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浑球红细菌Rhodobacter sphaeroides LHS-305腈水解酶基因的克隆及表达 被引量：2
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作者 王学东 李桂南 李明阳 《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 2012年第6期24-28,共5页
以筛选的产腈水解酶浑球红细菌Rhodobacter sphaeroides LHS-305为出发菌株,根据已知腈水解酶基因保守区域设计简并引物,从总DNA中成功扩增得到腈水解酶基因的部分片段(402 bp)。通过染色体步移扩增片段的上下游序列,经拼接,得到的腈水... 以筛选的产腈水解酶浑球红细菌Rhodobacter sphaeroides LHS-305为出发菌株,根据已知腈水解酶基因保守区域设计简并引物,从总DNA中成功扩增得到腈水解酶基因的部分片段(402 bp)。通过染色体步移扩增片段的上下游序列,经拼接,得到的腈水解酶基因全长为969 bp(在Genebank数据库中的登录号为JN635494)。该基因与已知腈水解酶序列的最高相似性为82%。构建pET28a-nit表达载体,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),得到重组菌。SDS-PAGE电泳结果表明该基因在大肠杆菌中成功表达。重组酶对底物3-氰基吡啶催化结果显示了较高的酶活力,具有跟原始菌相同的特性。 展开更多
关键词 RHODOBACTER SPHAEROIDES lhs-305 腈水解酶 染色体步移
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