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SFFV启动子高效驱动mCherry-GFP-LC3B双荧光体系在红系细胞中进行自噬检测
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作者 任久强 李静 +2 位作者 李卓 刘雪会 吕湘 《基础医学与临床》 2025年第7期866-873,共8页
目的建立由造血细胞中高活性的脾焦点形成病毒(SFFV)启动子驱动的mCherry-GFP-LC3B慢病毒表达体系,并实现红系终末分化细胞自噬流的高效动态示踪。方法构建pRSC-SFFV-mCherry-GFP-LC3B慢病毒质粒,包装慢病毒并感染人红系祖细胞系(HUDEP... 目的建立由造血细胞中高活性的脾焦点形成病毒(SFFV)启动子驱动的mCherry-GFP-LC3B慢病毒表达体系,并实现红系终末分化细胞自噬流的高效动态示踪。方法构建pRSC-SFFV-mCherry-GFP-LC3B慢病毒质粒,包装慢病毒并感染人红系祖细胞系(HUDEP-2)及小鼠胎肝来源原代红系细胞;结合血清剥夺及氯喹干预模型,利用荧光成像、Western blot及流式细胞测量术分析红系终末分化细胞的自噬动态变化。结果SFFV启动子在HUDEP-2(97%vs.60%)及原代小鼠胎肝红系细胞(83%vs.1%)中表达的阳性率均显著高于巨噬细胞病毒(CMV)启动子(P<0.01,P<0.001),且不影响正常分化。血清剥夺后,自噬溶酶体(红斑)数量增加,伴随LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高及p62蛋白下降;氯喹干预则导致自噬体(黄斑)累积(P<0.001),且抑制效应呈剂量依赖性(r^(2)=0.92)。结论SFFV驱动双荧光体系可高效实时示踪红系细胞自噬流动态,为红系分化及相关贫血性疾病的机制研究提供了高灵敏度工具。 展开更多
关键词 SFFV启动子 自噬 mCherry-GFP-lc3b双荧光 红系细胞
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问号钩端螺旋体感染对C3H/HeJ小鼠自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B、P62表达的影响
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作者 杜诚 谭燕 +3 位作者 谢玲 谷媛媛 唐东 陈旭 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第8期832-837,共6页
目的了解问号钩端螺旋体(简称问号钩体)感染对自噬相关蛋白肌球蛋白样BCL2结合蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)和泛素结合蛋白62(P62)表达的影响及差异。方法采用问号钩体赖株感染C3H/HeJ小鼠构建钩体病动物模型,并运用组织... 目的了解问号钩端螺旋体(简称问号钩体)感染对自噬相关蛋白肌球蛋白样BCL2结合蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)和泛素结合蛋白62(P62)表达的影响及差异。方法采用问号钩体赖株感染C3H/HeJ小鼠构建钩体病动物模型,并运用组织镀银染色法检测小鼠肺、肝、肾组织内问号钩体侵袭情况。采用HE染色法检测小鼠肺、肝、肾组织病理变化。采用透射电镜法检测小鼠肺、肝、肾组织内自噬小体及钩体形态。采用免疫组化法检测问号钩体感染小鼠肺、肝、肾组织中自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B和P62表达水平。结果组织镀银染色检测结果显示在感染的C3H/HeJ小鼠肺、肝、肾组织内均观察到入侵的问号钩体。病理检测结果显示,问号钩体感染小鼠后肺、肝、肾组织均出现典型的钩体病病理变化,如肺出血、肝细胞坏死、肾小球和肾小管坏死、炎性细胞浸润等。透射电镜检测结果显示小鼠肺、肝、肾组织内出现包裹有钩体的自噬小体。免疫组化检测结果显示,问号钩体感染C3H/HeJ小鼠后,肺、肝、肾组织内Beclin-1和LC3B蛋白表达水平增加(P<0.05),P62蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论问号钩体感染可诱导小鼠肺、肝、肾组织内Beclin-1、LC3B和P62自噬相关蛋白表达水平发生变化,激活自噬的发生。 展开更多
关键词 问号钩端螺旋体 感染 自噬 BECLIN-1 lc3b P62
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人肝细胞癌中LC3B和p62的表达及意义 被引量:8
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作者 吴文涌 孟翔凌 +2 位作者 齐勇 马伟 吴正升 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期366-369,共4页
