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水禽细小病毒LAMP及其可视化通用检测方法的建立
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作者 戴银 周慧琴 +9 位作者 谷思琴 胡晓苗 王洁茹 殷冬冬 尹磊 沈学怀 潘孝成 赵瑞宏 周学利 侯宏艳 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期63-68,共6页
为了建立鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)通用的检测方法,本试验以GPV和MDPV两种水禽细小病毒的NS基因保守序列作为靶标,设计了1组特异性引物,优化建立了水禽细小病毒的环介导等温扩增(LAMP)和LAMP-羟基萘酚蓝(HNB)可视化通用检测... 为了建立鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)通用的检测方法,本试验以GPV和MDPV两种水禽细小病毒的NS基因保守序列作为靶标,设计了1组特异性引物,优化建立了水禽细小病毒的环介导等温扩增(LAMP)和LAMP-羟基萘酚蓝(HNB)可视化通用检测方法,并对2种方法的特异性和灵敏性进行检测。采用常规PCR、LAMP和LAMP-HNB对10份水禽临床样品进行检测,以评估2种方法的实用性。结果显示,LAMP方法的最佳反应温度为65℃、反应时间为60 min。2种方法仅能扩增GPV和MDPV,而对其他5种常见水禽病毒的检测结果均为阴性,最低检出浓度均为1×10-5ng/μL。2种方法与常规PCR的检测结果一致,符合率达100%。结果表明,建立的LAMP方法和LAMP-HNB可视化方法具有灵敏性好、特异性高、仪器要求低和可视化等优点,可为水禽细小病毒的现场快速检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 鹅细小病毒(GPV) 番鸭细小病毒(MDPV) NS基因 环介导等温扩增(lamp) 可视化
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绵羊无浆体LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法的建立 被引量:2
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作者 郭心龙 周勇志 +4 位作者 曹杰 王亚楠 张厚双 段德勇 周金林 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第3期330-337,共8页
绵羊无浆体(Anaplasma ovis)是一种蜱传、寄生于红细胞内的细菌病原体,引起绵羊、山羊和野生反刍动物等发病,对我国养羊业发展造成严重危害。尽管已有多种绵羊无浆体诊断方法报道,但仍然缺少简易快捷、应用于现场的检测技术。本研究旨... 绵羊无浆体(Anaplasma ovis)是一种蜱传、寄生于红细胞内的细菌病原体,引起绵羊、山羊和野生反刍动物等发病,对我国养羊业发展造成严重危害。尽管已有多种绵羊无浆体诊断方法报道,但仍然缺少简易快捷、应用于现场的检测技术。本研究旨在建立一种针对绵羊无浆体msp4基因的LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法。该检测方法是在恒定温度下进行的,不需要特殊设备仪器,能够产生荧光呈现可视化的结果。通过优化LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法的体系以确定各成分最佳浓度比。该检测方法能够检测到绵羊无浆体msp4基因最低质粒DNA拷贝数为3.90 copies/μL,具有较高的敏感性。检测其他无浆体和其他常见羊病原体时呈阴性,表明特异性良好。对临床样本的应用检测,与常规PCR检测结果符合率为100%。结果表明,建立的LAMP-CRISPR/Cas12a体系适用于绵羊无浆体的检测,具有快捷方便的现场诊断和在资源匮乏的情况下应用的优势。 展开更多
关键词 绵羊无浆体 msp4基因 lamp CRISPR
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当归魔芋花叶病毒RT-LAMP检测方法的建立
3
作者 敬赛玲 张玉宝 +4 位作者 苏学思 金卫杰 邱阳 赵霞 李岩 《应用与环境生物学报》 北大核心 2025年第9期1477-1486,共10页
魔芋花叶病毒(konjac mosaic virus,KoMV)是一种可在当归植株间传播的致病病毒.受其侵染后,当归叶片出现黄化、坏死等症状,严重抑制了当归的正常生长发育进程.然而,当前尚缺乏快速、灵敏且可靠的KoMV检测方法.以KoMV的外壳蛋白(coat pro... 魔芋花叶病毒(konjac mosaic virus,KoMV)是一种可在当归植株间传播的致病病毒.受其侵染后,当归叶片出现黄化、坏死等症状,严重抑制了当归的正常生长发育进程.然而,当前尚缺乏快速、灵敏且可靠的KoMV检测方法.以KoMV的外壳蛋白(coat protein,CP)基因为靶点,利用反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)和实时荧光定量反转录环介导等温扩增(RT-qLAMP)技术,构建高效的检测体系.结果表明,RT-LAMP和RT-qLAMP检测方法能够精准识别感染KoMV的当归样本,且与同属的LMoV及其他7种植物病毒无交叉反应.经过优化,确定了两种方法的最佳反应条件:RT-qLAMP的最佳反应条件为66℃、Mg(2+)浓度8 mmol、反应时长40 min;RT-LAMP的最佳反应条件为54℃、Mg(2+)浓度8 mmol、反应时长40 min.同时,获得RT-qLAMP的标准曲线为y=-2.1513x+31.32(R^(2)=0.9834),检测范围为5.799×10^(10)-5.799copies/μL.灵敏度测试表明,RT-qLAMP检测的灵敏性是RT-LAMP的10倍,是传统RT-PCR的100倍.本研究成功建立了两种LAMP检测方法,可广泛应用于当归叶片、根、茎和种子等各类组织中KoMV的快速定性和定量检测,结果为当归产业的病害监测与防控提供了强有力的技术支撑.(图6表2参23) 展开更多
