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地黄葱X病毒RT-LAMP快速检测方法的建立与应用
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作者 鲁书豪 秦艳红 +7 位作者 杨会珍 杨瑾 李雪梦 李绍建 文艺 高素霞 王飞 鲁传涛 《植物保护》 北大核心 2026年第1期266-272,共7页
地黄葱X病毒(Rehmannia allexivirus,ReAV)是首次在地黄上报道的新病毒,本研究基于ReAV外壳蛋白(coat protein,CP)基因的核苷酸序列设计了3组引物进行筛选,对RT-LAMP进行了温度优化、时间优化、特异性检测、灵敏度比较等试验,建立了ReA... 地黄葱X病毒(Rehmannia allexivirus,ReAV)是首次在地黄上报道的新病毒,本研究基于ReAV外壳蛋白(coat protein,CP)基因的核苷酸序列设计了3组引物进行筛选,对RT-LAMP进行了温度优化、时间优化、特异性检测、灵敏度比较等试验,建立了ReAV反转录环介导恒温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)快速检测技术。结果表明:本研究建立的ReAV RT-LAMP方法最适反应条件为65°C40 min,该方法可特异性检测出ReAV,其检测限为6.99拷贝/μL,灵敏度是常规PCR的10倍。对21份地黄样品的检测结果表明,RT-LAMP方法的阳性检出率(85.7%)略高于常规RT-PCR方法(71.4%)。本研究建立的RT-LAMP检测技术为ReAV的准确检测提供了快速、特异、简便的方法,为田间样品的检测提供了技术支撑。 展开更多
关键词 地黄 地黄葱X病毒 反转录环介导等温扩增(RT-lamp) 可视化 快速检测
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溶酶体相关蛋白CTSB及LAMP2与IgA肾病病情进展关系的分析
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作者 胡杰强 徐映雪 +1 位作者 张会健 李贵森 《临床肾脏病杂志》 2026年第2期97-104,共8页
目的 经尿液蛋白质组学筛选出IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者特征性蛋白,分析其与临床、病理指标的相关性,并探索IgAN潜在的蛋白生物标志物。方法 回顾性收集50例IgAN患者、50例膜性肾病(membranous nephropathy,MN)患者及68名健康... 目的 经尿液蛋白质组学筛选出IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者特征性蛋白,分析其与临床、病理指标的相关性,并探索IgAN潜在的蛋白生物标志物。方法 回顾性收集50例IgAN患者、50例膜性肾病(membranous nephropathy,MN)患者及68名健康对照(health controls,HC)人群尿液标本,通过液相色谱串联质谱法检测蛋白质组学数据,筛选出IgAN的表达差异蛋白,富集在溶酶体通路的5种差异蛋白:CTSA, CTSB,CTSH,β-GAL,LAMP2。进一步收集31例IgAN和31例HC人群的尿液、血液标本,通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对上述蛋白表达情况进行验证,并与IgAN临床及病理指标进行相关性分析。进一步筛选出CTSB、LAMP2表达差异蛋白,通过免疫组化检测其在6例IgAN患者肾活检组织及6例肾癌患者癌旁正常肾组织中的表达情况,探讨溶酶体功能与IgAN的关系。结果 尿蛋白质组学结果显示,HC组尿液中CTSA、CTSB、CTSH、β-GAL、LAMP2差异蛋白表达水平显著高于IgAN组,差异具有统计学意义(P<0.05)。通过ELISA验证,尿液中蛋白表达水平结果与尿蛋白质组学趋势一致,在血液中,HC组表达水平低于IgAN组,除β-GAL外差异均有统计学意义(P<0.05)。与IgAN临床和病理指标进行相关性分析,尿液中5种蛋白与高密度脂蛋白、血清IgM正相关,与尿白蛋白/肌酐比值、24h尿蛋白量、血氯、三酰甘油等负相关。血液中CTSB与尿白蛋白/肌酐比值、24h尿蛋白量、血清补体C4呈负相关,与高血压、牛津肾脏病理分型E评分呈正相关;LAMP2与血肌酐、血钾、游离轻链κ、游离轻链λ呈负相关,与估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)、牛津肾脏病理分型E评分呈正相关,相关性均有统计学意义(P<0.05),其余3种蛋白无相关性。CTSB、LAMP2在IgAN肾小管、肾小球均表达。结论 多种溶酶体相关蛋白在IgAN患者尿液中表达显著变化。CTSB与尿蛋白相关指标显著相关,LAMP2与eGFR、血肌酐显著相关,两者有望成为IgAN的潜在生物标志物,为研究IgAN发病机制提供新思路。 展开更多
关键词 IGA肾病 尿蛋白质组学 CTSB lamp2 溶酶体相关蛋白
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Examining the Impact of Heparin-Free Dialysis Supplemented with Infrared Lamp Irradiation on Coagulation in Dialyzers
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作者 Qin Chen 《Journal of Clinical and Nursing Research》 2026年第1期316-322,共7页
