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METTL5、VIRMA在肝细胞肝癌中的表达及与临床预后的关系
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作者 陈宏 刘磊 +2 位作者 周华友 杨华 杨瑞 《国际检验医学杂志》 2025年第9期1060-1065,共6页
目的研究肝细胞肝癌(HCC)中甲基转移酶样蛋白5(METTL5)、病毒样m^(6)A甲基转化酶(VIRMA)的表达及与临床预后的关系。方法选取2018年3月至2021年3月就诊于该院的89例HCC患者。应用免疫组化和荧光定量PCR检测组织METTL5、VIRMA蛋白和m RN... 目的研究肝细胞肝癌(HCC)中甲基转移酶样蛋白5(METTL5)、病毒样m^(6)A甲基转化酶(VIRMA)的表达及与临床预后的关系。方法选取2018年3月至2021年3月就诊于该院的89例HCC患者。应用免疫组化和荧光定量PCR检测组织METTL5、VIRMA蛋白和m RNA表达。利用Kaplan-Meier曲线和Cox回归分析METTL5、VIRMA蛋白对HCC预后的影响。结果HCC癌组织METTL5 m RNA(3.23±0.55 vs.0.61±0.20),VIRMA m RNA(2.97±0.42 vs.0.58±0.17)高于癌旁组织,差异有统计学意义(t=42.234、49.762,均P<0.001)。METTL5、VIRMA蛋白位于细胞质和细胞膜,部分位于细胞核。HCC癌组织METTL5[71.91%(64/89)vs.5.62%(5/89)]、VIRMA[69.66%(62/89)vs.6.74%(6/89)]阳性率高于癌旁组织,差异有统计学意义(χ^(2)=82.385、74.627,P<0.001,P=0.001)。HCC中METTL5、VIRMA蛋白表达与肝癌分期标准(CNLC)、肿瘤最大径及血管侵犯有关,CNLC分期Ⅱ~Ⅲ期、肿瘤最大径≥5 cm及血管侵犯的HCC癌组织中METTL5、VIRMA蛋白阳性率较高(均P<0.05)。METTL5阳性组和阴性组3年生存率为34.88%(15/43),67.39%(31/46),差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=7.893,P=0.005)。VIRMA阳性组和阴性组3年生存率为36.36%(16/44)、66.67%(30/45),差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=9.828,P=0.002)。CNLC分期Ⅱ~Ⅲ期、肿瘤最大径≥5 cm、血管侵犯、METTL5阳性、VIRMA阳性是影响HCC患者不良预后的危险因素。结论HCC中METTL5、VIRMA表达上调,均与CNLC分期Ⅱ~Ⅲ期、肿瘤最大径及血管侵犯有关,是评估HCC预后的肿瘤标志物。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 甲基转移酶样蛋白5 病毒样m^(6)A甲基转化酶 预后
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牛副流感3型病毒样颗粒的制备及免疫原性评价
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作者 朱晨曦 黄向月 +8 位作者 朱庆 丁露 邓梏男 阿克阿加 贺春赛 马元珍 吴锦波 张朝辉 张斌 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第3期404-411,442,共9页
针对牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)的基质蛋白(M)和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因进行密码子优化并构建重组穿梭质粒Dual-M+HN;使用杆状病毒表达系统制备BPIV3病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并采用We... 针对牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)的基质蛋白(M)和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因进行密码子优化并构建重组穿梭质粒Dual-M+HN;使用杆状病毒表达系统制备BPIV3病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并采用Western blot、间接免疫荧光和电镜对其进行验证;将验证成功的VLPs与MF59佐剂和CpG-ODN免疫增强剂混合通过肌注方式免疫小鼠。通过检测小鼠血清特异性抗体、中和抗体和血凝抑制抗体来评估BPIV3 VLPs的免疫效果。