目的鉴定人肺特异性X蛋白(lung specific X protein,LUNX)基因的增强子及其调控活性。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增生物信息学预测的3个增强子片段(E1:+3770～+3959bp;E2:+6454～+6555bp;E3:+14553～+14652bp),通过荧光素酶报告基...目的鉴定人肺特异性X蛋白(lung specific X protein,LUNX)基因的增强子及其调控活性。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增生物信息学预测的3个增强子片段(E1:+3770～+3959bp;E2:+6454～+6555bp;E3:+14553～+14652bp),通过荧光素酶报告基因表达体系检测转录活性。结果 PCR产物经测序证实后,分别定向连接至pGL3-Promoter载体中报告基因启动子上游的Kpn I和Xho I酶切位点和报告基因下游的BamHI和Sal I酶切位点上,经酶切鉴定后,构建了6种荧光素酶报告基因表达体系。以pSV-β-Galactosidase质粒为内对照,瞬时转染HEK293细胞,培养48h后检测细胞裂解液中荧光素酶活性。当3个DNA片段位于报告基因启动子上游时,均不具有增强转录的能力。将它们分别连接于报告基因下游时,E1和E3所调控的荧光素酶活性分别是对照pGL3-Promoter的2.83倍(P<0.05)和1.59倍(P<0.05)。结论 LUNX基因的+3770～+3959bp和+14553～+14652bp序列具有增强转录的能力,为LUNX表达调控机制的深入研究奠定了基础。展开更多
探讨LUNX m RNA作为肺癌微转移检测分子标志物的可行性。临床纳入20例确诊为可以进行手术治疗的中早期非小细胞肺癌(Non-small cell lung carcinoma,NSCLC)患者,分别于术前、术后即刻以及术后1 w采集患者的外周血液,使用逆转录聚合酶链...探讨LUNX m RNA作为肺癌微转移检测分子标志物的可行性。临床纳入20例确诊为可以进行手术治疗的中早期非小细胞肺癌(Non-small cell lung carcinoma,NSCLC)患者,分别于术前、术后即刻以及术后1 w采集患者的外周血液,使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺癌特异性基因LUNX的表达。此外,研究纳入10例肺部良性疾病患者,亦进行肺癌特异性基因LUNX表达的RT-PCR检测。20例中早期非小细胞肺癌患者中,有9例患者的外周血中检测到LUNX m RNA的表达;10例肺部良性疾病患者的外周血中,均未检测到LUNX m RNA的表达。采用RT-PCR法进行外周血LUNX m RNA表达的检测,是目前较为理想的诊断中早期非小细胞肺癌患者是否发生微转移的方法。手术治疗中早期非小细胞肺癌患者,能够减低患者术后远处转移的发生。手术操作可能促进肿瘤细胞向外周血的脱落。展开更多
目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)行肺癌根治术患者的外周血LUNX m RNA表达,及其对判断预后的价值。方法选择2013年3月至2014年3月于我科住院治疗的NSCLC患者共200例,用Trizol法提取其外周血总RNA,并进行逆转录及PCR扩增和荧光测定PCR反应,...目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)行肺癌根治术患者的外周血LUNX m RNA表达,及其对判断预后的价值。方法选择2013年3月至2014年3月于我科住院治疗的NSCLC患者共200例,用Trizol法提取其外周血总RNA,并进行逆转录及PCR扩增和荧光测定PCR反应,术后随访其复发及转移的情况。结果 142例外周血LUNX表达阳性者复发98例,复发率为69.0%;58例外周血LUNX表达阴性者复发8例,复发率为13.8%,明显低于外周血LUNX表达阳性者复发的比例,差异有统计学意义,P<0.05。结论 NSCLC患者外周血中LUNX阳性者,其复发率高、预后较差。展开更多
文摘目的鉴定人肺特异性X蛋白(lung specific X protein,LUNX)基因的增强子及其调控活性。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增生物信息学预测的3个增强子片段(E1:+3770～+3959bp;E2:+6454～+6555bp;E3:+14553～+14652bp),通过荧光素酶报告基因表达体系检测转录活性。结果 PCR产物经测序证实后,分别定向连接至pGL3-Promoter载体中报告基因启动子上游的Kpn I和Xho I酶切位点和报告基因下游的BamHI和Sal I酶切位点上,经酶切鉴定后,构建了6种荧光素酶报告基因表达体系。以pSV-β-Galactosidase质粒为内对照,瞬时转染HEK293细胞,培养48h后检测细胞裂解液中荧光素酶活性。当3个DNA片段位于报告基因启动子上游时,均不具有增强转录的能力。将它们分别连接于报告基因下游时,E1和E3所调控的荧光素酶活性分别是对照pGL3-Promoter的2.83倍(P<0.05)和1.59倍(P<0.05)。结论 LUNX基因的+3770～+3959bp和+14553～+14652bp序列具有增强转录的能力,为LUNX表达调控机制的深入研究奠定了基础。
文摘探讨LUNX m RNA作为肺癌微转移检测分子标志物的可行性。临床纳入20例确诊为可以进行手术治疗的中早期非小细胞肺癌(Non-small cell lung carcinoma,NSCLC)患者,分别于术前、术后即刻以及术后1 w采集患者的外周血液,使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺癌特异性基因LUNX的表达。此外,研究纳入10例肺部良性疾病患者,亦进行肺癌特异性基因LUNX表达的RT-PCR检测。20例中早期非小细胞肺癌患者中,有9例患者的外周血中检测到LUNX m RNA的表达;10例肺部良性疾病患者的外周血中,均未检测到LUNX m RNA的表达。采用RT-PCR法进行外周血LUNX m RNA表达的检测,是目前较为理想的诊断中早期非小细胞肺癌患者是否发生微转移的方法。手术治疗中早期非小细胞肺癌患者,能够减低患者术后远处转移的发生。手术操作可能促进肿瘤细胞向外周血的脱落。
文摘目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)行肺癌根治术患者的外周血LUNX m RNA表达,及其对判断预后的价值。方法选择2013年3月至2014年3月于我科住院治疗的NSCLC患者共200例,用Trizol法提取其外周血总RNA,并进行逆转录及PCR扩增和荧光测定PCR反应,术后随访其复发及转移的情况。结果 142例外周血LUNX表达阳性者复发98例,复发率为69.0%;58例外周血LUNX表达阴性者复发8例,复发率为13.8%,明显低于外周血LUNX表达阳性者复发的比例,差异有统计学意义,P<0.05。结论 NSCLC患者外周血中LUNX阳性者,其复发率高、预后较差。