Objective:To investigate the effects of infrared lamp irradiation therapy on the risk of arteriovenous fistula thrombosis in patients undergoing heparin-free dialysis and those receiving appropriate reductions in hepa... Objective:To investigate the effects of infrared lamp irradiation therapy on the risk of arteriovenous fistula thrombosis in patients undergoing heparin-free dialysis and those receiving appropriate reductions in heparin anticoagulation dosage during dialysis.Methods:This study was conducted from January 1,2021,to December 31,2021,involving 19 patients who regularly underwent heparin-free dialysis for more than three months at our hospital,totaling 70 patient encounters.Each patient underwent heparin-free dialysis for more than two cycles during the experimental period.The study employed a self-control design.Prior to the experiment,an experienced medical team established an emergency management group and formulated relevant emergency measures,ensuring the long-term stability of patients’vital signs before enrollment.Patients requiring heparin-free dialysis as per medical advice underwent the procedure according to the treatment manual without additional interventions.During the second heparin-free dialysis session within the experimental period,patients received 40 minutes of infrared lamp irradiation as an adjunctive therapy during the dialysis process.The study observed coagulation in the dialyzer,blood biochemical indicators,the occurrence of adverse reactions,and patient satisfaction during treatment.Results:The use of heparin-free dialysis combined with infrared irradiation therapy resulted in better coagulation outcomes compared to heparin-free dialysis alone(p<0.05).There was no statistically significant difference in blood biochemical indicators between patients receiving heparin-free dialysis combined with infrared irradiation therapy and those receiving heparin-free dialysis alone(p>0.05).There was no statistically significant difference in the number of patients experiencing adverse clinical symptoms such as angina,dizziness,and lower limb cramps,leading to treatment interruption,between those receiving heparin-free dialysis combined with infrared therapy and those receiving heparin-free dialysis alone(p>0.05).Patient satisfaction was higher among those receiving heparin-free dialysis combined with infrared therapy compared to those receiving heparin-free dialysis alone(p<0.05).Conclusion:The use of infrared lamp irradiation therapy as an adjunct to heparin-free dialysis can reduce the risk of coagulation to a certain extent without affecting the stability of core blood biochemical indicators in patients.It also reduces the incidence of clinical adverse reactions caused by coagulation,demonstrating good safety and improving patient satisfaction. 展开更多
关键词 Heparin-free dialysis Infrared lamp Heparin anticoagulation
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LAMP3基因表达与肾癌之间的因果关系:一项基于孟德尔随机化分析的研究
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作者 吴金海 王斌 朱学进 《广州医药》 2026年第1期88-94,共7页
