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重组多肽酶联免疫吸附法检测抗LKM-1抗体的初步应用
1
作者 王文凯 李永哲 段秀杰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1021-1024,1027,共5页
目的:制备人自身抗原细胞色素P4502D6(CYP2D6)257-351位氨基酸片段融合蛋白作为自身抗原,探讨ELISA检测抗LKM-1抗体的敏感性和特异性。方法:以肝脏的cDNA混合文库为模板作PCR,将PCR产物与真核表达载体pEGH共同转化酿酒酵母Y258,碱裂解... 目的:制备人自身抗原细胞色素P4502D6(CYP2D6)257-351位氨基酸片段融合蛋白作为自身抗原,探讨ELISA检测抗LKM-1抗体的敏感性和特异性。方法:以肝脏的cDNA混合文库为模板作PCR,将PCR产物与真核表达载体pEGH共同转化酿酒酵母Y258,碱裂解法进行质粒制备,PCR扩增鉴定。表达载体构建成功后,在半乳糖的诱导下表达产生重组融合蛋白,经GST亲和层析法进行纯化后,免疫印迹法鉴定抗原性,ELISA检测抗LKM-1抗体阳性血清及部分其他结缔组织病患者血清中的抗LKM-1抗体。结果:重组融合蛋白在宿主菌中获得表达,免疫印迹法鉴定表明其能与标准抗LKM-1抗体阳性血清反应,而与正常血清、其他抗血清无反应。在26份抗LKM-1抗体阳性血清中,6份抗HCV抗体阳性血清用重组多肽ELISA检测有5份呈阳性,其余20份血清用重组多肽ELISA检测均呈阳性;20份其他结缔组织病患者血清用重组多肽ELISA检测均为阴性。结论:重组的257-351位氨基酸片段是CYP2D6抗原的主要抗原表位区域,以重组多肽为基质ELISA检测抗LKM-1抗体的敏感性较高,为进一步研究抗体水平与临床病情变化的相关性奠定了基础。 展开更多
关键词 重组 表位 抗lkm-1抗体 酶联免疫吸附测定
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肝肾微粒体1型抗原的制备及纯化
2
作者 叶国强 刘香萍 +1 位作者 曾东良 谢春英 《放射免疫学杂志》 CAS 2013年第2期211-212,共2页
在1973年,Rizzetto用间接免疫荧光法发现了与近端肾小管和肝细胞胞浆反应的自身抗体[1].这些针对细胞内质网反应的自身抗体被命名为肝肾微粒体抗体（LKM）,随后鉴定出LKM抗体有3种亚型, LKM-1、LKM-2和LKM-3.LKM-1是Ⅱ型自身免疫性肝炎... 在1973年,Rizzetto用间接免疫荧光法发现了与近端肾小管和肝细胞胞浆反应的自身抗体[1].这些针对细胞内质网反应的自身抗体被命名为肝肾微粒体抗体（LKM）,随后鉴定出LKM抗体有3种亚型, LKM-1、LKM-2和LKM-3.LKM-1是Ⅱ型自身免疫性肝炎（AIH）的血清学标志[2]. 展开更多
关键词 肝肾微粒体 1型抗原 间接免疫荧光法 自身免疫性肝炎 lkm-1 纯化 制备 自身抗体
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自身免疫性肝病患者血清自身抗体检测意义 被引量：2
3
作者 张利方 阎有功 +1 位作者 郑山根 钟情 《检验医学》 CAS 北大核心 2005年第3期253-255,共3页
