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题名忍冬VIGS基因沉默体系构建
被引量：3
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作者
褚洪月
刘振华
李佳
张永清
蒲高斌
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机构
山东中医药大学
山东省中药质量控制与全产业链建设协同创新中心
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出处
《中草药》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期1309-1315,共7页
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基金
山东省重点研发计划(乡村振兴科技创新提振行动计划)项目(2022TZXD0036)
山东省农业良种工程项目(2021LZGC008)
山东省现代农业产业技术体系中草药创新团队项目(SDAIT-20)。
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文摘
目的以忍冬Lonicera japonica八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因为标记基因,利用ZMBJCMV载体建立基于病毒诱导的忍冬基因沉默体系。方法以忍冬为材料,通过选取同源性较高的片段设计PDS基因的特异性引物,克隆出片段长度为135 bp的序列作为目的基因片段,经双酶切后与黄瓜花叶病毒载体连接构建VIGS重组载体,转化根癌农杆菌后,侵染忍冬幼苗。此外,还对农杆菌吸光度(A)值和侵染方法对PDS基因沉默效率的影响进行了比较。结果被侵染植株叶片PDS基因表达水平显著降低,叶绿素和类胡萝卜素含量显著下降,叶片出现白化表型。结论建立了以ZMBJ-CMV载体诱导的忍冬基因沉默体系,农杆菌A值为0.8、注射后再进行真空浸润,能够提高忍冬目标基因的沉默效率,为开展忍冬关键基因的功能研究提供了技术支撑。
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关键词
忍冬
ljpds
VIGS
叶绿素
类胡萝卜素
沉默体系
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Keywords
Lonicera japonica Thunb.
ljpds
VIGS
chlorophyll
carotenoid
silencing system
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分类号
R286.12
[医药卫生—中药学]
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