目的探讨溶酶体相关膜蛋白3(LAMP3)与肾癌发病风险之间的因果关系,为肾癌的分子致病机制提供新的理论依据。方法基于全基因组关联研究(GWAS)数据,采用孟德尔随机化分析方法,评估LAMP3基因表达与肾癌的因果关系。并通过GEPIA2分析LAMP3... 目的探讨溶酶体相关膜蛋白3(LAMP3)与肾癌发病风险之间的因果关系,为肾癌的分子致病机制提供新的理论依据。方法基于全基因组关联研究(GWAS)数据,采用孟德尔随机化分析方法,评估LAMP3基因表达与肾癌的因果关系。并通过GEPIA2分析LAMP3表达对肾癌总体生存期(OS)及无病生存期(DFS)的关系。结果LAMP3基因变异与肾癌风险呈正相关,提示LAMP3的表达可能增加肾癌的发病风险。此外,GEPIA2分析进一步显示,LAMP3的高表达与肾癌患者的低总体生存期(OS)及无病生存期(DFS)显著相关。结论本研究通过孟德尔随机化分析探讨了LAMP3基因表达与肾癌的因果关系,结果表明LAMP3可能是肾癌的潜在致病因子,并与肾癌预后相关。这为肾癌的分子致病机制研究提供了重要的理论依据,并为未来的生物标志物和靶向治疗策略的开发提供了新的思路。 展开更多
关键词 孟德尔随机化 lamp3 肾癌
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石斑鱼肠孢虫环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用
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作者 解恩佩 万晓媛 +6 位作者 要菲 魏京广 吴成龙 史成银 张庆利 谢国驷 黄倢 《渔业科学进展》 北大核心 2026年第1期151-160,共10页
石斑鱼肠孢虫(Enterospora epinepheli)是当前危害石斑鱼(Epinephelus spp.)养殖产业的重要病原,但该病原自2017年报道以来,仅有2种基于核酸检测方法的报道。本研究以石斑鱼肠孢虫的核糖体小亚基r RNA(small subunit ribosomal RNA, SSU... 石斑鱼肠孢虫(Enterospora epinepheli)是当前危害石斑鱼(Epinephelus spp.)养殖产业的重要病原,但该病原自2017年报道以来,仅有2种基于核酸检测方法的报道。本研究以石斑鱼肠孢虫的核糖体小亚基r RNA(small subunit ribosomal RNA, SSU rRNA)基因为靶序列,设计3对环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)引物,建立了该病原的LAMP检测方法(LAMP for E. epinepheli, E.ep_LAMP)。添加EvaGreen^(®)核酸染料的检测体系置于定量PCR仪中,以2.68×10^(2)~2.68×10^(9)拷贝/μL的重组质粒标准品pMD18_E.ep为模板,各浓度均可在20 min内完全检测,检测灵敏度为2.68×10^(2)拷贝/反应;分析p MD18_E.ep中目的基因核酸拷贝数的对数值(x)与其对应Ct值(y)的线性关系得到检测方法的标准曲线:y=–1.719 5x+23.971(R2=0.996 2);重复性检测中,其批内和批间检测的变异系数(coefficient of variation, CV)范围分别为0.22%~3.52%和0.24%~1.70%。特异性检测中,E.ep_LAMP与虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP)和肌孢虫(Ameson portunus)以及其他11种细菌和病毒均无交叉反应。E.ep_LAMP检测体系中使用核酸染料GeneFinder^(®)后,还可在简易恒温条件下进行现场检测,具有诊断试剂产品开发的前景。总体而言,本研究建立的方法快速、灵敏、特异性强,兼顾定量和可现场诊断的优点,可为当前频发的石斑鱼微孢子虫病的诊断及防控提供新的有效检测方法。 展开更多
关键词 石斑鱼肠孢虫 环介导等温扩增 检测 核糖体小亚基rRNA
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地黄灼烧病毒RT-LAMP快速检测方法的建立与应用
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作者 鲁书豪 文艺 +8 位作者 高素霞 李雪梦 杨瑾 李绍建 李想 徐国豪 齐红志 王飞 秦艳红 《河南农业科学》 北大核心 2026年第2期80-88,共9页
地黄灼烧病毒(Rehmannia torradovirus virus,ReTV)是首次在地黄上报道的新病毒,严重危害地黄田间生长。为建立快速检测ReTV的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),以ReTV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因为靶标基因设计了4组特异性引物,... 地黄灼烧病毒(Rehmannia torradovirus virus,ReTV)是首次在地黄上报道的新病毒,严重危害地黄田间生长。为建立快速检测ReTV的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),以ReTV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因为靶标基因设计了4组特异性引物,利用电泳检测及可视化方法(加SYBR GreenⅠ显色剂)进行引物筛选和RT-LAMP产物鉴定,同时以单一变量法优化RT-LAMP反应条件,以ReTV重组质粒为模板检测特异性和灵敏度,并对田间地黄样品进行检测应用。结果表明,建立的ReTV RTLAMP检测方法最适反应条件为65℃60 min;特异性检测结果表明,只有ReTV为模板显示阳性,与地黄上其他病毒无交叉反应;RT-LAMP灵敏度是常规RT-PCR的100倍,可检测到3.39×10^(0)拷贝/μL;在样品检测中RT-LAMP方法的阳性检出率(100%)高于常规RT-PCR方法(93.75%),表明RT-LAMP方法准确性高于常规RT-PCR方法。建立的RT-LAMP检测技术为ReTV的准确检测提供了快速、特异、简便的方法。 展开更多
关键词 地黄灼烧病毒 地黄 环介导等温扩增技术 可视化检测
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樱桃病毒A陕西分离物基因组扩增及RT-LAMP检测体系的建立
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作者 吴薇 刘斐 +1 位作者 李开国 刘欢 《植物保护》 北大核心 2026年第1期258-265,共8页
