LZ-8基因在大肠杆菌中的表达 被引量：14

1

作者 叶波平 王凡 +2 位作者 梁亦馨 金国虔 吴梧桐 《药物生物技术》 CAS CSCD 2002年第1期21-23,共3页

根据Murasugi等人发表的LZ 8基因的DNA序列 ,设计了两条引物 ,从灵芝孢子粉的基因组DNA中扩增到LZ 8基因 (3 5 6bp)。利用此基因及pET 3d质粒 ,构建了该基因的原核表达载体质粒 ,进一步将其转化进大肠杆菌HB10 1菌株中获得了表达该基因... 根据Murasugi等人发表的LZ 8基因的DNA序列 ,设计了两条引物 ,从灵芝孢子粉的基因组DNA中扩增到LZ 8基因 (3 5 6bp)。利用此基因及pET 3d质粒 ,构建了该基因的原核表达载体质粒 ,进一步将其转化进大肠杆菌HB10 1菌株中获得了表达该基因的基因工程菌株 ,并对IPTG诱导后的LZ 8蛋白进行了初步的SDS 展开更多

关键词 灵芝孢子粉 lz-8基因 原核表达 大肠杆菌

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灵芝lz-8基因乳酸菌表达载体的构建与表达及免疫特性 被引量：4

2

作者 曲宁宁 陈萍 +2 位作者 孙鑫泽 张雪 刘琼 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期411-415,共5页

克隆灵芝lz-8基因并进行原核表达,通过动物试验检测其生理活性。根据GenBank公布的lz-8基因的DNA序列设计引物,从灵芝菌丝中提取灵芝总DNA,PCR扩增lz-8基因并连接到乳酸菌食品级表达载体pNZ8149,转化乳酸乳球菌NZ3900,于30℃Nisin诱导3 ... 克隆灵芝lz-8基因并进行原核表达,通过动物试验检测其生理活性。根据GenBank公布的lz-8基因的DNA序列设计引物,从灵芝菌丝中提取灵芝总DNA,PCR扩增lz-8基因并连接到乳酸菌食品级表达载体pNZ8149,转化乳酸乳球菌NZ3900,于30℃Nisin诱导3 h,SDS-PAGE进行蛋白表达分析。将工程菌菌悬液给小鼠灌胃,对其碳廓清试验等免疫指标进行检测。结果表明:扩增到的lz-8基因序列全长330 bp,构建了原核表达载体pNZ8149-lz-8,LZ-8蛋白在NZ3900中得到表达。NZ3900/pNZ8149-lz-8菌悬液对小鼠各项免疫指标有明显的调节作用。 展开更多

关键词 灵芝 lz-8基因 乳酸乳球菌 表达 免疫特性

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灵芝LZ-8在烟草中的表达及产物特性的初步研究 被引量：5

3

作者 白杰英 曾林 +3 位作者 刘毅 李彦舫 林忠平 胡鸢雷 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第5期645-649,共5页

将从灵芝中克隆的LZ-8基因构建成原核表达质粒pET-30a-lz8,在大肠杆菌BL21中表达。SDS-PAGE表明其分子量约为14kD,与推算出的氨基酸分子量相似。经金属镍离子螯合柱纯化后的原核表达产物为单一条带,纯化产物免疫兔子获得了高效价的抗血... 将从灵芝中克隆的LZ-8基因构建成原核表达质粒pET-30a-lz8,在大肠杆菌BL21中表达。SDS-PAGE表明其分子量约为14kD,与推算出的氨基酸分子量相似。经金属镍离子螯合柱纯化后的原核表达产物为单一条带,纯化产物免疫兔子获得了高效价的抗血清。将该基因亚克隆到植物双元表达载体中,用农杆菌介导的方法转化烟草。经ELISA实验定量测定,重组LZ-8达到了烟草可溶性蛋白的0.18%(每克新鲜叶片约含149.82μgLZ-8重组蛋白)。体外活性检测表明,重组蛋白能有效地提高VeroE6细胞中肿瘤坏死因子(TNF-α)基因的mRNA转录水平,具有免疫调节相关功能。 展开更多

关键词 灵芝 lz-8基因 免疫调节 转基因烟草

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LZ-8蛋白的原核密码子优化表达及免疫调节功能的初步检测 被引量：4

4

作者 黄俊 张灵霞 +1 位作者 胡松年 于军 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期7-12,共6页