关键词 当归 魔芋花叶病毒(KoMV) 反转录环介导等温扩增(RT-lamp) 实时荧光定量反转录环介导等温扩增(RT-qlamp)
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哈维氏弧菌LAMP可视化检测方法的建立
4
作者 于劼豪 黄郁葱 +4 位作者 孙良娟 钟键 鲁义善 简纪常 蔡双虎 《海洋渔业》 北大核心 2025年第1期29-39,共11页
为提高哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)早期快速诊断水平,建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)技术的可视化快速检测方法。利用表达环二聚体磷酸二酯的VieA基因序列在哈维氏弧菌中的保守性,将其作为靶基因设计引物,并初步建立LAMP反应体系,对L... 为提高哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)早期快速诊断水平,建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)技术的可视化快速检测方法。利用表达环二聚体磷酸二酯的VieA基因序列在哈维氏弧菌中的保守性,将其作为靶基因设计引物,并初步建立LAMP反应体系,对LAMP反应体系中各反应物浓度、内外引物比例、反应时间和反应温度进行优化,并对优化后的LAMP反应的特异性和灵敏度进行检测;分别在优化后的LAMP反应体系中加入SYBR Green I、钙黄绿素-锰离子或羟基萘酚蓝作为指标剂对LAMP反应产物进行可视化判别,从而建立一种针对哈维氏弧菌的LAMP可视化检测方法。研究表明,该LAMP反应体系最佳反应温度60℃、反应时间60 min、Mg2+浓度1.2 mmol·L^(-1)、dNTPs浓度0.64 mmol·L^(-1)、甜菜碱浓度0.25 mmol·L^(-1)及内外引物比例16∶1;该反应体系能特异性检测到哈维氏弧菌,且灵敏度为3.4×10-6 ng·μL^(-1)。可视化指标剂钙黄绿素-锰离子的添加比例为12∶1或羟基萘酚蓝的添加浓度为390μmol·L^(-1)时,LAMP反应产物的可视化效果最好,临床应用表明,该LAMP可视化技术能准确并特异性地检测到珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀×E.lanceolatus♂)和凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)组织中感染的哈维氏弧菌。研究提供了一种简单、快速和结果可视化的哈维氏弧菌LAMP检测方法,可以为水生动物哈维氏弧菌的现场检测和弧菌病的早期诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 哈维氏弧菌 lamp技术 可视化检测 临床应用
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海南万宁咖啡炭疽病菌Colletotrichum siamense的分离鉴定及LAMP快速检测体系的建立
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作者 温思为 高圣风 +5 位作者 田甜 刘世超 苟亚峰 张若男 薛超 孙世伟 《热带作物学报》 北大核心 2025年第7期1733-1744,共12页
作为海南省万宁市特色农业支柱产业,兴隆咖啡产业的可持续发展正面临炭疽病侵害的严峻挑战。咖啡炭疽病可导致咖啡叶片焦枯、枝条溃疡及浆果褐腐,是咖啡的主要病害之一。本研究在万宁咖啡主产区采集咖啡炭疽病样品并分离病原菌,通过ITS... 作为海南省万宁市特色农业支柱产业,兴隆咖啡产业的可持续发展正面临炭疽病侵害的严峻挑战。咖啡炭疽病可导致咖啡叶片焦枯、枝条溃疡及浆果褐腐,是咖啡的主要病害之一。本研究在万宁咖啡主产区采集咖啡炭疽病样品并分离病原菌,通过ITS、TUB2、CHS-1、ACT、GAPDH多基因联合分析鉴定病原菌,并基于环介导等温扩增技术(LAMP)建立快速检测体系。结果表明:(1)采集典型病样50份,经组织分离纯化获得炭疽菌株24株;(2)明确万宁5个种植区的病原种群结构包含4个炭疽菌种,即Colletotrichum tropicale、C.karstii、C.fructicola及优势种暹罗炭疽菌(C.siamense,45.8%)。(3)基于TUB2基因特异区域,设计筛选得到特异性LAMP引物组Tub-L1,优化反应体系参数为63℃恒温扩增50 min,内外引物浓度比为8∶1,Mg^(2+)8 mmol/L,d NTPs 0.8 mmol/L,无需甜菜碱。验证试验表明,该体系检测灵敏度达100 pg/μL(为常规PCR的10倍);对炭疽菌属的7个近缘种(C.tropicale、C.fructicola、C.karstii等)及7种非靶标植物病原菌[含咖啡驼孢锈菌(Hemileia vastatrix)、菜豆间座壳菌(Diaporthe phaseolorum)等]均无阳性反应。采用优化后的LAMP检测体系对田间采集的病害叶片样本进行分析,所有样品均成功检测出暹罗炭疽菌,其结果与常规PCR检测方法一致。综上所述,本研究建立并优化的咖啡炭疽病菌LAMP快速检测体系具有操作简便、反应高效、特异性强、灵敏度高以及结果可视化等优势,适用于暹罗炭疽菌(C.siamense)的田间快速检测。该体系为咖啡炭疽菌的精准鉴定及高效检测提供了可靠的技术支撑,对咖啡炭疽病的早期预警、病害监测及综合防控具有重要的实践意义和应用价值。 展开更多
