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基于转录组数据分析的六味地黄方活性组分LWD-b抗补体作用的发现与验证 被引量：1
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作者 林颖 韩露 +3 位作者 高圣乔 罗丹 肖智勇 周文霞 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期168-177,共10页
目的 基于转录组数据分析发现与验证六味地黄方活性组分的抗补体作用,并研究其可能的作用途径。方法 人恶性黑素瘤细胞A375用DMEM/F12高糖培养基培养,分为细胞对照、六味地黄苷糖LW-AFC、寡糖组分CA-30、多糖组分LWB-B和糖苷组分LWD-b组... 目的 基于转录组数据分析发现与验证六味地黄方活性组分的抗补体作用,并研究其可能的作用途径。方法 人恶性黑素瘤细胞A375用DMEM/F12高糖培养基培养,分为细胞对照、六味地黄苷糖LW-AFC、寡糖组分CA-30、多糖组分LWB-B和糖苷组分LWD-b组(终浓度均为100 mg·L^(-1)),培养6 h后用L1000技术采集细胞转录组数据,采用Cosine相似度算法和特征方向法对各组转录组数据进行相似性比对和差异表达分析,采用基因富集分析算法进行KEGG通路富集分析。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定补体通路基因C3和C5 m RNA表达。采用基于补体经典途径的溶血活性实验测定相对溶血率,观察LWAFC,CA-30,LWB-B和LWD-b(终浓度均为1,10和100 mg·L^(-1))及LWD-b中各主要成分莫诺苷、芍药苷、獐牙菜苷、马钱苷、马钱苷酸和丹皮酚原苷(终浓度均为1和100μmol·L^(-1))的抗补体活性。采用补体成分(C1q,C2,C3,C4,C5和C9)缺失血清法测定LWD-b的补体作用靶点。结果 转录组数据分析结果显示,LWD-b下调的基因显著富集于补体级联激活通路(P<0.01),而LW-AFC,CA-30和LWB-B此作用不明显。RT-qPCR结果表明,与细胞对照组相比,LWD-b 100 mg·L^(-1)组补体C3和C5 mRNA表达明显降低(P<0.01)。抗补体活性测定结果表明,与补体组相比,LWD-b各浓度组及LW-AFC 10和100 mg·L^(-1)组相对溶血率均明显降低(P<0.01),但仅LWD-b组相对溶血抑制率>20%,提示LWD-b具有抗补体活性,LW-AFC,CA-30和LWB-B此作用不明显。LWD-b中主要成分的抗补体活性筛选结果表明,与补体组相比,莫诺苷1和100μmol·L^(-1)组及芍药苷100μmol·L^(-1)组相对溶血率均明显降低(P<0.01),且相对溶血抑制率均>20%;獐牙菜苷、马钱苷、马钱苷酸和丹皮酚原苷组相对溶血率虽也明显降低(P<0.01),但其相对溶血抑制率均<20%;提示莫诺苷和芍药苷具有显著抗补体活性,而其余成分抗补体活性较弱。补体成分缺失血清法测定结果表明,分别与补体C1q,C2,C3,C5和C9缺失血清组相比,LWD-b 100 mg·L^(-1)处理后相对溶血率变化均<5%,提示LWD-b降低溶血能力与其作用于上述补体成分相关。结论 基于转录组数据分析发现并验证了六味地黄方活性组分LWD-b具有抗补体激活作用,莫诺苷和芍药苷可能是其发挥该作用的主要活性成分。LWD-b可能通过作用于补体成分C1q,C2,C3,C5和C9发挥作用。 展开更多
关键词 六味地黄方 活性组分 lwd-b 补体系统 溶血实验 转录组数据分析
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六味地黄苷糖及其糖苷通过调控脑内O-GlcNAc修饰改善小鼠记忆再巩固损伤
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作者 杨贺禧 王晨冉 +2 位作者 夏梦婷 王健辉 周文霞 《中国药理学与毒理学杂志》 北大核心 2025年第11期801-812,共12页