目的观察自噬标志因子LC3B和p62在人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测61例人HCC组织中LC3B和p62的表达,分析二者表达与临床病理特征及其预后的关系。结果 HCC中LC3B和p62的高... 目的观察自噬标志因子LC3B和p62在人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测61例人HCC组织中LC3B和p62的表达,分析二者表达与临床病理特征及其预后的关系。结果 HCC中LC3B和p62的高表达率分别为31.1%和65.6%;LC3B表达与肿瘤大小、组织学分级和临床分期呈显著正相关(P<0.05),p62表达与肿瘤临床分期呈显著正相关(P<0.05);LC3B和p62表达均与HCC患者的无复发生存期和总生存期密切相关(P=0.009和0.036;P=0.001和0.007)。结论肿瘤细胞自噬活性的提高可能参与人HCC的发展,LC3B和p62表达可能是肝细胞进展和预后不良的潜在标志物。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肝细胞癌 自噬 lc3b P62 免疫组织化学
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芪玉三龙汤调节Beclin1,Atg5,LC3B表达以抑制肺癌肿瘤生长机制 被引量:22
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作者 程建超 童佳兵 +5 位作者 朱洁 张星星 高雅婷 陈杨 李泽庚 郑莉莉 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期29-35,共7页
目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长及对自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),自噬相关基因5(autophagy related genes,Atg5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1light chain3,LC3B)表达的影响。方法:采用... 目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长及对自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),自噬相关基因5(autophagy related genes,Atg5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1light chain3,LC3B)表达的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞(lewis lung cancer cell,LLC)构建肺癌移植瘤小鼠模型,造模成功后随机分为模型组、芪玉三龙汤组、顺铂组及联合组,每组18只移植瘤小鼠。模型组每日按照生理盐水20 mL·kg^-1灌胃;芪玉三龙汤组每日按照80.48 g·kg^-1灌胃;顺铂组在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液(DDP)0.4 mL;联合组每日按80.48 g·kg^-1灌胃给药,并分别在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液0.4 mL;连续治疗21 d剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态学改变。免疫组化检测肿瘤组织中Beclin1,LC3B蛋白表达和定位。蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Beclin1,Atg5,微管相关蛋白1轻链3-I(LC3B-Ⅰ)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)蛋白表达,并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织Beclin1,Atg5 mRNA转录水平。结果:芪玉三龙汤具有温和的移植瘤抑制作用,抑瘤率为31.2%;镜下观察芪玉三龙汤组肿瘤组织可见片状坏死的肿瘤细胞;免疫组化及Western blot实验表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够上调Beclin1,Atg5,LC3B蛋白的表达(P<0.01),并且能促进LC3B-Ⅰ转化为LC3B-Ⅱ;Real-time PCR结果表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够促进Beclin1,Atg5 mRNA的转录(P<0.01)。结论:芪玉三龙汤对肺肿瘤生长具有温和地抑制作用,其作用机制可能与上调自噬关键分子Beclin1,Atg5,LC3B表达,促进LC3B-Ⅰ向LC3B-Ⅱ转化有关。 展开更多