为研究LZ-8蛋白的免疫调节活性,设计合成12个寡核苷酸片段,并用PCR方法将它们连接为经密码子优化的新LZ-8基因;将该新基因克隆至原核表达载体pET-28b,构建重组表达质粒pET-28b_lz8,并在大肠杆菌BL21中进行诱导表达.表达产物经Ni离子亲... 为研究LZ-8蛋白的免疫调节活性,设计合成12个寡核苷酸片段,并用PCR方法将它们连接为经密码子优化的新LZ-8基因;将该新基因克隆至原核表达载体pET-28b,构建重组表达质粒pET-28b_lz8,并在大肠杆菌BL21中进行诱导表达.表达产物经Ni离子亲和层析法纯化后,蛋白表达量达70mg·L-1.通过不同品系小鼠的皮肤移植模型检测表明:纯化的重组蛋白具有一定程度的免疫抑制功能,还需进一步实验验证. 展开更多

关键词 原核表达 密码子优化 真菌免疫调节蛋白 lz-8蛋白 免疫抑制活性

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真菌免疫调节蛋白基因LZ-8过表达载体的构建及转化灵芝原生质体的研究 被引量：7

5

作者 孙墨可 张曼 +3 位作者 田娟 李晓薇 李海燕 李玉 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1625-1631,共7页

灵芝Ganoderma lingzhi是我国著名的药用真菌。但是,作为一种营养和保健价值都非常高的大型担子菌,灵芝还缺乏完善的转基因方法和安全转基因体系。本研究建立了免疫调节蛋白基因的过表达系统,并利用真菌特异性启动子GPD、终止子NOS和目... 灵芝Ganoderma lingzhi是我国著名的药用真菌。但是,作为一种营养和保健价值都非常高的大型担子菌,灵芝还缺乏完善的转基因方法和安全转基因体系。本研究建立了免疫调节蛋白基因的过表达系统,并利用真菌特异性启动子GPD、终止子NOS和目的基因LZ-8构建真菌特异性双T-DNA表达载体p SB130NG-LZ8;利用溶壁酶提取灵芝原生质体,并用FDA染色法检测灵芝原生质体活性,原生质体成活率约为80%。通过PEG转化法对灵芝原生质体成功进行了转化,转化得到的原生质体在带有潮霉素抗性平板上长出,转化率为3–4/μgpSB130NG-LZ8+107个原生质体。转化子通过PCR检测和荧光定量PCR检测,获得LZ-8在灵芝中的过表达。 展开更多

关键词 灵芝 双T-DNA载体 目的基因lz-8 PEG转化法 荧光定量PCR

原文传递

灵芝免疫调节蛋白LZ-8基因的克隆与表达 被引量：3

6

作者 李世丽 胡亚平 +3 位作者 苏建臣 宋杰 郭雅玮 齐志广 《河北师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2009年第5期677-681,共5页

灵芝能够调节和增强机体免疫力,具有极高的药用价值;LZ-8蛋白是最早被分离研究的免疫调节蛋白,它不仅是灵芝生命活动的重要物质而且具有独特免疫原性.实验采用CTAB法提取灵芝基因组DNA,PCR扩增全长lz-8基因;利用XbaⅠ,XhoⅠ位点将lz-8... 灵芝能够调节和增强机体免疫力,具有极高的药用价值;LZ-8蛋白是最早被分离研究的免疫调节蛋白,它不仅是灵芝生命活动的重要物质而且具有独特免疫原性.实验采用CTAB法提取灵芝基因组DNA,PCR扩增全长lz-8基因;利用XbaⅠ,XhoⅠ位点将lz-8编码基因片段克隆到原核表达载体pET-28 a中,构建原核重组表达质粒pET-lz8,转化BL21（DE3）并进行SDS-PAGE及Western-blot分析.结果表明：克隆的lz-8基因与GenBank报道的序列同源性达到87.5%-100%;重组菌株经IPTG诱导后,lz-8基因得到了高效表达,目的蛋白表达量可达菌体总蛋白的36.52%. 展开更多

关键词 灵芝 lz-8 克隆与表达 WESTERN-BLOT

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氨基酸定点突变提高灵芝蛋白LZ-8热稳定性的研究 被引量：3

7

作者 孙熙麟 蒋振彦 +3 位作者 刘志屹 戴璐 孙非 黄伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期23-28,共6页