结果显示,优化后的M和HN蛋白基因密码子适应指数(codon adaptation index,CAI)分别为0.96和0.95,CG含量分别达到54.1%和53.1%;构建的重组质粒转化至DH10Bac进行蓝白斑筛选,将验证正确的重组杆粒转染至Sf9细胞,获得杆状病毒pFastBac-M+HN,电镜下观察可见直径约180 nm的BPIV3 VLPs;IFA和Western blot试验均证明目的蛋白的成功表达并具有生物学活性;通过蛋白优化发现感染剂量MOI=5时蛋白表达量最高;将50μg VLPs与MF59佐剂和CpG-ODN混合后肌注方式免疫小鼠,结果显示VLPs免疫组在首免2周时抗体开始上升,在二免后21 d时达到最高,平均IgG抗体滴度为1∶40228,中和抗体滴度平均为1∶298,血凝抑制抗体滴度为1∶549,达到灭活苗水平(P≥0.05),表明本试验制备的VLPs能诱导机体产生体液免疫反应。结果表明,本试验成功制备了能自组装表达BPIV3 HN和M蛋白的VLPs,并能诱导小鼠机体产生体液免疫反应,为后续BPIV3 VLPs疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 牛副流感病毒3型 基质蛋白(M) 血凝素-神经氨酸酶(HN) 病毒样颗粒 免疫原性
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尿液线粒体基因检测确诊线粒体脑病1例报告
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作者 闫少凤 杨潇 +3 位作者 汪汉芳 崔海英 王维平 贾丽景 《中风与神经疾病杂志》 2025年第5期467-469,共3页
线粒体脑肌病伴高乳酸血症及卒中样发作(MELAS)是一种罕见的遗传性线粒体疾病,可通过外周血及尿液组织中线粒体基因突变确诊。本文通过分析1例尿液线粒体基因检测确诊的MELAS的病例,认识尿液标本在线粒体基因送检的重要性。
关键词 线粒体脑病 卒中样发作 m.10158T>C突变 尿液 基因检测
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丹参通络解毒汤调控METTL3介导的m^(6)A修饰对缺氧/复氧CMECs的保护作用
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作者 陆哲雯 刘莉 +1 位作者 蒋啸 李鑫辉 《湖南中医药大学学报》 2025年第3期438-444,共7页
目的探讨丹参通络解毒汤对缺氧/复氧(H/R)损伤大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)的保护作用及甲基转移酶样3(METTL3)的影响。方法建立H/R损伤CMECs模型,将细胞分为空白组、模型组、中药组、过表达组、中药+过表达组、空载组,ELISA检测各组... 目的探讨丹参通络解毒汤对缺氧/复氧(H/R)损伤大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)的保护作用及甲基转移酶样3(METTL3)的影响。方法建立H/R损伤CMECs模型,将细胞分为空白组、模型组、中药组、过表达组、中药+过表达组、空载组,ELISA检测各组炎症因子IL-1β和IL-10水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测各组METTL3蛋白表达水平,比色法检测各组m^(6)A及肌酸激酶CK水平。结果与空白组比较,模型组METTL3蛋白表达与m^(6)A水平均升高(P<0.01),CMECs凋亡率升高(P<0.01),IL-1β、CK含量升高(P<0.01),IL-10含量降低(P<0.01);与模型组比较,中药组METTL3蛋白表达与m^(6)A水平均降低(P<0.05,P<0.01),CMECs凋亡率显著降低(P<0.01),IL-1β、CK含量显著降低(P<0.01),IL-10含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,过表达组METTL3蛋白表达升高(P<0.01),CMECs凋亡率升高(P<0.01),IL-1β、CK含量升高(P<0.01,P<0.05),IL-10含量降低(P<0.01);与过表达组相比,中药+过表达组METTL3蛋白表达降低(P<0.01),CMECs凋亡率降低(P<0.01),IL-1β、CK含量降低(P<0.01,P<0.05),IL-10含量显著升高(P<0.01)。结论丹参通络解毒汤能降低炎症反应,抑制细胞凋亡,对缺氧/复氧CMECs有保护作用,其机制可能与抑制METTL3表达,从而下调m^(6)A水平有关。 展开更多
关键词 丹参通络解毒汤 甲基转移酶样3 m^(6)A修饰 心肌缺血再灌注损伤 心肌微血管内皮细胞
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lncRNA JPX通过m^(6)A-YTHDC2轴上调细胞质p21蛋白促进RA-FLS增殖
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作者 韦丽丽 杨洁 +1 位作者 沈维干 周玮 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 北大核心 2025年第5期56-65,共10页
