转录-聚合酶链反应 同源性 疫苗株

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RT-PCR方法扩增白蛉热病毒M片段的研究 被引量：2

10

作者 刘东瀛 肖红 +3 位作者 郭广松 文利 叶梦贻 杨占秋 《中国病毒学》 CSCD 2003年第5期437-440,共4页

为建立扩增未知序列白蛉热病毒M片段的RT-PCR方法,本研究选取7个血清组成员和8个未分组血清型,共42株白蛉热病毒为RT-PCR检测对象。通过排列GenBank中已知的4型白蛉热病毒M片段氨基酸序列,选择保守区设计引物。根据保守区各已知病毒的c... 为建立扩增未知序列白蛉热病毒M片段的RT-PCR方法,本研究选取7个血清组成员和8个未分组血清型,共42株白蛉热病毒为RT-PCR检测对象。通过排列GenBank中已知的4型白蛉热病毒M片段氨基酸序列,选择保守区设计引物。根据保守区各已知病毒的cDNA特异序列合成寡核苷酸,将相同区的寡核苷酸等量混合成为“鸡尾酒”引物,用于RT-PCR。扩增产物经电泳检测,纯化后直接测序。引物对Ph-M-2FM和Ph-M-3RM扩增产物长度约为600bp,从42株病毒中扩增出34株,阳性率为81.0％。另一引物对Ph-M-2FM和Ph-M-4R2M扩增产物长度约为1400bp,扩增出22株病毒,阳性率为52.3％。测出序列经BLAST检索,与GenBank中已知白蛉热病毒同源。本研究首次成功地应用RT-PCR扩增不同血清型未知序列白蛉热病毒的部分M片段,并测出扩增产物序列,为白蛉热病毒属成员的基因鉴定和种系发生关系分析提供了实验手段,并将有助于白蛉热病毒感染的基因诊断。 展开更多

关键词 RT—PCR 扩增 白蛉热病毒 M片段

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猪流行性腹泻病毒的RT-PCR鉴定及其M、N和E基因的序列分析 被引量：6

11

作者 张红垒 董洁 +2 位作者 梁亚冰 许信刚 童德文 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期24-28,共5页

对引起仔猪严重腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)进行RT-PCR检测,并对PEDV部分基因进行克隆和序列分析。从陕西省某发生严重仔猪腹泻的养猪场采集肠道内容物,利用RT-PCR技术成功检测到PEDV感染。克隆检测... 对引起仔猪严重腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)进行RT-PCR检测,并对PEDV部分基因进行克隆和序列分析。从陕西省某发生严重仔猪腹泻的养猪场采集肠道内容物,利用RT-PCR技术成功检测到PEDV感染。克隆检测到的PEDV M、N和E基因片段,并将该基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与其他不同来源的PEDV毒株进行比较分析。结果表明,克隆的M、N和E基因与其他已经发表的PEDV毒株核苷酸的同源性分别为96.3%～99.9%、95.2%～99.5%和96.1%～96.9%,氨基酸同源性分别为95.6%～99.6%、96.1%～99.5%和96.1%～98.7%;系统进化树结果表明,试验检测的PEDV与国内分离株的PEDV株亲缘关系更近。可见:陕西省养殖场存在猪流行性腹泻病毒感染,其M、N和E基因变异不大。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 RT-PCR鉴定 M基因 N基因 E基因 序列分析

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新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：4

12

作者 王素春 孙亚伟 +6 位作者 樊擎莹 黄保续 康京丽 汪洋 刘华雷 张云香 王楷宬 《中国动物检疫》 CAS 2020年第1期74-78,共5页

为满足新城疫病毒高通量快速检测的需要,针对新城疫病毒M基因序列,通过基因比对分析保守区域,经同源性分析后,设计合成多条引物和探针并对其筛选,建立了一种能够快速检测新城疫病毒的实时荧光RTPCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性... 为满足新城疫病毒高通量快速检测的需要,针对新城疫病毒M基因序列,通过基因比对分析保守区域,经同源性分析后,设计合成多条引物和探针并对其筛选,建立了一种能够快速检测新城疫病毒的实时荧光RTPCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性进行了评估。结果显示,该方法检测耗时短、特异性好,检测下限达10-4 ng/μL。利用该方法,对480份临床采集的各类家禽咽拭子样品进行检测,共检测出25份阳性,与常规RT-PCR检测方法结果一致,κ值为1(P<0.001)。结果表明,该方法快速、准确,可用于新城疫病毒的快速检测。 展开更多

