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日本血吸虫重组蛋白Sj22.6、LHD-Sj23、2LHD-Sj23的表达和抗原性比较
1
作者 付媛 石团员 +7 位作者 蒲克俊 舒琦艳 卢福庄 帅江冰 张雪娟 莫虹斐 杨富文 何永强 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第2期72-76,共5页
日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)膜相关蛋白Sj22.6和Sj23大亲水区多肽(LHD-Sj23)都具有良好的抗原性,可用于日本血吸虫病的免疫学诊断。本研究通过RT-PCR技术扩增了Sj22.6和LHD-Sj23基因片段,重叠延伸PCR方法融合了2个LHD-Sj23的... 日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)膜相关蛋白Sj22.6和Sj23大亲水区多肽(LHD-Sj23)都具有良好的抗原性,可用于日本血吸虫病的免疫学诊断。本研究通过RT-PCR技术扩增了Sj22.6和LHD-Sj23基因片段,重叠延伸PCR方法融合了2个LHD-Sj23的片段,构建了pET28-Sj22.6、pET28-LHD-Sj23以及pET28-2LHD-Sj23原核表达质粒,在大肠杆菌(Transetta DE3)中表达,获得了rSj22.6、rLHD-Sj23和r2LHD-Sj23三种重组蛋白。用Dot-ELISA方法检测牛日本血吸虫阴阳性血清各10份,比较其敏感性和特异性,结果表明rLHD-Sj23具有较好的效果,为进一步研究利用重组蛋白进行血吸虫血清学诊断奠定基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 Sj22.6 lhd-sj23 2lhd-sj23 斑点酶联免疫吸附试验
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日本血吸虫Sj22.6-LHD-Sj23融合基因的克隆及原核表达 被引量：2
2
作者 付媛 卢福庄 +4 位作者 石团员 顾昀 俞国乔 陆国林 张雪娟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期904-907,共4页
为获得具有良好抗原性的日本血吸虫重组蛋白,本研究设计了两对特异性引物,以日本血吸虫mRNA为模板,RT-PCR方法分别克隆基因片段Sj22.6ku和LHD-Sj23,以重叠延伸PCR方法将两个片段连接,构建原核重组表达质粒pET28-Sj22.6-LHD-Sj23;该重组... 为获得具有良好抗原性的日本血吸虫重组蛋白,本研究设计了两对特异性引物,以日本血吸虫mRNA为模板,RT-PCR方法分别克隆基因片段Sj22.6ku和LHD-Sj23,以重叠延伸PCR方法将两个片段连接,构建原核重组表达质粒pET28-Sj22.6-LHD-Sj23;该重组质粒在大肠杆菌Rosetta DE3中表达后所获得的融合蛋白Sj22.6-LHD-Sj23分子量约为35 ku。Western blot鉴定结果表明该重组蛋白有良好的免疫原性,为进一步研制日本血吸虫病分子诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 Sj22.6ku蛋白 lhd-sj23蛋白 融合蛋白 重叠延伸PCR
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日本血吸虫重组蛋白LHD-Sj23-GST诱导的细胞免疫应答和免疫保护效果 被引量：2
3
作者 朱珠 傅志强 +5 位作者 洪炀 韩艳辉 张旻 李东 石耀军 林矫矫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期36-41,共6页
为探讨日本血吸虫重组蛋白LHD-Sj23-GST与3种不同类型佐剂(弗氏佐剂、ISA 206佐剂、ISA70M佐剂)配伍后免疫小鼠诱导的细胞免疫应答及免疫保护效果,应用流式细胞术检测并比较该重组蛋白配伍3种佐剂3次免疫后小鼠脾细胞中的CD4+、CD8+T细... 为探讨日本血吸虫重组蛋白LHD-Sj23-GST与3种不同类型佐剂(弗氏佐剂、ISA 206佐剂、ISA70M佐剂)配伍后免疫小鼠诱导的细胞免疫应答及免疫保护效果,应用流式细胞术检测并比较该重组蛋白配伍3种佐剂3次免疫后小鼠脾细胞中的CD4+、CD8+T细胞及细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10水平;3次免疫后小鼠人工攻击感染日本血吸虫尾蚴,6周后经肝门静脉灌注冲虫,计数各组平均虫体数并计算减虫率。与PBS对照组相比,LHD-Sj23-GST/FA和LHD-Sj23-GST/70M免疫组的CD4+T细胞显著升高(P<0.05),LHD-Sj23-GST/206免疫组未呈现明显变化;3种不同佐剂配伍LHD-Sj23-GST免疫组CD8+T细胞水平均显著降低(P<0.05);与PBS对照组相比,免疫组的IFN-γ及IL-10水平升高,而IL-4水平降低。LHD-Sj23-GST/FA、LHD-Sj23-GST/206和LHD-Sj23-GST/70M免疫组与PBS对照组相比,分别获得65.52%、51.72%和51.72%的减虫率;而相较于各自的佐剂对照组,则分别获得58.76%,26.31%,54.28%的减虫率。结果表明,用重组蛋白LHD-Sj23-GST配伍3种不同类型佐剂免疫小鼠,均刺激产生了偏向Th1型的细胞免疫应答,且都对小鼠诱导了较高的免疫保护作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组蛋白lhd-sj23-GST 佐剂 细胞免疫应答 免疫保护效果
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检测牛血吸虫病的重组LHD-Sj23蛋白乳胶凝集试验的建立 被引量：2
4
作者 赵清兰 李友 +1 位作者 聂浩 赵俊龙 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第9期2061-2065,共5页
利用原核表达的日本血吸虫重组LHD-Sj23蛋白作为抗原致敏乳胶,建立诊断牛血吸虫病的乳胶凝集试验(LAT)。用制备的乳胶抗原分别检测牛结核杆菌、牛泰勒虫、牛巴贝斯虫、牛口蹄疫、牛边虫、牛传染性支气管炎阳性血清,结果均为阴性,说明建... 利用原核表达的日本血吸虫重组LHD-Sj23蛋白作为抗原致敏乳胶,建立诊断牛血吸虫病的乳胶凝集试验(LAT)。用制备的乳胶抗原分别检测牛结核杆菌、牛泰勒虫、牛巴贝斯虫、牛口蹄疫、牛边虫、牛传染性支气管炎阳性血清,结果均为阴性,说明建立的乳胶凝集方法具有良好的特异性。用所建立的LAT方法与ELISA方法同时检测169份牛血清,结果表明,建立的LAT方法的特异性为94.29%,敏感性为93.10%,两种方法的符合率为94.08%(P>0.05),差异不显著。用同一批乳胶抗原检测7份牛血清,5次检测结果一致,说明致敏的乳胶抗原是稳定的。保存期试验结果表明,致敏乳胶在25℃可保存1个月,在4℃可保存3个月。这表明建立的LAT方法稳定、特异性强、灵敏度高、操作简便快速,无需昂贵仪器,适宜在临床上推广应用。 展开更多
关键词 牛血吸虫病 重组lhd-sj23蛋白 乳胶凝集试验 诊断
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