本研究获得了樱桃病毒A(cherry virus A,CVA)陕西安康樱桃分离物SXAK3-3和SXAK3-4的全基因组,全长分别为7440 nt和7436 nt,核苷酸一致性为80.77%。建立了CVA的反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amp... 本研究获得了樱桃病毒A(cherry virus A,CVA)陕西安康樱桃分离物SXAK3-3和SXAK3-4的全基因组,全长分别为7440 nt和7436 nt,核苷酸一致性为80.77%。建立了CVA的反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测技术并优化了反应条件和体系。该检测体系可特异检测CVA,对樱桃小果病毒2(little cherry virus 2,LChV-2)、李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、柑橘叶斑驳病毒(citrus leaf blotch virus,CLBV)和樱桃绿环斑驳病毒(cherry green ring mottle virus,CGRMV)4种樱桃病毒的检测结果均为阴性,其检测灵敏度是RT-PCR的100倍。RT-LAMP检测CVA的成本低、速度快、特异性强,在CVA抗病毒育种、苗木带毒检测、病毒早期监测等方面将发挥重要作用。 展开更多
关键词 樱桃病毒A 全基因组 反转录环介导等温扩增
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水禽细小病毒LAMP及其可视化通用检测方法的建立
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作者 戴银 周慧琴 +9 位作者 谷思琴 胡晓苗 王洁茹 殷冬冬 尹磊 沈学怀 潘孝成 赵瑞宏 周学利 侯宏艳 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期63-68,共6页
为了建立鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)通用的检测方法,本试验以GPV和MDPV两种水禽细小病毒的NS基因保守序列作为靶标,设计了1组特异性引物,优化建立了水禽细小病毒的环介导等温扩增(LAMP)和LAMP-羟基萘酚蓝(HNB)可视化通用检测... 为了建立鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)通用的检测方法,本试验以GPV和MDPV两种水禽细小病毒的NS基因保守序列作为靶标,设计了1组特异性引物,优化建立了水禽细小病毒的环介导等温扩增(LAMP)和LAMP-羟基萘酚蓝(HNB)可视化通用检测方法,并对2种方法的特异性和灵敏性进行检测。采用常规PCR、LAMP和LAMP-HNB对10份水禽临床样品进行检测,以评估2种方法的实用性。结果显示,LAMP方法的最佳反应温度为65℃、反应时间为60 min。2种方法仅能扩增GPV和MDPV,而对其他5种常见水禽病毒的检测结果均为阴性,最低检出浓度均为1×10-5ng/μL。2种方法与常规PCR的检测结果一致,符合率达100%。结果表明,建立的LAMP方法和LAMP-HNB可视化方法具有灵敏性好、特异性高、仪器要求低和可视化等优点,可为水禽细小病毒的现场快速检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 鹅细小病毒(GPV) 番鸭细小病毒(MDPV) NS基因 环介导等温扩增(lamp) 可视化
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烟草轻型绿花叶病毒RT-LAMP快速检测方法的建立与应用
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作者 秦艳红 鲁书豪 +8 位作者 陈须琨 文艺 高素霞 李绍建 杨瑾 李雪梦 郝学政 王飞 鲁传涛 《植物病理学报》 北大核心 2025年第6期1325-1334,共10页
为快速检测烟草轻型绿花叶病毒(tobacco mild green mosaic virus,TMGMV),本文根据TMGMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因的保守序列设计了3组RT-LAMP引物进行筛选确定最佳引物组合;采用单一变量法对反应温度和反应时间进行优化,并将RT-PC... 为快速检测烟草轻型绿花叶病毒(tobacco mild green mosaic virus,TMGMV),本文根据TMGMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因的保守序列设计了3组RT-LAMP引物进行筛选确定最佳引物组合;采用单一变量法对反应温度和反应时间进行优化,并将RT-PCR和RT-LAMP进行对比实验,验证优化后特异性检测、灵敏度比较及田间应用的实际性,建立了TMGMV RT-LAMP快速检测技术体系。结果表明:RT-LAMP最适反应条件为在65℃恒温扩增60 min,优化后的RT-LAMP灵敏度是常规RT-PCR的1000倍,可检测到模板的最低浓度为1.65×10-2拷贝·μL-1,检测过程中与其他相关病毒无交叉反应。对60份地黄样品的检测结果表明,RT-LAMP方法的检出率(100%)高于RT-PCR检出率(83.3%)。因此本研究建立的RT-LAMP检测技术可用于TMGMV的快速检测。 展开更多
关键词 烟草轻型绿花叶病毒 地黄 RT-lamp恒温扩增 可视化检测
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绵羊无浆体LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法的建立 被引量:3
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作者 郭心龙 周勇志 +4 位作者 曹杰 王亚楠 张厚双 段德勇 周金林 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第3期330-337,共8页