关键词 芪玉三龙汤 肺癌 自噬 自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1) 自噬相关基因5(Atg5) 微管相关蛋白1轻链3(lc3b)
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自噬标志性分子LC3B在大鼠全脑缺血复灌损伤中海马CA1区的表达及意义 被引量:7
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作者 曾斌 王静文 +2 位作者 张玉琳 任典寰 应志国 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第6期667-669,共3页
目的探讨自噬标志分子LC3B在大鼠全脑缺血复灌不同时间的表达以及对海马神经元损伤的影响。方法采用四血管法(4-vessel-occlusion,4-VO)法制作大鼠全脑缺血模型,随机将33只SD大鼠分成假手术组和缺血再灌注组。在大鼠全脑缺血20 min后,... 目的探讨自噬标志分子LC3B在大鼠全脑缺血复灌不同时间的表达以及对海马神经元损伤的影响。方法采用四血管法(4-vessel-occlusion,4-VO)法制作大鼠全脑缺血模型,随机将33只SD大鼠分成假手术组和缺血再灌注组。在大鼠全脑缺血20 min后,分别恢复血流灌注30 min、1、2、4、6、8、12、24、48、72 h,用免疫组织化学法检测海马CA1区神经元LC3B的表达。结果 LC3B在大鼠全脑缺血20 min复灌2 h开始表达,在复灌12 h表达到达高峰,之后逐渐减弱。结论自噬的激活介导了大鼠全脑缺血再灌注海马CA1区神经元的损伤死亡,长时间脑缺血再灌注损伤中自噬激活的时间更早及介导神经元的损伤更严重。 展开更多
关键词 全脑缺血 缺血再灌注损伤 自噬 lc3b/LC3-II
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自噬相关基因BECN1、LC3B、mTOR在宫颈鳞状上皮病变进展中的表达及意义 被引量:8
6
作者 张晶 舒丽莎 张林西 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2017年第7期497-501,共5页
目的:检测BECN1、膜型微管相关蛋白1轻链3(LC3B)和雷帕霉素靶蛋白(m TOR)在宫颈鳞状上皮病变中的表达,并探讨其临床意义。方法:免疫组化法及荧光原位杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变和正常宫颈组织中自噬相关基因BECN1、LC3B和m TOR的蛋白... 目的:检测BECN1、膜型微管相关蛋白1轻链3(LC3B)和雷帕霉素靶蛋白(m TOR)在宫颈鳞状上皮病变中的表达,并探讨其临床意义。方法:免疫组化法及荧光原位杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变和正常宫颈组织中自噬相关基因BECN1、LC3B和m TOR的蛋白及m RNA表达情况。结果:宫颈鳞状细胞癌(SCC)组和高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组中BECN1和LC3B的蛋白及m RNA表达均明显低于正常宫颈组,m TOR的蛋白及m RNA表达明显高于正常宫颈组,差异均有统计学意义(P<0.01)。低级别鳞状上皮内病变(LSIL)组中,BECN1及LC3B的蛋白表达明显低于正常宫颈组,LC3B m RNA表达明显低于正常宫颈组,m TOR m RNA表达高于正常宫颈组,差异均有统计学意义(P<0.01)。SCC组中,BECN1蛋白表达与临床分期及淋巴结转移有关,LC3B蛋白表达与肿瘤细胞分化程度相关,m TOR蛋白表达则与淋巴结转移相关。SCC组中,LC3B表达与BECN1呈正相关,与m TOR呈负相关。结论:自噬相关基因与宫颈鳞状上皮病变的严重程度有关,推测BECN1、LC3B和m TOR异常表达可能导致病变恶化。 展开更多
关键词 自噬 BECN1 lc3b MTOR 宫颈鳞状病变
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子宫颈鳞状细胞癌组织中LC3B的表达及其与Ki-67表达的相关性 被引量:1
7
作者 赵洪萍 周颖 +1 位作者 万安 赵卫东 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1228-1231,1236,共5页
