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临床型奶牛乳房炎乳腺组织中LDHA和PFKP的表达定位及功能分析
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作者 霍王博 张博皓 +4 位作者 蔺婷 魏倩倩 赵兴绪 张勇 张全伟 《甘肃农业大学学报》 北大核心 2025年第1期10-18,共9页
【目的】探究临床型奶牛乳房炎乳腺组织中乳酸脱氢酶A(Lactate dehydrogenase A,LDHA)和血小板型磷酸果糖激酶(Platelet phosphofructose kinase,PFKP)的分布、表达规律及其潜在功能。【方法】采集泌乳期健康(Control,C,n=3)和患临床型... 【目的】探究临床型奶牛乳房炎乳腺组织中乳酸脱氢酶A(Lactate dehydrogenase A,LDHA)和血小板型磷酸果糖激酶(Platelet phosphofructose kinase,PFKP)的分布、表达规律及其潜在功能。【方法】采集泌乳期健康(Control,C,n=3)和患临床型乳房炎(clinical mastitis,CM,n=3)荷斯坦奶牛乳腺组织,通过苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,H&E)染色观察奶牛乳腺组织病理变化;免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)染色、免疫荧光(Immunofluorescence,IF)染色和实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析奶牛乳腺组织中LDHA和PFKP的分布和表达规律;基于非依赖型模式(data-independent acquisition,DIA)蛋白质组学数据,通过生物信息学分析LDHA和PFKP潜在功能。【结果】H&E染色结果表明,C组乳腺结构完整,腺泡充盈,CM组乳腺结构模糊,腺泡塌陷,且有炎性细胞浸润;IHC和IF结果显示LDHA和PFKP蛋白主要定位于乳腺上皮细胞的胞质;qRT-PCR结果显示,与C组相比,CM组乳腺中LDHA和PFKP基因表达水平显著上调(P<0.01);生信预测分析发现LDHA和PFKP可能通过酸代谢、糖代谢等生物学途径参与奶牛临床型乳房炎的发生。【结论】LDHA与PFKP参与奶牛乳房炎的发病过程,其高表达可加剧乳房炎症反应,这为深入研究奶牛乳腺组织中LDHA和PFKP的功能及机制提供参考。 展开更多
关键词 临床型奶牛乳房炎 糖酵解途径 ldha PFKP DIA蛋白质组学
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蟾毒灵对肝癌组织LDHA表达及NK细胞的影响
2
作者 于芳婧 缪林轩 +1 位作者 陈浩然 崔晓楠 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第5期1108-1113,共6页
目的:探究LDHA、CD56及NKG2D在肝癌组织中的表达,进一步探讨蟾毒灵(BF)对肝细胞癌LDHA及NK细胞的影响及相关性。方法:免疫组化(IHC)检测91例肝癌术后石蜡病理标本中LDHA和NK细胞特异分子标志CD56、NKG2D在癌及癌旁的表达差异及各指标的... 目的:探究LDHA、CD56及NKG2D在肝癌组织中的表达,进一步探讨蟾毒灵(BF)对肝细胞癌LDHA及NK细胞的影响及相关性。方法:免疫组化(IHC)检测91例肝癌术后石蜡病理标本中LDHA和NK细胞特异分子标志CD56、NKG2D在癌及癌旁的表达差异及各指标的相关性。利用C57BL/6小鼠构建Hepa1-6皮下荷瘤肝癌模型,并随机分为Control(Ctrl)组、BF+丙酮酸(BF+PA)组、Oxamate(OX)组、BF组,5只/组,观察皮下瘤生长速度及体积;IHC检测各组小鼠肿瘤中LDHA和鼠NK细胞特异性分子标志NK1.1、NKG2D表达;ELISA检测各组小鼠血清中穿孔素、TNF-α、IFN-γ浓度。结果:LDHA在人肝癌组织中高表达(P<0.001),CD56、NKG2D均在癌旁组织高表达(P<0.001);LDHA与CD56(r=-0.5298,P<0.0001)、NKG2D(r=-0.3201,P<0.001)表达均呈负相关;CD56与NKG2D表达呈正相关(r=0.6122,P<0.0001)。小鼠肝癌皮下瘤实验显示,相比于Ctrl组和BF+PA组,OX组和BF组皮下瘤增长速度变慢并呈现肿瘤减小趋势;IHC检测显示,与Control组相比,BF组LDHA表达显著下调(P<0.01),并显著增加NK1.1及NKG2D表达(P<0.0001);ELISA结果显示,与Ctrl组相比,BF组血清中LDHA提高穿孔素、TNF-α、IFN-γ表达(P<0.0001),增强NK细胞杀伤能力。结论:BF可抑制肝癌细胞LDHA表达,并增加NK细胞在肝癌组织中的浸润比例,从而可能提高肝癌NK细胞在肿瘤微环境的杀伤能力,抑制肝癌生长。 展开更多
关键词 肝细胞癌 蟾毒灵 NK细胞 ldha
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民猪PGD和LDHA基因的表达与冷诱导研究 被引量:4
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作者 张冬杰 刘娣 +2 位作者 汪亮 王文涛 杨国伟 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期17-21,共5页
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因(6-phosphogluconate dehydrogenase,PGD)是戊糖代谢途径中的一个关键酶,乳酸脱氢酶A(Lactate dehydrogenase A,LDHA)是动物体内参与糖酵解的重要酶类之一。为了探讨PGD和LDHA基因在民猪抵御寒冷气候的过程中是... 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因(6-phosphogluconate dehydrogenase,PGD)是戊糖代谢途径中的一个关键酶,乳酸脱氢酶A(Lactate dehydrogenase A,LDHA)是动物体内参与糖酵解的重要酶类之一。为了探讨PGD和LDHA基因在民猪抵御寒冷气候的过程中是否起着一定的生物学作用,研究采用RT-PCR和Real-time PCR的方法,分析了这2个基因在民猪大肠,腿肌、肺、脂肪、心脏、脾脏和肝脏的表达情况以及冷诱导后在腿肌的表达变化情况。结果表明,PGD基因在所检的7个组织内均高水平表达,冷诱导后表达水平显著上升(P<0.05),LDHA基因在所检的7个组织中也均有表达,冷诱导后表达水平出现显著下降(P<0.05)。 展开更多
