加味七方胃痛颗粒通过MicroRNA let-7c促进胃癌细胞凋亡机制研究 被引量：1

1

作者 王婷 梁英业 +4 位作者 李霞 李英豪 常亮 唐燕 唐梅文 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2572-2580,共9页

目的探讨加味七方胃痛颗粒抗胃癌机制。方法细胞随机分为6组,分别加入对应的血清及慢病毒进行干预,检测细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭,以及miR-let-7c、MTDH、ERK、NF-кB、CyclinD1的水平。结果相较于空白组,CCK8实验中,含药血清组与miR-... 目的探讨加味七方胃痛颗粒抗胃癌机制。方法细胞随机分为6组,分别加入对应的血清及慢病毒进行干预,检测细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭,以及miR-let-7c、MTDH、ERK、NF-кB、CyclinD1的水平。结果相较于空白组,CCK8实验中,含药血清组与miR-let-7c mimics组可抑制细胞增殖,miR-let-7c inhibitor组可促进细胞增殖;流式细胞术实验中,含药血清组和miR-let-7c mimics组可促进细胞凋亡;细胞划痕实验中含药血清组与miR-let-7c mimics组抑制细胞迁移,miR-let-7c inhibitor组促进细胞迁移;Transwell侵袭实验中,含药血清组与miR-let-7c mimics组抑制细胞侵袭,miR-let-7c inhibitor组促进细胞侵袭;RT-PCR实验中,含药血清组和miR-let-7c mimics组可降低MTDH、ERK、CyclinD1、NF-κB的水平,增加miR-let-7c水平;miR-let-7c inhibitor组可增加MTDH、ERK、CyclinD1、NF-κB的表达水平,降低miR-let-7c水平;Western Blot实验中,含药血清组和miR-let-7c mimics组可降低MTDH、ERK、CyclinD1、NF-κB的水平,miR-let-7c inhibitor组可增加MTDH、ERK、CyclinD1、NF-κB的水平。结论加味七方胃痛颗粒可促进胃癌细胞凋亡,机制可能是通过上调miRNA-let-7c靶向下调MTDH水平,从而抑制ERK/NF-кB通路的表达实现的。 展开更多

关键词 加味七方胃痛颗粒 微小RNA let-7c 人胃腺癌细胞

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let-7c参与肺泡巨噬细胞M2极化在煤矿粉尘致大鼠肺组织上皮-间质转化中的作用 被引量：2

2

作者 王茹 卢丽媛 +3 位作者 李萌 刘洋 贺小玉 张慧芳 《环境与职业医学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期687-693,共7页

[背景]煤工尘肺(CWP)是一种危害严重的职业性肺病,是我国法定职业病之一。上皮-间质转化(EMT)参与尘肺病肺组织弥漫性纤维化,其机制可能与let-7c调控巨噬细胞极化有关。[目的]通过动物体内实验,探讨let-7c参与巨噬细胞极化在不同含量游... [背景]煤工尘肺(CWP)是一种危害严重的职业性肺病,是我国法定职业病之一。上皮-间质转化(EMT)参与尘肺病肺组织弥漫性纤维化,其机制可能与let-7c调控巨噬细胞极化有关。[目的]通过动物体内实验,探讨let-7c参与巨噬细胞极化在不同含量游离SiO_(2)的煤矿粉尘致大鼠肺组织EMT中的作用。[方法]将SD大鼠随机分为对照组、5%SiO_(2)组、30%SiO_(2)组和99.9%SiO_(2)组,每组16只。各组大鼠分别气管滴注100μL 20 mg·mL^(-1)混悬液(5%SiO_(2)、30%SiO_(2)、99.9%SiO_(2))或生理盐水,并在1、3个月时,收集支气管肺泡灌洗液。采用免疫荧光检测肺泡巨噬细胞(AMs)中M1标志物(CD86)或M2标志物(CD206)相对表达水平。采用苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色观察肺组织炎症和纤维化。采用蛋白质免疫印迹法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、E-钙黏连蛋白及波形蛋白表达水平;采用荧光定量PCR检测let-7c、c/EBP-δ基因表达水平。[结果]HE及Masson染色结果显示:与对照组相比,随着染尘时间的增加,5%SiO_(2)组、30%SiO_(2)组和99.9%SiO_(2)组大鼠肺组织纤维化程度逐渐加重。与对照组相比,5%SiO_(2)组、30%SiO_(2)组和99.9%SiO_(2)组大鼠CD86、CD206的表达在1个月时均逐渐增加(F=330.904、146.801,P<0.05),3个月时各组CD86的表达逐渐减少(F=331.781,P<0.05),而CD206的表达增加(F=1164.190,P<0.05)。1个月时,5%SiO_(2)组、30%SiO_(2)组和99.9%SiO_(2)组TGF-β1(F=8.847,P<0.05)及波形蛋白(F=13.275,P<0.05)表达逐渐增加,E-钙黏连蛋白(F=6.253,P<0.05)表达逐渐减少;3个月时,各组TGF-β1(F=16.833,P<0.05)及波形蛋白(F=55.021,P<0.05)表达增加,E-钙黏连蛋白减少(F=12.790,P<0.05)。PCR结果显示:与对照组相比,5%SiO_(2)组、30%SiO_(2)组和99.9%SiO_(2)组let-7c mRNA的表达在1个月和3个月时均增加(F=11.251、28.136,P<0.05);各组c/EBP-δmRNA的表达在1个月和3个月时均减少(F=49.204、177.090,P<0.05)。[结论]在粉尘刺激下,let-7c通过调节巨噬细胞极化促进EMT的发生,从而参与肺纤维化的形成,进而影响CWP的进展。 展开更多