目的探讨自噬标志物LC3B蛋白在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其与细胞增殖蛋白Ki-67表达的相关性。方法采用免疫组化SP法检测16例正常子宫颈和126例子宫颈鳞状细胞癌组织中LC3B及Ki-67的表达。结果 LC3B蛋白在子宫颈鳞状细胞癌组织中... 目的探讨自噬标志物LC3B蛋白在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其与细胞增殖蛋白Ki-67表达的相关性。方法采用免疫组化SP法检测16例正常子宫颈和126例子宫颈鳞状细胞癌组织中LC3B及Ki-67的表达。结果 LC3B蛋白在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达低于正常子宫颈上皮,差异有统计学意义(P<0.05);LC3B与Ki-67表达呈负相关(rs=-0.248,P<0.05)。结论子宫颈鳞状细胞癌中LC3B的表达降低,自噬活性减弱可能促进早期子宫颈鳞状细胞癌细胞的增殖,该发现为进一步探究自噬在子宫颈癌发生、发展中的作用提供临床参考依据。 展开更多
关键词 子宫肿瘤 鳞状细胞癌 lc3b KI-67 自噬 免疫组织化学
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MAP1LC3B表达促进结直肠癌侵袭转移的体外研究 被引量:2
8
作者 李蓉蓉 殷先利 +1 位作者 李俊军 钟美佐 《实用预防医学》 CAS 2013年第2期152-156,共5页
目的探讨MAP1LC3B在结直肠癌(CRC)中的表达与侵袭转移及自噬的作用机制。方法采用免疫组织化学方法检测92例结直肠癌组织中MAP1LC3B的表达情况,结合临床病理及随访资料进行分析。体外构建慢病毒pLKO.1-MAP1LC3B-siRNA干扰质粒,转染HCT-... 目的探讨MAP1LC3B在结直肠癌(CRC)中的表达与侵袭转移及自噬的作用机制。方法采用免疫组织化学方法检测92例结直肠癌组织中MAP1LC3B的表达情况,结合临床病理及随访资料进行分析。体外构建慢病毒pLKO.1-MAP1LC3B-siRNA干扰质粒,转染HCT-116细胞株,对照组转染空质粒;采用MTT和侵袭小室实验检测细胞增殖侵袭能力。免疫荧光观察细胞形态。定量RT-PCR和Western blot方法检测MAP1LC3B、mTOR、ATG5和HIF-1α蛋白表达水平。结果 MAP1LC3B高表达存在于82.6%(76/92)癌组织,高于癌旁组织中的阳性率11.95%(11/92),差异有统计学意义(P<0.05);MAP1LC3B蛋白高表达与肝转移、TNM分期和不良预后具有显著相关性(P<0.05);抑制MAP1LC3B表达降低HCT-116细胞侵袭能力;并促进细胞发生自吞噬;下调mTOR、ATG5和HIF-1α蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MAP1LC3B是CRC新的预后指标;MAP1LC3B调控mTOR、ATG5和HIF-1α表达介导自吞噬的作用分子机制在CRC侵袭转移中起重要作用。 展开更多
关键词 结直肠癌 MAP1lc3b 自吞噬 肝转移
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三倍体雌性虹鳟性腺发育过程中lc3b基因的表达分析 被引量:1
9
作者 黄天晴 王星然 +2 位作者 王彦娜 孙慧智 韩英 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期179-184,共6页
旨在证明细胞自噬与三倍体雌性虹鳟性腺败育的关系。利用RT-PCR扩增虹鳟自噬基因lc3b(Microtubule associated protein 1 light chain 3 beta,lc3b)的编码区序列,通过透射电镜观察三倍体雌性虹鳟不同发育阶段性腺中自噬小体的形态,结合... 旨在证明细胞自噬与三倍体雌性虹鳟性腺败育的关系。利用RT-PCR扩增虹鳟自噬基因lc3b(Microtubule associated protein 1 light chain 3 beta,lc3b)的编码区序列,通过透射电镜观察三倍体雌性虹鳟不同发育阶段性腺中自噬小体的形态,结合不同发育阶段性腺中lc3b基因和蛋白的表达,来证明细胞自噬的发生。结果表明,在200 dpf-270 dpf(Days post fertilization,dpf)这个发育阶段,lc3b基因以及自噬蛋白LC3B-II/LC3B-I的表达处于相对较高的水平,在这个时期内,都观察到了自噬体结构的存在。这些结果证明了性腺细胞自噬为三倍体雌性虹鳟性腺败育的主要原因之一。 展开更多
关键词 三倍体 虹鳟 自噬 lc3b 性腺发育
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稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块自噬相关蛋白Atg5和LC3B的影响 被引量:3