关键词 PGD ldha 民猪 冷诱导 REAL-TIME PCR
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胶质瘤LDHA和突变型p53蛋白联合表达的临床病理学意义 被引量:4
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作者 赖妙玲 郝卓芳 +3 位作者 黄世章 欧阳小明 郅程 申洪 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第14期2275-2280,共6页
目的探讨LDHA/p53联合表达在胶质瘤临床病理学中的意义。方法按照2016年WHO中枢神经系统肿瘤新分类,分析68例胶质瘤LDHA和突变型p53蛋白的表达特点及其与临床病理特征的关系。结果 68例胶质瘤中,LDHA单独高表达多为高级别胶质瘤,占48.5%... 目的探讨LDHA/p53联合表达在胶质瘤临床病理学中的意义。方法按照2016年WHO中枢神经系统肿瘤新分类,分析68例胶质瘤LDHA和突变型p53蛋白的表达特点及其与临床病理特征的关系。结果 68例胶质瘤中,LDHA单独高表达多为高级别胶质瘤,占48.5%;突变型p53高表达则多为胶质母细胞瘤,占26.5%。LDHA/p53联合表达在胶质母细胞瘤中显著增高,占22.1%(P=0.005)。高级别胶质瘤中LDHA/p53联合表达增多,占27.9%(P=0.002)。结论 LDHA/p53联合表达有助于高级别胶质瘤的诊断,对胶质母细胞瘤的诊断也具有提示作用。 展开更多
关键词 胶质瘤 乳酸脱氢酶-A亚基(ldha) 突变型P53 异柠檬酸脱氢酶1(IDH1) 鉴别诊断
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克雷伯氏菌产1,3-丙二醇ldhA基因缺失菌株的构建 被引量:7
5
作者 陈利飞 李猛 +1 位作者 马春玲 杨建楼 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期121-126,共6页
克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)甘油歧化发酵生产1,3-丙二醇(1,3-PD)的过程中,乳酸是氧化途径最主要的副产物,乳酸的产生和积累,不仅限制了菌体本身的生长,而且严重影响了1,3-丙二醇的转化率。利用λRed重组技术对Klebsiella pneumo... 克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)甘油歧化发酵生产1,3-丙二醇(1,3-PD)的过程中,乳酸是氧化途径最主要的副产物,乳酸的产生和积累,不仅限制了菌体本身的生长,而且严重影响了1,3-丙二醇的转化率。利用λRed重组技术对Klebsiella pneumonia中的酶乳酸脱氢酶基因(ldhA)进行改造。在λRed重组系统作用下,将带有300 bp的线性同源片段ldhA1-Cm-ldh A2与基因组DNA的同源重组,经过抗性筛选和PCR鉴定最终获得了ldhA基因缺失菌株K.pneumonia2-1ΔldhA。经过24 h发酵可知,乳酸最大产出浓度由原来的10.16 g/L降为0.49 g/L,1,3-PD由原来的78.83 g/L增长为85.76 g/L,甘油转化率由60.64%增长到65.97%,提高了5.33%。 展开更多
关键词 克雷伯氏菌 ldha基因 λRed同源重组 1 3-丙二醇
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温经通络汤含药血清对小鼠软骨细胞损伤及IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴的影响研究 被引量:3
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作者 魏伟 彭晨健 +4 位作者 顾任钧 颜习武 叶嘉鹏 黄桂成 孙鲁宁 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期469-478,共10页
目的研究温经通络汤含药血清对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的小鼠原代软骨细胞损伤的影响及机制。方法采用IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞损伤模型,检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α,软骨降解相关蛋白酶基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9... 目的研究温经通络汤含药血清对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的小鼠原代软骨细胞损伤的影响及机制。