为揭示lncRNA JPX对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)活性影响的分子机制,通过RT-qPCR、Western blot、甲基化RNA免疫沉淀(methylated RNA immunoprecipitation,MeRIP)、... 为揭示lncRNA JPX对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)活性影响的分子机制,通过RT-qPCR、Western blot、甲基化RNA免疫沉淀(methylated RNA immunoprecipitation,MeRIP)、荧光素酶报告基因、RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)、蛋白质稳定性以及体外功能试验等检测JPX调控RA-FLS活性的作用及其分子机制。结果表明:JPX可上调p21 mRNA的N^(6)甲基腺苷(N6-methyladenosine,m^(6)A)修饰水平,YTHDC2可通过与JPX介导的m^(6)A修饰的p21 mRNA结合,上调RA-FLS中p21蛋白水平;同时,JPX可增加p21蛋白在细胞质中的富集而促进RA-FLS的增殖。综上,JPX可通过m^(6)A-YTHDC2-p21轴以及调控p21蛋白在细胞中的分布调节RA-FLS增殖,JPX有可能是一个新的RA诊断和治疗靶点。 展开更多
关键词 lncRNA JPX 类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS) P21 N^(6)甲基腺苷(m^(6)A) 含YTH结构域蛋白2(YTHDC2)
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广州地区革兰阴性杆菌CTX-M和OXA型广谱β-内酰胺酶基因分型研究 被引量:34
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作者 肖庆忠 苏丹虹 +1 位作者 江洁华 钟南山 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1321-1326,共6页
目的调查广州地区临床分离的革兰阴性杆菌中CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和OXA型广谱β-内酰胺酶(beta-lactamase,Bla)的主要基因型别及其流行情况。方法按照NCCLS 2001年标准筛选广州地区临床分离菌株的ESBLs表型;用聚合酶链反应(P... 目的调查广州地区临床分离的革兰阴性杆菌中CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和OXA型广谱β-内酰胺酶(beta-lactamase,Bla)的主要基因型别及其流行情况。方法按照NCCLS 2001年标准筛选广州地区临床分离菌株的ESBLs表型;用聚合酶链反应(PCR)扩增法和DNA测序法进行ESBLs基因序列分析。结果PCR扩增结果显示,CTX-M1、CTX-M2、CTX-M9群和OXA的总阳性率在本地区临床分离的临床检测ESBLs阳性的革兰阴性杆菌中分别为9.96%、0、35.5%和1.6%,同时检出≥两种ESBLs基因的菌株数64株,阳性率为5.9%;序列分析进一步证实了CTX-M型ESBLs的具体型别,包括CTX-M-3、CTX-M-22、CTX-M-9、CTX-M-14、CTX-M-17、CTX-M-18、CTX-M-21、CTX-M-24、TOHO-2和TOHO-3,其比例分别为3.23%、3.7%、4.99%、3.32%、2.21%、3.69%、2.95%、4.43%、1.85%和1.48%;其中以CTX-M-9和CTX-M-24阳性率较高;在本地区只检出1种OXA型Bla-OXA-2/PSE-2(1.38%,15/1084);另外,还检出了8株无法具体归类的CTX-M-9型ESBLs,占0.74%;CTX-M型基因主要分布于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,分别占42.8%和36.3%,而OXA基因则主要分布于铜绿假单胞菌中,占80%。结论本地区CTX-M类ESBLs也较为常见,其中尤以CTX-M-9和CTX-M-24为主,暂无CTX-M2群ESBLs,可能存在1种或多种新的CTX-M型ESBLs。 展开更多
关键词 革兰阴性杆菌感染 Β-内酰胺酶类 基因型 CTX-M类β-内酰胺酶 OXA类β-内酰胺酶
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马链球菌兽疫亚种类M蛋白的基因克隆、序列分析及其在猪源链球菌的检测 被引量:15
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作者 范红结 陆承平 唐家琪 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期617-620,共4页