绵羊无浆体(Anaplasma ovis)是一种蜱传、寄生于红细胞内的细菌病原体,引起绵羊、山羊和野生反刍动物等发病,对我国养羊业发展造成严重危害。尽管已有多种绵羊无浆体诊断方法报道,但仍然缺少简易快捷、应用于现场的检测技术。本研究旨... 绵羊无浆体(Anaplasma ovis)是一种蜱传、寄生于红细胞内的细菌病原体,引起绵羊、山羊和野生反刍动物等发病,对我国养羊业发展造成严重危害。尽管已有多种绵羊无浆体诊断方法报道,但仍然缺少简易快捷、应用于现场的检测技术。本研究旨在建立一种针对绵羊无浆体msp4基因的LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法。该检测方法是在恒定温度下进行的,不需要特殊设备仪器,能够产生荧光呈现可视化的结果。通过优化LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法的体系以确定各成分最佳浓度比。该检测方法能够检测到绵羊无浆体msp4基因最低质粒DNA拷贝数为3.90 copies/μL,具有较高的敏感性。检测其他无浆体和其他常见羊病原体时呈阴性,表明特异性良好。对临床样本的应用检测,与常规PCR检测结果符合率为100%。结果表明,建立的LAMP-CRISPR/Cas12a体系适用于绵羊无浆体的检测,具有快捷方便的现场诊断和在资源匮乏的情况下应用的优势。 展开更多
关键词 绵羊无浆体 msp4基因 lamp CRISPR
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哈维氏弧菌LAMP可视化检测方法的建立 被引量:1
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作者 于劼豪 黄郁葱 +4 位作者 孙良娟 钟键 鲁义善 简纪常 蔡双虎 《海洋渔业》 北大核心 2025年第1期29-39,共11页
为提高哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)早期快速诊断水平,建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)技术的可视化快速检测方法。利用表达环二聚体磷酸二酯的VieA基因序列在哈维氏弧菌中的保守性,将其作为靶基因设计引物,并初步建立LAMP反应体系,对L... 为提高哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)早期快速诊断水平,建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)技术的可视化快速检测方法。利用表达环二聚体磷酸二酯的VieA基因序列在哈维氏弧菌中的保守性,将其作为靶基因设计引物,并初步建立LAMP反应体系,对LAMP反应体系中各反应物浓度、内外引物比例、反应时间和反应温度进行优化,并对优化后的LAMP反应的特异性和灵敏度进行检测;分别在优化后的LAMP反应体系中加入SYBR Green I、钙黄绿素-锰离子或羟基萘酚蓝作为指标剂对LAMP反应产物进行可视化判别,从而建立一种针对哈维氏弧菌的LAMP可视化检测方法。研究表明,该LAMP反应体系最佳反应温度60℃、反应时间60 min、Mg2+浓度1.2 mmol·L^(-1)、dNTPs浓度0.64 mmol·L^(-1)、甜菜碱浓度0.25 mmol·L^(-1)及内外引物比例16∶1;该反应体系能特异性检测到哈维氏弧菌,且灵敏度为3.4×10-6 ng·μL^(-1)。可视化指标剂钙黄绿素-锰离子的添加比例为12∶1或羟基萘酚蓝的添加浓度为390μmol·L^(-1)时,LAMP反应产物的可视化效果最好,临床应用表明,该LAMP可视化技术能准确并特异性地检测到珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀×E.lanceolatus♂)和凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)组织中感染的哈维氏弧菌。研究提供了一种简单、快速和结果可视化的哈维氏弧菌LAMP检测方法,可以为水生动物哈维氏弧菌的现场检测和弧菌病的早期诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 哈维氏弧菌 lamp技术 可视化检测 临床应用
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团头鲂皮特不动杆菌环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测方法建立 被引量:2
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作者 张瑞轩 曹景龙 +2 位作者 王卫民 罗毅 黎洁 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第3期71-78,共8页
为了精准识别和监测鱼类中皮特不动杆菌(Acinetobacter pittii)的感染,针对团头鲂(Megalobrama amblycephala)源皮特不动杆菌的管家基因rpo B设计特异性扩增引物,通过反应体系和条件(包括反应温度、时间、Mg^(2+)浓度以及内、外、环引... 为了精准识别和监测鱼类中皮特不动杆菌(Acinetobacter pittii)的感染,针对团头鲂(Megalobrama amblycephala)源皮特不动杆菌的管家基因rpo B设计特异性扩增引物,通过反应体系和条件(包括反应温度、时间、Mg^(2+)浓度以及内、外、环引物用量比)优化及灵敏度和特异性检测,建立一种基于环介导等温扩增技术(LAMP)的快速检测方法。结果表明:Mg^(2+)最优浓度为6.0 mmol/L,内、外、环引物最优用量比为8∶1∶4,在63℃恒温条件下反应30 min即可检测到皮特不动杆菌,反应60 min可获得最优结果;该LAMP方法的灵敏度是常规PCR方法的100倍,最低检出量为1.4 cfu/m L;在特异性检测方面,该方法仅能检测出皮特不动杆菌,与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、摩根菌(Morganella morganii)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)以及鲁氏耶尔森菌(Yersinia ruckeri)等7种常见致病菌均无交叉反应;此外,该方法既可以通过检测体系的颜色变化直观读取结果,也可以通过琼脂糖凝胶电泳分析结果。由此可见,本研究中所建立的针对团头鲂源皮特不动杆菌的LAMP快速检测方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点,可用于水产养殖业皮特不动杆菌引起的细菌性败血症的现场快速检测。 展开更多
关键词 团头鲂 皮特不动杆菌 细菌性败血症 环介导等温扩增技术(lamp) RPOB 反应体系
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SILIC:Intelligent On/Off Control for Networked Solar Insecticidal Lamps
