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Daxx对Chol：MβCD诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用与机制 被引量：1
1
作者 庹勤慧 刘锦红 +1 位作者 李天平 廖端芳 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期I0029-I0029,共1页
目的探讨Daxx对Chol：MβCD诱导的平滑肌细胞凋亡的影响以及可能的机制。方法体外培养大鼠源性血管平滑肌细胞，然后分别将人源性pcDNA3．1（＋）、pcDNA3．1（＋）-Daxx质粒瞬时转染进入血管平滑肌细胞中，并通过RT．PCR和Westernblot... 目的探讨Daxx对Chol：MβCD诱导的平滑肌细胞凋亡的影响以及可能的机制。方法体外培养大鼠源性血管平滑肌细胞，然后分别将人源性pcDNA3．1（＋）、pcDNA3．1（＋）-Daxx质粒瞬时转染进入血管平滑肌细胞中，并通过RT．PCR和Westernblot两种方法检测平滑肌细胞内Daxx的表达；瞬时转染成功的血管平滑肌细胞用10mg／LChol：MβCD孵育48h，建立泡沫细胞模型．然后用油红O染色检测细胞内脂滴情况。再分别采用CCK-8法检测血管平滑肌细胞的细胞活性，流式细胞术检测血管平滑肌细胞的凋亡情况。 展开更多
关键词 DAXX CHOL mβcd 平滑肌细胞 细胞凋亡
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甲基-β-环糊精对T细胞膜分子CD69和GM1表达的影响 被引量：1
2
作者 吕合作 李柏青 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期114-118,共5页
目的:探讨甲基-β-环糊精(M ethyl--βcyc lodextrin,MβCD)去除细胞膜胆固醇诱导人外周血T细胞CD69和单唾液酸四己糖神经节苷脂(Ganglioside GM1,GM1)的表达及机理。方法:用高浓度MβCD(10 mmol/L)处理PBMC,或预先加阻断剂PD98059或/和... 目的:探讨甲基-β-环糊精(M ethyl--βcyc lodextrin,MβCD)去除细胞膜胆固醇诱导人外周血T细胞CD69和单唾液酸四己糖神经节苷脂(Ganglioside GM1,GM1)的表达及机理。方法:用高浓度MβCD(10 mmol/L)处理PBMC,或预先加阻断剂PD98059或/和LY294002,用流式细胞术检测T细胞GM1及CD69的表达;免疫印迹法检测MβCD诱导的CD3+T细胞中ZAP-70的磷酸化。结果:MβCD(10 mmol/L)处理PBMC 30分钟,GM1在T细胞上即有高水平表达(>90%),CD69于处理后2小时高水平表达(>80%);预先加入PD98059或LY294002均能够大部分阻断MβCD诱导的T细胞CD69表达,部分阻断GM1表达,联合应用两种抑制剂也不能完全阻断GM1的表达;MβCD能够促进CD3+T细胞中ZAP-70分子的酪氨酸磷酸化。结论:MβCD能够促进T细胞GM1及CD69的表达;且这两种分子的表达可能与信号分子ZAP-70、MEK/ERK及PI3K有关。 展开更多
关键词 甲基-β-环糊精 单唾液酸四己糖神经节苷脂 信号转导
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脂筏在牛呼吸道合胞体病毒感染MDBK细胞中的作用 被引量：4
3
作者 李丽阳 刘洋 +2 位作者 王磊 李艳婷 侯喜林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期643-647,共5页
为探讨脂筏在牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)感染MDBK细胞中的作用,采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞。结果显示,细胞膜胆固醇含量明显降低,同时也降低BRSV感染水平,补充外源胆固醇后,病毒感染力可... 为探讨脂筏在牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)感染MDBK细胞中的作用,采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞。结果显示,细胞膜胆固醇含量明显降低,同时也降低BRSV感染水平,补充外源胆固醇后,病毒感染力可部分恢复;表明细胞膜胆固醇的去除可以抑制BRSV的感染,BRSV的感染与细胞膜脂筏相关。进一步研究发现,胆固醇去除不会影响BRSV结合在靶细胞表面,但会抑制病毒进入靶细胞。在病毒感染后采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞,对于病毒感染力的影响是轻微的。这些发现可有助于理解BRSV的感染机制,为研制安全、高效的疫苗和有效的治疗药物提供理论依据。 展开更多