关键词 煤工尘肺 let-7c 巨噬细胞极化 上皮-间质转化 游离二氧化硅

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EHD2、miR-let-7c和lncRNA FOXD2-AS1在人喉鳞状细胞癌组织中的表达及其关联性分析

3

作者 宫美恒 陈沫 +1 位作者 韩慧 于婷婷 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1365-1371,共7页

目的:探讨Eps15同源结构域蛋白2 (EHD2)、微小RNA let-7c (miR-let-7c)和长链非编码RNA (lncRNA)FOXD2-AS1在喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中的表达水平,阐明EHD2/miRlet-7c/FOXD2-AS1信号轴与LSCC发生的关联性。方法:收集40例LSCC患者的癌组... 目的:探讨Eps15同源结构域蛋白2 (EHD2)、微小RNA let-7c (miR-let-7c)和长链非编码RNA (lncRNA)FOXD2-AS1在喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中的表达水平,阐明EHD2/miRlet-7c/FOXD2-AS1信号轴与LSCC发生的关联性。方法:收集40例LSCC患者的癌组织标本,按照病理类型分为低级别组(中或高分化,32例)和高级别组(低分化,8例),按照肿瘤淋巴结转移(TNM)临床分期分为TNM早期组(Ⅰ-Ⅱ期,13例)和TNM晚期组(Ⅲ-Ⅳ期,27例),按照有无淋巴结转移分为转移组(21例)和无转移组(19例)。另取40例对应癌旁正常组织标本作为对照组。采用免疫组织化学法检测各组标本中EHD2表达情况,分析其与LSCC患者临床病理参数之间的关系,采用生物信息学方法筛选出miR-let-7c作为候选微小RNA (miRNA),与其启动子区域存在结合位点的FOXD2-AS1作为候选lncRNA。取10对新鲜的LSCC组织标本和癌旁正常组织标本,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组样本中EHD2 mRNA、miRNA-let-7c和FOXD2-AS1表达水平,并验证其关联性。结果:与癌旁正常组织比较,LSCC组织中EHD2表达水平明显降低(P<0.01),且TNM早期组患者LSCC组织中EHD2阳性表达率明显高于TNM晚期组(P<0.05),病理类别和有无淋巴结转移与EHD2表达无明显关联(P>0.05)。与癌旁正常组织比较,LSCC组织中miR-let-7c表达水平明显降低(P<0.01),FOXD2-AS1表达水平明显升高(P<0.05)。LSCC组织中FOXD2-AS1与miR-let-7c表达水平呈负相关关系(r=-0.67,P<0.05),miR-let-7c与EHD2 mRNA表达水平呈负相关关系(r=-0.83,P<0.01)。结论:EHD2和miR-let-7c在LSCC组织中呈低表达,可能是新的抑癌基因;FOXD2-AS1在LSCC组织中高表达,可能是新的原癌基因;FOXD2-AS1/miR-let-7c/EHD2信号轴可能参与了LSCC的发生发展。 展开更多

关键词 Eps15同源结构域蛋白2 微小RNA let-7c 喉鳞状细胞癌 长链非编码核糖核酸 原癌基因

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基于生物信息学探索let-7c-5p通过靶向OLFM4参与支气管哮喘疾病进展研究

4

作者 刘锡娇 黎友伦 《现代医药卫生》 2024年第11期1833-1839,共7页

目的基于生物信息学探索let-7c-5p通过靶向OLFM4参与支气管哮喘疾病进展。方法选取基因表达公共数据库(GEO)中芯片数据集GSE207751和GEO222894,采用R软件的“Limma”和“DESeq2”软件包分析2个数据集中的差异表达基因(DEGs)和差异miRNA... 目的基于生物信息学探索let-7c-5p通过靶向OLFM4参与支气管哮喘疾病进展。方法选取基因表达公共数据库(GEO)中芯片数据集GSE207751和GEO222894,采用R软件的“Limma”和“DESeq2”软件包分析2个数据集中的差异表达基因(DEGs)和差异miRNA。利用hclust函数进行WCGNA分析。应用“ClusterProfiler”软件包进行基因本体(GO)功能注释富集分析和京都基因与基因组百科全书信号通路富集分析,STRING数据库建立蛋白互作网络(PPI网络),Cytoscape筛选严重哮喘患者的核心基因。miRWalk、miRBase和miRTarBase数据库用于靶基因的miRNA预测。结果分析获得80个DEGs,包括上调的OLFM4,进行WCGNA分析后发现和哮喘严重程度相关的Darked模块基因24个,之后进行PPI网格构建和mRNA-miRNA预测筛选出4个核心上调基因(包括OLFM4)和6个miRNA(包括hsa-let-7c-5p)。分析获得98个差异表达miRNA,其中上调5个,下调93个。进行轻度哮喘患者和重度哮喘患者差异miRNA交叉分析发现,let-7c-5p在轻度哮喘患者和重度哮喘患者中表达下调。结论研究多重验证了在哮喘患者中,let-7c-5p通过调控OLFM4影响哮喘的气道炎症和气道重塑,参与哮喘疾病进展,有利于了解哮喘疾病状态进展的潜在分子机制,同时验证了let-7c-5p成为哮喘潜在生物标志物的潜力,为进一步研究哮喘疾病进展提供理论基础。 展开更多