通过氨基酸定点突变技术提高灵芝免疫调节蛋白LZ-8的热稳定性。通过分子动力学模拟结合温度因子预测对LZ-8氨基酸突变位点进行理性设计,在毕赤酵母X33菌株内构建并表达LZ-8突变体蛋白,采用HeLa细胞生长抑制实验和差示量热扫描分析检测... 通过氨基酸定点突变技术提高灵芝免疫调节蛋白LZ-8的热稳定性。通过分子动力学模拟结合温度因子预测对LZ-8氨基酸突变位点进行理性设计,在毕赤酵母X33菌株内构建并表达LZ-8突变体蛋白,采用HeLa细胞生长抑制实验和差示量热扫描分析检测并比较了LZ-8突变前后生物学活性及热力学参数。结果显示,LZ-8 N-端α螺旋为理论预测的温度敏感区域,在该区域进行F8W和R9K氨基酸双位点突变,突变后的LZ-8热稳定性提高,相变温度Tm上升0.92℃,相转变焓值ΔH提高23.14 kJ/mol,但突变后LZ-8生物学活性基本不变,LZ-8和LZ-8突变体对HeLa细胞生长抑制的IC50值分别是2.238μg/mL和2.407μg/mL。通过理性设计氨基酸突变位点,获得了稳定性提高但生物学活性不变的灵芝免疫调节蛋白LZ-8的突变体。 展开更多

关键词 lz-8 热稳定性 分子动力学模拟 温度因子 定点突变

暂未订购

灵芝免疫调节蛋白LZ-8的制备和晶体分析 被引量：1

8

作者 安敏 高福 +2 位作者 齐建勋 李锋 刘杏忠 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1563-1568,共6页

LZ-8蛋白是从灵芝菌丝中分离到的真菌免疫调节蛋白,具有多种免疫调节功能,然而这一蛋白的作用机制尚不清楚。通过蛋白质晶体结构的解析,能够得到蛋白质空间结构特点,从而阐述蛋白质功能的机制。旨在得到LZ-8蛋白的晶体,并获得空间结构... LZ-8蛋白是从灵芝菌丝中分离到的真菌免疫调节蛋白,具有多种免疫调节功能,然而这一蛋白的作用机制尚不清楚。通过蛋白质晶体结构的解析,能够得到蛋白质空间结构特点,从而阐述蛋白质功能的机制。旨在得到LZ-8蛋白的晶体,并获得空间结构数据。以pET21a为表达载体,获得诱导表达的rLZ-8,通过亲和层析、分子筛凝胶层析和阴离子交换层析纯化,蛋白纯度在98%以上,采用悬滴气相扩散法得到蛋白晶体,并获得3.2?数据,为进一步对真菌免疫调节蛋白功能和结构的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 lz-8 真菌免疫调节蛋白 晶体衍射

原文传递

利用毕赤酵母系统高效表达灵芝中的免疫调节因子LZ-8蛋白 被引量：2

9

作者 宋细忠 肖建勇 +2 位作者 巩伯梁 习梅兰 李刚 《微生物学免疫学进展》 2011年第3期1-5,共5页

根据Murasugi等发表的LZ-8基因的DNA序列,利用PCR方法从灵芝菌丝体的基因组DNA中扩增到lz-8基因。将该基因构建到毕赤酵母表达载体上,电激转化毕赤酵母。对转化子先后进行PCR和PCR-Southern鉴定,表明lz-8基因已转入毕赤酵母。转化子经... 根据Murasugi等发表的LZ-8基因的DNA序列,利用PCR方法从灵芝菌丝体的基因组DNA中扩增到lz-8基因。将该基因构建到毕赤酵母表达载体上,电激转化毕赤酵母。对转化子先后进行PCR和PCR-Southern鉴定,表明lz-8基因已转入毕赤酵母。转化子经发酵培养后用SDS-PAGE电泳方法检测发酵液,证明毕赤酵母中成功地表达出LZ-8蛋白,而且表达量可高达350 mg/L。 展开更多

关键词 lz-8 免疫调节因子 毕赤酵母 高效表达

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LZ-8基因的克隆及其在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达

10

作者 金华南 《中山大学研究生学刊（自然科学与医学版）》 2002年第3期9-13,共5页

用 PCR 从灵芝(Gamoderma lucidum)基因组扩增免疫蛋白 LZ-8基因,将其构建到酵母表达质粒 pPICZaA 中,采用电激转化法转化毕赤酵母,获得转化子。对其 Sourthern 杂交分析,结果表明 LZ-8基因整合到毕赤酵母基因组。对转化酵母作发酵培养,... 用 PCR 从灵芝(Gamoderma lucidum)基因组扩增免疫蛋白 LZ-8基因,将其构建到酵母表达质粒 pPICZaA 中,采用电激转化法转化毕赤酵母,获得转化子。对其 Sourthern 杂交分析,结果表明 LZ-8基因整合到毕赤酵母基因组。对转化酵母作发酵培养,SDS—聚炳烯酰胺凝胶电泳检测到 LZ-8蛋白的表达。 展开更多