关键词 咖啡炭疽病 病原鉴定 环介导等温扩增(lamp) 检测
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睡眠嗜组织菌可视化LAMP现场检测方法的建立及初步应用 被引量:1
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作者 李富祥 高华峰 +1 位作者 赵文华 宋建领 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期477-483,共7页
为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检... 为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检测方法。反应程序优化结果显示,本研究建立LAMP方法的最佳反应程序为58℃反应70 min。特异性试验结果显示,该方法能特异性地检测Hi.somni,与溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌等14种牛、绵羊和山羊常见细菌无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法能检出最低浓度为4.7 copies/μL的重组质粒标准品pMD19T-His,敏感性较高。临床样品检测结果显示,LAMP方法和普通PCR方法检测Hi.somni的阳性率分别为11.49%(10/87)和9.20%(8/87),LAMP方法与PCR方法的总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为97.70%(85/87)、100%(8/8)和97.47%(77/79)。结果表明,本研究建立的LAMP方法为牛、山羊和绵羊Hi.somni感染的快速可视化现场检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 睡眠嗜组织菌 环介等温扩增 现场检测 山羊 绵羊
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团头鲂皮特不动杆菌环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测方法建立
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作者 张瑞轩 曹景龙 +2 位作者 王卫民 罗毅 黎洁 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第3期71-78,共8页
为了精准识别和监测鱼类中皮特不动杆菌(Acinetobacter pittii)的感染,针对团头鲂(Megalobrama amblycephala)源皮特不动杆菌的管家基因rpo B设计特异性扩增引物,通过反应体系和条件(包括反应温度、时间、Mg^(2+)浓度以及内、外、环引... 为了精准识别和监测鱼类中皮特不动杆菌(Acinetobacter pittii)的感染,针对团头鲂(Megalobrama amblycephala)源皮特不动杆菌的管家基因rpo B设计特异性扩增引物,通过反应体系和条件(包括反应温度、时间、Mg^(2+)浓度以及内、外、环引物用量比)优化及灵敏度和特异性检测,建立一种基于环介导等温扩增技术(LAMP)的快速检测方法。结果表明:Mg^(2+)最优浓度为6.0 mmol/L,内、外、环引物最优用量比为8∶1∶4,在63℃恒温条件下反应30 min即可检测到皮特不动杆菌,反应60 min可获得最优结果;该LAMP方法的灵敏度是常规PCR方法的100倍,最低检出量为1.4 cfu/m L;在特异性检测方面,该方法仅能检测出皮特不动杆菌,与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、摩根菌(Morganella morganii)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)以及鲁氏耶尔森菌(Yersinia ruckeri)等7种常见致病菌均无交叉反应;此外,该方法既可以通过检测体系的颜色变化直观读取结果,也可以通过琼脂糖凝胶电泳分析结果。由此可见,本研究中所建立的针对团头鲂源皮特不动杆菌的LAMP快速检测方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点,可用于水产养殖业皮特不动杆菌引起的细菌性败血症的现场快速检测。 展开更多
关键词 团头鲂 皮特不动杆菌 细菌性败血症 环介导等温扩增技术(lamp) RPOB 反应体系
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月季3种病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用
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作者 李振锋 袁志豪 +4 位作者 陆月霞 罗云 黄冬华 王国平 蔡丽 《山西农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期1-9,共9页
