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线性质粒pBSSB1 LP002基因缺陷对伤寒沙门菌致病性的影响
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作者 张绮思 邓予晖 +3 位作者 张珂 王倩 董阳阳 李涛 《中华实用诊断与治疗杂志》 2024年第8期779-785,共7页
目的构建伤寒沙门菌线性质粒pBSSB1 LP002基因缺陷株(ΔLP002),探讨LP002基因在伤寒沙门菌致病中的作用。方法采用自杀质粒介导的同源重组法制备伤寒沙门菌ΔLP002。2种菌株分别培养12 h,每隔1 h应用分光光度计检测波长600 nm处吸光度(O... 目的构建伤寒沙门菌线性质粒pBSSB1 LP002基因缺陷株(ΔLP002),探讨LP002基因在伤寒沙门菌致病中的作用。方法采用自杀质粒介导的同源重组法制备伤寒沙门菌ΔLP002。2种菌株分别培养12 h,每隔1 h应用分光光度计检测波长600 nm处吸光度(OD_(600))值并绘制生长曲线,采用实时荧光定量PCR法检测野生株培养至OD_(600)=0.2、0.4、0.6、0.8、1.2、1.8时LP002 mRNA相对表达量,并选择合适生长期的ΔLP002和伤寒沙门菌野生株进行表型实验:采用细菌动力实验检测动力圈直径,采用生物膜形成实验检测生物膜形成量;氨苄西林、庆大霉素处理后检测活菌菌落数并绘制生存曲线,观察有无滞留菌形成,计算抗生素处理5 h时滞留率、抑菌圈直径;检测对HeLa细胞的侵袭能力及在巨噬细胞内存活能力,计算侵袭指数、增殖指数。结果经PCR筛选验证,野生株基因组扩增产物长度为1450 bp,ΔLP002基因组扩增产物长度为888 bp,敲除长度为562 bp,表明ΔLP002制备成功。培养1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12 h时,ΔLP002 OD_(600)值与野生株比较差异均无统计学意义(t=1.385、1.576、1.895、0.351、0.833、0.195、0.213、0.926、0.024、0.011、0.116、0.063,P均>0.05)。ΔLP002动力圈直径[(35.67±1.15)mm]、生物膜形成量(0.29±0.04)与野生株[(35.00±1.00)mm、0.36±0.04]比较差异均无统计学意义(t=0.756,P=0.492;t=2.196,P=0.093)。生存曲线显示,ΔLP002、野生株均存在滞留现象;ΔLP002经氨苄西林、庆大霉素处理5 h时滞留率[(0.300±0.200)%、(0.022±0.022)%]与野生株[(0.513±0.252)%、(0.063±0.044)%]比较差异均无统计学意义(t=1.143,P=0.317;t=1.464,P=0.217)。经氨苄西林、庆大霉素处理前、后ΔLP002与野生株抑菌圈直径比较差异均无统计学意义(P>0.05);ΔLP002、野生株经氨苄西林、庆大霉素处理后抑菌圈直径与处理前比较差异均无统计学意义(P>0.05)。ΔLP002侵袭指数[(28.65±4.73)%]、增殖指数(1.10±0.17)均低于野生株[(41.35±3.59)%、2.63±0.18](t=5.230,P<0.001;t=15.550,P<0.001)。结论LP002基因缺陷可抑制伤寒沙门菌对HeLa细胞的侵袭能力及在巨噬细胞内存活能力,但不影响细菌生长速度、动力、生物膜形成能力、滞留菌形成能力及对氨苄西林和庆大霉素的敏感性。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 线性质粒 pBSSB1 lp002 侵袭 巨噬细胞
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