关键词 牛呼吸道合胞体病毒 脂筏 mβcd mDBK细胞
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依泽替米贝对泡沫细胞胆固醇转运的影响 被引量：1
4
作者 梁磊 庹勤慧 +4 位作者 朱炳阳 匡双玉 罗迪贤 许灿新 廖端芳 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2006年第2期93-98,F0003,共7页
目的：建立一种新的诱导巨噬细胞泡沫化的模型,并用这个模型探讨依泽替米贝对泡沫细胞胆固醇转运的影响.方法：用不同浓度（0,5,10,15,25,35,45和55μg/mL）的Chol：MβCD孵育巨噬细胞株RAW264.7细胞72 h;并选用45μg/mLChol：MβCD孵育... 目的：建立一种新的诱导巨噬细胞泡沫化的模型,并用这个模型探讨依泽替米贝对泡沫细胞胆固醇转运的影响.方法：用不同浓度（0,5,10,15,25,35,45和55μg/mL）的Chol：MβCD孵育巨噬细胞株RAW264.7细胞72 h;并选用45μg/mLChol：MβCD孵育RAW264.7细胞0,12,24,48,60,72 h.进一步在加入Chol：MβCD的同时加入ezetimibe和阳性对照药物lovastatin孵育.用HPLC检测细胞内游离胆固醇和总胆固醇含量,油红O染色观察细胞荷脂情况,用Western印迹法检测SREBP-1和caveolin-1蛋白的表达.结果：细胞内游离胆固醇、总胆固醇含量随Chol：MβCD浓度的增加,孵育时间的延长,呈浓度和时间依赖性地升高,分别在45μg/mL和72 h时达到峰值.Chol：MβCD 45μg/mL处理RAW264.7细胞72 h和用经典方法50μg/mL ox-LDL处理48 h,比较二种方法细胞内游离胆固醇、总胆固醇含量以及油红O染色显示的细胞内荷脂的情况均无明显差别.在加入45μg/mL的Chol：MβCD处理RAW264.7细胞的同时加入不同浓度依泽替米贝（3,10,30μmol/L）以及阳性对照药lovastatin,结果显示依泽替米贝和lovastatin均能显著降低细胞内胆固醇水平,且依泽替米贝的这一作用有剂量依赖性.Western印迹结果显示,Chol：MβCD诱导的模型组SREBP-1和caveolin-1的表达增加,而依泽替米贝和lovastatin能够逆转这种效应,且依泽替米贝的这一作用呈剂量依赖性.结论：Chol：MβCD能诱导RAW264.7细胞转化成为泡沫细胞.依泽替米贝能抑制Chol：MβCD诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞,其机制可能与通过下调SREBP-1表达进而下调caveolin-1的表达,抑制胆固醇的摄取有关. 展开更多
关键词 依泽替米贝 Chol:mβcd 巨噬细胞 泡沫细胞 CAVEOLIN-1 SREBP-1
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甲基-β-环糊精对中性粒细胞极性化及其与细胞内游离钙离子浓度变化的关系
5
作者 袁春华 蔡春青 +1 位作者 王斌 邹飞 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第29期5619-5622,共4页
背景:脂筏是质膜上富含胆固醇和鞘磷脂的微结构域。甲基-β-环糊精(Methyl-β-cyclodextrin,mβCD)为脂筏破裂剂,破坏膜脂的完整性。目的:观察mβCD对甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,fMLP)诱导... 背景:脂筏是质膜上富含胆固醇和鞘磷脂的微结构域。甲基-β-环糊精(Methyl-β-cyclodextrin,mβCD)为脂筏破裂剂,破坏膜脂的完整性。目的:观察mβCD对甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,fMLP)诱导的中性粒细胞极性化过程中的作用,及其与胞内游离钙离子浓度(Cytosolic free Ca2+concentration,[Ca2+]i)的关系。设计、时间及地点:开放性实验,于2007-02在南方医科大学公共卫生与热带医学学院环境医学研究室完成。材料:fMLP由美国Phoenix pharmaceuticals公司提供,mβCD由美国Sigma公司提供。