方法采用IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞损伤模型,检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α,软骨降解相关蛋白酶基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9、MMP13、ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4(ADAMTS4)以及糖酵解相关酶乳酸脱氢酶A(LDHA)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶2(NOX2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶4(NOX4)的mRNA表达;测定细胞内MMP3、MMP13、P65、IκB-ζ、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)以及LDHA蛋白表达水平;进一步检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和乳酸的浓度,测定细胞内辅酶Ⅰ(NAD)的还原态(NADH)和氧化态(NAD+)的比率,以及细胞内活性氧(ROS)水平。结果温经通络汤含药血清可显著抑制IL-1β软骨细胞内IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达(P<0.01),降低细胞上清液中NO浓度(P<0.05,P<0.01),下调IκB-ζ(P<0.05)和P65蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。温经通络汤含药血清可显著下调MMP3、MMP9、MMP13以及ADAMTS4 mRNA表达(P<0.01),抑制MMP13(P<0.05,P<0.01)和MMP3(P<0.05)的蛋白表达。氧化应激方面,它可显著抑制软骨细胞内ROS的产生,提高NADH/NAD+比率,降低上清液中MDA浓度,下调HIF-1α蛋白表达(P<0.01)。温经通络汤含药血清可显著降低乳酸浓度,下调LDHA、PKM2、NOX2、NOX4的表达,降低细胞内糖酵解水平(P<0.05,P<0.01)。结论温经通络汤含药血清可通过抑制炎症、软骨降解、氧化应激和糖酵解,缓解IL-1β诱导的小鼠原代软骨细胞损伤,其机制可能与调控IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴有关。 展开更多
关键词 温经通络汤含药血清 IκB-ζ/HIF-1α/ldha 白细胞介素-1Β 软骨细胞损伤
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乳酸脱氢酶A(ldha)基因的克隆与原核表达 被引量:2
7
作者 袁军 许香雅 沈榕强 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 2012年第11期23-26,44,共5页
乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶,在厌氧条件下能催化丙酮酸生成乳酸;当动物体内缺乏葡萄糖时,还可氧化乳酸生成丙酮酸并经葡萄糖异生途径转变为葡萄糖。通过反转录PCR获得了Hela细胞中的ldha基因,并将它克隆到pET28a(+)载体上,获得重组表达载... 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶,在厌氧条件下能催化丙酮酸生成乳酸;当动物体内缺乏葡萄糖时,还可氧化乳酸生成丙酮酸并经葡萄糖异生途径转变为葡萄糖。通过反转录PCR获得了Hela细胞中的ldha基因,并将它克隆到pET28a(+)载体上,获得重组表达载体pET28a(+)-ldha。重组质粒通过转化法转入宿主E.coli BL21(DE3)溶源菌中。SDS-PAGE分析表明,在1.0 mmol·L-1异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)的诱导下,重组子成功表达了一条分子质量约为36 kDa的目标蛋白。 展开更多
关键词 HELA细胞 ldha基因 克隆 原核表达
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LDHA Ki67蛋白在鼻咽癌中的表达及其意义 被引量:1
8
作者 唐洪波 龚邵新 +2 位作者 刘利军 李明 许明 《基层医学论坛》 2020年第34期4887-4890,共4页
目的探讨乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白、Ki67蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其意义。方法选取鼻咽癌黏膜组织93例(病例组)和鼻咽部慢性炎症黏膜组织30例(对照组),采用免疫组织化学检测2组标本中的LDHA蛋白、Ki67蛋白表达水平,并分析LDHA蛋白、Ki6... 目的探讨乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白、Ki67蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其意义。方法选取鼻咽癌黏膜组织93例(病例组)和鼻咽部慢性炎症黏膜组织30例(对照组),采用免疫组织化学检测2组标本中的LDHA蛋白、Ki67蛋白表达水平,并分析LDHA蛋白、Ki67蛋白与鼻咽癌发生、发展的关系。结果病例组的LDHA蛋白与Ki67蛋白阳性表达率分别是77.42%与72.04%,均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ期和Ⅳ期鼻咽癌患者病灶组织中LDHA蛋白与Ki67蛋白阳性表达率分别是83.58%与79.10%,均高于Ⅰ期和Ⅱ期鼻咽癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);发生淋巴结转移的鼻咽癌患者病灶组织中的LDHA蛋白与Ki67蛋白阳性表达率分别是84.42%与77.92%,均高于未发生淋巴结转移的鼻咽癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。经Spearman相关分析,LDHA蛋白表达与Ki67蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论鼻咽癌组织中LDHA蛋白与Ki67蛋白与鼻咽癌肿瘤的发生、发展密切相关,并且在鼻咽癌的发生、发展以及淋巴结转移中起协同作用,对鼻咽癌的早期诊断及其预后判断可提供一定的参考。 展开更多
关键词 鼻咽癌 ldha蛋白 KI67蛋白 发生发展 淋巴结转移