10
作者 李思琦 赵兵 +2 位作者 张磊 肖福龙 宫丽鸿 《中医药信息》 2022年第12期11-15,20,共6页
目的:观察搜风祛痰中药稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块自噬相关蛋白Atg5和LC3B的影响。方法:选取6周龄ApoE基因敲除小鼠,采用高脂饲料喂养的方法建立动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块模型,并随机分为模型组,稳斑汤低、中、... 目的:观察搜风祛痰中药稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块自噬相关蛋白Atg5和LC3B的影响。方法:选取6周龄ApoE基因敲除小鼠,采用高脂饲料喂养的方法建立动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块模型,并随机分为模型组,稳斑汤低、中、高剂量组,阿托伐他汀组;另取C57BL/6J小鼠设为空白对照组。模型组和空白对照组均给予0.9%生理盐水灌胃,稳斑汤低、中、高剂量组和阿托伐他汀组分别给予不同剂量的稳斑汤和阿托伐他汀片干预。13周后将小鼠麻醉处死,透射电镜下观察小鼠主动脉自噬小体,然后采用蛋白质印记(Western blot)法检测Atg5和LC3B蛋白表达水平。结果:透射电镜观察显示,空白对照组有少量自噬小体出现,模型组无明显自噬小体出现;与模型组相比,稳斑汤各剂量组和阿托伐他汀组的自噬小体数量均显著增多,其中阿托伐他汀组的数量最多。与空白对照组相比,模型组小鼠腹主动脉组织中Atg5和LC3B蛋白表达水平均降低(P<0.05);与模型组相比,稳斑汤各剂量组和阿托伐他汀组小鼠腹主动脉组织中Atg5和LC3B蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论:搜风祛痰中药稳斑汤可以明显提高ApoE基因敲除小鼠AS不稳定斑块自噬相关蛋白Atg5和LC3B的表达水平,这可能是稳斑汤影响动脉粥样硬化斑块稳定性的分子机制之一。 展开更多
关键词 稳斑汤 搜风祛痰 动脉粥样硬化 不稳定斑块 APOE基因敲除小鼠 Atg5 lc3b
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胃癌组织中LC3B和p62的表达和临床意义 被引量:10
11
作者 侯德法 《安徽医药》 CAS 2017年第9期1647-1650,共4页
目的探讨细胞自噬相关标志物LC3B和p62在人胃癌组织中的表达水平及其临床意义。方法收集80例石蜡包埋人胃癌组织,采用免疫组织化学两步实验法检测LC3B和p62的表达状况,分析它们与胃癌患者临床病理学特征的关系。结果胃癌组织LC3B和p62... 目的探讨细胞自噬相关标志物LC3B和p62在人胃癌组织中的表达水平及其临床意义。方法收集80例石蜡包埋人胃癌组织,采用免疫组织化学两步实验法检测LC3B和p62的表达状况,分析它们与胃癌患者临床病理学特征的关系。结果胃癌组织LC3B和p62的高表达率分别为68.8%和62.5%;LC3B和p62表达状况与胃癌肿瘤大小、组织学分级、肿瘤淋巴结转移情况和临床分期均差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示:胃癌组织LC3B和p62表达水平呈显著正相关(r_s=0.338,P<0.01)。结论肿瘤细胞自噬行为可能参与了人胃癌的恶性演进,LC3B和p62联合表达状况可能作为判定胃癌病情进展以及预测患者预后的潜在标志物。 展开更多
关键词 胃细胞癌 自噬 lc3b P62 免疫组织化学
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LC3B-Ⅱ在不同级别胶质瘤中的表达及意义 被引量:1
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作者 廉民学 孙念荣 +2 位作者 姜海涛 梁晨 郭世文 《现代肿瘤医学》 CAS 2015年第23期3407-3410,共4页
目的:探讨微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3B-Ⅱ,LC3BⅡ)在不同级别胶质瘤中的表达及意义。方法:免疫组化法检测45例不同级别胶质瘤中LC3B-Ⅱ的表达,并结合临床资料分析其与胶质瘤临床特征之间... 目的:探讨微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3B-Ⅱ,LC3BⅡ)在不同级别胶质瘤中的表达及意义。方法:免疫组化法检测45例不同级别胶质瘤中LC3B-Ⅱ的表达,并结合临床资料分析其与胶质瘤临床特征之间的关系。结果:LC3B-Ⅱ在高级别胶质瘤组织中的表达高于低级别胶质瘤组织,差异具有统计学意义。胶质瘤组织中LC3B-Ⅱ的表达不受年龄、性别因素的影响。结论:在高级别胶质瘤中细胞自噬较为严重,LC3B-Ⅱ可作为胶质瘤的辅助病理指标。 展开更多