根据已发表的马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp .zooepidemicus)马源株的类M蛋白基因序列 ,设计和合成一对引物 ,以兽疫亚种猪源ATCC35 2 4 6株的基因组DNA为模板 ,通过PCR技术 ,扩增出类M蛋白基因并定向克隆至表达载体pET_32a... 根据已发表的马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp .zooepidemicus)马源株的类M蛋白基因序列 ,设计和合成一对引物 ,以兽疫亚种猪源ATCC35 2 4 6株的基因组DNA为模板 ,通过PCR技术 ,扩增出类M蛋白基因并定向克隆至表达载体pET_32a(+)中 ,测定其序列 ,GenBank接收号为AY2 6 3781。类M蛋白基因含一个完整的开放阅读框 ,全长为 1137bp ,编码 379个氨基酸残基。经DNAStar软件分析 ,ATCC35 2 4 6株类M蛋白基因与兽疫亚种马源W6 0株、马亚种的类M蛋白基因及A群化脓链球菌的M蛋白基因的同源性分别为 86 9%、30 8%、2 9 4 % ;推导的氨基酸序列的同源性分别为 84 3%、2 1 9%、2 3 4 %。但ATCC35 2 4 6株类M蛋白的C末端细胞膜锚定区与M蛋白、马亚种类M蛋白高度同源。用上述设计的引物进行PCR试验 ,检测 34株猪源链球菌类M蛋白基因 ,发现所有 16株C群猪源链球菌均能检测出类M蛋白基因 ,而所有猪链球菌 (Streptococcussuis) 1型和 2型菌株及S群、B群、D群链球菌共 13株均不能检出类M蛋白基因 ,而 5株未鉴定的猪源链球菌中 3株能检测出类M基因。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种 类M蛋白基因 克隆 检测
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产CTX-M超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌传播的分子机制研究 被引量:6
8
作者 江洁华 廖伟娇 +4 位作者 徐军 易建云 陈涛 徐韫健 李翊泉 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期126-130,共5页
目的研究肺炎克雷伯菌(KPN)中CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因的其传播机制。方法用K-B药敏法分析53株肺炎克雷伯菌的耐药性;用多重PCR技术扩增ESBLs、AmpCI、SEcp1BI、S903I、S26等插入序列及Ⅰ类整合子,用套式PCR在Ⅰ类整合子寻... 目的研究肺炎克雷伯菌(KPN)中CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因的其传播机制。方法用K-B药敏法分析53株肺炎克雷伯菌的耐药性;用多重PCR技术扩增ESBLs、AmpCI、SEcp1BI、S903I、S26等插入序列及Ⅰ类整合子,用套式PCR在Ⅰ类整合子寻找β-内酰胺酶基因盒,用长片段PCR扩增ISEcp1B下游的CTX-M型ESBLs全序列并测序。结果17株肺炎克雷伯菌中检出CTX-M-G1,其中6株同时检出ISEcp1B、TEM、SHV、CTX-M-G1及Ⅰ类整合子,KPN 49、9检出DHAI、S903,KPN 9检出PSE;套式PCR在Ⅰ类整合子内未检出β-内酰胺酶基因,KPN 49整合子内检出二氢叶酸还原酶(dhfr)和核苷转移酶基因(aad2);KPN 49检出CTX-M ESBLs新的基因亚型,全长876 bp,与blaCTX-M-14相比在825 bp处有1个核苷酸不同,导致1个氨基酸不同,第275位由脯氨酸取代谷氨酰胺;KPN 49、9 blaCTX-M-Like的上游是ISEcp1B的遗传元件,提供-35及-10位点两个启动子及1个右反向重复序列(转位酶识别位点),下游是插入序列IS903提供反向重复序列组成复合转座子。结论ISEcp1B可能对下游CTX-M型ESBLs的高水平表达和传播起重要的调控作用。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 CTX-M类β-内酰胺酶 插入序列 转座子 整合子
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豚链球菌和停乳链球菌类M蛋白及其抗原性分析 被引量:4
9
作者 汪笑宇 战文斌 +1 位作者 邢婧 绳秀珍 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期945-949,共5页