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靶向乳酸脱氢酶A(LDHA)对T细胞急性淋巴细胞白血病具有抗白血病作用 被引量:7
9
作者 于海智 尹亚飞 +11 位作者 易艺芳 程钊 旷文勇 李睿娟 钟海莹 崔亚娟 袁玲俐 龚凡杰 王志华 李姮 彭宏凌 张广森 《癌症》 SCIE CAS 2021年第1期24-40,共17页
背景与目的T细胞急性淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)中少见且具侵袭性的一种亚型。在T-ALL患者的血清中,乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LD... 背景与目的T细胞急性淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)中少见且具侵袭性的一种亚型。在T-ALL患者的血清中,乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的活性增高。我们推测靶向LDHA可以作为改善T-ALL患者预后的一个潜在治疗策略。本研究旨在研究LDHA靶向治疗对T-ALL的抗白血病作用及其潜在的分子机制。方法用LDH抑制剂草氨酸盐处理原代T-ALL细胞系Jurkat和DU528。采用MTT、克隆形成、凋亡及细胞周期检测分析草氨酸盐对T-ALL细胞的作用。采用定量实时PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blotting检测相关的信号通路。采用活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测分析草氨酸盐处理后的T-ALL细胞中的ROS产量。用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了LDHA基因敲减的T-ALL转基因斑马鱼模型,采用TUNEL、Western blotting及T-ALL肿瘤进展检测分析LDHA基因敲减对T-ALL转基因斑马鱼模型的影响。结果草氨酸盐显著抑制了Jurkat和DU528的细胞增殖,诱导了细胞凋亡,同时也引起了Jurkat和DU528细胞周期G0/G1期阻滞,刺激了ROS的生成(P<0.001)。阻断LDHA显著减低了c-Myc基因及蛋白的表达,也降低了磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3′-kinase,PI3K)信号通路上的磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(phos-phorylated serine/threonine kinase,AKT)和糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3 beta,GSK-3β)的表达。在T-ALL转基因斑马鱼中,LDHA基因敲减减缓了疾病进展,下调了c-Myc的mRNA和蛋白表达。结论靶向LDHA对T-ALL表现出抗白血病的作用,可作为一种对T-ALL的潜在的治疗策略。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9基因编辑 ldha 草氨酸盐 T细胞淋巴细胞白血病 转基因斑马鱼模型
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LDHA对乳腺癌演变的影响及SUMO化修饰 被引量:3
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作者 赵雪可 李威 +4 位作者 刘文 黄泽翎 曹鸽 梁伟华 曹玉文 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期427-431,共5页
目的探讨LDHA在乳腺癌中的表达、临床意义及与SUMO1修饰的关系。方法采用免疫组化和Western blot法检测乳腺癌组织中LDHA蛋白表达,并分析其与临床病理特征的关系。应用数据库预测LDHA表达与患者预后的关系。Co-IP鉴定LDHA分子SUMO化水平... 目的探讨LDHA在乳腺癌中的表达、临床意义及与SUMO1修饰的关系。方法采用免疫组化和Western blot法检测乳腺癌组织中LDHA蛋白表达,并分析其与临床病理特征的关系。应用数据库预测LDHA表达与患者预后的关系。Co-IP鉴定LDHA分子SUMO化水平,软件筛选SUMO化位点。结果LDHA在癌旁正常乳腺组织、普通型导管增生、导管不典型增生、导管原位癌和浸润性导管癌组织中的阳性率分别为26.0%、26.8%、31.4%、54.2%、64.3%。LDHA表达与乳腺癌组织学高分级、淋巴结转移、TNM III+IV期、ER阴性相关(P均<0.05),与患者总生存期、无瘤生存期呈负相关(P=0.009,P=0.008)。LDHA与SUMO1相互作用,致使乳腺癌中的SUMO化修饰水平降低。LDHA的SUMO化位点可信度最高的是K284、K59及K14。结论LDHA高表达提示乳腺癌变、恶性进展及预后不良,同时LDHA蛋白发生SUMO化修饰。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 ldha SUMO 免疫组织化学
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糖酵解相关基因HIF⁃1α、FOXO4、LDHA在胃癌中的表达及临床意义 被引量:3
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作者 朱方圆 朱耀东 +2 位作者 彭强 张效泽 李平 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2023年第9期798-805,共8页