方法:取健康志愿者外周静脉血5mL,采用重复梯度密度离心的方法分离中性粒细胞。根据诱导中性粒细胞极性化处理条件的不同分为3组,正常对照组、fMLP组、mβCD+fMLP组。正常对照组不加入任何试剂。fMLP组加入100nmol/LfMLP孵育15min。mβCD+fMLP组先加入10mmol/LmβCD预孵育15min,然后加入100nmol/LfMLP孵育15min。最后3组均滴入终浓度为10μmol/Lfuro-3/AM避光孵育45~60min。主要观察指标:倒置显微镜下观察中性粒细胞在不同处理条件下的细胞极性化情况,使用激光共聚焦显微镜监测[Ca2+]i在mβCD抑制细胞极性化过程中的变化。结果:fMLP可以诱导中性粒细胞的极性化,而预先使用10mmol/LmβCD孵育15min后,fMLP诱导的中性粒细胞极性化受抑制。同时,极性化过程中中性粒细胞的[Ca2+]i急剧增加,而mβCD预孵育后[Ca2+]i上升相幅度明显下降。结论:脂筏破裂剂mβCD抑制了fMLP诱导中性粒细胞极性化过程,该作用可能与[Ca2+]i变化有关。 展开更多
关键词 中性粒细胞 极性化 [CA^2+]I mβcd
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膜胆固醇对重组创伤弧菌溶细胞素活性的影响 被引量：2
6
作者 丁卉 潘娌妮 +4 位作者 郭秋 楼永良 严杰 伍越 王福乐 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2010年第5期696-701,共6页
研究膜胆固醇对重组创伤弧菌溶细胞素(recombinant Vibrio vulnificus hemolysin,rVvhA)生物学活性的影响,以进一步明确rVvhA的分子致病机制。利用甲基-β-环糊精(MβCD)可以去除细胞膜上胆固醇的能力,rVvhA作用细胞之前,细胞预先经5 mm... 研究膜胆固醇对重组创伤弧菌溶细胞素(recombinant Vibrio vulnificus hemolysin,rVvhA)生物学活性的影响,以进一步明确rVvhA的分子致病机制。利用甲基-β-环糊精(MβCD)可以去除细胞膜上胆固醇的能力,rVvhA作用细胞之前,细胞预先经5 mmol/L MβCD处理。测定MβCD预处理组和未处理组(即rVvhA直接作用组)细胞的存活率、细胞内钙离子浓度、培养上清中钾离子浓度及细胞凋亡与坏死情况。结果显示MβCD预处理组的细胞存活率较rVvhA直接作用组高、rVvhA引起的钙离子内流和钾离子释放受到抑制、细胞凋亡率也明显降低。结果表明,在rVvhA活性发挥中细胞膜上的胆固醇是必须存在的,胆固醇的降低会抑制rVvhA的活性。 展开更多
关键词 创伤弧菌 溶细胞素 甲基-β-环糊精 胆固醇
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小凹蛋白-1和细胞外钙敏感受体在人脐静脉内皮细胞小凹共定位研究 被引量：1
7
作者 龚艳 胡清华 +3 位作者 钟华 梁霄 罗小林 何芳 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2011年第3期305-308,共4页
前期研究发现小凹蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)和细胞外钙敏感受体(extracellular Ca2+-sensing receptor,CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)膜上有共定位,且Cav-1下调CaR介导的钙内流。本实验探讨HU... 前期研究发现小凹蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)和细胞外钙敏感受体(extracellular Ca2+-sensing receptor,CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)膜上有共定位,且Cav-1下调CaR介导的钙内流。本实验探讨HUVECs中Cav-1与CaR的亚细胞定位,可为进一步机制研究提供理论依据。以3~4代HU-VECs随机分为2组:(1)对照组;(2)甲基-β-环糊精(MβCD)处理组,分别采用蔗糖密度梯度离心和Western blot技术提取含小凹膜碎片和检测Cav-1和CaR蛋白的表达。结果显示,(1)MβCD处理组HUVECs细胞中Cav-1和CaR蛋白的表达与对照组相比无差异(P>0.05)。(2)MβCD处理组小凹区Cav-1和CaR蛋白的表达低于对照组(P<0.05)。由此可知,Cav-1和CaR蛋白共定位于HUVECs的小凹区,MβCD可抑制两者在小凹的共定位。 展开更多