[目的]月季是我国重要的观赏花卉,李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)、月季潜隐病毒1(rose cryptic virus 1,RCV1)是侵染月季的主要病毒,与其它病毒复合侵染月季... [目的]月季是我国重要的观赏花卉,李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)、月季潜隐病毒1(rose cryptic virus 1,RCV1)是侵染月季的主要病毒,与其它病毒复合侵染月季时,对其生长和发育可造成严重影响。本文旨在建立灵敏、便捷地检测月季中这3种病毒的RT-LAMP检测方法。[方法]本研究以病毒CP基因为靶序列设计特异性引物,建立侵染月季的PNRSV、ASGV和RCV1的RT-LAMP检测方法,并对反应体系中Mg^(2+)浓度和dNTP使用浓度、反应温度和反应时间进行了优化,并对反应灵敏度和特异性进行了检测。[结果]该方法在恒温条件(61℃)下即可对目标病毒实现可视化特异性检测,检测体系中Mg^(2+)和dNTP最佳使用浓度分别为5.0 mmol/L和1.2 mmol/L;本研究所建立的RT-LAMP检测方法,RCV1、PNRSV和ASGV可以检测到病毒的最低浓度分别为3.19×10^(5)、6.44×10^(4)和4.04×10^(4)拷贝/μL,灵敏度是RT-PCR的100~1000倍,而且检测体系具有很好的反应特异性,与侵染月季的其它病毒之间不存在交叉反应;使用该RT-LAMP检测方法随机对田间19个样品进行检测,可通过颜色变化,能准确检测出样品中的目标病毒,而无需借助琼脂糖凝胶电泳或其它专门仪器。[结论]该方法可通过直接添加染料实现可视化,具有快速、便捷、特异性好特点,适用于侵染月季的PNRSV、ASGV和RCV1的快速诊断及田间监测。 展开更多
关键词 月季 病毒 RT-lamp 检测方法
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余甘子果实斑点病菌LAMP可视化检测方法的建立 被引量:1
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作者 赖多 王德林 +3 位作者 邵雪花 秦健 庄庆礼 肖维强 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期69-79,90,共12页
【目的】建立余甘子果实斑点病菌快速、便捷、灵敏、可视的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,为该病害的风险预判和科学防治提供依据。【方法】以余甘子果实斑点病致病菌间座壳菌(Diaporthe ph... 【目的】建立余甘子果实斑点病菌快速、便捷、灵敏、可视的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,为该病害的风险预判和科学防治提供依据。【方法】以余甘子果实斑点病致病菌间座壳菌(Diaporthe phoenicicola)的翻译延伸因子EF-1α基因为靶序列,设计LAMP特异性扩增引物;以余甘子间座壳菌DNA为模板,优化反应温度、反应时间、dNTPs浓度、Mg^(2+)浓度和内外侧引物浓度比,建立LAMP检测最佳反应体系,测试其特异性和灵敏性,并对余甘子发病果实进行实际检测。【结果】适用于余甘子果实斑点病LAMP检测的最佳引物为引物组合4(EF4-F3/EF4-B3和EF4-FIP/EF4-BIP);LAMP检测最佳反应条件为dNTPs浓度1.0 mmol/L,Mg^(2+)浓度4 mmol/L,内外侧引物质量比6∶1,反应温度63℃,反应时间50 min。优化后的LAMP检测方法可特异性地检出余甘子间座壳菌(D.phoenicicola),检测灵敏度可达0.01 ng/μL,且在实际应用中准确率高达100%。【结论】首次建立了余甘子果实斑点病致病菌间座壳菌LAMP可视化快速检测方法,该方法特异性强、灵敏度高,操作简单,可用于田间余甘子果实斑点病菌的快速检测。 展开更多
关键词 余甘子 间座壳菌 环介导等温扩增技术 灵敏性 特异性 可视化
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地锦叶斑病菌鉴定及LAMP快速检测体系的建立
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作者 黄成玉 陈健鑫 +3 位作者 郑星月 吴峰婧琳 马焕成 伍建榕 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第1期89-96,共8页
【目的】明确引起云南玉龙县地锦叶斑病的病原种类,并建立快速检测方法。【方法】采用组织分离法分离病原菌,并依据科赫氏法则确定地锦叶斑病病原,通过形态学特征及多基因联合构建系统发育树,明确病原菌的分类地位;以病原菌的Alt a1基... 【目的】明确引起云南玉龙县地锦叶斑病的病原种类,并建立快速检测方法。【方法】采用组织分离法分离病原菌,并依据科赫氏法则确定地锦叶斑病病原,通过形态学特征及多基因联合构建系统发育树,明确病原菌的分类地位;以病原菌的Alt a1基因序列为靶标设计特异性引物建立环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。【结果】地锦叶斑病病原菌鉴定为链格孢菌Alternaria alternata。建立的LAMP反应体系可特异有效地检测出地锦叶斑病菌,该体系最佳反应温度为65℃、最佳反应时间为50 min、最低检测灵敏度为1 pg/μL。使用该体系对人工接种病原菌不同时间的地锦叶片进行链格孢LAMP检测,检出时间为接种12 h及以上。【结论】本研究可为地锦叶斑病的早期检测和科学防控提供理论依据。 展开更多
关键词 地锦 叶斑病 链格孢菌 病原鉴定 lamp体系
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基于LAMP与智能手机端对龋病致病菌快速检测平台的构建
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作者 尚进 张晓东 +5 位作者 王敬夫 王玥晖 杨晨 王贺靓 刘佼佼 张然 《实用口腔医学杂志》 北大核心 2025年第5期595-599,共5页