关键词 新城疫病毒 M基因 实时荧光RT-PCR 检测方法 建立与应用

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逆转录多重PCR检测人感染高致病禽流感H5N1亚型 被引量：1

13

作者 刘丁 王政 +3 位作者 张一 李元朝 陈萍 吕凤林 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第13期1641-1643,共3页

目的建立并优化检测人感染高致病禽流感H5N1亚型的逆转录多重PCR(RT-MPCR)方法。方法将提取H5N1型高致病禽流感病毒RNA,逆转录为cDNA,测序后针对H5裂解位点及N1的保守区序列设计特异性引物,应用RT-MPCR对H5N1型基因进行检测,并验证所建... 目的建立并优化检测人感染高致病禽流感H5N1亚型的逆转录多重PCR(RT-MPCR)方法。方法将提取H5N1型高致病禽流感病毒RNA,逆转录为cDNA,测序后针对H5裂解位点及N1的保守区序列设计特异性引物,应用RT-MPCR对H5N1型基因进行检测,并验证所建立方法的敏感性,通过检测NDV、IBV和IBDV的RNA病毒验证其特异性。结果测序结果表明该株H5N1型与安徽株同源,经RT-MPCR扩增出302bp和567bp的两条片段,实验最低检出限为0.500pg的RNA病毒,并且特异性高。结论该法可用于人感染高致病性禽流感病毒H5N1亚型的检测。 展开更多

关键词 禽流感 高致病禽流感病毒 H5NI 逆转录多重PCR

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外排泵MexAB-OprM在多重耐药铜绿假单胞菌中的作用 被引量：4

14

作者 刘洋 李方去 +6 位作者 蒋伟燕 杨爱平 杨锦红 王金文 张颖 赵飞 李向阳 《中国卫生检验杂志》 CAS 2010年第4期830-833,共4页

目的:探讨铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)的耐药机制及其耐药性与外排泵表达水平关系。方法:PCR法对30株铜绿假单胞菌进行MexB基因检测;采用实时荧光定量PCR的方法检测MexAB-OprM的mRNA相对表达水平;对多重耐药铜绿假单胞菌... 目的:探讨铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)的耐药机制及其耐药性与外排泵表达水平关系。方法:PCR法对30株铜绿假单胞菌进行MexB基因检测;采用实时荧光定量PCR的方法检测MexAB-OprM的mRNA相对表达水平;对多重耐药铜绿假单胞菌采用琼脂对倍稀释法进行外排泵抑制剂的抑制试验,观察抗菌药物的MIC变化。结果:联合外排泵抑制剂后,庆大霉素(GEN)和环丙沙星(CIP)MIC值与之前相比大部分有2个折点的变化,有4株MPa的MIC值有4个折点以上的变化,但总体耐药率差异无统计学意义(P>0.05);30株多重耐药Pa株中,均存在外排泵Mex-AB-OprM的高表达,多重耐药菌组外排泵表达量达敏感组的36.5倍。当外排泵抑制剂CCCP浓度为7.5μg/ml时,庆大霉素(GEN)、环丙沙星(CIP)、四环素(TET)MIC值不变或增加的菌株(≥1MIC组)与MIC值减小的菌株(≤1/2MIC组)的外排泵相对表达量之间有着显著性的差异(P<0.05),而头孢噻肟(CTX)MIC值不变或增加的菌株(≥1MIC组)与MIC值减小的菌株(≤1/2MIC组)的外排泵相对表达量之间无显著性的差异(P>0.05)。结论:外排泵MexAB-OprM在多重耐药铜绿假单胞菌临床分离株中起着十分重要的作用,MexAB-OprM的高表达与多重耐药Pa菌庆大霉素、环丙沙星的耐药性有着密切关系,可能起着基础性耐药作用,但其对头孢噻肟的耐药性影响较小。其高表达还与庆大霉素、环丙沙星、四环素的耐药有着直接的量的关系,具体机制有待进一步的研究。 展开更多