关键词 let-7c-5p OLFM4 支气管哮喘 疾病进展 生物标志物

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Let-7c靶向IGF2BP2调控人牙髓干细胞增殖的分子机制

5

作者 王雨珊 孙梦馨 +4 位作者 杨屹城 衡笑 张雨欣 杨建光 刘岩 《上海口腔医学》 CAS 2024年第6期572-579,共8页

目的:探讨let-7c过表达对人类牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖的影响及其作用机制。方法:分离培养hDPSCs,应用let-7c模拟物和抑制剂转染hDPSCs。利用qRT-PCR检测转染效率,利用CCK-8检测细胞增殖情况。应用流式细... 目的:探讨let-7c过表达对人类牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖的影响及其作用机制。方法:分离培养hDPSCs,应用let-7c模拟物和抑制剂转染hDPSCs。利用qRT-PCR检测转染效率,利用CCK-8检测细胞增殖情况。应用流式细胞术检测细胞周期,通过蛋白质印迹分析let-7c抑制细胞增殖的作用机制。应用小干扰RNA(small interfer RNA,siRNA)瞬时转染方法构建针对胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)基因的细胞模型,通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验探讨分析let-7c是否直接靶向IGF2BP2。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:Let-7c过表达抑制细胞增殖。Let-7c通过调节S和G2/M周期阻断细胞增殖,直接与hDPSCs中与细胞周期调控有关的一组信使RNA(messenger RNA,mRNA)序列IGF2BP2结合,靶向抑制IGF2BP2的表达,两者的表达水平呈现负相关关系。结论:Let-7c通过靶向抑制IGF2BP2表达,抑制hDPSCs增殖。 展开更多

关键词 let-7c IGF2BP2 人类牙髓干细胞 细胞增殖 细胞周期

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Let-7c-5p在食管鳞癌中的表达及生物学功能

6

作者 郑雅心 康敏 《现代消化及介入诊疗》 2024年第3期302-306,共5页

目的探讨食管鳞癌(ESCC)中let-7c-5p的表达,同时分析let-7c-5p对ESCC细胞KYSE150增殖与迁移的影响。方法收集本院食管鳞癌组织标本42例,癌旁组织作为对照组,经由qRT-PCR(实时荧光定量聚合酶链反应)测定ESCC组织与其相邻癌旁组织内let-7c... 目的探讨食管鳞癌(ESCC)中let-7c-5p的表达,同时分析let-7c-5p对ESCC细胞KYSE150增殖与迁移的影响。方法收集本院食管鳞癌组织标本42例,癌旁组织作为对照组,经由qRT-PCR(实时荧光定量聚合酶链反应)测定ESCC组织与其相邻癌旁组织内let-7c-5p表达量;经由脂质体Lipofectamine 2000对KYSE150进行转染,qRT-PCR测定let-7c-5p于转染KYSE150细胞内的表达,借助CCK-8技术测定转染后细胞的增殖情况;通过伤口愈合试验与Transwell迁移试验对细胞迁移活性展开测定。结果ESCC组织内let-7c-5p mRNA表达量较其癌旁正常组织明显偏低(P=0.000);经过KYSE150细胞转染,在表达量上,let-7c-5p mimics较NC组明显偏高(P<0.05);转染组KYSE150增殖功能显示大幅下降,其迁移活性也大幅受抑。结论let-7c-5p在食管鳞癌中呈低表达,上调其表达能够明显抑制食管鳞癌KYSE150细胞增殖和抑制其迁移,为食管鳞癌患者的诊断和治疗提供了新的潜在靶点。 展开更多

