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题名酵母单杂交技术验证叶用莴苣LsHPB互作启动子
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作者
曹佳琰
王惠玉
韩莹琰
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机构
农业应用新技术北京市重点试验室/植物生产国家级实验教学示范中心/北京农学院植物科学技术学院
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出处
《北京农学院学报》
2025年第1期37-43,共7页
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基金
国家自然科学基金资助项目“LsFUL上游调控因子响应高温启动叶用莴苣抽薹开花的作用机制研究”(32472769)。
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文摘
【目的】AG和SOC1都属于MADS-box家族基因,AG参与调控多种植物花器官中雄蕊和雌蕊的发育和成熟;SOC1在多种植物中参与整合许多开花途径。以叶用莴苣SOC1-like基因LsHPB基因为研究对象,挖掘出LsHPB基因下游互作蛋白之一LsAG,解析LsHPB参与叶用莴苣抽薹的分子机理,进一步完善MADS-box家族基因调控植物响应高温诱导后抽薹的模型。【方法】通过酵母单杂试验验证转录因子LsHPB与候选基因启动子proLsAG之间的关系,构建双荧光素酶载体,注射烟草并比较检测荧光信号强度和LUC和REN两种酶活性的比值,验证转录因子LsHPB能否激活LsAG启动子。【结果】酵母单杂交试验显示酵母菌在0 ng/mL AbA的SD/-Leu培养基上正常生长,但在含有200 ng/mL AbA抑制浓度的SD/-Leu固体培养基上只有同时含有Prey和Bait的酵母菌株才能生长。随着酵母菌液稀释程度加倍,酵母菌斑的个数明显减少。双荧光素酶试验显示了烟草叶片荧光表达情况,pGreenII62-SK-LsHPB+pGreenII0800-LUC-ProLsAG的组合菌液注射部分荧光信号强度最高,此外此组合LUC和REN两种酶活性的比值高于其他组合。由此可验证LsAG为LsHPB基因下游调控因子,最终确定LsHPB蛋白结合LsAG启动子的互作关系。【结论】初步解析了LsHPB参与叶用莴苣抽薹的分子机理,为完善MADS-box家族基因调控植物响应高温诱导后抽薹的模型奠定基础。
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关键词
叶用莴苣
酵母单杂
lsag
LsHPB
MADS-box家族基因
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Keywords
leaf lettuce
yeast-one-hybrid
lsag
LsHPB
MADS-box family gene
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分类号
S636.2
[农业科学—蔬菜学]
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