关键词 胶质瘤 细胞自噬 lc3b-Ⅱ 免疫组化
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Beclin1、MAP1LC3B和mTOR在宫颈病变中的表达及临床意义 被引量:5
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作者 张晶 舒丽莎 +1 位作者 陈江平 张林西 《河北北方学院学报(自然科学版)》 2017年第6期1-5,共5页
目的检测Beclin1、MAP1LC3B及mTOR在宫颈病变中的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫组织化学方法,检测宫颈病变中Beclin1、MAP1LC3B及mTOR的表达,并与正常宫颈组织对照。结果Beclin1在正常宫颈组、低度鳞状上皮内病变(low-grade squa... 目的检测Beclin1、MAP1LC3B及mTOR在宫颈病变中的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫组织化学方法,检测宫颈病变中Beclin1、MAP1LC3B及mTOR的表达,并与正常宫颈组织对照。结果Beclin1在正常宫颈组、低度鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)组、高度鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)组和宫颈鳞癌组中的阳性表达率分别为95.00%、84.00%、62.00%及34.00%;MAP1LC3B的阳性表达率分别为90.00%、86.00%、54.00%及22.00%;mTOR阳性表达率分别为35.00%、44.00%、72.00%及86.00%,不同组中的表达差异均有统计学意义(P<0.01)。在宫颈癌患者中,Beclin1阳性表达与淋巴转移及临床分期相关,MAP1LC3B阳性表达与肿瘤分化相关,mTOR的阳性表达则与淋巴转移相关。MAP1LC3B与Beclin1的表达呈正相关而与mTOR的表达呈负相关。结论自噬相关基因所反应的自噬水平随着宫颈病变的进展而下降,推测自噬功能缺失可能是促使宫颈病变持续发展的原因之一。 展开更多
关键词 自噬 BECLIN1 MAP1lc3b MTOR 宫颈病变
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胃癌组织PTEN和LC3B的表达及意义 被引量:2
14
作者 颜伟 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第19期4145-4147,共3页
目的检测胃癌中PTEN和LC3B的表达,探讨其表达的临床意义及关系。方法本实验以70例胃癌标本作为观察组,56例正常胃黏膜组织作为对照组,应用量子点免疫荧光方法检测二组中PTEN和LC3B的表达,探讨其表达差别及相关性。结果观察组中PTEN的表... 目的检测胃癌中PTEN和LC3B的表达,探讨其表达的临床意义及关系。方法本实验以70例胃癌标本作为观察组,56例正常胃黏膜组织作为对照组,应用量子点免疫荧光方法检测二组中PTEN和LC3B的表达,探讨其表达差别及相关性。结果观察组中PTEN的表达明显低于对照组,观察组中LC3B的表达明显高于对照组,观察组中PTEN和LC3B的表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移和Ki67的表达有关。相关性分析显示观察组中PTEN和LC3B的表达不具有相关性。结论胃癌PTEN和LC3B异常表达,二者对病变进展具有重要作用。 展开更多
关键词 胃癌 PTEN lc3b 量子点免疫荧光
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HP感染的消化性溃疡伴胃癌前病变与LC3B的相关性研究 被引量:2
15
作者 任江南 李立平 +1 位作者 李啸峰 郭惠学 《深圳中西医结合杂志》 2016年第12期8-9,共2页
目的:阐明幽门螺杆菌(HP)感染伴胃黏膜癌前病变与自噬之间的关系。方法:纳入中山大学附属第五医院消化科胃镜及黏膜下活检确诊为消化性溃疡患者60例,所有患者均采用半定量RT-PCR方法、Western blotting方法检测自噬因子LC3B表达水平,同... 目的:阐明幽门螺杆菌(HP)感染伴胃黏膜癌前病变与自噬之间的关系。方法:纳入中山大学附属第五医院消化科胃镜及黏膜下活检确诊为消化性溃疡患者60例,所有患者均采用半定量RT-PCR方法、Western blotting方法检测自噬因子LC3B表达水平,同时行碳14呼气试验进行HP检测,比较HP感染的消化性溃疡伴胃癌前病变与自噬因子LC3B表达水平之间的相关度。结果:LC3B相对表达量与患者的年龄、性别、发病的部位及黏膜损伤(受累范围)的大小差异无统计学意义(P>0.05);而HP感染、胃上皮不典型增生、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生与LC3B的相对表达量具有统计学意义(P<0.05)。结论:自噬因子LC3B mRNA及蛋白高表达与HP感染及消化性溃疡伴胃黏膜不典型增生具有相关性。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 lc3b 消化性溃疡