目的检测糖酵解相关基因缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、转录因子叉头框蛋白(FOX)O4(FOXO4)、乳酸脱氢酶A(LDHA)在胃癌组织中的表达情况,并探讨其与胃癌临床病理特征及预后的关系。方法UALCAN、LinkedOmics数据库分析HIF-1α、FOXO4、LDHA... 目的检测糖酵解相关基因缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、转录因子叉头框蛋白(FOX)O4(FOXO4)、乳酸脱氢酶A(LDHA)在胃癌组织中的表达情况,并探讨其与胃癌临床病理特征及预后的关系。方法UALCAN、LinkedOmics数据库分析HIF-1α、FOXO4、LDHA在胃癌组织与正常组织中的表达及与表达相关的基因。免疫组化方法检测70例胃癌组织、癌旁组织及30例正常胃组织中HIF-1α、FOXO4、LDHA的表达,分析其与胃癌患者临床病理特征及预后的关系。Spearman相关性检验分析HIF-1α、FOXO4、LDHA表达的相关性,并用Starbase数据库验证三者间的关系。Kaplan-Meier Plotter数据库分析HIF-1α、FOXO4、LDHA表达对患者生存预后的影响。选择与HIF-1α、FOXO4、LDHA表达相关的前50个基因与GeneCards中获得的胃癌相关基因取交集,并进行KEGG分析。结果生物信息学分析显示,胃癌组织中HIF-1α、LDHA高表达而FOXO4低表达,且三者可以共表达。免疫组化结果显示,胃癌组织中HIF-1α、LDHA高表达而FOXO4低表达;胃癌组织中HIF-1α、FOXO4、LDHA的表达与患者的TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关(P<005)。Spearman相关性分析表明HIF-1α与FOXO4的表达呈负相关(r=-0338,P<005),HIF-1α与LDHA的表达呈正相关(r=0462,P<005)。Cox单因素与多因素回归分析结果显示,HIF-1α阳性、LDHA阳性、FOXO4阴性、淋巴结转移、肿瘤分期晚及分化程度低为胃癌不良的预后影响因素(P<005);Kaplan-Meier Plotter数据库的生存分析也表明HIF-1α、FOXO4、LDHA与患者生存预后有关(P<005)。KEGG分析显示三者均参与了胃癌的糖酵解/糖异生、HIF-1α通路等过程。结论HIF-1α、LDHA高表达于胃癌组织,FOXO4低表达于胃癌组织,且与胃癌患者的临床病理特征及生存预后密切相关,并可反映糖酵解情况,三者的检测有助于胃癌的诊疗及预后预测。 展开更多
关键词 胃癌 HIF-1Α FOXO4 ldha 临床病理特征 预后 数据库
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人源LDHA基因启动子质粒的构建及在肺癌细胞中Nrf2对其转录表达调控和功能分析 被引量:2
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作者 曹玉祥 周兴路 +3 位作者 李祥瑞 黄滔 柯丽霞 吴志浩 《生命科学研究》 CAS CSCD 2018年第1期36-41,共6页
为探索核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)调节肿瘤代谢进而影响肿瘤细胞迁移的分子机制,着重研究了Nrf2对乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)表达的调控。首先成功构建了人源LDHA基因启动... 为探索核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)调节肿瘤代谢进而影响肿瘤细胞迁移的分子机制,着重研究了Nrf2对乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)表达的调控。首先成功构建了人源LDHA基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因质粒LDHA-luc。将质粒LDHA-luc与Nrf2表达载体共同转染A549细胞,转染后经双荧光素酶报告基因系统检测,显示共转Nrf2质粒时LDHA-luc活性明显要比对照组高;同时,转染Nrf2质粒时LDHA的蛋白质表达水平明显高于对照组,表明在A549细胞中Nrf2促进LDHA的转录和表达。而LDHA的上调会促进酸性肿瘤微环境的形成,促进细胞迁移。因此,成功构建的人源LDHA基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因质粒LDHA-luc及探索出的Nrf2对LDHA基因表达的调控,为进一步研究Nrf2通过LDHA影响细胞代谢进而促进细胞迁移奠定了基础。 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶A(ldha) 核因子E2相关因子2(Nrf2) 萤火虫荧光素酶报告基因质粒 转录表达分析 细胞迁移
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人LDHA原核表达、纯化及体外抑制剂筛选模型的建立 被引量:5
13
作者 金科华 吴昕瑞 +1 位作者 王苗苗 宋思扬 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期36-40,共5页
在多数肿瘤细胞中高度表达的乳酸脱氢酶A(LDHA)与肿瘤的发生、发展和预后密切相关,筛选LDHA小分子抑制剂可提供一种富有潜力的靶向抗肿瘤策略.本研究以pET-28a为载体,构建了人LDHA表达质粒并于大肠杆菌BL21(DE3)中稳定表达,产量达到2.65... 在多数肿瘤细胞中高度表达的乳酸脱氢酶A(LDHA)与肿瘤的发生、发展和预后密切相关,筛选LDHA小分子抑制剂可提供一种富有潜力的靶向抗肿瘤策略.本研究以pET-28a为载体,构建了人LDHA表达质粒并于大肠杆菌BL21(DE3)中稳定表达,产量达到2.65mg/L.基于LDHA的催化反应建立了以丙酮酸钠和还原型烟酰胺腺嘌呤二核甘酸(NADH)为底物的筛选模型.实验结果表明:模型的LDHA最适质量浓度为60ng/mL,以质量分数0.25%草酸铵为阳性对照,筛选模型的Z因子为0.812.至此,本研究建立了LDHA抑制剂体外生化筛选模型,其成本低、可操作性强,符合高通量筛选要求,为发现新颖的LDHA抑制剂奠定了基础. 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶A 表达 抑制剂 筛选模型