目的研究六味地黄苷糖(LW-AFC)及其活性组分糖苷(LWD-b)对记忆再巩固的影响,并分析其作用与O-连接β-N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)修饰的相关性。方法(1)将6月龄快速老化易感系8型小鼠(SAMP8)分为SAMP8组、SAMP8+LW-AFC组和SAMP8+LWD-b组,... 目的研究六味地黄苷糖(LW-AFC)及其活性组分糖苷(LWD-b)对记忆再巩固的影响,并分析其作用与O-连接β-N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)修饰的相关性。方法(1)将6月龄快速老化易感系8型小鼠(SAMP8)分为SAMP8组、SAMP8+LW-AFC组和SAMP8+LWD-b组,另设同龄快速老化抵抗系1型小鼠(SAMR1)作为对照组。SAMP8+LW-AFC组和SAMP8+LWD-b组连续60 d分别ig给予LW-AFC 1.6 g·kg^(-1)和LWD-b 0.216 g·kg^(-1),SAMR1组和SAMP8组ig给予等体积去离子水。(2)C57BL/6J小鼠分为对照组、外源性皮质酮(CORT)组、CORT+LW-AFC组和CORT+LW-AFC+6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸(DON)组。CORT组连续15 d sc给予CORT 25 mg·kg^(-1);CORT+LW-AFC组连续30 d ig给予LW-AFC,第15天起连续sc给予CORT 25 mg·kg^(-1);CORT+LW-AFC+DON组连续30 d ig给予LW-AFC,第15天起连续sc给予CORT 25 mg·kg^(-1)和ip给予DON 600μg·kg^(-1);对照组每天ig给予等体积去离子水。(3)将C57BL/6J小鼠分为对照组、CORT组、CORT+LWD-b组和CORT+LWD-b+DON组,给药时间和给药顺序同(2)一致。实验(1)(2)(3)均通过改进的新物体识别实验和条件恐惧实验评价小鼠记忆再巩固功能,采用ELISA和Western印迹法检测小鼠海马中O-GlcNAc水平,采用Pearson相关性分析记忆再巩固表现(新物体的偏好指数、僵直时间)与O-GlcNAc水平的相关性。结果(1)与SAMR1组相比,SAMP8组新物体的偏好指数显著降低,僵直时间显著延长,O-GlcNAc水平显著降低;与SAMP8组相比,SAMP8+LW-AFC组和SAMP8+LWD-b组新物体的偏好指数显著升高,僵直时间显著缩短,O-GlcNAc水平显著升高;且Pearson分析显示,新物体的偏好指数与O-GlcNAc水平呈正相关,僵直时间与O-GlcNAc呈负相关。(2)与对照组相比,CORT组新物体的偏好指数显著降低,僵直时间显著延长,O-GlcNAc水平显著降低;与CORT组相比,CORT+LW-AFC组新物体的偏好指数显著升高,僵直时间显著缩短,O-GlcNAc水平显著升高;与CORT+LW-AFC组相比,CORT+LW-AFC+DON组小鼠新物体的偏好指数降低,僵直时间延长,O-GlcNAc水平显著降低;Pearson分析显示,新物体的偏好指数与O-GlcNAc水平呈正相关,僵直时间与O-GlcNAc水平呈负相关。(3)与对照组相比,CORT组新物体的偏好指数显著降低,僵直时间显著延长,O-GlcNAc水平显著降低;与CORT组相比,CORT+LWD-b组新物体的偏好指数升高,僵直时间缩短,O-GlcNAc水平显著升高;与CORT+LWD-b组相比,CORT+LWD-b+DON组小鼠新物体的偏好指数降低,僵直时间延长,O-GlcNAc水平显著降低;Pearson分析显示,新物体的偏好指数与O-GlcNAc水平呈正相关,僵直时间与O-GlcNAc水平呈负相关。结论LW-AFC及LWD-b可显著改善老化及应激所致小鼠记忆再巩固损伤,其作用机制可能与上调O-GlcNAc水平相关。 展开更多
关键词 六味地黄苷糖 lwd-b 记忆再巩固 O-GlcNAc修饰 SAMP8 外源性皮质酮模型小鼠
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