目的　探讨抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原(SLA/LP)抗体在自身免疫性肝病中的意义。方法　用间接免疫荧光法、免疫印迹法检测抗SLA/LP抗体,并与抗平滑肌抗体(SMA)、抗线粒体抗体(AMA M2)及抗肝肾微粒体(LKM 1)抗体之间的阳性率进行比较。结... 目的　探讨抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原(SLA/LP)抗体在自身免疫性肝病中的意义。方法　用间接免疫荧光法、免疫印迹法检测抗SLA/LP抗体,并与抗平滑肌抗体(SMA)、抗线粒体抗体(AMA M2)及抗肝肾微粒体(LKM 1)抗体之间的阳性率进行比较。结果　自身免疫性肝炎(AIH)组、原发性胆汁性肝硬化(PBC)组、原发性硬化性胆管炎(PSC)组抗SLA/LP抗体阳性率分别为41. 7%、5. 9%和0. 0%,与SMA、AMA M2及LKM 1抗体之间的阳性率差异有显著性(P<0. 01)。结论　抗SLA/LP抗体在AIH相关抗体中具有较高的诊断价值,可视为AIH新的血清学指标。 展开更多
关键词 检测意义 自身抗体 肝病患者 原发性胆汁性肝硬化 原发性硬化性胆管炎 自身免疫性肝病 间接免疫荧光法 自身免疫性肝炎 可溶性肝抗原 抗平滑肌抗体 抗线粒体抗体 AMA-M2 免疫印迹法 肝肾微粒体 抗体阳性率 lkm-1 血清学指标
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乙型肝炎后肝硬化自身抗体检测及其对肝功能影响的研究 被引量：18
4
作者 王波 丁楠 常波 《中国实验诊断学》 2013年第11期2022-2025,共4页
目的探讨乙型肝炎后肝硬化患者血清中自身抗体存在的情况及其对肝功能的影响。方法利用间接免疫荧光法及免疫印迹法分别检测89例乙型肝炎后肝硬化(HBC)患者及64例慢性肝炎患者(CHB)血清中自身抗体阳性率,将两组阳性率进行统计比较。将89... 目的探讨乙型肝炎后肝硬化患者血清中自身抗体存在的情况及其对肝功能的影响。方法利用间接免疫荧光法及免疫印迹法分别检测89例乙型肝炎后肝硬化(HBC)患者及64例慢性肝炎患者(CHB)血清中自身抗体阳性率,将两组阳性率进行统计比较。将89例HBC患者按照自身抗体存在情况分成自身抗体阳性组和自身抗体阴性组,利用全自动生化分析仪分别检测两组患者的肝功指标,并与90例正常对照者(正常对照组)进行比较。结果乙型肝炎后肝硬化组自身抗体检出情况与慢性乙型肝炎组相比,AMA、AMA-M2升高最为明显(P<0.01),ANA检出率也显著增高(P<0.05),其他指标差异无统计学意义(P>0.05)。肝功能指标中,自身抗体阳性组与阴性组比较,ALP升高最为明显(P<0.01),AST、TBA值显著升高(P<0.05),其他指标差异无统计学意义(P>0.05)。自身抗体阳性组与正常对照组比较,ALT、AST、TBil、DBil、GGT、ALP、TBA值均显著升高(P<0.01)。自身抗体阴性组与正常对照组比较,ALT、AST、TBil、GGT、TBA及DBil显著升高(P<0.01或P<0.05),ALP值差异无统计学意义(P>0.05)。结论乙型肝炎后肝硬化患者合并自身免疫性肝病对肝脏损害更大,在肝病患者中检测自身抗体将有助于判断肝病患者病情的严重程度和预后。 展开更多
关键词 乙型肝炎后肝硬化 抗核抗体 抗线粒体抗体 抗线粒体抗体M2亚型 抗肝肾微粒体抗体1型抗体 抗肝 细胞溶质抗原1型抗体 抗可溶性抗原 肝胰抗原
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病毒性肝炎患者抗肝抗原自身抗体的检测与分析 被引量：4
5