关键词 let-7c-5p 食管鳞癌 细胞增殖 细胞迁移

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Let-7c及其前体在肺癌中的表达 被引量：4

7

作者 陈波 卢敏南 +3 位作者 王熙才 吴疆 吴锡南 何越峰 《昆明医科大学学报》 CAS 2014年第9期20-22,共3页

目的探讨Let-7c及其前体Pri-let-7c在肺癌中的表达特征.方法选择47例肺癌患者的肺癌组织和癌旁正常肺组织,利用TRIzol提取总RNA,实时荧光定量PCR检测基因表达量.结果 Pri-let-7c在癌组织中的相对表达量为(13.69±0.80),显著低于癌... 目的探讨Let-7c及其前体Pri-let-7c在肺癌中的表达特征.方法选择47例肺癌患者的肺癌组织和癌旁正常肺组织,利用TRIzol提取总RNA,实时荧光定量PCR检测基因表达量.结果 Pri-let-7c在癌组织中的相对表达量为(13.69±0.80),显著低于癌旁正常组织的(14.13±0.66)(P<0.05),而Let-7c表达无显著变化.肺癌组织中Let-7c与MRP成正相关(P<0.05),与淋巴结转移成负相关(P<0.05)),Pri-let-7c的表达与GSTPπ及淋巴结转移均成负相关(P<0.05).结论 Let-7c及其前体Pri-let-7c在肺组织表达并不一致,但与肺癌密切相关. 展开更多

关键词 肺癌 let-7c pri-let-7c

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let-7c与其靶基因细胞因子在肺结核痰液中的表达及其功能分析 被引量：3

8

作者 伊正君 付玉荣 +1 位作者 吴晓燕 许福亮 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期385-388,411,共5页

目的检测microRNA let-7c及其靶基因细胞因子在肺结核患者痰液中的含量变化,并用生物信息学技术和软件对let-7c的功能进行预测分析,为进一步阐明let-7c在结核感染中的作用奠定基础。方法用核酸杂交和定量PCR检测健康对照和活动性肺结核... 目的检测microRNA let-7c及其靶基因细胞因子在肺结核患者痰液中的含量变化,并用生物信息学技术和软件对let-7c的功能进行预测分析,为进一步阐明let-7c在结核感染中的作用奠定基础。方法用核酸杂交和定量PCR检测健康对照和活动性肺结核病人的痰液中let-7c的含量;用TargetScan与PicTar预测let-7c的靶基因,用DAVID数据库和Cyto-scape的BINGO插件对let-7c的预测靶基因进行GO注释分析和生物通路分析;用ELISA法检测let-7c靶基因细胞因子IL-10与IL-6在痰液中的水平变化。结果杂交和PCR结果表明:let-7c在活动性肺结核患者痰液中的含量均比健康对照组显著降低(P<0.05)。let-7c预测靶基因的GO注释结果富集在负性调节细胞间通讯等生物学过程及胞外基质构成等分子功能方面(P<0.05);在KEGG通路数据库中let-7c预测靶基因主要富集于MAPK、钙离子信号通路与TGF-beta信号通路等方面(P<0.05)。痰液中let-7c的靶基因细胞因子IL-10的含量显著增高。结论 let-7c在活动性肺结核感染病人痰液中的含量明显降低,let-7c靶基因细胞因子IL-10明显增高,let-7c的靶基因主要参与细胞信号通讯、刺激反应、信号转导等生物学过程。这些结果为进一步深入研究let-7c在结核感染中调控功能奠定了基础。 展开更多

关键词 肺结核 let-7c 靶基因 IL-10 生物信息学

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Let-7c慢病毒载体对骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经细胞的影响 被引量：6

9

作者 王静 赵绍云 +5 位作者 李明哲 景黎君 焦淑洁 彭涛 滕军放 贾延劼 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第1期20-25,共6页

背景:微小RNA参与调控干细胞增殖、分化、衰老等过程,通过了解Let-7家族成员Let-7c对骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的影响可以为干细胞移植治疗提供新思路。目的:探讨Let-7c慢病毒载体在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化... 背景:微小RNA参与调控干细胞增殖、分化、衰老等过程,通过了解Let-7家族成员Let-7c对骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的影响可以为干细胞移植治疗提供新思路。目的:探讨Let-7c慢病毒载体在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中的作用。方法:构建Let-7c上调及下调慢病毒载体并体外转染大鼠骨髓间充质干细胞,筛选最适转染复数;实验分为未转染组、阴性转染组(转染空白慢病毒)、转染上调组(转染LV-rno-Let-7c-up)、转染下调组(转染LV-rno-Let-7c-5p-inhibition);采用法舒地尔诱导转染后的大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经细胞,倒置荧光显微镜下观察骨髓间充质干细胞转染后荧光表达,免疫细胞化学染色检测神经元标记物NSE和MAP-2的表达,RT-PCR检测MAP-2 m RNA的表达,MTT法检测细胞存活率。结果与结论:倒置荧光显微镜下观察大鼠LV-rno-Let-7c-up和LV-rno-Let-7c-5p-inhibition慢病毒载体转染成功。法舒地尔可以诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞,与阴性转染组相比,转染上调组的诱导效率升高(P<0.05),NSE和MAP-2表达率上升(P<0.05),转染下调组的诱导效率下降,NSE和MAP-2表达率下降(P<0.05)。转染LV-rno-Let-7c-up后骨髓间充质干细胞经法舒地尔诱导向神经细胞分化比率增加,Let-7c可能具有促进骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。 展开更多

关键词 骨髓 间质干细胞 微RNAs 神经元 细胞分化 慢病毒感染 组织工程 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞 let-7c 慢病毒 转染 神经分化 国家自然科学基金