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组蛋白去乙酰化酶6介导血清饥饿条件下LC3B-Ⅱ的去乙酰化作用
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作者 刘坤鹏 王遥 +3 位作者 徐丽慧 潘浩 欧阳东云 何贤辉 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期517-521,共5页
自噬是哺乳动物细胞内控制错误折叠蛋白和受损细胞器降解的重要机制,营养、氨基酸以及细胞因子的缺乏均能诱导自噬.在自噬的信号通路中,一些自噬蛋白已被证明受到乙酰化修饰的调控,进而影响其催化活性的发挥.但是没有研究证明微管结合蛋... 自噬是哺乳动物细胞内控制错误折叠蛋白和受损细胞器降解的重要机制,营养、氨基酸以及细胞因子的缺乏均能诱导自噬.在自噬的信号通路中,一些自噬蛋白已被证明受到乙酰化修饰的调控,进而影响其催化活性的发挥.但是没有研究证明微管结合蛋白1轻链3(LC3)是否受到乙酰化调控.该研究证明了在血清饥饿诱导的自噬过程中,LC3B-Ⅱ的乙酰化程度大幅降低.HDAC6特异性抑制剂tubacin处理细胞后,LC3B-Ⅱ的乙酰化修饰程度随之升高.同时,血清饥饿条件下,抑制HDAC6的催化活性降低了自噬通路的降解能力.该研究结果表明在血清饥饿诱导的自噬过程中,LC3B-Ⅱ发生去乙酰化,其去乙酰化调控蛋白可能是HDAC6,抑制HDAC6的催化活性会减少自噬途径蛋白的降解.HDAC6介导的LC3乙酰化修饰为自噬降解和自噬蛋白调控的研究提供了新思路. 展开更多
关键词 细胞自噬 lc3b—II 去乙酰化作用
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pcDNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体的构建
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作者 刘宣宣 王文倩 +3 位作者 毛伟平 严浩 孟素芳 王芳 《安徽农业科学》 CAS 2015年第6期82-84,97,共4页
[目的]构建含GFP-LC3B基因的真核表达载体。[方法]从HEK293细胞中提取总RNA,以反转录得到c DNA为模板,根据Gen Bank公布的人源LC3B基因序列设计引物,通过PCR方式扩增目的基因,将基因和pc DNA3.1-GFP载体双酶切后,通过T4连接酶将基因连接... [目的]构建含GFP-LC3B基因的真核表达载体。[方法]从HEK293细胞中提取总RNA,以反转录得到c DNA为模板,根据Gen Bank公布的人源LC3B基因序列设计引物,通过PCR方式扩增目的基因,将基因和pc DNA3.1-GFP载体双酶切后,通过T4连接酶将基因连接到pc DNA3.1-GFP载体上,得到pc DNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体。[结果]扩增出目的基因,构建了含目的基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B。[结论]成功构建了含有人LC3B基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B,为研究细胞自噬提供了基础。 展开更多
关键词 HEK293 CELLS lc3b pcDNA3.1-GFP 真核表达
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GFP-LC3B真核表达载体的构建及表达鉴定
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作者 朱杰 丁丽华 +6 位作者 刘婕 禾荣华 张亚楠 陈志达 罗晓丽 叶棋浓 吕朝晖 《生物技术通讯》 CAS 2015年第4期485-488,共4页