作者 叶国强 刘香萍 +1 位作者 曾东良 黄呈辉 《检验医学与临床》 CAS 2012年第21期2659-2661,共3页
目的分析病毒性肝炎患者中几种抗肝抗原自身抗体的存在状况和临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验和免疫印迹法检测941例病毒性肝炎患者和32例自身免疫性肝病患者血清中肝肾微粒抗体Ⅰ型(LKM-1)、肝细胞胞溶质抗原Ⅰ型(LC-1)、可溶性肝... 目的分析病毒性肝炎患者中几种抗肝抗原自身抗体的存在状况和临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验和免疫印迹法检测941例病毒性肝炎患者和32例自身免疫性肝病患者血清中肝肾微粒抗体Ⅰ型(LKM-1)、肝细胞胞溶质抗原Ⅰ型(LC-1)、可溶性肝抗原(SLA)等自身抗体。结果 941例病毒性肝炎患者中,抗肝抗原自身抗体检测阳性率分别为LKM-1 0.9%(9/941)、LC-1 0.2%(2/941)、SLA 0.0%(0/941),其中153例丙型肝炎患者中,抗肝抗原自身抗体检测阳性率分别为LKM-1 4.5%(7/153)、LC-1 1.3%(2/153)、SLA 0%(0/153);552例乙型肝炎患者中,仅检测出2例(0.4%)LKM-1阳性,在甲型肝炎、戊型肝炎和丁型肝炎中未检测出抗肝抗原自身抗体。在32例自身免疫性肝病患者中,抗肝抗原抗体LKM-1、LC-1和SLA的检出率分别为9.4%、3.1%和9.4%,其中在11例自身免疫性肝炎中,LKM-1、LC-1和SLA阳性率分别为27.3%、9.1%和18.2%。病毒性肝炎患者抗肝抗原自身抗体检出率低,与自身免疫性肝病患者比较,LKM-1和SLA差异有统计学意义(P<0.01)。结论少数丙型病毒性肝炎患者血清中存在多种抗肝抗原自身抗体,对病毒性肝炎患者进行包括抗肝抗原在内的自身抗体检测有助于病毒性肝炎合并自身免疫性肝病的诊断。 展开更多
关键词 病毒性肝炎 自身免疫性肝炎 自身抗体 肝肾微粒体抗体Ⅰ型
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人肝肾微粒体1抗原的提取及其抗体的检测 被引量：3
6
作者 王达 仲人前 +1 位作者 于嘉屏 孔宪涛 《中华医学检验杂志》 CSCD 1999年第4期222-224,共3页
目的　进一步了解自身免疫性肝炎的致病机理。方法　测定肝功能异常患者的肝肾微粒体（ Ｌ Ｋ Ｍ）１ 的自身抗体阳性情况。在重组质粒表达的基础上，用亲和柱层析进一步纯化，采用免疫印迹法检测抗 Ｌ Ｋ Ｍ１ 抗体。结果　在６０... 目的　进一步了解自身免疫性肝炎的致病机理。方法　测定肝功能异常患者的肝肾微粒体（ Ｌ Ｋ Ｍ）１ 的自身抗体阳性情况。在重组质粒表达的基础上，用亲和柱层析进一步纯化，采用免疫印迹法检测抗 Ｌ Ｋ Ｍ１ 抗体。结果　在６０５ 例丙氨酸氨基转移酶（ Ａ Ｌ Ｔ） 升高的成人患者组内，检出 Ｌ Ｋ Ｍ１ 自身抗体阳性２４ 例，阳性率为３９７ ％ ，５０ 例 Ａ Ｌ Ｔ升高的小儿患者中检出阳性６ 例，占１２ ％ 。两组比较，差异有非常显著意义（ Ｐ＜ ００１） 。而５０ 名正常人及４０ 例丙型肝炎病毒（ Ｈ Ｃ Ｖ） Ｒ Ｎ Ａ 阳性的丙型肝炎患者中，无一发现 Ｌ Ｋ Ｍ１ 自身抗体阳性。结论　 Ｌ Ｋ Ｍ１ 自身抗体可作为自身免疫性肝炎（ Ａ Ｉ Ｈ）的一项重要检测指标。 展开更多
关键词 微粒体 自身抗体 免疫印迹法 肝炎 lkm-1
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