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作者 Heyang Yao Lei Shu +2 位作者 Yuli Yang Miguel Martínez-García Wei Lin 《IEEE/CAA Journal of Automatica Sinica》 2025年第6期1221-1235,共15页
The solar insecticidal lamp(SIL)is an innovative green control device.Nevertheless,a major challenge is often encountered when carrying out insecticidal work is low energy utilization efficiency.The substantial energy... The solar insecticidal lamp(SIL)is an innovative green control device.Nevertheless,a major challenge is often encountered when carrying out insecticidal work is low energy utilization efficiency.The substantial energy consumption required to turn on the SIL,coupled with the extension of insecticidal working time during the low pest activity periods,can result in low energy efficiency.Especially when the energy storage level is below 50%,the inefficient use of energy significantly reduces the effectiveness of pest control.Consequently,an ineffective on/off scheme for these lamps may lead to suboptimal energy utilization.In this paper,we present the solar insecticidal lamp intelligent energy management scheme(SIL-IEMS)to address the challenge of inefficient energy utilization in the solar insecticidal lamp internet of things(SIL-IoT).SIL-IEMS primarily utilizes genetic algorithm(GA)and greedy algorithms to optimize insecticidal working time by considering constraints such as residual energy and the number of trap pests.Comparing SIL-IEMS to the traditional remote switching method(TRSM)and the solar insecticidal lamp genetic algorithm(SILGA),our simulation results showcase its superior energy efficiency and pest control effectiveness.Particularly noteworthy is the SILIEMS's 17.6%increase in insecticidal efficiency compared to TRSM and 6%improvement over SILGA when the SIL begins with a remaining energy level of 15%. 展开更多
关键词 Energy management internet of things on/off scheme solar insecticidal lamp(SIL) solar insecticidal lamp intelligent energy management scheme(SIL-IEMS)
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月季3种病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 李振锋 袁志豪 +4 位作者 陆月霞 罗云 黄冬华 王国平 蔡丽 《山西农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期1-9,共9页
[目的]月季是我国重要的观赏花卉,李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)、月季潜隐病毒1(rose cryptic virus 1,RCV1)是侵染月季的主要病毒,与其它病毒复合侵染月季... [目的]月季是我国重要的观赏花卉,李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)、月季潜隐病毒1(rose cryptic virus 1,RCV1)是侵染月季的主要病毒,与其它病毒复合侵染月季时,对其生长和发育可造成严重影响。本文旨在建立灵敏、便捷地检测月季中这3种病毒的RT-LAMP检测方法。[方法]本研究以病毒CP基因为靶序列设计特异性引物,建立侵染月季的PNRSV、ASGV和RCV1的RT-LAMP检测方法,并对反应体系中Mg^(2+)浓度和dNTP使用浓度、反应温度和反应时间进行了优化,并对反应灵敏度和特异性进行了检测。[结果]该方法在恒温条件(61℃)下即可对目标病毒实现可视化特异性检测,检测体系中Mg^(2+)和dNTP最佳使用浓度分别为5.0 mmol/L和1.2 mmol/L;本研究所建立的RT-LAMP检测方法,RCV1、PNRSV和ASGV可以检测到病毒的最低浓度分别为3.19×10^(5)、6.44×10^(4)和4.04×10^(4)拷贝/μL,灵敏度是RT-PCR的100~1000倍,而且检测体系具有很好的反应特异性,与侵染月季的其它病毒之间不存在交叉反应;使用该RT-LAMP检测方法随机对田间19个样品进行检测,可通过颜色变化,能准确检测出样品中的目标病毒,而无需借助琼脂糖凝胶电泳或其它专门仪器。[结论]该方法可通过直接添加染料实现可视化,具有快速、便捷、特异性好特点,适用于侵染月季的PNRSV、ASGV和RCV1的快速诊断及田间监测。 展开更多