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miRNA-let-7c在逆转大鼠糖尿病视网膜病变中的作用 被引量：4

10

作者 欧玉仑 邝国平 周小平 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2020年第7期619-624,共6页

目的探讨MicroRNA-let-7c(miRNA-let-7c)在逆转糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)中的作用。方法制作DR大鼠模型48只,分为6组空白模型组、miRNA-let-7c模拟物组、Anti-miRNA-let-7c组、阴性对照(NC)组、Anti-miRNA-let-7c+Anti... 目的探讨MicroRNA-let-7c(miRNA-let-7c)在逆转糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)中的作用。方法制作DR大鼠模型48只,分为6组空白模型组、miRNA-let-7c模拟物组、Anti-miRNA-let-7c组、阴性对照(NC)组、Anti-miRNA-let-7c+Anti-STAT3组、Anti-STAT3组;同时选择8只正常大鼠作为正常组。采用实时荧光定量PCR检测各组大鼠视网膜和转染后的293T细胞中miRNA-let-7c和STAT3的mRNA表达水平,Western blot检测各组大鼠视网膜中STAT3、VEGFA、BAX及Bcl蛋白水平,通过HE染色计数大鼠视网膜血管内皮细胞的数目以及荧光素酶报告基因分析miRNA-let-7c与STAT3的直接作用。结果各组大鼠视网膜和转染后的293T细胞中miRNA let-7c与STAT3的mRNA表达呈负相关(r=-0.906,P<0.001)。与NC组的血管内皮细胞核(22±3)个相比,Anti-STAT3组的血管内皮细胞核(14±3)个明显减少(P<0.05);而Anti-miRNA-let-7c组血管内皮细胞核(58±6)个显著增加(P<0.05)。与NC组相比,miRNA-let-7c组和Anti-STAT3组大鼠视网膜中的STAT3、VEGFA和Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);而Anti-miRNA-let-7c组大鼠视网膜中的STAT3、VEGFA和Bax蛋白表达显著升高(P<0.05)。此外,miRNA-let-7c组miRNA-let-7c mRNA表达为2.24±0.25,较NC组miRNA-let-7c mRNA表达(1.32±0.17)显著升高(P<0.05),而Anti-miRNA-let-7c组miRNA-let-7c mRNA表达(0.62±0.05)显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果显示,STAT33’UTR-WT的相对荧光素酶活性为0.55±0.03,低于WT+NC组的1.04±0.18,差异有统计学意义(P<0.05),表明STAT3是miRNA-let-7c的靶基因。结论miRNA-let-7c的过表达可能下调STAT3的表达,从而阻止大鼠DR模型的发展。 展开更多

关键词 MicroRNA-let-7c STAT3 糖尿病视网膜病变 内皮细胞核

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稳定表达猪miRNA let-7c细胞株的建立及其对CSFV的调控作用 被引量：1

11

作者 张旭 张彦明 +2 位作者 张倩 程媛媛 谭晓妮 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第12期1-6,12,共7页

【目的】构建含有let-7c前体基因的重组质粒pGene-pre-let-7c,建立稳定表达猪miRNAlet-7c细胞株,研究let-7c对猪瘟病毒(CSFV)复制的调控作用。【方法】利用RNA22软件筛选出CSFV基因组3′-UTR潜在的let-7c结合位点,PCR扩增出let-7c前体片... 【目的】构建含有let-7c前体基因的重组质粒pGene-pre-let-7c,建立稳定表达猪miRNAlet-7c细胞株,研究let-7c对猪瘟病毒(CSFV)复制的调控作用。【方法】利用RNA22软件筛选出CSFV基因组3′-UTR潜在的let-7c结合位点,PCR扩增出let-7c前体片段,连接到表达载体pGenesil-1.1-dBm2上,构建重组质粒pGene-pre-let-7c,采用脂质体法将重组质粒转染猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),经G418抗性压力筛选获得阳性细胞株。对获得的阳性细胞株进行接毒试验,检测CSFV的复制情况。用MTT比色法检测阳性细胞的增殖情况。【结果】成功扩增出let-7c前体基因,并构建了pGene-pre-let-7c重组质粒。重组质粒转染SUVEC细胞后筛选获得了稳定表达let-7c的细胞株。let-7c可下调CSFV在细胞中的复制。【结论】let-7c可下调CSFV的RNA复制水平。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 猪脐静脉血管内皮细胞 MIRNA let-7c

