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基于LC-MALDI的蛋白质组学技术建立与评价 被引量:4
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作者 陈默 王秋霞 +4 位作者 郑颖 唐玲 周少霞 付鹏 马洪雨 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2016年第9期61-65,共5页
建立了一套适用于LC-MALDI系统的标记定量蛋白质组学分析技术,主要包括蛋白提取、溶液内酶解、肽段标记、液相分离、质谱检测、生物信息学分析等步骤。将该方法与传统的双向凝胶电泳技术进行了比较与评价,该方法的实验结果可靠、灵敏度... 建立了一套适用于LC-MALDI系统的标记定量蛋白质组学分析技术,主要包括蛋白提取、溶液内酶解、肽段标记、液相分离、质谱检测、生物信息学分析等步骤。将该方法与传统的双向凝胶电泳技术进行了比较与评价,该方法的实验结果可靠、灵敏度高、实验周期短。为今后的蛋白质组学研究工作提供了有效的参考与借鉴。 展开更多
关键词 蛋白质组学 lc-maldi 发标记定量
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基于四重iTRAQ标记结合LC-MALDI-TOF-TOF方法分析雌二醇和它莫西芬对MCF-7乳腺癌细胞内蛋白质含量影响的研究 被引量:5
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作者 倪国新 郭立海 +5 位作者 朱镭 郭妍 徐学敏 林标扬 刘建华 李伟 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1283-1287,共5页
应用体外iTRAQ标记结合LC-MALDI-TOF-TOF方法对雌二醇刺激、雌二醇与它莫西芬共同处理,将它莫西芬处理与正常培养的MCF-7乳腺癌细胞内蛋白质表达的差异进行了比较分析。结果表明:各实验组与对照组之间存在数种上调或下调1倍以上的差异... 应用体外iTRAQ标记结合LC-MALDI-TOF-TOF方法对雌二醇刺激、雌二醇与它莫西芬共同处理,将它莫西芬处理与正常培养的MCF-7乳腺癌细胞内蛋白质表达的差异进行了比较分析。结果表明:各实验组与对照组之间存在数种上调或下调1倍以上的差异表达蛋白质,雌二醇可显著改变74种蛋白质的含量,雌二醇与它莫西芬共同处理引起26种蛋白质水平的显著变化,它莫西芬引起18种蛋白质表达的明显改变。各组之间既有变化趋势相同的蛋白质,也有变化趋势相反的蛋白质。 展开更多
关键词 iTRAQ标记 lc-maldi-TOF-TOF 雌二醇 它莫西芬
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枯草芽孢杆菌F-2抗植物病原真菌活性物质的研究 被引量:4
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作者 鲁小城 赵宇华 方萍 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期34-39,共6页
枯草芽孢杆菌F-1和F-2与尖孢镰刀菌的对峙实验中,F-1没有抑菌作用,而F-2表现出强抑菌效果.为了分析测定F-2的抑菌活性物质,对F-1和F-2胞外代谢物粗提液的HPLC谱图进行比较,发现F-2具有F-1所没有的特征代谢产物.使用LC-MS对F-2的特征产... 枯草芽孢杆菌F-1和F-2与尖孢镰刀菌的对峙实验中,F-1没有抑菌作用,而F-2表现出强抑菌效果.为了分析测定F-2的抑菌活性物质,对F-1和F-2胞外代谢物粗提液的HPLC谱图进行比较,发现F-2具有F-1所没有的特征代谢产物.使用LC-MS对F-2的特征产物进行分析,推测主要产物的分子量为1477.0、1489.1和1505.1.进一步采用MALDI-TOFMS对F-2粗提液进行分析,发现F-2产生两组分子量相差14Da(CH2)的同系物.其中一组的分子量依次为1462.8、1476.8、1490.8、1504.8和1518.9,通过质量指纹谱技术鉴定为脂肽抗生素C14-18 Fengycin B.另一组的分子量依次为1432.8、1446.8、1460.8、1474.8和1488.9,与C14-18 Fengycin A对应分子分子量相差2Da,推测可能是Fengycin A的一种异构体,其碳链中具有一个双键,具体性质有待进一步分析. 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 脂肽抗生素 质量指纹谱技术 LC—MS MALDI—TOF MS
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液质联用技术鉴定蛋白的方法建立 被引量:1
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作者 王富强 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1135-1138,共4页
