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应用LC3B-PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用
1
作者
洪甜
闫志风
+2 位作者
张立
徐小洁
叶棋浓
《生物技术通讯》
CAS
2017年第4期490-494,共5页
目的:构建带Myc标签的LC3B-PLA2基因的真核表达质粒,获得LC3B-PLA2融合蛋白,并应用LC3B-PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,PCR扩增获得LC3B序列,与PLA2G10拼接后插入pCMV-Myc载体,用构建的重组质粒...
目的:构建带Myc标签的LC3B-PLA2基因的真核表达质粒,获得LC3B-PLA2融合蛋白,并应用LC3B-PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,PCR扩增获得LC3B序列,与PLA2G10拼接后插入pCMV-Myc载体,用构建的重组质粒转染HEK293T细胞,Western印迹检测融合蛋白的表达,用LC3B-PLA2与Atg4B共转染的方法检测Atg4B对LC3B的切割作用。结果:菌液PCR、重组质粒双酶切及测序均表明重组质粒构建成功,Western印迹结果表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达,LC3B-PLA2真核表达蛋白能够应用于Atg4B对LC3B切割作用的研究。结论:构建了pCMV-Myc-LC3B-PLA2真核表达质粒,LC3B-PLA2融合蛋白在Atg4B对LC3B切割作用的研究中至关重要,为进一步研究Atg4B在自噬过程中的作用奠定了基础。
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关键词
lc3b-pla2
Atg4B
自噬
重组质粒
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职称材料
题名
应用LC3B-PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用
1
作者
洪甜
闫志风
张立
徐小洁
叶棋浓
机构
军事医学科学院生物工程研究所
中国人民解放军总医院妇产科
总参警卫局卫生保健处
出处
《生物技术通讯》
CAS
2017年第4期490-494,共5页
基金
国家自然科学基金(81672602
81472589
+2 种基金
81502264)
北京市科技新星计划(Z141102001814055)
军事医学科学院创新基金转化医学项目(ZHYX003)
文摘
目的:构建带Myc标签的LC3B-PLA2基因的真核表达质粒,获得LC3B-PLA2融合蛋白,并应用LC3B-PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,PCR扩增获得LC3B序列,与PLA2G10拼接后插入pCMV-Myc载体,用构建的重组质粒转染HEK293T细胞,Western印迹检测融合蛋白的表达,用LC3B-PLA2与Atg4B共转染的方法检测Atg4B对LC3B的切割作用。结果:菌液PCR、重组质粒双酶切及测序均表明重组质粒构建成功,Western印迹结果表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达,LC3B-PLA2真核表达蛋白能够应用于Atg4B对LC3B切割作用的研究。结论:构建了pCMV-Myc-LC3B-PLA2真核表达质粒,LC3B-PLA2融合蛋白在Atg4B对LC3B切割作用的研究中至关重要,为进一步研究Atg4B在自噬过程中的作用奠定了基础。
关键词
lc3b-pla2
Atg4B
自噬
重组质粒
Keywords
lc3b-pla2
Atg4B
autophagy
recombinant plasmid
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用LC3B-PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用
洪甜
闫志风
张立
徐小洁
叶棋浓
《生物技术通讯》
CAS
2017
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