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let-7c对卵巢功能的调控作用 被引量：4

12

作者 洪黎明 杨晓葵 《国际生殖健康／计划生育杂志》 CAS 2015年第4期315-318,共4页

正常的卵巢功能不仅受下丘脑-垂体-卵巢轴神经内分泌活动的调控,还与卵巢自分泌与旁分泌有关。内分泌激素、细胞因子、生长因子等多种因素的协调作用共同维持正常的卵巢周期,任何因素调节异常都会导致卵巢功能障碍或卵巢疾病的发生。微... 正常的卵巢功能不仅受下丘脑-垂体-卵巢轴神经内分泌活动的调控,还与卵巢自分泌与旁分泌有关。内分泌激素、细胞因子、生长因子等多种因素的协调作用共同维持正常的卵巢周期,任何因素调节异常都会导致卵巢功能障碍或卵巢疾病的发生。微小RNA(micro RNA,mi RNA)是一类能在转录后水平对基因表达进行负调控的非编码单链小RNA,参与机体多种生理与病理过程。let-7c是目前研究最为广泛的mi RNA之一,近年研究表明let-7c除了与肿瘤的发生、发展密切相关,还通过多种信号转导途径参与卵巢颗粒细胞增殖、分化和凋亡过程,在卵泡发育、卵巢激素的合成与作用、卵巢早衰及卵巢癌的发病过程中也具有重要作用。 展开更多

关键词 微RNAS 卵泡 卵巢功能早衰 卵巢肿瘤 let-7c

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双荧光素酶报告法验证乳腺癌中lncRNA PVT1为let-7c-5p的靶基因 被引量：4

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作者 张硕 沈泳 +1 位作者 高秀飞 谢小红 《浙江医学》 CAS 2020年第1期11-15,共5页

目的探索在乳腺癌中长链非编码RNA(lncRNA)浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)是否为let-7c-5p的靶标基因。方法利用生物信息学软件预测PVT1序列上let-7c-5p的结合位点,PCR扩增出PVT1上包含结合位点的部分原序列片段以及敲除结合位点的突变序... 目的探索在乳腺癌中长链非编码RNA(lncRNA)浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)是否为let-7c-5p的靶标基因。方法利用生物信息学软件预测PVT1序列上let-7c-5p的结合位点,PCR扩增出PVT1上包含结合位点的部分原序列片段以及敲除结合位点的突变序列片段并连接到pRL-TK载体上,重组成pRL-TK-Pw和pRL-TK-Pm质粒,再与对照质粒pGL3以及let-7c-5p或微小RNA(miRNA)-NC mimics共转染至乳腺癌细胞系MCF-7细胞中。作用48h后,使用双荧光素酶检测试剂盒裂解细胞并检测荧光素酶活性。结果与对照组比较,let-7c-5p能够有效抑制含PVT1原序列的pRL-TK-Pw报告载体的荧光素酶活性,而对敲除了结合位点的pRL-TK-Pm报告载体则无明显抑制作用。结论乳腺癌中PVT1为let-7c-5p的靶标基因。 展开更多

关键词 let-7c-5p PVT1 双荧光素酶报告法 乳腺癌 长链非编码RNA 微小RNA

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let-7a1和let-7c在非小细胞肺癌中的表达及临床意义 被引量：7

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作者 李殿明 柳兆飞 宁国兰 《蚌埠医学院学报》 CAS 2021年第3期285-290,共6页

目的:探讨人类微小RNA let-7a1和let-7c在肺癌组织中的表达及与临床病理特征之间的关系。方法:收集53例肺组织手术标本及临床资料,其中包括肺癌组织44例(收集其癌组织和癌旁正常组织)和良性肺疾病组织9例。并收集病人吸烟史、肿瘤TNM分... 目的:探讨人类微小RNA let-7a1和let-7c在肺癌组织中的表达及与临床病理特征之间的关系。方法:收集53例肺组织手术标本及临床资料,其中包括肺癌组织44例(收集其癌组织和癌旁正常组织)和良性肺疾病组织9例。并收集病人吸烟史、肿瘤TNM分期、病理分化程度及有无淋巴结转移等。采用Trizol法提取总RNA,采用荧光定量PCR检测let-7a1和let-7c的表达,分析其在肺癌组织、癌旁正常组织及良性肺疾病组织中的表达差异及与临床特征的关系。结果:肺癌组织中let-7a1和let-7c的相对表达量均低于癌旁正常组织和良性肺疾病组织(P<0.05);癌旁正常组织中let-7a1和let-7c的相对表达量均低于良性肺疾病组织(P<0.05)。let-7a1表达与分化程度、吸烟和TNM分期有关(P<0.05~P<0.01),与淋巴结有无转移无关(P>0.05)。let-7c表达与淋巴结转移、分化程度有关(P<0.01),与吸烟、TNM分期无关(P>0.05)。结论:let-7a1和let-7c基因在肺癌组织中相对表达量降低,并且随临床分期进展、淋巴结转移呈明显下降趋势,提示两者与肺癌的发生、发展及转移密切相关,let-7a1和let-7c可能成为肺癌早期诊断生物标志因子,并可能成为肺癌的靶向治疗新的靶点,为高危人群的早期干预提供实验依据。 展开更多

关键词 肺肿瘤 微小RNA let-7a1 let-7c

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RNA结合蛋白HuR通过其RNA识别模体调节hsa-let-7c表达（英文）

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作者 宋峣 冯伟 +2 位作者 施国敏 陈超 张幼怡 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期1-8,共8页