目的:建立一种基于环介导等温扩增技术(LAMP)对变异链球菌的快速、定量、可视化的快速检测方法。方法:提取变异链球菌DNA,通过LAMP技术对DNA中的特异性片段进行检测,建立基于LAMP技术的检测方案,对检测实验条件进行优化,建立针对变异链... 目的:建立一种基于环介导等温扩增技术(LAMP)对变异链球菌的快速、定量、可视化的快速检测方法。方法:提取变异链球菌DNA,通过LAMP技术对DNA中的特异性片段进行检测,建立基于LAMP技术的检测方案,对检测实验条件进行优化,建立针对变异链球菌的LAMP定量检测技术,运用基于移动端检测设备对阳性实验结果进行定量分析。结果:建立的LAMP定量检测方法可在23 min内检测时间内对样本进行检测,具有良好的特异性和灵敏性,检测精度达到1.625×10^(-3)ng/μL。使用移动端应用程序对阳性结果进行采集、识别并进行了量化,绝对G值与DNA浓度呈良好线性关系,方程为y=3.2x+57.133(R^(2)=0.9882)。结论:LAMP定量检测变异链球菌的新方法灵敏度高、特异性强、结果可视化、方便省时、可以对细菌DNA进行定量等特点,具有广泛的临床应用前景。 展开更多
关键词 lamp 变异链球菌 DNA 定量检测
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miR-207靶向自噬相关蛋白LAMP2调控巨噬细胞与结核分枝杆菌相互作用机制的研究 被引量:1
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作者 杜文雅 代禹美 +2 位作者 乐林芝 马涛 吴利先 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第2期97-104,共8页
目的miR-207被发现在自然杀伤(NK)细胞外泌体中表达,参与疾病进展,但暂无与结核病(TB)有关的研究。方法生物信息学方法预测并用双荧光素酶报告实验检测溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)是否与miR-207有靶向关系。使用脂质体转染法将实验分为四... 目的miR-207被发现在自然杀伤(NK)细胞外泌体中表达,参与疾病进展,但暂无与结核病(TB)有关的研究。方法生物信息学方法预测并用双荧光素酶报告实验检测溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)是否与miR-207有靶向关系。使用脂质体转染法将实验分为四组(OP-LAMP2组:共转染miR-207 mimics和LAMP2过表达质粒;EP组:共转染mimics NC和空载质粒;siLAMP2组:转染siLAMP2;siLAMP2-NC组:转染siLAMP2-NC)。使用H37Ra感染Ana-1细胞建立结核感染模型。结核菌落形成单位计数评估LAMP2对胞内分枝杆菌负荷的影响以及对胞外残留分枝杆菌的清除作用。流式细胞术检测细胞总凋亡率。实时荧光定量PCR检测LAMP2、细胞凋亡基因、焦亡基因及自噬基因相对表达量。Western blot法检测LAMP2蛋白、细胞凋亡、焦亡、自噬蛋白的相对表达量。结果双荧光素酶报告实验检测显示miR-207与LAMP2存在靶向关系,实时荧光定量PCR、Western blot结果统计分析和显微镜下观察证明成功建立感染模型。菌落形成单位计数发现OP-LAMP2组的菌落数低于EP组,siLAMP2组高于siLAMP2-NC组。流式细胞术检测发现OP-LAMP2组总凋亡率低于EP组,siLAMP2组高于siLAMP2-NC组。实时荧光定量PCR及Western blot法检测发现对照组凋亡、焦亡相关蛋白和基因相对表达量趋势为OP-LAMP2低于EP组,siLAMP2组高于siLAMP2-NC组。实时荧光定量PCR检测自噬正调节基因微管相关蛋白1轻链3(LC3)和重组人自噬效应蛋白(Beclin1)在OP-LAMP2组相对表达量高于EP组,siLAMP2组低于siLAMP2-NC组,负调节自噬基因相对表达量与自噬正调节基因趋势相反。自噬相关蛋白相对表达量与自噬基因趋势一致。结论miR-207通过靶向自噬相关蛋白LAMP2促进巨噬细胞凋亡、细胞焦亡、抑制自噬,促进结核分枝杆菌(Mtb)的存活,为TB提供新的治疗方向。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(Mtb) miR-207 lamp2 自噬 凋亡 焦亡
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黑木耳菌棒中长枝木霉LAMP可视化检测技术研究
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作者 朱姝蕊 张传清 《食药用菌》 2025年第4期280-284,共5页
长枝木霉(Trichoderma harzianum)是黑木耳生产中菌棒灭菌不彻底的标志性污染菌之一。为提高长枝木霉在黑木耳菌棒中早期诊断的效率,本研究提出一种基于环介导等温扩增(LAMP)技术的可视化快速检测方法。研究首先选取长枝木霉的tubulin... 长枝木霉(Trichoderma harzianum)是黑木耳生产中菌棒灭菌不彻底的标志性污染菌之一。为提高长枝木霉在黑木耳菌棒中早期诊断的效率,本研究提出一种基于环介导等温扩增(LAMP)技术的可视化快速检测方法。研究首先选取长枝木霉的tubulin基因作为靶基因,设计特异性引物,初步构建LAMP反应体系。通过在LAMP反应中加入羟基萘酚蓝作为显色剂,实现了对反应产物的颜色判别,从而实现可视化检测。最后,通过优化反应温度(55~66℃,共12个梯度)和反应时间(15~120 min,共8个梯度),提升检测体系的灵敏度。研究结果表明,该体系采取反应温度60℃,反应时间60 min,灵敏度达到10 pg/μL,比传统的PCR方法高出100倍。该方法简便、快速、准确,无需昂贵仪器即可实施,适用于普通实验室和田间的大规模检测,为黑木耳菌棒中长枝木霉的早期诊断与防控提供了有力的技术支持。 展开更多