目的:建立液质联用鉴定蛋白的方法。方法:通过与目前最常用质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定蛋白对比,判断液相色谱与质谱联用鉴定蛋白技术——增加色谱(CapLC)分离,用质谱鉴定蛋白是否是一种可行的实验方法。结果:直接使用MALDI-TOF/TOF-MS... 目的:建立液质联用鉴定蛋白的方法。方法:通过与目前最常用质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定蛋白对比,判断液相色谱与质谱联用鉴定蛋白技术——增加色谱(CapLC)分离,用质谱鉴定蛋白是否是一种可行的实验方法。结果:直接使用MALDI-TOF/TOF-MS鉴定出酶切产物中的17种肽段,覆盖率:31.5%检索的得分为130;CapLC联合使用MALDI-TOF/TOF-MS共鉴定出35种肽段,覆盖率为59.35%,检索的得分为2976。结论:CapLC联合使用MALDI-TOF/TOF-MS对酶切产物进行鉴定的方法,是一种可行的实验方法,并且该技术路线与MALDI-TOF/TOF-MS相比,是更加准确有效的蛋白鉴定方法。 展开更多
关键词 液质联用 飞行时间质谱 毛细管色谱
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红莲型水稻二核期花粉蛋白质组学分析 被引量:1
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作者 文李 刘盖 +2 位作者 王坤 谭碧君 陶钧 《华南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2012年第2期115-119,140,共6页
采用固相pH梯度等电聚焦/SDS-PAGE对红莲型细胞质雄性不育水稻的不育系、保持系和杂种F1代二核期花粉总蛋白质进行了双向电泳分离,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱.对其中15差异点进行了肽质指纹图分析或者LC-MS/MS分析,共有12... 采用固相pH梯度等电聚焦/SDS-PAGE对红莲型细胞质雄性不育水稻的不育系、保持系和杂种F1代二核期花粉总蛋白质进行了双向电泳分离,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱.对其中15差异点进行了肽质指纹图分析或者LC-MS/MS分析,共有12个点得到鉴定.不育系相对于可育系有部分参与蛋白质缺失或表达量降低,可能与线粒体提供能量不足而导致的花粉不能正常发育有关. 展开更多
关键词 水稻 双向凝胶电泳 MALDI-TOF/MS LC-MS/MS
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基因工程菌枯草芽孢杆菌GEB3产生的脂肽类抗生素及其生物活性研究 被引量:49
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作者 高学文 姚仕义 +2 位作者 Huong Pham Joachim Vater 王金生 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1496-1501,共6页
利用MALDI TOF MS技术 ,鉴定了将lpaB3基因转入枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis 168菌株所构建的工程菌GEB3产生的脂肽类抗生素种类。结果表明 ,GEB3仅产生表面活性素 (surfactin) 1种脂肽类抗生素。经LC MS分析 ,GEB3产生由 13、14和 15... 利用MALDI TOF MS技术 ,鉴定了将lpaB3基因转入枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis 168菌株所构建的工程菌GEB3产生的脂肽类抗生素种类。结果表明 ,GEB3仅产生表面活性素 (surfactin) 1种脂肽类抗生素。经LC MS分析 ,GEB3产生由 13、14和 15个碳原子的脂肪酸链构成的标准表面活性素变异体 (standardsurfactinisoforms)。生物活性检测表明 。 展开更多
关键词 基因工程 菌枯草芽孢杆菌 GEB3 脂肽类抗生素 生物活性 遗传操作性 小麦 纹枯病菌 稻瘟病
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质谱技术的新进展及其在生命科学中的应用 被引量:1
7
作者 文丽君 曾志 杨定乔 《海南师范学院学报(自然科学版)》 CAS 2002年第3期209-213,共5页
文章综述了质谱技术的新进展与CZE MS MS ,MALDI-TOF -MS ,LC -ESI-MS等质谱新技术及它们在生命科学中的应用 .指出这些质谱新技术已被证明在多肽和蛋白质的鉴定、单核苷酸、核酸、糖蛋白的分析等领域是很有效的工具 .