分别用热酸抽提法、碱抽提法和胃蛋白酶消化法分离豚链球菌NUF849的类M蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blotting印迹法分析比较三种方法所提类M蛋白的组成和抗原性差异。结果表明,热酸抽提法分离制备的类M蛋白得率和纯度都较其它两种方法高... 分别用热酸抽提法、碱抽提法和胃蛋白酶消化法分离豚链球菌NUF849的类M蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blotting印迹法分析比较三种方法所提类M蛋白的组成和抗原性差异。结果表明,热酸抽提法分离制备的类M蛋白得率和纯度都较其它两种方法高,蛋白的抗原性保持较好。采用热酸抽提法提取5株豚链球菌NUF633、NUF693、NUF701、NUF812、NUF849和2株停乳链球菌SD和L2的类M蛋白,其SDS-PAGE图谱明显不同,种间差异明显,豚链球菌主要类M蛋白的分子量分别为60、48、37、30、27、24和15ku,停乳链球菌主要类M蛋白的分子量分别为68、48、42、37、29、26、23、21、19、17、15、14和11ku。Western-blotting结果显示,兔抗豚链球菌血清可与豚链球菌的两条类M蛋白带结合,分子量分别为60和37ku;与停乳链球菌的两条类M蛋白带结合,分子量为68和37ku。两种链球菌主要类M蛋白组成及其抗原性差异明显。 展开更多
关键词 豚链球菌 停乳链球菌 类M蛋白 抗原性
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马链球菌兽疫亚种类M蛋白亚单位疫苗小鼠免疫试验 被引量:3
10
作者 王建 刘佩红 +3 位作者 沈素芳 沈莉萍 王永康 陆承平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期495-497,共3页
为获得控制猪链球菌病安全高效的疫苗,本试验进行了马链球菌兽疫亚种类M蛋白亚单位疫苗的研制。应用热酸法提取马链球菌兽疫亚种ATCC35246株类M蛋白,并分别采用羟基磷灰石(HAT)层析和冷酒精沉淀法进行纯化,结果得到较纯的类M蛋白。用热... 为获得控制猪链球菌病安全高效的疫苗,本试验进行了马链球菌兽疫亚种类M蛋白亚单位疫苗的研制。应用热酸法提取马链球菌兽疫亚种ATCC35246株类M蛋白,并分别采用羟基磷灰石(HAT)层析和冷酒精沉淀法进行纯化,结果得到较纯的类M蛋白。用热酸提取的粗制类M蛋白、2种纯化的类M蛋白及全菌苗免疫小鼠,结果保护率分别为92%(11/12)、100%(12/12)、100%(12/12)和83%(10/12),表明类M蛋白亚单位疫苗有进一步开发的必要。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种 类M蛋白 疫苗
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猪源马链球菌兽疫亚种中国分离株类M基因特性分析 被引量:4
11
作者 范红结 陆承平 唐家琪 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期210-214,共5页
目的阐明国内不同区域猪源马链球菌兽疫亚种分离株类M基因的特性,为疫苗研制提供指导。方法利用PCR技术,扩增国内9省市从1974~2003年分离的9株马链球菌兽疫亚种类M基因,并进行克隆、测序及序列分析。结果发现7株类M基因长度为1137bp,... 目的阐明国内不同区域猪源马链球菌兽疫亚种分离株类M基因的特性,为疫苗研制提供指导。方法利用PCR技术,扩增国内9省市从1974~2003年分离的9株马链球菌兽疫亚种类M基因,并进行克隆、测序及序列分析。结果发现7株类M基因长度为1137bp,含一个阅读框,CG-74-63和CP-0104株的长度分别为1143bp及1125bp。除1株关节炎分离株CP-0104外,引致败血症的8株菌类M基因的核苷酸同源性高达95.4%~99.9%,推导的相应氨基酸序列同源性高达92.1%~100%。9株猪源菌与马源菌株及人源菌株类M基因的核苷酸同源性分别为81.6%~87.0%、81.7%~91.8%。9株猪源分离株类M蛋白信号肽、C末端细胞锚定区的序列均高度同源;除CP-0104外,其余8株高变区高度同源。结论国内不同区域猪源马链球菌兽疫亚种分离株类M基因同源性高。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种 类M基因 分析
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马链球菌兽疫亚种中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的克隆与表达 被引量:6
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作者 苏良科 陆承平 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第7期633-636,共4页
