探讨仙鹤草-黄连(Agrimoniae Herba-Coptidis Rhizoma,XHC-HL)含药血清通过溶酶体相关膜蛋白2A型(lysosome-associated membrane protein type 2A,LAMP2A)介导的自噬对人结直肠癌HT29和HCT116细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。通过生...探讨仙鹤草-黄连(Agrimoniae Herba-Coptidis Rhizoma,XHC-HL)含药血清通过溶酶体相关膜蛋白2A型(lysosome-associated membrane protein type 2A,LAMP2A)介导的自噬对人结直肠癌HT29和HCT116细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。通过生物信息学分析LAMP2A在结直肠癌发生发展中的作用机制;蛋白免疫印迹(Westem blot,WB)检测LAMP2A蛋白在结直肠癌细胞株中的表达;利用慢病毒转染技术构建LAMP2A干扰HT29及过表达HCT116结直肠癌细胞模型;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)实验检测转染效率;结直肠癌HT29和HCT116细胞分别给予不同浓度的仙鹤草-黄连含药血清,采用cell counting kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖,筛选含药血清最佳干预浓度及时间。将HT29细胞分为空白对照(NC)组、XHC-HL(仙鹤草-黄连药对处理)组、XHC-HL+shLAMP2A(仙鹤草-黄连药对处理+干扰LAMP2A)组;将HCT116细胞分为空白对照(NC)组、XHC-HL(仙鹤草-黄连药对处理)组、XHC-HL+LAMP2A(仙鹤草-黄连药对处理+过表达LAMP2A)组,CCK-8检测细胞活力;平板克隆实验检测细胞增殖能力;划痕实验及Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;WB技术和real-time qPCR技术检测仙鹤草-黄连药对对结直肠癌细胞LAMP2A、热休克同源蛋白70(heat shock cognate protein 70,HSC70)、热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的蛋白表达水平及mRNA的影响。通过差异表达分析发现结直肠癌患者相对于正常对照样本的LAMP2A表达水平有显著升高,生存分析提示伴侣介导的自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)关键分子LAMP2A与结直肠癌的进展密切关联,通过基因集功能富集分析发现LAMP2A高表达患者显著上调了血管生成、免疫抑制等肿瘤进展相关信号通路,且免疫浸润分析发现LAMP2A高表达患者的肿瘤微环境会有更少的CD8 T细胞浸润。仙鹤草-黄连含药血清可以抑制HT29和HCT116细胞活力,最佳干预质量分数及时间为20%、48 h。与NC组相比,仙鹤草-黄连药对均可抑制HT29和HCT116细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,药对处理干扰LAMP2A组均能进一步抑制肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力并促进凋亡,而过表达LAMP2A可逆转含药血清处理后结直肠癌细胞被抑制的增殖、迁移、侵袭能力,减少细胞凋亡率。仙鹤草-黄连药对含药血清对CMA具有抑制作用,通过LAMP2A介导的自噬,上调LAMP2A、HSC70、HSP90蛋白和基因的表达,下调底物蛋白GAPDH的表达发挥抗结直肠癌功能。综上,仙鹤草-黄连药对可通过下调CMA关键分子蛋白LAMP2A表达,抑制CMA活性,从而抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡。展开更多
目的:探讨肝脏中lamp2a对plin5表达及其功能的影响。方法:利用Western blot及免疫组化检测正常人和脂肪肝患者肝脏中lamp2a与plin5表达相关性。利用HepG2细胞构建lamp2a敲减的细胞系HepG2-L2A,通过给予油酸刺激、溶酶体抑制剂处理等进...目的:探讨肝脏中lamp2a对plin5表达及其功能的影响。方法:利用Western blot及免疫组化检测正常人和脂肪肝患者肝脏中lamp2a与plin5表达相关性。利用HepG2细胞构建lamp2a敲减的细胞系HepG2-L2A,通过给予油酸刺激、溶酶体抑制剂处理等进一步在细胞水平证实其相关性。结果:Western-Blot及免疫组化检测显示脂肪肝患者肝组织中lamp2a的表达明显下降,而plin5表达显著升高。Western-Blot试验提示正常培养的HepG2-L2A细胞中plin5表达较HepG2细胞中升高,Bodipy染色提示HepG2-L2A细胞中脂滴数量也明显增加(124±15.3 vs 273±19.1)。在分解试验中,HepG2细胞中plin5明显降低,脂滴数量也明显减少(282±24.1 vs 192±17.5);而HepG2-L2A细胞中plin5仍然处于高水平,脂滴数量仍然较多(325±24.0 vs 286±28.7)。当给予溶酶体抑制剂处理时,HepG2细胞中plin5降解明显抑制,而HepG2-L2A中plin5水平未见明显改变。结论:肝脏中lamp2a的异常表达影响plin5的表达,进而影响了脂质的分解。展开更多