关键词 质谱技术 生命科学 应用 CZE/MS/MS MALDI-TOF-MS LC-ESI-MS 生物分子结构鉴定 生物分子序列分析
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蛋白质组学样品消化条件的优化 被引量:1
8
作者 黄竞男 张旭敏 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期2884-2891,共8页
随着质谱的飞速发展,基于质谱的“鸟枪法”技术广泛的应用于大规模的蛋白质组学分析。化学反应保护效率过低或者酶切效率过低则会降低鉴定效率,并且在现有的计算方式下会丢失很多肽段信息。因此,蛋白质样品的前处理在现有的蛋白质组学... 随着质谱的飞速发展,基于质谱的“鸟枪法”技术广泛的应用于大规模的蛋白质组学分析。化学反应保护效率过低或者酶切效率过低则会降低鉴定效率,并且在现有的计算方式下会丢失很多肽段信息。因此,蛋白质样品的前处理在现有的蛋白质组学研究中发挥重要作用。本研究对蛋白质的烷基化试剂的反应条件进行优化以提高烷基化效率,同时优化酶解Buffer提高酶切效率以及增加酶量和引入多种酶以提高酶切效率等,最终确定了蛋白质前处理的最优条件,最终使用1μg样品在一次质谱分析鉴定到(2 425±7)个蛋白质,较未优化的方法提高了31%。优化后的蛋白质前处理方法可有效提高现有蛋白质组学的研究效率,可进一步应用于蛋白质的定量及动态分析研究。 展开更多
关键词 蛋白质组学 LC-MS/MS MALDI-TOF 蛋白质样品前处理 优化
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Rapid <i>In-Vitro</i>and <i>In-Vitro</i>Detection of <i>Chalara fraxinea</i>by Means of Mass Spectrometric Techniques 被引量:1
9
作者 Thi Lam Huong Pham Irmtraut Zaspel +2 位作者 Michael Schuemann Heike Stephanowitz Eberhard Krause 《American Journal of Plant Sciences》 2013年第2期444-453,共10页
For the first time, mass spectrometric (MS) techniques were employed to rapidly detect the pathogen Chalara fraxinea in-vitro and directly in-vivo in tissues of diseased ash trees caused by C. fraxinea, using a range ... For the first time, mass spectrometric (MS) techniques were employed to rapidly detect the pathogen Chalara fraxinea in-vitro and directly in-vivo in tissues of diseased ash trees caused by C. fraxinea, using a range of characteristic novel secondary metabolites of C. fraxinea as chemical markers for the presence of the pathogen. We have found an evident correlation between the presence and amount of these-only for C. fraxinea characteristic and novel-secondary metabolites (named chalarafraxinines) and the degree of disease of respective infected ash seedlings. As demonstrated in this work, the MS based high-throughput-screening approach constitute an alternative to the time consuming and expensive micro biological isolation procedures for detection of the pathogen C. fraxinea and furthermore, can be used to rapidly test ash genotypes for resistance / susceptibility to C. fraxinea infection. 展开更多
关键词 Chalara fraxinea RAPID In-Vitro In-Vitro DETECTION MS TECHNIQUES MALDI LC-MS
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Lipopeptide Antibiotics Produced by the Engineered Strain Bacillus subtilis GEB3 and Detection of Its Bioactivity 被引量:1
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作者 GAOXue-wen YAOShi-yi +2 位作者 HuongPham JoachimVater WANGJin-sheng 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2004年第3期192-197,共6页
