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噬菌体TM4中LysinB蛋白的特征及抗菌特性研究
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作者 潘稚芬 周紫薇 +1 位作者 徐海萍 王蔚 《中国现代医生》 2024年第21期6-10,25,共6页
目的对分枝杆菌噬菌体TM4LysinB蛋白序列进行生物学分析,原核表达LysinB蛋白并评估其体外杀菌特性。方法合成噬菌体TM4 LysinB基因,构建原核表达重组质粒,诱导蛋白可溶表达、纯化,通过在线软件程序分析噬菌体TM4 LysinB蛋白的生物学特征... 目的对分枝杆菌噬菌体TM4LysinB蛋白序列进行生物学分析,原核表达LysinB蛋白并评估其体外杀菌特性。方法合成噬菌体TM4 LysinB基因,构建原核表达重组质粒,诱导蛋白可溶表达、纯化,通过在线软件程序分析噬菌体TM4 LysinB蛋白的生物学特征;在7H9培养基中培养耻垢分枝杆菌,检测其杀菌效果及稳定性。结果LysinB蛋白理论等电点为6.66,不稳定指数为28.71,为稳定蛋白质,且为两亲性蛋白。二级结构中,无规则卷曲、α-螺旋、β-折叠和转角分别占42.00%、40.25%、12.00%和5.75%;三级结构中,无规则卷曲含量高,由11~73位AA组成的肽段构成肽聚糖结合结构域。预测出B细胞抗原表位区段和T细胞抗原表位的强结合肽段。LysinB蛋白具有显著的体外杀耻垢分枝杆菌的能力,pH8.0的PBST蛋白缓冲液有利于在实验周期内维持LysinB蛋白的杀菌效果。结论进一步了解分枝杆菌噬菌体TM4裂解酶LysinB蛋白,为研制可稳定贮存的噬菌体酶制剂及其临床应用提供参考。 展开更多
关键词 噬菌体TM4 lysinb蛋白 耻垢分枝杆菌 生物信息学
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分枝杆菌噬菌体D29 LysinB/Holin真核表达载体的构建及杀菌试验
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作者 席志阳 宋通 +3 位作者 王文涛 吴文潇 付玉荣 伊正君 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期74-80,共7页
目的构建分枝杆菌噬菌体D29 LysinB/Holin融合蛋白真核表达载体,通过细胞感染模型研究其在胞内对结核分枝杆菌的杀伤效果。方法构建原核重组质粒pET32a-LysinB并诱导表达,纯化蛋白后制备多克隆抗体;构建真核重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/... 目的构建分枝杆菌噬菌体D29 LysinB/Holin融合蛋白真核表达载体,通过细胞感染模型研究其在胞内对结核分枝杆菌的杀伤效果。方法构建原核重组质粒pET32a-LysinB并诱导表达,纯化蛋白后制备多克隆抗体;构建真核重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/Holin并转染进单核巨噬细胞RAW264.7,经制备的LysinB多克隆抗体进行表达鉴定后,建立细胞感染模型并通过抗酸染色和菌落计数检测LysinB/Holin融合蛋白的杀菌效果。结果成功制备LysinB的多克隆抗体。重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/Holin在真核细胞中有效表达LysinB/Holin融合蛋白且对细胞无明显毒性。LysinB/Holin融合蛋白可有效杀伤胞内的结核分枝杆菌。结论重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/Holin对胞内结核分枝杆菌有较好的杀伤效果,且对细胞无明显毒性,具有治疗结核病的潜能。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 噬菌体D29 Lysin B HOLIN
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