关键词 长枝木霉 lamp技术 可视化检测 黑木耳菌棒
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A dopant-assisted iodide-adduct chemical ionization time-of-flight mass spectrometer based on VUV lamp photoionization for atmospheric low-molecular-weight organic acids analysis 被引量:1
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作者 Yonglei Zhang Ruidong Liu +3 位作者 Mei Li Yingzhe Guo Jichuang Kong Keyong Hou 《Journal of Environmental Sciences》 2025年第3期500-511,共12页
Formic and acetic acids are the most abundant gaseous organic acids and play the key role in the atmospheric chemistry.In iodine-adduct chemical ionizationmass spectrometry(CIMS),the low utilization efficiency of meth... Formic and acetic acids are the most abundant gaseous organic acids and play the key role in the atmospheric chemistry.In iodine-adduct chemical ionizationmass spectrometry(CIMS),the low utilization efficiency of methyl iodide and humidity interference are two major issues of the vacuum ultraviolet(VUV)lamp initiated CIMS for on-line gaseous formic and acetic acids analysis.In this work,we present a new CIMS based on VUV lamp,and the ion-molecular reactor is separated into photoionization and chemical ionization zones by a reducer electrode.Acetone was added to the photoionization zone,and the VUV photoionization acetone provided low-energy electrons for methyl iodide to generate I−,and the addition of acetone reduced the amount of methyl iodide by 2/3.In the chemical ionization zone,a headspace vial containing ultrapure water was added for humidity calibration,and the vial changes the sensitivity as a function of humidity from ambiguity to well linear correlation(R2>0.95).With humidity calibration,the CIMS can quantitatively measure formic and acetic acids in the humidity range of 0%-88%RH.In this mode,limits of detection of 10 and 50 pptv are obtained for formic and acetic acids,respectively.And the relative standard deviation(RSD)of quantitation stability for 6 days were less than 10.5%.This CIMS was successfully used to determine the formic and acetic acids in the underground parking and ambient environment of the Shandong University campus(Qingdao,China).In addition,we developed a simple model based formic acid concentration to assess vehicular emissions. 展开更多
关键词 Formic acid Acetic acid Vacuum ultraviolet(VUV)lamp photoionization(PI) Chemical ionization(CI) Time-of-flight mass spectrometry (TOFMS) Trace gases measurement
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LAMP-2基因在心力衰竭中的研究进展