关键词 月季 病毒 RT-lamp 检测方法
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当归魔芋花叶病毒RT-LAMP检测方法的建立
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作者 敬赛玲 张玉宝 +4 位作者 苏学思 金卫杰 邱阳 赵霞 李岩 《应用与环境生物学报》 北大核心 2025年第9期1477-1486,共10页
魔芋花叶病毒(konjac mosaic virus,KoMV)是一种可在当归植株间传播的致病病毒.受其侵染后,当归叶片出现黄化、坏死等症状,严重抑制了当归的正常生长发育进程.然而,当前尚缺乏快速、灵敏且可靠的KoMV检测方法.以KoMV的外壳蛋白(coat pro... 魔芋花叶病毒(konjac mosaic virus,KoMV)是一种可在当归植株间传播的致病病毒.受其侵染后,当归叶片出现黄化、坏死等症状,严重抑制了当归的正常生长发育进程.然而,当前尚缺乏快速、灵敏且可靠的KoMV检测方法.以KoMV的外壳蛋白(coat protein,CP)基因为靶点,利用反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)和实时荧光定量反转录环介导等温扩增(RT-qLAMP)技术,构建高效的检测体系.结果表明,RT-LAMP和RT-qLAMP检测方法能够精准识别感染KoMV的当归样本,且与同属的LMoV及其他7种植物病毒无交叉反应.经过优化,确定了两种方法的最佳反应条件:RT-qLAMP的最佳反应条件为66℃、Mg(2+)浓度8 mmol、反应时长40 min;RT-LAMP的最佳反应条件为54℃、Mg(2+)浓度8 mmol、反应时长40 min.同时,获得RT-qLAMP的标准曲线为y=-2.1513x+31.32(R^(2)=0.9834),检测范围为5.799×10^(10)-5.799copies/μL.灵敏度测试表明,RT-qLAMP检测的灵敏性是RT-LAMP的10倍,是传统RT-PCR的100倍.本研究成功建立了两种LAMP检测方法,可广泛应用于当归叶片、根、茎和种子等各类组织中KoMV的快速定性和定量检测,结果为当归产业的病害监测与防控提供了强有力的技术支撑.(图6表2参23) 展开更多
关键词 当归 魔芋花叶病毒(KoMV) 反转录环介导等温扩增(RT-lamp) 实时荧光定量反转录环介导等温扩增(RT-qlamp)
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海南万宁咖啡炭疽病菌Colletotrichum siamense的分离鉴定及LAMP快速检测体系的建立
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作者 温思为 高圣风 +5 位作者 田甜 刘世超 苟亚峰 张若男 薛超 孙世伟 《热带作物学报》 北大核心 2025年第7期1733-1744,共12页
作为海南省万宁市特色农业支柱产业,兴隆咖啡产业的可持续发展正面临炭疽病侵害的严峻挑战。咖啡炭疽病可导致咖啡叶片焦枯、枝条溃疡及浆果褐腐,是咖啡的主要病害之一。本研究在万宁咖啡主产区采集咖啡炭疽病样品并分离病原菌,通过ITS... 作为海南省万宁市特色农业支柱产业,兴隆咖啡产业的可持续发展正面临炭疽病侵害的严峻挑战。咖啡炭疽病可导致咖啡叶片焦枯、枝条溃疡及浆果褐腐,是咖啡的主要病害之一。本研究在万宁咖啡主产区采集咖啡炭疽病样品并分离病原菌,通过ITS、TUB2、CHS-1、ACT、GAPDH多基因联合分析鉴定病原菌,并基于环介导等温扩增技术(LAMP)建立快速检测体系。结果表明:(1)采集典型病样50份,经组织分离纯化获得炭疽菌株24株;(2)明确万宁5个种植区的病原种群结构包含4个炭疽菌种,即Colletotrichum tropicale、C.karstii、C.fructicola及优势种暹罗炭疽菌(C.siamense,45.8%)。(3)基于TUB2基因特异区域,设计筛选得到特异性LAMP引物组Tub-L1,优化反应体系参数为63℃恒温扩增50 min,内外引物浓度比为8∶1,Mg^(2+)8 mmol/L,d NTPs 0.8 mmol/L,无需甜菜碱。验证试验表明,该体系检测灵敏度达100 pg/μL(为常规PCR的10倍);对炭疽菌属的7个近缘种(C.tropicale、C.fructicola、C.karstii等)及7种非靶标植物病原菌[含咖啡驼孢锈菌(Hemileia vastatrix)、菜豆间座壳菌(Diaporthe phaseolorum)等]均无阳性反应。采用优化后的LAMP检测体系对田间采集的病害叶片样本进行分析,所有样品均成功检测出暹罗炭疽菌,其结果与常规PCR检测方法一致。综上所述,本研究建立并优化的咖啡炭疽病菌LAMP快速检测体系具有操作简便、反应高效、特异性强、灵敏度高以及结果可视化等优势,适用于暹罗炭疽菌(C.siamense)的田间快速检测。该体系为咖啡炭疽菌的精准鉴定及高效检测提供了可靠的技术支撑,对咖啡炭疽病的早期预警、病害监测及综合防控具有重要的实践意义和应用价值。 展开更多
关键词 咖啡炭疽病 病原鉴定 环介导等温扩增(lamp) 检测
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睡眠嗜组织菌可视化LAMP现场检测方法的建立及初步应用 被引量:1
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作者 李富祥 高华峰 +1 位作者 赵文华 宋建领 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期477-483,共7页