微小RNA(microRNAs,miRNA)是一种短链的非编码RNA,它通过抑制RNA的翻译或促进RNA的降解调控多种细胞活动和机体的发育。机体主要通过转录和转录后两个层面对miRNA的表达进行调控,其中对miRNA转录水平的调控决定了miRNA表达的特异性,而... 微小RNA(microRNAs,miRNA)是一种短链的非编码RNA,它通过抑制RNA的翻译或促进RNA的降解调控多种细胞活动和机体的发育。机体主要通过转录和转录后两个层面对miRNA的表达进行调控,其中对miRNA转录水平的调控决定了miRNA表达的特异性,而目前我们对其转录后调控的机制还知之甚少。本研究旨在证实RNA结合蛋白HuR是否通过与pri-miRNA中富含AU的序列相结合调节miRNA的表达。利用生物信息学方法对pri-miRNA中的AUUUA模体进行筛查,发现在hsa-let-7c下游富含AUUUA模体,而hsa-miR-21则不具备这一模体。通过转染HuR质粒到HEK293T细胞构建过表达模型,然后用Western blot和real-time PCR分别检测HuR蛋白和miRNAs表达水平。结果显示,过表达HuR能够促进成熟hsa-let-7c而非hsa-miR-21表达。而过表达缺失RNA识别模体3(RNA recognition motif,RRM3)的突变体HuR则不能促进hsa-let-7c的表达。以上结果提示RRM3是HuR介导成熟hsa-let-7c表达的关键序列,而HuR在调控miRNA生物合成中可能扮演了一种新的角色,即在转录后水平调节miRNA的表达。 展开更多

关键词 微小RNA HUR let-7c 转录后调节

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不同猪种泌乳期母乳外核体中let-7c表达模式研究

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作者 顾以韧 梁艳 +5 位作者 杨雪梅 陶璇 杨跃奎 钟志君 陈晓晖 吕学斌 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期82-85,共4页

为了研究不同猪种泌乳期母乳外核体中let-7c的表达模式，试验采用荧光定量PCR（Q—PCR）方法检测了不同泌乳期（0，3，7，14，21，28天）的大约克夏猪和梅山猪母乳外核体中let-7c的发育性表达模式。结果表明：两个猪种不同泌乳阶段母乳... 为了研究不同猪种泌乳期母乳外核体中let-7c的表达模式，试验采用荧光定量PCR（Q—PCR）方法检测了不同泌乳期（0，3，7，14，21，28天）的大约克夏猪和梅山猪母乳外核体中let-7c的发育性表达模式。结果表明：两个猪种不同泌乳阶段母乳外核体中let-7c的发育表达模式十分相似，总体趋势均表现为随时间推移而下降，且泌乳前期（0—3d）免疫球蛋白（IgE）的表达水平极显著高于泌乳后期（7—28d）（P〈0．01）；品种间分析结果显示，梅山猪母乳外核体中的let-7c表达水平在整个泌乳期均明显高于大约克夏猪。 展开更多

关键词 猪 母乳 外核体 let-7c 表达模式

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绵羊let-7c前体序列突变及其对前体二级结构的影响

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作者 杨力伟 刘晓娜 +1 位作者 王世银 张伟 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第11期69-72,共4页

为了研究碱基突变对miRNA成熟加工的影响,以绵羊let-7c(oar-let-7c)为研究对象,探讨了其前体序列在阿勒泰羊和中国美利奴羊(军垦型)群体中的突变情况,及相关突变对oar-let-7c前体二级结构和稳定性的影响。结果表明:oar-let-7c前体序列... 为了研究碱基突变对miRNA成熟加工的影响,以绵羊let-7c(oar-let-7c)为研究对象,探讨了其前体序列在阿勒泰羊和中国美利奴羊(军垦型)群体中的突变情况,及相关突变对oar-let-7c前体二级结构和稳定性的影响。结果表明:oar-let-7c前体序列在阿勒泰羊和中国美利奴羊(军垦型)群体中可检测到1处C>T突变,该突变位于oar-let-7c成熟序列下游,且在阿勒泰羊群体中以C等位基因为主,而在中国美利奴羊(军垦型)群体中则以T等位基因为主,该突变改变了oar-let-7c前体二级结构且使其自由能值升高了46.89kJ/mol,推测该突变将对oar-let-7c成熟加工产生影响,进而影响oar-let-7c在阿勒泰羊和中国美利奴羊(军垦型)体内的水平。 展开更多

关键词 阿勒泰羊 中国美利奴羊 let-7c 突变 二级结构

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let-7c在卵巢癌中的表达及和临床病理因素的相关性分析

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作者 张威 郭文涛 《现代诊断与治疗》 CAS 2017年第10期1847-1849,共3页

探讨let-7c在卵巢癌组织中的表达情况。收集卵巢癌组织标本52例及相应临床病理资料,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌组织标本中let-7c的表达,并分析let-7c表达水平与患者的病理因素的相关性。结果卵巢癌组织中let-7c表达水平低... 探讨let-7c在卵巢癌组织中的表达情况。收集卵巢癌组织标本52例及相应临床病理资料,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌组织标本中let-7c的表达,并分析let-7c表达水平与患者的病理因素的相关性。结果卵巢癌组织中let-7c表达水平低于正常卵巢组织(P<0.05);let-7c表达与淋巴结转移、临床分期有关。let-7c在卵巢癌组织中低表达与卵巢癌发生发展密切相关。 展开更多