目的 构建马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp zooepidemicus)中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的重组表达质粒 (pET -Szp) ,并检测表达产物的免疫反应性。 方法 根据GenBank登录的马链球菌兽疫亚种纽约分离株w6 0类M蛋白基因... 目的 构建马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp zooepidemicus)中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的重组表达质粒 (pET -Szp) ,并检测表达产物的免疫反应性。 方法 根据GenBank登录的马链球菌兽疫亚种纽约分离株w6 0类M蛋白基因序列设计和合成引物 ,以该菌中国分离株ATCC35 2 4 6的基因组DNA为模板 ,扩增类M蛋白基因 5’端第 5 83~ 10 6 8bp片段 ,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET - 32a(+)中 ,将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1株 ,用IPTG诱导表达 ,并通过SDS -PAGE和免疫印迹对表达蛋白进行初步分析。结果 扩增出 4 86bp的马链球菌兽疫亚种ATCC35 2 4 6的类M蛋白基因片段 ,该基因在大肠杆菌表达系统中经诱导 ,得到分子量为 5 0 0 0 0的表达产物 ,免疫印迹表明该产物具有特异的免疫反应性。结论 成功构建了表达马链球菌兽疫亚种中国株类M蛋白片段的重组表达质粒 ,并实现在大肠杆菌中表达 ,为重组类M蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种 类M基因 克隆 表达 重组表达质粒 免疫反应性
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猪源马链球菌兽疫亚种类 M蛋白原核表达及其小鼠免疫保护力分析 被引量:2
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作者 周俊明 何孔旺 +10 位作者 倪艳秀 祝昊丹 俞正玉 茅爱华 吕立新 温立斌 张雪寒 王小敏 汪伟 李彬 郭容利 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期590-594,共5页
为了原核表达猪源马链球菌兽疫亚种去除信号肽的类M蛋白质,并分析该蛋白质对小鼠的免疫保护力,克隆了马链球菌兽疫亚种CY菌株去除信号肽的类M蛋白质基因Szp,并将Szp基因插入p ET28a表达载体,IPTG诱导,获得重组类M蛋白质,弗氏佐剂乳化重... 为了原核表达猪源马链球菌兽疫亚种去除信号肽的类M蛋白质,并分析该蛋白质对小鼠的免疫保护力,克隆了马链球菌兽疫亚种CY菌株去除信号肽的类M蛋白质基因Szp,并将Szp基因插入p ET28a表达载体,IPTG诱导,获得重组类M蛋白质,弗氏佐剂乳化重组类M蛋白质后,3次免疫小鼠,用同源菌株CY攻击。诱导获得分子量约5.8×104的重组蛋白质,免疫印迹结果表明该重组类M蛋白质能够被马链球菌兽疫亚种猪多抗识别。类M蛋白质免疫小鼠的存活率为60%,弗氏佐剂乳化灭活CY免疫小鼠的存活率为70%,PBS对照组小鼠攻毒后6 d内全部死亡。表达的类M蛋白质可以给予ICR小鼠部分的免疫保护力,保护效果略低于CY全菌灭活苗,提示可以对马链球菌兽疫亚种多种免疫保护性抗原进行联合,从而进一步提高对动物的免疫保护力。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种 类M蛋白质 原核表达 疫苗
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马链球菌兽疫亚种类M蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立及应用 被引量:2
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作者 周红 周瑾 +1 位作者 范红结 陆承平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期605-610,共6页
为建立简便实用的马链球菌兽疫亚种间接ELISA,对马链球菌兽疫亚种ATCC35246菌株的类M蛋白(SzP)进行了原核表达,以纯化的SzP作为包被抗原,建立了马链球菌兽疫亚种血清抗体间接ELISA,并对抗原包被浓度、血清稀释度、封闭液的选择等反应条... 为建立简便实用的马链球菌兽疫亚种间接ELISA,对马链球菌兽疫亚种ATCC35246菌株的类M蛋白(SzP)进行了原核表达,以纯化的SzP作为包被抗原,建立了马链球菌兽疫亚种血清抗体间接ELISA,并对抗原包被浓度、血清稀释度、封闭液的选择等反应条件进行了优化。结果显示,重组SzP的最佳包被浓度为0.625μg/mL,标准阳性血清的最佳稀释度为1∶40,最适封闭液为含50g/L脱脂奶粉的PBS溶液,待检血清的最佳孵育时间为60min,酶标二抗的最佳作用时间为45min。用建立的马链球菌兽疫亚种血清抗体间接ELISA对采自河南、山东、安徽、上海、江苏等地猪场的1 080份血清进行检测。结果显示,上述五地猪场血清样本马链球菌兽疫亚种抗体的阳性率分别为33.3%、16.5%、21.8%、13.9%和13.5%。上述结果表明,本试验建立的间接ELISA的特异性和重复性良好,具有重要的临床应用价值。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种 类M蛋白 间接ELISA
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不同淋巴组织淋巴细胞培养上清诱导Caco2细胞向微皱褶样细胞转分化 被引量:1