MALDI-TOF-MS technology was used for identification of lipopeptide antibiotics producedby GEB3 strain, a derivative of Bacillus subtilis 168 which was transformed by lpaB3gene. The result showed GEB3 only produced lip... MALDI-TOF-MS technology was used for identification of lipopeptide antibiotics producedby GEB3 strain, a derivative of Bacillus subtilis 168 which was transformed by lpaB3gene. The result showed GEB3 only produced lipopeptide antibiotic surfactin. The analysisby LC-MS demonstrated that GEB3 produced standard surfactin isoforms with side chainlengths of 13,14 and 15 carbon atoms. The bioactivity detection of surfactin indicatedthat the surfactin produced by GEB3 had inhibition effect on plant pathogens Rhizoctoniasolani and Pyricularia oryzae. 展开更多
关键词 Engineered strain GEB3 Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of- flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) LC-MS Lipopeptide antibiotics Surfactin Plant pathogenic fungi Inhibition effect
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疏水型色谱饼对人血清蛋白质组学样品的快速分离与制备
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作者 李瑛 白泉 +1 位作者 陈刚 王骊丽 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期331-334,共4页
建立了疏水型色谱饼(10mm×20mm i.d.)与反相色谱(RPLC)离线二维色谱快速分离制备人血清蛋白质组学样品,并用基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行检测的方法。以4种标准蛋白质的稀溶液为模型进行分离富集,得到细胞... 建立了疏水型色谱饼(10mm×20mm i.d.)与反相色谱(RPLC)离线二维色谱快速分离制备人血清蛋白质组学样品,并用基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行检测的方法。以4种标准蛋白质的稀溶液为模型进行分离富集,得到细胞色素c(Cyt-c)与肌红蛋白(Myo)的检出限均为1pmol/μL,溶菌酶(Lys)和胰岛素(Ins)的检出限为0.1pmol/μL。将此方法用于人血清蛋白质组学样品的分离与制备,随着血清处理量的增大,质谱可检出的组分数目与信号强度均增加,当血清处理量达到1.0mL时,可检出低丰度蛋白质或多肽285个(相对分子质量均在15000以下)。研究中将1μgCyt-c加入到0.5mL血清中,用上述方法在分离富集低丰度Cyt-c上取得了很好的效果。结果表明,采用疏水型色谱饼与反相色谱联用技术不仅可对血清样品中低丰度蛋白质进行有效的分离和富集,而且一次样品的处理量大,可显著提高低丰度蛋白质的分析、检测水平。 展开更多
关键词 二维液相色谱 基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱 色谱饼 蛋白质组学 人血清
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Edman降解中异硫氰酸苯酯新修饰位点的发现和验证 被引量:6
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作者 周艳卿 蒋小岗 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期752-756,共5页
Edman降解是最早建立的一种用于多肽和蛋白质氨基端测序的方法,该方法现在仍被广泛用于生物化学领域。随着高通量蛋白质组学技术的发展和应用,该方法中的异硫氰酸苯酯反应被用于修饰蛋白质氨基端,并用于检测蛋白质水解位点。但还没有异... Edman降解是最早建立的一种用于多肽和蛋白质氨基端测序的方法,该方法现在仍被广泛用于生物化学领域。随着高通量蛋白质组学技术的发展和应用,该方法中的异硫氰酸苯酯反应被用于修饰蛋白质氨基端,并用于检测蛋白质水解位点。但还没有异硫氰酸苯酯是否可以修饰其他氨基酸侧链并影响多肽序列分析的研究。为了探究其修饰其他氨基酸的可能性,本文利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)研究了异硫氰酸苯酯对一个模型肽的化学修饰。质谱数据解析后发现在高浓度异硫氰酸苯酯的反应条件下,组氨酸上可以引入一个新的异硫氰酸苯酯修饰位点。这一修饰位点的发现预示着通过改变实验条件或分析方法,可以更准确地利用Edman降解和蛋白质组学技术分析多肽和蛋白质。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 液相色谱-串联质谱 Edman降解 异硫氰酸苯酯 模型肽 组氨酸
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