关键词 灵芝 lz-8基因 电激转化 毕赤酵母 基因表达 基因克隆 免疫抑制作用 工业化发酵生产

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灵芝免疫调节蛋白LZ-8及云芝免疫调节蛋白FIP-tvc对几种癌细胞系的抑制活性检测

11

作者 王雪妍 周伏忠 +3 位作者 向凌云 陈晓飞 宁萌 刁文涛 《河南科学》 2019年第6期914-918,共5页

在体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞、人胃腺癌BGC-823细胞、人结肠癌HCT116细胞、人肝癌Hep3B细胞、人宫颈癌Hela细胞中加入不同浓度的酵母异源表达的LZ-8或FIP-tvc,培养24h后显微镜下观察细胞形态变化,并用CCK8试剂盒检测细胞存活率... 在体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞、人胃腺癌BGC-823细胞、人结肠癌HCT116细胞、人肝癌Hep3B细胞、人宫颈癌Hela细胞中加入不同浓度的酵母异源表达的LZ-8或FIP-tvc,培养24h后显微镜下观察细胞形态变化,并用CCK8试剂盒检测细胞存活率,以用来检测灵芝免疫调节蛋白LZ-8及云芝免疫调节蛋白FIP-tvc对几种癌细胞生长抑制能力.结果显示,LZ-8和FIP-tvc在5~10μg/mL浓度时使A549、BGC-823、Hela和Hep 3B细胞贴壁性变差,且CCK8结果显示前3种细胞的存活率有不同程度的降低(80%~95%存活率),而在20μg/mL浓度时FIP-tvc对Hep 3B细胞的存活率开始有明显抑制效果(89%存活率),但对HCT116细胞的形态无影响,对其存活率也无抑制作用. 展开更多

关键词 灵芝免疫调节蛋白 云芝免疫调节蛋白 抑癌活性 癌细胞存活率

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优良糯玉米自交系lz-8的选育与应用

12

作者 莫武平 梁燕听 +1 位作者 张尉 孙海潮 《广西农学报》 2008年第2期28-29,34,共3页

lz-8-5-2-2是以贵州省一糯质农家种为材料,经连续多代自交分离选育而成,具有优质、高配合力等特点。以其为亲本育成了优良糯玉米新品种柳糯582、柳糯8号,并通过了品种审定,值得推广种植。

关键词 糯玉米 自交系 lz-8 选育

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灵芝-8基因的番茄果实特异性启动子植物表达载体的构建 被引量：1

13

作者 胡正萍 杨家森 +2 位作者 叶亮 刑莹莹 奚涛 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期23-26,共4页

构建含有灵芝-8(LZ-8)基因和番茄果实特异性E8启动子的重组载体,并将其转化到根瘤农杆菌中。通过PCR法获取LZ-8基因和E8启动子序列,将目的基因和E8启动子序列构建到植物表达载体pB I121中,获得果实特异性表达LZ-8蛋白的重组质粒。并采用... 构建含有灵芝-8(LZ-8)基因和番茄果实特异性E8启动子的重组载体,并将其转化到根瘤农杆菌中。通过PCR法获取LZ-8基因和E8启动子序列,将目的基因和E8启动子序列构建到植物表达载体pB I121中,获得果实特异性表达LZ-8蛋白的重组质粒。并采用PCR、限制性内切酶酶切和序列测定分析法,对重组质粒进行鉴定,将其转入根瘤农杆菌GV3101中。PCR法、限制性内切酶酶切图谱和序列测定分析均表明番茄果实特异性表达LZ-8蛋白的重组质粒构建成功。获得了含有LZ-8基因和E8启动子的重组质粒,并成功转化根瘤农杆菌,为下一步LZ-8蛋白在番茄果实中特异表达奠定基础。 展开更多

关键词 灵芝-8蛋白 果实特异性启动子 载体构建

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苏州相城区吴语单字调实验研究

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作者 史梁樱 唐七元 《湖州师范学院学报》 2015年第7期99-103,107,共6页

运用实验语音学方法研究相城区吴语单字调,根据声学实验数据和五度标调法确定该方言8个调类的调值,发现与市区吴语不同之处是阳上调和阳去调还未合并。用声调格局走势图印证该方言浊音清化后阴阳调类的高低分布特点。

关键词 相城区吴语 8个声调 音高归一化 对数Z score转换法

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