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作者 王丽虹 罗霞 +3 位作者 郑冬生 周联 朱远洪 吴秀 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1311-1315,共5页
目的复制微皱褶(M)样细胞体外诱导模型,从功能和基因水平两方面鉴定M样细胞,同时观察不同淋巴组织活化的淋巴细胞的培养上清对Caco2细胞向M样细胞转化的影响。方法用3μg/m L伴刀豆球蛋白A(Con A)刺激Peyer结(PP)、肠系膜淋巴结(MLN)和... 目的复制微皱褶(M)样细胞体外诱导模型,从功能和基因水平两方面鉴定M样细胞,同时观察不同淋巴组织活化的淋巴细胞的培养上清对Caco2细胞向M样细胞转化的影响。方法用3μg/m L伴刀豆球蛋白A(Con A)刺激Peyer结(PP)、肠系膜淋巴结(MLN)和脾脏(Sp)的淋巴细胞3 d,收集细胞培养上清后,将其并与Caco2细胞共培养。在TranswellTM上室加入微球,收集下室的培养液,流式细胞术分析荧光微球数量;反转录PCR检测M样细胞相关基因CC趋化因子配体20(CCL20)、密封蛋白基因4(CLDN4)、肿瘤坏死因子受体超家族成员9(TNFRSF9)、Ets家族转录因子Spi-B mRNA的水平,观察不同淋巴组织淋巴细胞培养上清对Caco2细胞向M样细胞转化的诱导率的影响。结果与空白对照组相比,PP、MLN和Sp淋巴细胞培养上清诱导后,诱导后的Caco2细胞转运的微球数量和CCL20、CLDN4、TNFRSF9、Spi-B的mRNA水平均显著增加;与未刺激组相比,Con A刺激后,诱导后的Caco2细胞转运的微球数量和CCL20、CLDN4、TNFRSF9、Spi-B的mRNA水平均显著增加。结论 Con A刺激和未刺激的淋巴细胞培养上清,均可以诱导Caco2细胞向M样细胞转分化。 展开更多
关键词 M样细胞 Caco2细胞 Peyer结 肠系膜淋巴结 脾脏 基因表达
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ISEcp1B介导铜绿假单胞菌CTX-M型ESBLs传播的分子机制研究 被引量:1
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作者 易建云 江洁华 +4 位作者 廖伟娇 陈涛 苏秀馨 李翊泉 徐韫健 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期532-534,共3页
目的了解CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)在铜绿假单胞菌传播的分子机制。方法用K ir-by-Bauer(K-B)药敏法分析26株铜绿假单胞菌的耐药性;用多重聚合酶链式反应(PCR)扩增ESBLs、ISEcp1B插入序列及I类整合子;用套式PCR在Ⅰ类整合子寻找... 目的了解CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)在铜绿假单胞菌传播的分子机制。方法用K ir-by-Bauer(K-B)药敏法分析26株铜绿假单胞菌的耐药性;用多重聚合酶链式反应(PCR)扩增ESBLs、ISEcp1B插入序列及I类整合子;用套式PCR在Ⅰ类整合子寻找β-内酰胺酶基因盒。结果26株多重耐药铜绿假单胞菌对下列抗生素的耐药率为:(1)头孢噻肟(69.23%)、哌拉西林(65.38%)、替卡西林/克拉维酸(65.38%)、头孢他啶(57.69%)、头孢吡肟(46.15%)、环丙沙星(50.00%)、氨曲南(46.15%)、阿米卡星(34.62%)、亚胺培南(30.77%)、头孢哌酮/舒巴坦(23.08%);(2)11株铜绿假单胞菌中检出CTX-M-G1,其中4株同时检出TEM、SHV、CTX-M-G1、ISEcp1B及I类整合子,I类整合子内未扩增出β-内酰胺酶;(3)ISEcp1B下游均连接CTX-M型ESBLs,ISEcp1B右端有一个反向重复序列,为转位酶提供作用位点;-35及-10位点各有一个启动子,对下游不同的CTX-M型ESBLs的高水平表达和传播起重要的调控作用。结论ISEcp1B可能对下游CTX-M型ESBLs的高水平表达和传播起重要的调控作用。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 CTX—M类β-内酰胺酶 插入序列 转座子 整合子
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插入序列ISEcp1B在革兰阴性杆菌中的分布及基因多态性分析 被引量:1
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作者 廖伟娇 江洁华 +6 位作者 陈涛 苏秀馨 潘思争 徐韫健 易建云 魏小平 李翊泉 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期905-908,共4页
