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C/EBPα对脂滴相关蛋白LSDP5转录活性的调控
1
作者 张立杰 周磊 +4 位作者 甘莉 牛丛丛 雷朋 余安 杨在清 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第S1期157-158,共2页
脂滴是细胞内储藏中性脂质的场所,动物中被称为脂肪滴或脂滴,植物中被叫做油体,酵母中被叫做脂肪微体。成熟的脂滴由中性的疏水核和包裹在外的亲水磷脂单层膜组成,磷脂膜上募集了多种蛋白质被称为脂滴相关蛋白,这些蛋白质与脂滴的生成... 脂滴是细胞内储藏中性脂质的场所,动物中被称为脂肪滴或脂滴,植物中被叫做油体,酵母中被叫做脂肪微体。成熟的脂滴由中性的疏水核和包裹在外的亲水磷脂单层膜组成,磷脂膜上募集了多种蛋白质被称为脂滴相关蛋白,这些蛋白质与脂滴的生成、转运和降解有关。作为脂滴表面的重要物质,脂滴相关蛋白有着重要的功能与意义。脂滴相关蛋白有多种。 展开更多
关键词 脂滴 C/EBP lsdp5 磷脂单层膜 磷脂膜 微体 转录活性 脂肪滴 启动子活性 启动子调控
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脂肪储存小滴蛋白5基因真核表达载体的构建及亚细胞定位 被引量：2
2
作者 刘芳 张利军 +5 位作者 叶菁 张丽英 李烦繁 李航 谷雨 李青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期438-439,443,共3页
目的:构建pCMV5-HA与脂肪储存小滴蛋白5(LS-DP5)的融合基因真核表达载体,观察其在非洲绿猴肾成纤维细胞COS7中的表达,通过免疫荧光技术确定LSDP5的亚细胞定位。方法:采用NdeI和BamHI酶切pCMV5-HA质粒,用BglII和NdeI酶切pMD18-LSDP5质粒... 目的:构建pCMV5-HA与脂肪储存小滴蛋白5(LS-DP5)的融合基因真核表达载体,观察其在非洲绿猴肾成纤维细胞COS7中的表达,通过免疫荧光技术确定LSDP5的亚细胞定位。方法:采用NdeI和BamHI酶切pCMV5-HA质粒,用BglII和NdeI酶切pMD18-LSDP5质粒,克隆到pCMV5-HA载体,测序鉴定后,通过脂质体法转染COS7细胞,通过免疫荧光技术观察其在COS7细胞中的表达,并利用荧光染料Bodipy493/503定位脂滴,探讨LSDP5与脂滴之间的关系。结果:酶切及DNA测序证实重组质粒pCMV5-HA-LSDP5构建成功。荧光显微镜观察显示,pCMV5-HA-LSDP5融合蛋白定位于细胞质内,并定位于脂滴表面。结论:成功构建了重组质粒pCMV5-HA-LSDP5;融合蛋白分布于细胞质并与脂滴存在共定位关系。 展开更多
关键词 脂肪储存小滴蛋白5 融合蛋白 pCMV5-HA COS7细胞 亚细胞定位
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脂肪储存小滴蛋白5重组腺病毒的制备
3
作者 薛玲 李航 +4 位作者 张静 王净 吴雅岚 姬秋和 叶菁 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第6期1083-1086,共4页
目的:利用AdEasy腺病毒表达系统构建含有小鼠脂肪储存小滴蛋白5(LSDP5)基因的重组腺病毒。方法:从小鼠肝脏cDNA克隆出LSDP5基因全长,克隆至pMD18-T载体中,酶切测序。回收酶切产物,连接到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV,构建pShuttle-CMV-LS... 目的:利用AdEasy腺病毒表达系统构建含有小鼠脂肪储存小滴蛋白5(LSDP5)基因的重组腺病毒。方法:从小鼠肝脏cDNA克隆出LSDP5基因全长,克隆至pMD18-T载体中,酶切测序。回收酶切产物,连接到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV,构建pShuttle-CMV-LSDP5重组质粒,经PmeI酶切线性化后转化至含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中。筛选阳性克隆,提取重组质粒,PacI酶切线性化并转染AD293细胞进行包装,提取病毒DNA,鉴定重组病毒并检测病毒滴度。结果:LSDP5基因克隆经测序证实与Genebank公布一致,双酶切重组pMD18-T载体得到1400 bp左右的片段。重组穿梭载体经Kpn I和Sal I双酶切后得到预期片段。PacI酶切得到30 Kb大片段和4.5 Kb小片段。转染AD293细胞后收集病毒,经PCR鉴定,获得理想的目的片段。取病毒上清反复感染AD293细胞以扩增病毒,最后所得病毒滴度为2.5×109pfu/ml。结论:成功构建了携带脂肪储存小滴蛋白5基因的重组腺病毒载体,为进一步研究LSDP5基因功能奠定基础。 展开更多
关键词 AdEasy腺病毒 lsdp5 小鼠
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