关键词 蔗糖密度梯度离心 甲基-β-环糊精 小凹蛋白-1 细胞外钙敏感受体
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甲基-β-环糊精通过限制脂质代谢抑制横纹肌肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭
8
作者 胡亚飞 阚晨 汪思应 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第12期2010-2018,共9页
目的探讨抑制脂质合成对人骨骼横纹肌肉瘤细胞的影响及其分子机制。方法采用肿瘤基因表达数据库检查人骨骼肌细胞(HSMC)和人骨骼横纹肌肉瘤细胞脂质合成相关基因固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)和角鲨烯环氧化酶(SQLE)mRNA表达水平并通过... 目的探讨抑制脂质合成对人骨骼横纹肌肉瘤细胞的影响及其分子机制。方法采用肿瘤基因表达数据库检查人骨骼肌细胞(HSMC)和人骨骼横纹肌肉瘤细胞脂质合成相关基因固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)和角鲨烯环氧化酶(SQLE)mRNA表达水平并通过qRT-PCR验证。通过细胞增殖实验选出脂质抑制剂甲基-β-环糊精(mβCD)的细胞处理浓度。分别将3株人骨骼横纹肌肉瘤细胞(RD、SJCRH30和A673)作为对照组,1 mmol/L mβCD处理的三株人骨骼横纹肌肉瘤细胞分别作为实验组。平板克隆实验、软琼脂集落形成实验、细胞迁移及侵袭实验和裸鼠成瘤实验检测对照组和mβCD处理组人骨骼横纹肌肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长的变化。通过脂质组学及三酰甘油(TG)分析探究mβCD抑制人骨骼横纹肌肉瘤细胞恶性的分子机制。结果相对于HSMC,人骨骼横纹肌肉瘤细胞脂质合成相关基因SREBP1、SQLE表达增高(P<0.001);与对照组相比,mβCD组人骨骼横纹肌肉瘤细胞的增殖、平板克隆、迁移侵袭和集落形成能力减弱(P<0.05);裸鼠肿瘤体积和肿瘤质量增加也减少(P<0.05);脂质组学和TG试剂盒检测结果发现,与对照组相比,mβCD组TG含量降低(P<0.01)。结论mβCD可能通过降低TG等脂质代谢过程从而抑制人骨骼横纹肌肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。 展开更多
关键词 横纹肌肉瘤 脂质合成 脂质代谢 三酰甘油 甲基-β-环糊精
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脂筏在柯萨奇B3病毒感染心肌细胞中作用
9
作者 王槐栋 张莹 +1 位作者 许东洙 黄红兰 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期228-229,共2页
目的探讨脂筏在柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞中的作用,旨在为阐明CVB3致病的分子机理及寻找新的抗病毒靶点提供依据。方法用甲基-β-环糊精(MβCD)去除细胞膜维持脂筏稳定性的胆固醇分子后感染CVB3,用Western blot法检测CVB3 VP1蛋... 目的探讨脂筏在柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞中的作用,旨在为阐明CVB3致病的分子机理及寻找新的抗病毒靶点提供依据。方法用甲基-β-环糊精(MβCD)去除细胞膜维持脂筏稳定性的胆固醇分子后感染CVB3,用Western blot法检测CVB3 VP1蛋白的表达并测定病毒的滴度,同时观察补充外源性胆固醇恢复MβCD对CVB3感染的抑制作用。结果用MβCD去除胆固醇分子破坏细胞膜脂筏结构,可抑制CVB3感染细胞;1.2、5.5和10 mmol/L MβCD去除细胞膜胆固醇CVB3滴度分别为(4.2±0.06)、(3.5±1.05)、(3.0±0.15)和(2.0±0.15)lgP-FU/mL,均低于无MβCD处理对照组的(5.7±0.06)lgPFU/mL(P<0.001);补充外源性胆固醇可恢复MβCD对CVB3感染的抑制作用。结论细胞膜脂筏在CVB3感染心肌细胞中起重要作用,是病毒进入细胞的关键因素。 展开更多
关键词 脂筏 甲基-β-环糊精(mβcd) 柯萨奇B3病毒(CVB3) 心肌细胞 感染
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