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作者 田振宁 崔英华 《中国分子心脏病学杂志》 2025年第2期6778-6783,共6页
心力衰竭是一组复杂的临床综合征,是各种心脏疾病的严重表现或终末阶段。随着全球人口老龄化的加剧,其发病率和死亡率逐年增加。心肌细胞的自噬在心力衰竭的发生和发展中起着重要的作用。溶酶体相关膜蛋白2(lysosomal-associated membra... 心力衰竭是一组复杂的临床综合征,是各种心脏疾病的严重表现或终末阶段。随着全球人口老龄化的加剧,其发病率和死亡率逐年增加。心肌细胞的自噬在心力衰竭的发生和发展中起着重要的作用。溶酶体相关膜蛋白2(lysosomal-associated membrane protein 2,LAMP-2)基因编码的蛋白质是维持正常溶酶体功能的关键因子。近年来的研究发现,LAMP-2在心力衰竭中的异常表达与心脏功能下降密切相关。本综述将概述LAMP-2基因的结构和功能,并综合分析LAMP-2在心力衰竭中的研究进展,为深入理解和治疗心力衰竭提供理论基础。 展开更多
关键词 lamp-2 心力衰竭 溶酶体 自噬
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玛瑙红樱桃花变绿植原体LAMP可视化检测方法建立
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作者 洪怡 田文杰 +3 位作者 文晓鹏 文壮 田田 乔光 《分子植物育种》 北大核心 2025年第14期4842-4849,共8页
花变绿植原体病害是近年来在玛瑙红樱桃上发生的一种毁灭性病害。课题组前期研究表明,该花变绿植原体属于16SrV型,为了建立能够用于玛瑙红樱桃花变绿植原体果园病害筛查,苗木流通检疫等方面的快速检测技术,本研究设计并优化了玛瑙红樱... 花变绿植原体病害是近年来在玛瑙红樱桃上发生的一种毁灭性病害。课题组前期研究表明,该花变绿植原体属于16SrV型,为了建立能够用于玛瑙红樱桃花变绿植原体果园病害筛查,苗木流通检疫等方面的快速检测技术,本研究设计并优化了玛瑙红樱桃花变绿植原体LAMP可视化检测方法。同时,灵敏度测试表明,该检测体系灵敏度为3.72×10^(-5)ng/μL,是普通PCR的100倍,同时对未出现花变绿症状的玛瑙红樱桃叶片(74份)进行检测,LAMP阳性检测率为36.84%、普通PCR方法仅仅为5.26%。本研究建立的玛瑙红樱桃花变绿植原体LAMP可视化检测方法灵敏度高,操作简单,具有非常好的基层推广潜力。 展开更多
关键词 樱桃 花变绿植原体 lamp检测技术
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基于LAMP的中药材金钱白花蛇真伪鉴别方法的建立
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作者 邓华明 徐晓可 +4 位作者 齐春丽 李子行 曾宇 李岩 谢英红 《食品与药品》 2025年第4期306-310,共5页
目的建立LAMP鉴别金钱白花蛇及其混淆品的方法。方法以金钱白花蛇Cyt b靶基因为基础,设计LAMP特异性引物,建立金钱白花蛇的LAMP快速鉴别方法,研究方法的特异性和灵敏度,并采用LAMP法和PCR法鉴别市售金钱白花蛇的真伪。结果LAMP法对金钱... 目的建立LAMP鉴别金钱白花蛇及其混淆品的方法。方法以金钱白花蛇Cyt b靶基因为基础,设计LAMP特异性引物,建立金钱白花蛇的LAMP快速鉴别方法,研究方法的特异性和灵敏度,并采用LAMP法和PCR法鉴别市售金钱白花蛇的真伪。结果LAMP法对金钱白花蛇对照药材和5份市售样本产生扩增,对9种混淆品样本未产生扩增,与PCR鉴别结果一致。方法灵敏度在DNA水平上达到0.003 ng/μl,与PCR灵敏度结果一致。结论LAMP法具有快速、简单等特点,可用于中药材金钱白花蛇真伪的快速鉴别。 展开更多
关键词 金钱白花蛇 环介导等温扩增技术 聚合酶链式反应 中药真伪鉴别 快速鉴定
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梅花鹿茸和马鹿茸可视化LAMP检测方法的建立与应用
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作者 张红 张珈晨 +3 位作者 徐佶婧 王洪阳 朱文赫 李亚巍 《食品研究与开发》 2025年第16期175-180,共6页
为建立一种高效、准确、灵敏的鹿茸检测方法,该研究分别针对梅花鹿茸和马鹿茸的线粒体基因序列设计3组不同的环介导等温扩增(loop‐mediated isothermal amplification,LAMP)引物,对其进行扩增并连接至载体pUC57,构建重组质粒,建立LAMP... 为建立一种高效、准确、灵敏的鹿茸检测方法,该研究分别针对梅花鹿茸和马鹿茸的线粒体基因序列设计3组不同的环介导等温扩增(loop‐mediated isothermal amplification,LAMP)引物,对其进行扩增并连接至载体pUC57,构建重组质粒,建立LAMP检测体系。通过对比不同引物的扩增效果,设置61~65℃温度梯度,优化检测梅花鹿茸和马鹿茸的条件。对比普通聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)与LAMP检测方法的敏感性和特异性,筛选最优检测条件用于市售鹿茸样品的检测。结果显示,试验成功建立了梅花鹿茸和马鹿茸的LAMP试验反应体系,确定61℃孵育40 min是直接观察测定结果的最佳反应条件。敏感性试验显示,梅花鹿茸LAMP检测方法的敏感性为2 copies/μL,马鹿茸LAMP检测方法的敏感性为10 copies/μL,均远高于普通PCR试验结果。特异性试验结果显示,LAMP体系能区分梅花鹿茸和马鹿茸,可用于市售商品的检测。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 马鹿 梅花鹿 可视化检测 鹿茸