关键词 多重耐药铜绿假单胞菌 外排泵MexAB-OprM 氨基糖苷类 喹诺酮类 碳酰氰化物间-氯苯基腙 RT-PCR

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当归红芪超滤物对衰老大鼠脑组织氧化损伤及线粒体DNA缺失的影响 被引量：1

15

作者 李应东 刘萍萍 +2 位作者 周倩倩 孙少伯 刘凯 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期2347-2349,2350,共4页

目的探讨当归红芪超滤物延缓老龄大鼠脑衰老的作用及其机制。方法选用3月龄大鼠12只作为青年组,选用24月龄大鼠36只随机分为老年组、当归红芪超滤物组、维生素E组。给予相应处理后检测各组学习记忆功能、脑指数测定,组织形态学观察,脑... 目的探讨当归红芪超滤物延缓老龄大鼠脑衰老的作用及其机制。方法选用3月龄大鼠12只作为青年组,选用24月龄大鼠36只随机分为老年组、当归红芪超滤物组、维生素E组。给予相应处理后检测各组学习记忆功能、脑指数测定,组织形态学观察,脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力,丙二醛(MDA)含量测定及脑组织线粒体DNA(mt-DNA)缺失的表达。结果与青年组大鼠相比:老年组大鼠学习能力下降,脑组织形态学存在差异,脑指数存在差异(P<0.05),脑组织SOD活力明显降低,MDA含量明显升高,脑缺失mt-DNA/内参mt-DNA比例明显增高(P<0.05);与老年组相比:用药组大鼠学习能力明显增加,脑组织形态学存在差异,脑指数无明显差异,脑组织中SOD活力显著增高,脑组织中MDA含量显著降低,脑缺失mt-DNA/内参mt-DNA比例降低(P<0.05)。与维生素E组相比,用药组大鼠学习能力、脑指数、脑组织SOD活力、MDA含量、脑缺失mt-DNA/内参mt-DNA比例均无显著差异(P>0.05)。结论当归红芪超滤物可能通过清除自由基,防止mt-DNA片段丢失发挥延缓老龄大鼠脑组织衰老的作用,其功效与维生素E相当。 展开更多

关键词 当归红芪超滤物 衰老 抗氧化 线粒体DNA

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一种基于M基因的尼帕病毒TaqMan-MGB荧光RT-PCR检测方法的建立 被引量：4

16

作者 王建华 柴明骏 +8 位作者 赵祥平 张俊哲 董志珍 王乃福 肖妍 王玉玲 赵丹 陈小金 陈本龙 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1277-1282,共6页

为建立一种快速、敏感和特异地检测尼帕病毒（Nipah virus,NiV）的方法,根据NiV M基因序列保守区设计了1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种检测NiV的TaqMan-MGB实时荧光RT-PCR方法,并对该方法进行特异性、定量线性范围、... 为建立一种快速、敏感和特异地检测尼帕病毒（Nipah virus,NiV）的方法,根据NiV M基因序列保守区设计了1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种检测NiV的TaqMan-MGB实时荧光RT-PCR方法,并对该方法进行特异性、定量线性范围、敏感性和重复性等试验。结果显示,该方法仅对NiV M基因的RNA标准对照（NiV-M-RNA）发生特异性扩增反应,对猪的其他常见病毒,包括经典猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪流感病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型均不发生交叉反应。该方法对NiV-M-RNA的最适线性检测范围为4.6×101~4.6×107 copies/μL,标准曲线方程为y=-3.418x＋37.57,线性相关系数（r2）为0.999,检测下限为4.6copies/μL。对5个不同浓度（4.6×103~4.6×107 copies/μL）的NiV-M-RNA进行双份样品的4次重复检测,每个浓度重复试验的Ct值的变异系数均小于1.5%,具有良好的重现性。用该方法对368份临床样品进行NiV检测,结果均为阴性。本方法的建立为活猪临床样品中NiV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。 展开更多