Danon病是一种罕见的X连锁显性遗传病,由Danon在1981年首次报道[1]。因Danon病的特征性病理改变为骨骼肌和心肌细胞内存在自噬空泡和糖原颗粒增多,酸性麦芽糖酶活性正常,曾被称为X连锁的空泡性骨骼肌心肌病或酸性麦芽糖酶正常的溶酶体...Danon病是一种罕见的X连锁显性遗传病,由Danon在1981年首次报道[1]。因Danon病的特征性病理改变为骨骼肌和心肌细胞内存在自噬空泡和糖原颗粒增多,酸性麦芽糖酶活性正常,曾被称为X连锁的空泡性骨骼肌心肌病或酸性麦芽糖酶正常的溶酶体糖原贮积症。2000年Nishino等[2]首次报道编码溶酶体相关膜蛋白2(lysosomal-associated membrane protein 2,LAMP2)的LAMP2基因突变可导致该病。目前关于Danon病的报道已超过500例[3],其临床表现各不相同,但以肥厚型心肌病、骨骼肌病、智力障碍为主要临床表现。本文回顾性分析1例以抽搐起病的Danon病患者的临床资料,报道如下。展开更多
目的探讨溶酶体关联膜蛋白2(lysosome-associated membrane protein 2,LAMP2)表达水平与三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)患者临床病理特征及其预后的关系。方法收集2015年1月至2017年1月在新疆医科大学附属肿瘤医院...目的探讨溶酶体关联膜蛋白2(lysosome-associated membrane protein 2,LAMP2)表达水平与三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)患者临床病理特征及其预后的关系。方法收集2015年1月至2017年1月在新疆医科大学附属肿瘤医院院确诊并行乳腺癌根治术的104例TNBC患者的临床病理资料,调取患者冻存癌组织及癌旁组织标本,使用蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测TNBC癌组织及癌旁组织中LAMP2表达,验证LAMP2表达水平与TNBC患者的临床病理特征及总生存(overall survival,OS)的关系。使用单因素及Cox多因素回归分析TNBC患者的预后因素。结果WB实验结果显示,LAMP2在TNBC癌组织中表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。LAMP2表达与TNBC患者TNM分期、淋巴结转移及组织学分级相关,结果有统计学差异(P均<0.05)。生存分析结果显示,截至2022年1月25日,LAMP2高表达组5年生存率显著低于低表达组(P<0.05)。单因素及Cox多因素回归分析:TNM分期及LAMP2表达水平是TNBC患者独立预后因素,结果有统计学差异(P<0.05)。结论LAMP2在TNBC癌组织及癌旁组织中差异表达,LAMP2高表达可能与患者TNM分期、淋巴结转移及组织学分级相关,更高的LAMP2的表达可能预示着患者更差的预后。展开更多
文摘目的:探讨肝脏中lamp2a对plin5表达及其功能的影响。方法:利用Western blot及免疫组化检测正常人和脂肪肝患者肝脏中lamp2a与plin5表达相关性。利用HepG2细胞构建lamp2a敲减的细胞系HepG2-L2A,通过给予油酸刺激、溶酶体抑制剂处理等进一步在细胞水平证实其相关性。结果:Western-Blot及免疫组化检测显示脂肪肝患者肝组织中lamp2a的表达明显下降,而plin5表达显著升高。Western-Blot试验提示正常培养的HepG2-L2A细胞中plin5表达较HepG2细胞中升高,Bodipy染色提示HepG2-L2A细胞中脂滴数量也明显增加(124±15.3 vs 273±19.1)。在分解试验中,HepG2细胞中plin5明显降低,脂滴数量也明显减少(282±24.1 vs 192±17.5);而HepG2-L2A细胞中plin5仍然处于高水平,脂滴数量仍然较多(325±24.0 vs 286±28.7)。当给予溶酶体抑制剂处理时,HepG2细胞中plin5降解明显抑制,而HepG2-L2A中plin5水平未见明显改变。结论:肝脏中lamp2a的异常表达影响plin5的表达,进而影响了脂质的分解。
文摘Danon病是一种罕见的X连锁显性遗传病,由Danon在1981年首次报道[1]。因Danon病的特征性病理改变为骨骼肌和心肌细胞内存在自噬空泡和糖原颗粒增多,酸性麦芽糖酶活性正常,曾被称为X连锁的空泡性骨骼肌心肌病或酸性麦芽糖酶正常的溶酶体糖原贮积症。2000年Nishino等[2]首次报道编码溶酶体相关膜蛋白2(lysosomal-associated membrane protein 2,LAMP2)的LAMP2基因突变可导致该病。目前关于Danon病的报道已超过500例[3],其临床表现各不相同,但以肥厚型心肌病、骨骼肌病、智力障碍为主要临床表现。本文回顾性分析1例以抽搐起病的Danon病患者的临床资料,报道如下。
文摘目的探讨溶酶体关联膜蛋白2(lysosome-associated membrane protein 2,LAMP2)表达水平与三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)患者临床病理特征及其预后的关系。方法收集2015年1月至2017年1月在新疆医科大学附属肿瘤医院院确诊并行乳腺癌根治术的104例TNBC患者的临床病理资料,调取患者冻存癌组织及癌旁组织标本,使用蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测TNBC癌组织及癌旁组织中LAMP2表达,验证LAMP2表达水平与TNBC患者的临床病理特征及总生存(overall survival,OS)的关系。使用单因素及Cox多因素回归分析TNBC患者的预后因素。结果WB实验结果显示,LAMP2在TNBC癌组织中表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。LAMP2表达与TNBC患者TNM分期、淋巴结转移及组织学分级相关,结果有统计学差异(P均<0.05)。生存分析结果显示,截至2022年1月25日,LAMP2高表达组5年生存率显著低于低表达组(P<0.05)。单因素及Cox多因素回归分析:TNM分期及LAMP2表达水平是TNBC患者独立预后因素,结果有统计学差异(P<0.05)。结论LAMP2在TNBC癌组织及癌旁组织中差异表达,LAMP2高表达可能与患者TNM分期、淋巴结转移及组织学分级相关,更高的LAMP2的表达可能预示着患者更差的预后。