关键词 卵巢癌 let-7c

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Let-7c在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义 被引量：1

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作者 沈淑蓉 施俊义 +2 位作者 沈贤 黄关立 薛向阳 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期400-403,共4页

目的:探讨Let-7c在乳腺浸润性导管癌中的表达情况及与各种临床病理特征的关系。方法:采用茎环RT-PCR方法检测40例乳腺浸润性导管癌及其对应的正常乳腺组织中Let-7c的表达,分析Let-7c表达与临床分期、淋巴结转移、增殖指数等临床病理特... 目的:探讨Let-7c在乳腺浸润性导管癌中的表达情况及与各种临床病理特征的关系。方法:采用茎环RT-PCR方法检测40例乳腺浸润性导管癌及其对应的正常乳腺组织中Let-7c的表达,分析Let-7c表达与临床分期、淋巴结转移、增殖指数等临床病理特征的关系。结果:用茎环RT-PCR方法检测Let-7c表达的敏感性和特异性良好;Let-7c在乳腺癌组织中的表达显著低于正常组织(P<0.05);Let-7c的表达与乳腺癌的增殖指数有关(P<0.05),与雌孕激素受体状态亦有关,与是否绝经、乳腺癌的TNM分期、淋巴结转移未见显著统计学意义(P>0.05)。在高增殖指数、雌孕激素受体阴性的肿瘤组Let-7c表达明显降低。结论:Let-7c在乳腺浸润性导管癌中的表达异常,可能和乳腺癌的发生和发展有关,有望成为乳腺癌新的预后指标及治疗靶点。 展开更多

关键词 let-7c基因 微MicroRNA 乳腺肿瘤 乳腺导管癌

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miR-let-7c-5p通过靶向HMGA2抑制膀胱癌细胞侵袭和迁移 被引量：4

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作者 姚越 张冲 +3 位作者 熊言骏 韩兵 高幸福 汪盛 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1022-1029,共8页

目的探讨miR-let-7c-5p能否调控HMGA2抑制膀胱癌细胞侵袭和迁移。方法生物信息学方法确定miR-let-7c-5p的关键基因;RT-qPCR和Western blot检测膀胱癌和癌旁组织中miR-let-7c-5p mRNA和HMGA2蛋白相对表达量。以人正常膀胱细胞SV-HUC-1作... 目的探讨miR-let-7c-5p能否调控HMGA2抑制膀胱癌细胞侵袭和迁移。方法生物信息学方法确定miR-let-7c-5p的关键基因;RT-qPCR和Western blot检测膀胱癌和癌旁组织中miR-let-7c-5p mRNA和HMGA2蛋白相对表达量。以人正常膀胱细胞SV-HUC-1作为对照,RT-qPCR和Western blot检测膀胱癌细胞系T24,UM-UC-3,5637细胞中miR-let-7c-5p mRNA和HMGA2蛋白的相对表达量。对UM-UC-3细胞中miR-let-7c-5p分别进行上调和下调,上调实验设模拟物阴性对照组(mimic NC)、miR-let-7c-5p模拟物组(mimicmiR-let-7c-5p)、下调实验设阴性对照组(inhibitor NC)及miR-let-7c-5p抑制剂组(si-miRlet-7c-5p),双荧光素酶实验、RT-qPCR和Western blot法共同验证miR-let-7c-5p和HMGA2的靶向关系;Transwell小室检测单独上调或下调miR-let-7c-5p表达及同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达UM-UC-3细胞侵袭和迁移的变化;Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin,N-cadherin,vimentin,Snail)相对表达量。结果HMGA2为miR-let-7c-5p的靶基因之一;与癌旁组织相比,膀胱癌组织中miR-let-7c-5pmRNA相对表达量降低(P<0.05),HMGA2蛋白相对表达量增加(P<0.05);与SV-HUC-1细胞相比,UM-UC-3细胞中miR-let-7c-5p相对表达量显著降低,HMGA2显著增加(P=0.01)。上调miRlet-7c-5p表达,UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力均显著下降(P<0.05);下调miR-let-7c-5p表达,UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力均显著增加(P<0.05);当同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05)。Western blot结果显示,上调miR-let-7c-5p表达,E-cadherin表达增加,N-cadherin,vimentin,Snail蛋白表达下降;下调miR-let-7c-5p表达,Ecadherin表达下降,N-cadherin,vimentin,Snail蛋白表达增加;同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达能够抑制UM-UC-3细胞EMT(P<0.05)。结论miR-let-7c-5p通过靶向HMGA2抑制EMT进而抑制UM-UC-3细胞侵袭和迁移。 展开更多

关键词 膀胱癌 miR-let-7c-5p HMGA2 上皮间质转化 侵袭迁移

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