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长链非编码RNA GLEC1通过调控LDHA参与食管鳞癌的代谢重塑 被引量:2
14
作者 欧阳军 陈奎生 戴丽萍 《中国卫生检验杂志》 CAS 2021年第5期610-613,共4页
目的研究长链非编码RNA GLEC1对食管癌代谢重塑的影响。方法利用核质分离技术检测长链非编码RNA GLEC1在细胞中的定位;用慢病毒介导的sh RNA敲低技术干扰Lnc RNA GLEC1的表达,构建出Lnc RNA GLEC1稳定敲低的细胞系;免疫印迹实验检测敲低... 目的研究长链非编码RNA GLEC1对食管癌代谢重塑的影响。方法利用核质分离技术检测长链非编码RNA GLEC1在细胞中的定位;用慢病毒介导的sh RNA敲低技术干扰Lnc RNA GLEC1的表达,构建出Lnc RNA GLEC1稳定敲低的细胞系;免疫印迹实验检测敲低Lnc RNA GLEC1后对代谢酶LDHA表达的影响;敲低Lnc RNA GLEC1后加入MG132检测是否可以恢复LDHA的表达量。结果 Lnc RNA GLEC1主要分布在细胞质中,敲低Lnc RNA GLEC1会引起代谢酶LDHA蛋白水平降低,降低程度约70%(P <0.01)。泛素蛋白酶途径的抑制剂MG132不能恢复敲低Lnc RNA GLEC1引起的LDHA蛋白水平降低。结论 Lnc RNA GLEC1通过调控LDHA的转录参与食管鳞癌的代谢重塑过程。 展开更多
关键词 长链非编码RNA ldha 食管癌 代谢重塑
原文传递
Cyclin G2与LDHA相互作用的鉴定分析
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作者 庄新宾 侯晓宇 +3 位作者 李森 高锦兰 刘琦 罗阳 《解剖科学进展》 2020年第4期466-470,共5页
目的分析细胞周期素G2(cyclin G2)与乳酸脱氢酶A(LDHA)之间的相互作用及其意义。方法将LDHA全长cDNA片段分别克隆到pGEX-5X-1和p3×FLAG-CMV-14载体上,构建pGEX-LDHA原核重组蛋白表达载体和p3×FLAG-CMV-LDHA真核重组蛋白表达载... 目的分析细胞周期素G2(cyclin G2)与乳酸脱氢酶A(LDHA)之间的相互作用及其意义。方法将LDHA全长cDNA片段分别克隆到pGEX-5X-1和p3×FLAG-CMV-14载体上,构建pGEX-LDHA原核重组蛋白表达载体和p3×FLAG-CMV-LDHA真核重组蛋白表达载体,诱导表达并纯化GST-LDHA融合蛋白,通过GST pull-down及western blot技术分析cyclin G2与LDHA的相互作用。分别转染p3×FLAG-CMV-LDHA、pEGFP-FALGCCNG2质粒到HEK293细胞使其表达,利用带有抗FLAG蛋白标签抗体的免疫沉淀凝胶进行Co-IP实验,进一步验证cyclin G2与LDHA的相互作用。结果成功构建了pGEX-LDHA原核重组蛋白表达载体和p3×FLAG-CMVLDHA真核重组蛋白表达载体。GST pull-down实验证实了cyclin G2与LDHA在细胞外的相互作用。Co-IP实验证实了cyclin G2和LDHA在细胞内的相互作用。结论 cyclin G2与LDHA在细胞内和细胞外能发生相互作用,为研究cyclin G2生物学功能奠定实验基础。 展开更多
关键词 cyclin G2 ldha 免疫共沉淀 GST pull-down 相互作用
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转牛LDHA基因酿酒酵母构建及产乳酸能力分析
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作者 左梦娜 何佳宁 +2 位作者 尹千禧 王凤梅 马利兵 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期3719-3726,共8页
【目的】探究转牛乳酸脱氢酶A基因(LDHA)酿酒酵母发酵制备食品级乳酸的可行性,为采用转基因商业酿酒酵母规模化制备乳酸提供技术支撑。【方法】从NCBI网站检索牛LDHA基因编码序列,并将编码序列中的同义密码子替换为酿酒酵母偏好密码子,... 【目的】探究转牛乳酸脱氢酶A基因(LDHA)酿酒酵母发酵制备食品级乳酸的可行性,为采用转基因商业酿酒酵母规模化制备乳酸提供技术支撑。【方法】从NCBI网站检索牛LDHA基因编码序列,并将编码序列中的同义密码子替换为酿酒酵母偏好密码子,经人工合成后导入酿酒酵母表达载体pAUR123,再将重组表达载体p AUR123-LDHA导入商业化酿酒酵母EC1118株,采用Aureobasidin A筛选转基因酿酒酵母。将转基因及非转基因酿酒酵母EC1118株分别接种于含200 g/L葡萄糖的YPD液体培养基中连续培养5 d,期间检测2组酿酒酵母的LDHA活性及其发酵产乳酸能力,以评估转牛LDHA基因酿酒酵母发酵制备乳酸的可行性。【结果】牛LDHA基因编码序列长1170 bp,共编码389个氨基酸残基;以酿酒酵母偏好密码子替换牛LDHA基因编码序列中的同义密码子,其替换率高达58.35%。牛LDHA在酿酒酵母中的预计半衰期>20 h,其二级结构富含α-螺旋和无规则卷曲。替换后的牛LDHA基因编码序列由表达载体pAUR123携带导入酿酒酵母中,经Aureobasidin A筛选获得1株转基因酿酒酵母菌株,命名为EC1118-LDHA。转基因酿酒酵母EC1118-LDHA株以200 g/L葡萄糖为碳源,发酵24 h后的LDHA活性达4.7±1.2 mU/mg,发酵2~3 d后约制备出30 g/L乳酸,同时产生约70 g/L乙醇,乳酸产出率约为0.15 g/g葡萄糖。【结论】将替换酿酒酵母偏好密码子后的牛LDHA基因编码序列导入酿酒酵母中能成功构建转牛LDHA基因酿酒酵母,牛LDHA基因的导入不会影响商业化酿酒酵母的发酵能力,且赋予了酿酒酵母以200 g/L葡萄糖为碳源约制备出30 g/L乳酸的能力。因此,采用转牛LDHA基因酿酒酵母制备食品级乳酸完全可行。 展开更多
关键词 酿酒酵母 乳糖脱氢酶A基因(ldha) 乳酸 发酵