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猪圆环病毒3型LAMP-PfAgo检测方法的建立
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作者 祁钊 余相宇 +1 位作者 陈魏圆 宋祥军 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第2期1-9,31,共10页
【目的】利用PfAgo蛋白结合环介导等温扩增技术(LAMP)建立一种新的PCV3检测方法LAMP-PfAgo法,用于PCV3的快速鉴别诊断。【方法】PCR扩增PCV3 Rep基因,构建重组阳性质粒pMD19-T-PCV3-Rep,对其进行PCR和测序鉴定。根据PCV3 Rep基因的保守... 【目的】利用PfAgo蛋白结合环介导等温扩增技术(LAMP)建立一种新的PCV3检测方法LAMP-PfAgo法,用于PCV3的快速鉴别诊断。【方法】PCR扩增PCV3 Rep基因,构建重组阳性质粒pMD19-T-PCV3-Rep,对其进行PCR和测序鉴定。根据PCV3 Rep基因的保守区域设计PCV3-T1~PCV3-T4等4组引物(每组包括1对内引物和1对外引物),以pMD19-T-PCV3-Rep为模板进行LAMP,筛选最佳引物组,并对LAMP反应的Mg ^(2+)浓度、内外引物浓度、反应温度、反应时间进行优化。根据PCV3 Rep基因的保守序列,设计PCV3-gs1~PCV3-gs5等5组gDNAs和一条特异性探针,进行LAMP-PfAgo反应,筛选最佳的gDNAs,并对LAMP-PfAgo反应体系中PfAgo蛋白浓度、gDNAs浓度、Mn 2+浓度和反应时间进行优化。对该LAMP-PfAgo方法的特异性、敏感性进行评价;并用该方法和实时荧光定量PCR方法对疑似感染PCV3的46份临床样品进行检测,比较结果的一致性。【结果】重组阳性质粒pMD19-T-PCV3-Rep PCR和测序均获得了891 bp的序列,表明重组阳性质粒构建成功。LAMP最佳引物为PCV3-T1,最佳Mg ^(2+)终浓度为6 mmol/L,最佳内外引物终浓度分别为1.6和1.2μmol/L,最适的反应温度65℃,最佳反应时间60 min。使用优化后的LAMP反应条件对PCV3 Rep基因保守序列进行扩增,并将其用于后续试验。LAMP-PfAgo反应最佳的gDNAs为PCV3-gs1;优化后的PfAgo蛋白终浓度为40 U/μL,gDNAs终浓度为1.50μmol/L,Mn 2+终浓度为1.50 mmol/L,反应时间为30 min。LAMP-PfAgo法的灵敏度为10拷贝/μL,且与猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒及猪伪狂犬病毒等常见猪源病原核酸无交叉反应。临床样本检测结果显示,LAMP-PfAgo法与实时荧光定量PCR方法检测结果的符合率为100%。【结论】基于PfAgo蛋白结合LAMP技术建立了对PCV3的核酸检测方法,该方法灵敏度高和特异性强,具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 PfAgo 环介导等温扩增 即时检验
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鸡星状病毒和禽肾炎病毒二重荧光RT-LAMP检测方法的建立
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作者 赵俊柯 余丹 +5 位作者 尹文巧 张艳芳 谢志勤 范晴 喻华英 谢芝勋 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第2期204-211,218,共9页
为建立一种能鉴别鸡星状病毒(chicken astrovirus, CAstV)和禽肾炎病毒(avian nephritis virus, ANV)的二重荧光RT-LAMP,该研究对比GenBank中下载的CAstV ORF1b基因和ANV ORF1b基因保守序列,分别设计了2套特异性引物和标记荧光基团的探... 为建立一种能鉴别鸡星状病毒(chicken astrovirus, CAstV)和禽肾炎病毒(avian nephritis virus, ANV)的二重荧光RT-LAMP,该研究对比GenBank中下载的CAstV ORF1b基因和ANV ORF1b基因保守序列,分别设计了2套特异性引物和标记荧光基团的探针。在CAstV探针3′端标记FAM荧光基团,5′端标记淬灭基团BHQ1;ANV探针3′端标记CY3荧光基团,5′端标记淬灭基团BHQ2,通过试验筛选出最适引物和探针浓度并进行反应条件的优化。用建立的二重荧光RT-LAMP进行特异性、敏感性、重复性和干扰性试验,并对采集自广西南宁不同地区的临床样品共300份进行检测,结果与RT-qPCR和RT-PCR比较,验证该方法的有效性。试验结果显示:建立的二重荧光RT-LAMP方法60 min即可反应结束,最适反应温度为65℃;设计的引物仅能检测CAstV和ANV,而对其他病源无交叉反应;CAstV最低检测限度为1.4×10^(2) copies/μL,ANV最低检测限度为1.5×10^(2) copies/μL,且干扰性试验和重复性试验良好;检测结果与RT-qPCR相比,CAstV和ANV检测结果符合率分别为97.97%和98.85%。综上所述,该研究建立的二重荧光RT-LAMP方法具有快速、准确、特异性好、灵敏性高、重复性好等特点,适用于临床诊断,为CAstV和ANV的流行病学调查提供技术支持。 展开更多
关键词 鸡星状病毒 禽肾炎病毒 可视化 RT-lamp 鉴别诊断
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