关键词 尼帕病毒 M基因 TAQMAN-MGB探针 实时荧光RT-PCR

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大鼠肝缺血再灌注损伤过程中apoM mRNA的表达 被引量：1

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作者 许贤林 叶启发 +7 位作者 明英姿 张毅 罗光华 朱江 何小舟 张晓膺 NING Xu Nilsson-Ehle 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期47-49,53,共4页

目的探讨apoMmRNA在大鼠肝缺血再灌注损伤中的表达。方法建立大鼠肝缺血再灌注损伤模型,健康雄性SD大鼠40只随机分成5组,每组8只:假手术组(对照组);IR1组(肝缺血30min);IR2组(肝缺血60min);IR3组(肝缺血120min);IR4组(肝缺血180min)。I... 目的探讨apoMmRNA在大鼠肝缺血再灌注损伤中的表达。方法建立大鼠肝缺血再灌注损伤模型,健康雄性SD大鼠40只随机分成5组,每组8只:假手术组(对照组);IR1组(肝缺血30min);IR2组(肝缺血60min);IR3组(肝缺血120min);IR4组(肝缺血180min)。IR组的再灌注时间统一为60min。观察每1组的病理变化;检测各组血浆谷丙转氨酶水平(ALT);RealtimeRT-PCR检测apoMmRNA在肝脏中的表达。结果肝缺血再灌注后,光镜下大鼠肝组织有明显的肝血窦和中央静脉瘀血,内皮细胞及肝细胞普遍水肿变性,可见肝细胞坏死,这些变化随着缺血时间的延长而逐渐加重。同样的结果见于血浆中ALT的水平。而apoMmRNA的表达有所不同,与对照组相比,IR1组的表达明显下降(P<0.05),随着缺血时间的延长,apoMmRNA的表达开始上升,至IR4及IR5组,其表达已明显高于IR1组(P<0.05)。结论在肝缺血再灌注损伤过程中,肝内apoMmRNA的表达有迅速、明显的变化,提示apoM可能具有急性时相反应蛋白的特性。 展开更多

关键词 缺血再灌注 RT—PCR 栽脂蛋白M 肝

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嗜水气单胞菌灭活疫苗浸泡后鳜IgM基因表达量和抗体效价的变化 被引量：9

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作者 刘雨果 潘厚军 +2 位作者 陈偿 石存斌 吴淑勤 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2009年第6期41-46,共6页

应用荧光定量PCR技术,研究了嗜水气单胞菌疫苗浸泡免疫后,鳜(Siniperca chuatsi)鳃、皮肤、脾脏和头肾中IgM基因表达量变化,同时应用ELISA检测皮肤黏液和血清中抗体滴度变化。结果显示:最早检测到IgMmRNA转录水平上调的是皮肤和鳃(第4... 应用荧光定量PCR技术,研究了嗜水气单胞菌疫苗浸泡免疫后,鳜(Siniperca chuatsi)鳃、皮肤、脾脏和头肾中IgM基因表达量变化,同时应用ELISA检测皮肤黏液和血清中抗体滴度变化。结果显示:最早检测到IgMmRNA转录水平上调的是皮肤和鳃(第4天),而脾脏和头肾在第7天才达到高峰。IgM基因在头肾和脾脏中表达量较高(高峰值分别达到16.3和23.8),皮肤和鳃中的表达量较小(高峰值分别为4.3和8.6)。抗体效价方面,皮肤黏液中抗体滴度峰值出现时间较早(第7天),但抗体从开始形成到消失持续时间较短(28 d);血清中抗体滴度峰值出现时间较迟(第21天),但持续较长(42 d)。结果表明:浸泡免疫能够引发鳜机体和局部均出现免疫应答。从抗体滴度和IgM基因表达量方面考虑,系统免疫组织均高于黏膜免疫组织,表明前者是合成IgM的主要场所。从时间上比较,对抗原刺激最早做出应答的是皮肤黏膜和鳃,其后系统免疫才表现应答作用,这表明了局部黏膜能够在抗原入侵的早期起到抵制作用。 展开更多