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Proteo-transcriptomic profiles reveal key regulatory pathways and functions of LDHA in the ovulation of domestic chickens(Gallus gallus) 被引量:1
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作者 Ruixue Nie Wenhui Zhang +5 位作者 Haoyu Tian Junying Li Yao Ling Bo Zhang Hao Zhang Changxin Wu 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS CSCD 2024年第4期1449-1465,共17页
Background In poultry, the smooth transition of follicles from the preovulatory-to-postovulatory phase impacts egg production in hens and can benefit the poultry industry. However, the regulatory mechanism underlying ... Background In poultry, the smooth transition of follicles from the preovulatory-to-postovulatory phase impacts egg production in hens and can benefit the poultry industry. However, the regulatory mechanism underlying follicular ovulation in avians is a complex biological process that remains unclear.Results Critical biochemical events involved in ovulation in domestic chickens(Gallus gallus) were evaluated by transcriptomics, proteomics, and in vitro assays. Comparative transcriptome analyses of the largest preovulatory follicle(F1) and postovulatory follicle(POF1) in continuous laying(CL) and intermittent laying(IL) chickens indicated the greatest difference between CL_F1 and IL_F1, with 950 differentially expressed genes(DEGs), and the smallest difference between CL_POF1 and IL_POF1, with 14 DEGs. Additionally, data-independent acquisition proteomics revealed 252 differentially abundant proteins between CL_F1 and IL_F1. Perivitelline membrane synthesis, steroid biosynthesis, lysosomes, and oxidative phosphorylation were identified as pivotal pathways contributing to ovulation regulation. In particular, the regulation of zona pellucida sperm-binding protein 3, plasminogen activator, cathepsin A, and lactate dehydrogenase A(LDHA) was shown to be essential for ovulation. Furthermore, the inhibition of LDHA decreased cell viability and promoted apoptosis of ovarian follicles in vitro.Conclusions This study reveals several important biochemical events involved in the process of ovulation, as well as crucial role of LDHA. These findings improve our understanding of ovulation and its regulatory mechanisms in avian species. 展开更多
关键词 CHICKEN Data-independent acquisition proteomics ldha OVULATION Regulatory mechanism TRANSCRIPTOME
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敲低膀胱癌细胞热休克蛋白60(HSP60)通过上调乳酸脱氢酶A(LDHA)表达抑制人NKL细胞杀伤 被引量:1
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作者 杨帆 刘静 +3 位作者 姚田军 吴丹 周幸春 张波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1098-1105,共8页