目的:构建人自噬相关基因LC3B的真核表达载体p EGFP-C1-LC3B,并鉴定其表达。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增LC3B全长基因,将其克隆至p EGFP-C1表达载体,得到p EGFP-C1-LC3B重组质粒,酶切和测序鉴定后,转染ZR75-1细胞,Western印迹检测真... 目的:构建人自噬相关基因LC3B的真核表达载体p EGFP-C1-LC3B,并鉴定其表达。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增LC3B全长基因,将其克隆至p EGFP-C1表达载体,得到p EGFP-C1-LC3B重组质粒,酶切和测序鉴定后,转染ZR75-1细胞,Western印迹检测真核细胞中GFP-LC3B融合蛋白的表达,用倒置荧光显微镜观察自噬诱导剂雷帕霉素处理和未处理ZR75-1细胞质中GFP-LC3B的分布。结果:Western印迹可见GFP-LC3B融合蛋白表达条带;在荧光显微镜下,ZR75-1细胞内可见绿色荧光,雷帕霉素刺激后有明显绿色荧光聚集体形成。结论:人自噬相关基因LC3B的真核表达载体p EGFP-C1-LC3B构建成功,为进一步研究自噬在乳腺癌细胞中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 自噬 lc3b 真核表达载体 绿色荧光蛋白
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应用LC3B-PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用
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作者 洪甜 闫志风 +2 位作者 张立 徐小洁 叶棋浓 《生物技术通讯》 CAS 2017年第4期490-494,共5页
目的:构建带Myc标签的LC3B-PLA2基因的真核表达质粒,获得LC3B-PLA2融合蛋白,并应用LC3B-PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,PCR扩增获得LC3B序列,与PLA2G10拼接后插入pCMV-Myc载体,用构建的重组质粒... 目的:构建带Myc标签的LC3B-PLA2基因的真核表达质粒,获得LC3B-PLA2融合蛋白,并应用LC3B-PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,PCR扩增获得LC3B序列,与PLA2G10拼接后插入pCMV-Myc载体,用构建的重组质粒转染HEK293T细胞,Western印迹检测融合蛋白的表达,用LC3B-PLA2与Atg4B共转染的方法检测Atg4B对LC3B的切割作用。结果:菌液PCR、重组质粒双酶切及测序均表明重组质粒构建成功,Western印迹结果表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达,LC3B-PLA2真核表达蛋白能够应用于Atg4B对LC3B切割作用的研究。结论:构建了pCMV-Myc-LC3B-PLA2真核表达质粒,LC3B-PLA2融合蛋白在Atg4B对LC3B切割作用的研究中至关重要,为进一步研究Atg4B在自噬过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 lc3b-PLA2 Atg4B 自噬 重组质粒
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紫贻贝LC3B蛋白的原核表达及抗血清制备 被引量:4
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作者 余振兴 朱倩 姚翠鸾 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期498-505,共8页
LC3B是检测自噬程度的标志性分子,但是在低等动物体内缺少特异性强的LC3B抗体。为研究贝类的自噬性细胞死亡,本研究通过将紫贻贝的LC3B编码序列克隆到pET-32a原核表达载体中构建重组表达载体,进而对IPTG诱导浓度、诱导表达时间进行摸索... LC3B是检测自噬程度的标志性分子,但是在低等动物体内缺少特异性强的LC3B抗体。为研究贝类的自噬性细胞死亡,本研究通过将紫贻贝的LC3B编码序列克隆到pET-32a原核表达载体中构建重组表达载体,进而对IPTG诱导浓度、诱导表达时间进行摸索;采用亲和层析对重组蛋白进行纯化,并采用SDS-PAGE检测及Western blot进行验证;利用获得的重组蛋白免疫新西兰兔,制备其多克隆抗体。结果显示,在20℃,转速为150 r/min条件下,当IPTG浓度为0.6 mmol/L,诱导表达10 h后,可以得到高表达量、可溶性的重组MgLC3B-His融合蛋白,亲和层析纯化后,获得单一条带的MgLC3B-His可溶性重组蛋白;采用纯化后的MgLC3B-His融合蛋白对新西兰兔进行多次免疫,采集分离兔抗血清并利用protein A纯化,获得紫贻贝的LC3B多克隆抗体,效价为25 600。紫贻贝LC3B多克隆抗体的成功制备,为今后深入开展紫贻贝及相近物种的细胞自噬研究奠定了基础。 展开更多
关键词 紫贻贝 lc3b 重组表达 细胞自噬 多克隆抗体
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