为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检... 为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检测方法。反应程序优化结果显示,本研究建立LAMP方法的最佳反应程序为58℃反应70 min。特异性试验结果显示,该方法能特异性地检测Hi.somni,与溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌等14种牛、绵羊和山羊常见细菌无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法能检出最低浓度为4.7 copies/μL的重组质粒标准品pMD19T-His,敏感性较高。临床样品检测结果显示,LAMP方法和普通PCR方法检测Hi.somni的阳性率分别为11.49%(10/87)和9.20%(8/87),LAMP方法与PCR方法的总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为97.70%(85/87)、100%(8/8)和97.47%(77/79)。结果表明,本研究建立的LAMP方法为牛、山羊和绵羊Hi.somni感染的快速可视化现场检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 睡眠嗜组织菌 环介等温扩增 现场检测 山羊 绵羊
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黑木耳菌棒中长枝木霉LAMP可视化检测技术研究 被引量:1
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作者 朱姝蕊 张传清 《食药用菌》 2025年第4期280-284,共5页
长枝木霉(Trichoderma harzianum)是黑木耳生产中菌棒灭菌不彻底的标志性污染菌之一。为提高长枝木霉在黑木耳菌棒中早期诊断的效率,本研究提出一种基于环介导等温扩增(LAMP)技术的可视化快速检测方法。研究首先选取长枝木霉的tubulin... 长枝木霉(Trichoderma harzianum)是黑木耳生产中菌棒灭菌不彻底的标志性污染菌之一。为提高长枝木霉在黑木耳菌棒中早期诊断的效率,本研究提出一种基于环介导等温扩增(LAMP)技术的可视化快速检测方法。研究首先选取长枝木霉的tubulin基因作为靶基因,设计特异性引物,初步构建LAMP反应体系。通过在LAMP反应中加入羟基萘酚蓝作为显色剂,实现了对反应产物的颜色判别,从而实现可视化检测。最后,通过优化反应温度(55~66℃,共12个梯度)和反应时间(15~120 min,共8个梯度),提升检测体系的灵敏度。研究结果表明,该体系采取反应温度60℃,反应时间60 min,灵敏度达到10 pg/μL,比传统的PCR方法高出100倍。该方法简便、快速、准确,无需昂贵仪器即可实施,适用于普通实验室和田间的大规模检测,为黑木耳菌棒中长枝木霉的早期诊断与防控提供了有力的技术支持。 展开更多
关键词 长枝木霉 lamp技术 可视化检测 黑木耳菌棒
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余甘子果实斑点病菌LAMP可视化检测方法的建立 被引量:1
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作者 赖多 王德林 +3 位作者 邵雪花 秦健 庄庆礼 肖维强 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期69-79,90,共12页
【目的】建立余甘子果实斑点病菌快速、便捷、灵敏、可视的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,为该病害的风险预判和科学防治提供依据。【方法】以余甘子果实斑点病致病菌间座壳菌(Diaporthe ph... 【目的】建立余甘子果实斑点病菌快速、便捷、灵敏、可视的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,为该病害的风险预判和科学防治提供依据。【方法】以余甘子果实斑点病致病菌间座壳菌(Diaporthe phoenicicola)的翻译延伸因子EF-1α基因为靶序列,设计LAMP特异性扩增引物;以余甘子间座壳菌DNA为模板,优化反应温度、反应时间、dNTPs浓度、Mg^(2+)浓度和内外侧引物浓度比,建立LAMP检测最佳反应体系,测试其特异性和灵敏性,并对余甘子发病果实进行实际检测。【结果】适用于余甘子果实斑点病LAMP检测的最佳引物为引物组合4(EF4-F3/EF4-B3和EF4-FIP/EF4-BIP);LAMP检测最佳反应条件为dNTPs浓度1.0 mmol/L,Mg^(2+)浓度4 mmol/L,内外侧引物质量比6∶1,反应温度63℃,反应时间50 min。优化后的LAMP检测方法可特异性地检出余甘子间座壳菌(D.phoenicicola),检测灵敏度可达0.01 ng/μL,且在实际应用中准确率高达100%。【结论】首次建立了余甘子果实斑点病致病菌间座壳菌LAMP可视化快速检测方法,该方法特异性强、灵敏度高,操作简单,可用于田间余甘子果实斑点病菌的快速检测。 展开更多
关键词 余甘子 间座壳菌 环介导等温扩增技术 灵敏性 特异性 可视化
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地锦叶斑病菌鉴定及LAMP快速检测体系的建立
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作者 黄成玉 陈健鑫 +3 位作者 郑星月 吴峰婧琳 马焕成 伍建榕 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第1期89-96,共8页
【目的】明确引起云南玉龙县地锦叶斑病的病原种类,并建立快速检测方法。【方法】采用组织分离法分离病原菌,并依据科赫氏法则确定地锦叶斑病病原,通过形态学特征及多基因联合构建系统发育树,明确病原菌的分类地位;以病原菌的Alt a1基... 【目的】明确引起云南玉龙县地锦叶斑病的病原种类,并建立快速检测方法。【方法】采用组织分离法分离病原菌,并依据科赫氏法则确定地锦叶斑病病原,通过形态学特征及多基因联合构建系统发育树,明确病原菌的分类地位;以病原菌的Alt a1基因序列为靶标设计特异性引物建立环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。【结果】地锦叶斑病病原菌鉴定为链格孢菌Alternaria alternata。建立的LAMP反应体系可特异有效地检测出地锦叶斑病菌,该体系最佳反应温度为65℃、最佳反应时间为50 min、最低检测灵敏度为1 pg/μL。使用该体系对人工接种病原菌不同时间的地锦叶片进行链格孢LAMP检测,检出时间为接种12 h及以上。【结论】本研究可为地锦叶斑病的早期检测和科学防控提供理论依据。 展开更多
关键词 地锦 叶斑病 链格孢菌 病原鉴定 lamp体系
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