目的探索热休克蛋白60(HSP60)蛋白表达变化影响膀胱癌细胞逃避自然杀伤(NK)细胞免疫监视的作用及机制。方法免疫组织化学染色法检测HSP60在膀胱癌组织及癌旁组织中的表达,统计学分析HSP60在膀胱癌及癌旁组织的表达差异及HSP60表达水平... 目的探索热休克蛋白60(HSP60)蛋白表达变化影响膀胱癌细胞逃避自然杀伤(NK)细胞免疫监视的作用及机制。方法免疫组织化学染色法检测HSP60在膀胱癌组织及癌旁组织中的表达,统计学分析HSP60在膀胱癌及癌旁组织的表达差异及HSP60表达水平与膀胱癌患者预后的相关性。利用腺病毒载体构建HSP60稳定干涉及过表达的膀胱癌细胞系并与NKL细胞共培养,ELISA及LDH释放实验检测NK细胞活化及杀伤能力的变化。Western blot法检测膀胱癌细胞乳酸脱氢酶A(LDHA)表达,试剂盒检测乳酸分泌。在HSP60稳定干涉及过表达的膀胱癌细胞系,利用小干涉RNA(siRNA)敲低或利用质粒过表达膀胱癌细胞中的LDHA,检测对NKL细胞杀伤能力的影响。利用线粒体活性氧探针MitoSOX检测线粒体活性氧(ROS)水平,Western blot法检测膀胱癌细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的蛋白表达,利用靶向线粒体抗氧化剂MitoEMPO及siRNA降低HSP60稳定干涉膀胱癌细胞中线粒体ROS及HIF-1α水平,探索HSP60表达降低促进LDHA表达的具体机制。结果膀胱癌组织HSP60蛋白的表达水平较癌旁组织显著降低,且HSP60表达越低的膀胱癌患者其预后越差;敲低HSP60蛋白表达可显著上调膀胱癌细胞LDHA的表达及乳酸的分泌,反之,过表达HSP60可显著抑制膀胱癌细胞LDHA的表达及乳酸的分泌;siRNA LDHA可显著增强HSP60敲低导致NKL细胞的杀伤抑制,同时过表达LDHA可显著抑制HSP60过表达导致NKL杀伤增强。此外,敲低膀胱癌细胞HSP60表达可通过激活ROS/HIF-1α通路促进LDHA的表达。结论敲低膀胱癌细胞HSP60表达通过激活ROS/HIF-1α通路促进LDHA的表达,抑制NK细胞的杀伤作用。 展开更多
关键词 膀胱癌细胞 热休克蛋白60(HSP60) 乳酸脱氢酶A(ldha) 乳酸 自然杀伤(NK)细胞
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以LDHA为靶点的抗癌药物虚拟筛选
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作者 段超杰 王浩臻 高兵 《智慧健康》 2021年第8期24-27,共4页
目的从天然产物中高效快速地筛选出一批有效针对乳酸脱氢酶A (Lactate dehydrogenase A,LDHA)的候选化合物,为研发抗癌药物提供有效线索。方法运用计算机辅助药物设计技术(computer-aided drug design,CADD),以LDHA中的1,4-二氢烟酰胺... 目的从天然产物中高效快速地筛选出一批有效针对乳酸脱氢酶A (Lactate dehydrogenase A,LDHA)的候选化合物,为研发抗癌药物提供有效线索。方法运用计算机辅助药物设计技术(computer-aided drug design,CADD),以LDHA中的1,4-二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(1,4-dihydronicotinamide adenine dinucleotide,NADH)结合区为靶点,在Drug Bank数据库7877个天然化合物中进行虚拟筛选。中靶化合物通过文献搜索和数据库查询明确其结构,特点以及用途。结果利用Auto Dock Vina虚拟筛选工具对数据库中的化合物进行了筛选,共筛选得到5个候选化合物。结论以LDHA为靶点,对Drug Bank数据库中的化合物进行虚拟筛选,发现5个新的LDHA抑制剂,中靶的化合物可作为候选化合物用于抗癌药物的研发。 展开更多
关键词 ldha 天然产物 药物筛选
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黄胸鼠Ldha基因的克隆、原核表达及酶学性质研究
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作者 倪玉芳 张树军 +3 位作者 方天星 万军 陈洁 曾凡才 《四川动物》 北大核心 2021年第6期601-610,共10页
Ldha基因表达可生成参与糖代谢的乳酸脱氢酶(LDH),通过克隆黄胸鼠Rattus tanezumi的Ldha基因并进行原核表达后可以研究其酶学性质。以黄胸鼠骨骼肌cDNA为模板,通过RT-PCR技术获得黄胸鼠Ldha基因编码序列,进行生物信息学分析后构建pET28... Ldha基因表达可生成参与糖代谢的乳酸脱氢酶(LDH),通过克隆黄胸鼠Rattus tanezumi的Ldha基因并进行原核表达后可以研究其酶学性质。以黄胸鼠骨骼肌cDNA为模板,通过RT-PCR技术获得黄胸鼠Ldha基因编码序列,进行生物信息学分析后构建pET28α-Ldha重组表达质粒,导入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达,采用SDS-PAGE和Western Blot对表达蛋白进行鉴定,最后检测表达蛋白的酶学性质。结果显示,黄胸鼠Ldha基因编码区序列被成功克隆,纯化后的原核表达蛋白分子量约为37 kD,Western Blot证实后,分别以丙酮酸和乳酸为底物测得酶的平均比活性为113.760 U·mg^(-1)±1.463 U·mg^(-1)和2.180 U·mg^(-1)±0.125 U·mg^(-1),琼脂糖凝胶电泳同工酶谱分析显示该蛋白具有LDH活性且仅形成1条同工酶带。在pH7.0,25℃条件下,LDHA蛋白对丙酮酸、NADH、乳酸、NAD+4种底物的平均Km值分别为0.170 mmol·L^(-1)±0.193 mmol·L^(-1)、0.088 mmol·L^(-1)±0.008 mmol·L^(-1)、22.540 mmol·L^(-1)±0.007 mmol·L^(-1)、0.413 mmol·L^(-1)±0.069 mmol·L^(-1)。黄胸鼠Ldha基因编码序列被首次克隆并表达出具有活性的酶蛋白,分析了其酶学性质,可为后续研究啮齿类动物LDH的结构和功能提供基础资料。 展开更多
关键词 黄胸鼠 ldha基因 原核表达 蛋白纯化 酶学性质
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