关键词 鳜(Siniperca chuatsi) 免疫球蛋白M 黏膜免疫组织 荧光定量PCR 嗜水气单胞菌

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内蒙古地区猪腹泻相关病毒的检测与分析 被引量：9

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作者 刘艳成 杜雅楠 +3 位作者 吴卫杰 王雪飞 芦婷 刘丹丹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1620-1628,共9页

旨在明确引起内蒙古地区猪腹泻的主要相关病毒及其流行特点,为该病的防控提供依据。采用多重RTPCR方法对从内蒙古8个盟市采集的394份腹泻粪样进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)三种病毒的检测;... 旨在明确引起内蒙古地区猪腹泻的主要相关病毒及其流行特点,为该病的防控提供依据。采用多重RTPCR方法对从内蒙古8个盟市采集的394份腹泻粪样进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)三种病毒的检测;对部分PCR检测呈阳性的病料进行PEDV M基因的克隆、测序,并与国内外已报道的48条M基因序列进行比对和遗传进化分析。检测结果表明:PEDV、PoRV阳性率分别为63.96%、2.03%,未检测到TGEV;PEDV和PoRV混合感染率为2.03%;各日龄猪群均可发病,但以未断乳仔猪和哺乳母猪感染率较高;遗传进化分析结果表明:CH/NMG/XLGL分离株与CV777等经典毒株亲缘关系较近,位于G2分支上;其余7条分离毒株与2012年以来国内多个省市的流行毒株及泰国、韩国、俄罗斯、越南等邻国的流行毒株位于G1-1分支上,特别是与美国2013—2014年流行的毒株亲缘关系更为密切,核苷酸序列相似性为99.5%~100%。从2013年至今导致内蒙古地区猪腹泻的病毒主要是PEDV,其次是PoRV;不同日龄的猪群均可感染,以未断乳的仔猪感染最为严重;获得的大部分流行毒株与我国2012年至今的大部分省市的流行毒株亲缘性较高,但与我国2007年以前分离的内蒙毒株、疫苗株、经典毒株相距较远,并存在碱基突变的情况。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 RT-PCR M基因 内蒙古

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马铃薯M病毒微滴数字PCR检测方法的建立 被引量：6

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作者 刘晗 黄洁芳 +2 位作者 向均 燕照玲 张永江 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第5期69-74,共6页

为了建立马铃薯M病毒(Potato virus M,PVM)的精准检测技术,根据PVM外壳蛋白基因核苷酸保守序列设计微滴数字PCR(dd PCR)的引物、探针,建立PVM的dd PCR检测技术。以田间采集并经RT-PCR验证的PVM及其他4种同样可侵染马铃薯的病毒(PVX、PVY... 为了建立马铃薯M病毒(Potato virus M,PVM)的精准检测技术,根据PVM外壳蛋白基因核苷酸保守序列设计微滴数字PCR(dd PCR)的引物、探针,建立PVM的dd PCR检测技术。以田间采集并经RT-PCR验证的PVM及其他4种同样可侵染马铃薯的病毒(PVX、PVY、CMV、TMV)总RNA为模板,进行dd PCR特异性分析;对PVM的总RNA进行10倍梯度稀释并用作模板,进行dd PCR灵敏度测定。结果表明,建立的dd PCR方法可以特异性地检测马铃薯上的PVM,与实时荧光RT-PCR结果一致;最低可检测5.7 fg/μL的总RNA,比实时荧光RT-PCR灵敏度高100倍。说明建立的dd PCR检测方法可用于PVM的准确鉴定。 展开更多

关键词 马铃薯 马铃薯M病毒 微滴数字PCR 实时荧光RT-PCR 检测

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