目的研究插入序列ISEcp1B基因在革兰阴性杆菌中的分布及多态性分析。方法用K-B药敏法分析143株革兰阴性杆菌的耐药性;用多重聚合酶链反应(PCR)技术扩增ESBLs、AmpC及ISEcp1B基因,并进行DNA测序。结果CTX-M-G1及ISEcp1B基因的总检出率分... 目的研究插入序列ISEcp1B基因在革兰阴性杆菌中的分布及多态性分析。方法用K-B药敏法分析143株革兰阴性杆菌的耐药性;用多重聚合酶链反应(PCR)技术扩增ESBLs、AmpC及ISEcp1B基因,并进行DNA测序。结果CTX-M-G1及ISEcp1B基因的总检出率分别为41.26%及16.08%;ISEcp1B插入序列的在各菌种的检出率分别为大肠埃希菌9株占20.93%、肺炎克雷伯菌6株占11.32%、铜绿假单胞菌5株占13.89%、阴沟肠杆菌2株占25.00%、弗氏柠檬酸杆菌1株占25.00%;插入序列ISEcp1B阳性株对头孢菌素的耐药率显著高于阴性株(P<0.01),在体外对亚胺培南有较好的抗菌活性;对ISEcp1BPCR产物进行测序,发现其下游均连接CTX-M型ESBLs,暂未见其他类型的β-内酰胺酶;ISEcp1B右端均连接一个反向重复序列,为转位酶提供作用位点;提供-35及-10两个启动子,对下游不同的CTX-M型ESBLs的高水平表达和传播起重要的调控作用,启动子与CTX-M型ESBLs编码起始距离长短不一,并有不同程度的突变,呈多态性。结论插入序列ISEcp1B较广泛分布于革兰阴性杆菌,增加了CTX-M型ESBLs水平播散的危险性,并对其表达起调控作用。 展开更多
关键词 革兰阴性杆菌 CTX—M类β-内酰胺酶 插入序列 转座子 传播
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自保护药芯焊丝焊缝组织及性能 被引量:3
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作者 范玉然 徐昌学 +2 位作者 李学达 汪凤 孙巧飞 《金属热处理》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期90-93,共4页
分析了两种焊材相同焊接工艺下焊缝组织对焊缝冲击性能的影响,研究结果表明:多层多道焊缝中,链状M/A及大角度晶界是影响焊缝冲击性能的主要原因。链状M/A增多将降低焊缝冲击性能,大角度晶界增多将提高焊缝冲击性能。
关键词 链状M/A 冲击性能 焊缝
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类M蛋白亚单位疫苗的佐剂筛选 被引量:4
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作者 苏良科 陆承平 《中国兽药杂志》 2004年第1期15-18,共4页
将铝胶、ISA2 0 6和CpG三种佐剂分别与热盐酸提取的马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp.zooepidemicus)ATCC35 2 4 6株类M蛋白配合 ,制成疫苗接种 2 0日龄的小鼠 ,并设不加佐剂的类M蛋白亚单位疫苗免疫对照组。二次免疫后用ATCC3... 将铝胶、ISA2 0 6和CpG三种佐剂分别与热盐酸提取的马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp.zooepidemicus)ATCC35 2 4 6株类M蛋白配合 ,制成疫苗接种 2 0日龄的小鼠 ,并设不加佐剂的类M蛋白亚单位疫苗免疫对照组。二次免疫后用ATCC35 2 4 6株活菌攻击 ,铝胶、ISA2 0 6、CpG和对照组的保护率分别为 75 % ( 1 2 /1 6)、81 .2 5 % ( 1 3/1 6)、68.75 % ( 1 1 /1 6)和5 6.2 5 % ( 9/1 6)。试验结果表明ISA2 0 6的免疫增强作用高于其他两种佐剂 ,可望与类M蛋白亚单位疫苗配合 ,用于预防猪链球菌病。 展开更多
关键词 类M蛋白 佐剂 亚单位疫苗 马链球菌兽疫亚种 猪链球菌病
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四倍体水稻试管速繁中甲基托布津的类细胞分裂素效应 被引量:1
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作者 肖拴锁 鲍文奎 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 1989年第2期89-91,共3页
笔者在利用杀菌剂控制四倍体水稻组培速繁育苗过程中的微生物污染时发现70%甲基托布津具有强烈的类细胞分裂素作用.在安全浓度范围内对四倍体水稻试管苗的生长发育及快速增殖具有显著的促进作用.能够大幅度提高繁殖效率.降低成本.... 笔者在利用杀菌剂控制四倍体水稻组培速繁育苗过程中的微生物污染时发现70%甲基托布津具有强烈的类细胞分裂素作用.在安全浓度范围内对四倍体水稻试管苗的生长发育及快速增殖具有显著的促进作用.能够大幅度提高繁殖效率.降低成本.现将结果报道如下。 展开更多
关键词 四倍体 甲基托布津 水稻 细胞分裂素 试管 育苗过程 组培 效应 降低成本 促进作用
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