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基于N基因的RT-LAMP技术检测PEDV、TGEV、PDCoV三种猪腹泻冠状病毒的研究 被引量:1
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作者 邓可辉 陈志飞 +6 位作者 俞婷 王志林 王修武 郭智轩 李松倍 魏文康 贺东生 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期70-79,共10页
本研究成功建立了检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)3种猪冠状病毒的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为现场快速诊断提供技术支持。根据GenBank公布的PEDV、TGEV、PDCoV的N基因保守序... 本研究成功建立了检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)3种猪冠状病毒的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为现场快速诊断提供技术支持。根据GenBank公布的PEDV、TGEV、PDCoV的N基因保守序列作为靶序列设计了3套LAMP检测引物,并通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及临床样品检测,分别建立了3种快捷、敏感的猪冠状病毒RT-LAMP检测方法。结果显示:所建立的PEDV、TGEV、PDCoV 3种冠状病毒RT-LAMP检测方法的最佳反应温度分别为65℃、63℃、63℃,3种检测方法均可在45 min左右完成恒温扩增,扩增出特异性阶梯状条带,且不依赖于PCR仪等昂贵设备,仅需普通恒温装置即可反应。所建立的检测方法对PEDV、TGEV、PDCoV分别可以达到的检测下限为20、23、10拷贝/μL,敏感性较好;所建立的3种检测方法分别只检测出PEDV、TGEV、PDCoV,且与常见的猪源性病毒均无交叉反应,特异性好。用所建立的3种RT-LAMP检测方法对45份猪腹泻病料进行检测,PEDV、TGEV、PDCoV阳性率分别为33.33%(15/45)、22.22%(10/45)、13.33%(6/45),均比常规RT-PCR检测阳性率高。与常规RT-PCR相比较,本研究建立的方法操作简便快速、经济,且检测设备门槛低,更适用于基层临床检测。 展开更多
关键词 冠状病毒 反转录环介导等温扩增 检测方法
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月季3种病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用
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作者 李振锋 袁志豪 +4 位作者 陆月霞 罗云 黄冬华 王国平 蔡丽 《山西农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期1-9,共9页
[目的]月季是我国重要的观赏花卉,李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)、月季潜隐病毒1(rose cryptic virus 1,RCV1)是侵染月季的主要病毒,与其它病毒复合侵染月季... [目的]月季是我国重要的观赏花卉,李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)、月季潜隐病毒1(rose cryptic virus 1,RCV1)是侵染月季的主要病毒,与其它病毒复合侵染月季时,对其生长和发育可造成严重影响。本文旨在建立灵敏、便捷地检测月季中这3种病毒的RT-LAMP检测方法。[方法]本研究以病毒CP基因为靶序列设计特异性引物,建立侵染月季的PNRSV、ASGV和RCV1的RT-LAMP检测方法,并对反应体系中Mg^(2+)浓度和dNTP使用浓度、反应温度和反应时间进行了优化,并对反应灵敏度和特异性进行了检测。[结果]该方法在恒温条件(61℃)下即可对目标病毒实现可视化特异性检测,检测体系中Mg^(2+)和dNTP最佳使用浓度分别为5.0 mmol/L和1.2 mmol/L;本研究所建立的RT-LAMP检测方法,RCV1、PNRSV和ASGV可以检测到病毒的最低浓度分别为3.19×10^(5)、6.44×10^(4)和4.04×10^(4)拷贝/μL,灵敏度是RT-PCR的100~1000倍,而且检测体系具有很好的反应特异性,与侵染月季的其它病毒之间不存在交叉反应;使用该RT-LAMP检测方法随机对田间19个样品进行检测,可通过颜色变化,能准确检测出样品中的目标病毒,而无需借助琼脂糖凝胶电泳或其它专门仪器。[结论]该方法可通过直接添加染料实现可视化,具有快速、便捷、特异性好特点,适用于侵染月季的PNRSV、ASGV和RCV1的快速诊断及田间监测。 展开更多
关键词 月季 病毒 RT-lamp 检测方法
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B亚型禽偏肺病毒可视化荧光RT-LAMP方法的建立
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作者 赵俊柯 谢芝勋 +7 位作者 余丹 张艳芳 谢志勤 范晴 尹文巧 杨冰怡 黄青红 喻华英 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期92-98,共7页
为了能快速鉴别B亚型禽偏肺病毒(Avian metapneumovirus B,aMPVB)与其他禽类常见病毒,试验基于aMPVB F基因的保守区域设计一套特异性环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplilication,LAMP)引物,包括外引物F3和B3,内引物FIP(F1c+... 为了能快速鉴别B亚型禽偏肺病毒(Avian metapneumovirus B,aMPVB)与其他禽类常见病毒,试验基于aMPVB F基因的保守区域设计一套特异性环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplilication,LAMP)引物,包括外引物F3和B3,内引物FIP(F1c+F2)和BIP(B1c+B2),环引物Floop和Bloop,其中FIP的5′端用淬灭基团BHQ2标记,同时在F3、B3之间引入1条探针FD,其3′端用CY5荧光基团标记,建立可视化荧光RT-LAMP方法,对该方法进行反应条件优化及特异性、敏感性检测,并利用该方法对临床样品进行检测。结果表明:建立的可视化荧光RTLAMP方法的最佳探针复合物浓度为0.32μmol/L,最佳反应温度为63℃;该方法仅能检测到aMPVB,其他17种禽类常见病毒均呈阴性;对aMPVB的最低检出限为1.2×10^(2)copies/μL,敏感性是普通PCR方法(1.2×10^(3)copies/μL)的10倍。该方法的反应时间为60 min,约为普通PCR方法的一半,大大提高了检测效率。利用该方法对采自广西地区的23份临床样本进行检测,结果与普通PCR方法完全一致。说明该方法能够快速、准确地检测aMPVB,特异性好,敏感性高,具有良好的实际应用价值。 展开更多
关键词 禽偏肺病毒 荧光RT-lamp 可视化 FD探针 检测方法
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猪伪狂犬病病毒LAMP-Taqman检测方法的建立与应用 被引量:3
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作者 李宇 石磊 +2 位作者 时国强 张莹露 董振国 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期2110-2115,共6页
基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)和荧光定量PCR技术建立一种猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)LAMP-Taqman快速检测体系。针对PRV保守序列设计LAMP引物组,并将环引物修饰荧光基团和淬灭基... 基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)和荧光定量PCR技术建立一种猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)LAMP-Taqman快速检测体系。针对PRV保守序列设计LAMP引物组,并将环引物修饰荧光基团和淬灭基团作为Taqman探针,以实际阳性样本和重组质粒为模板,测试体系组分添加量、特异性、灵敏度和重复性;同时,使用市售恒温检测试剂盒平行测试38份实际样本,验证LAMP-Taqman检测体系的实际检测效果。结果显示,各组分最佳终浓度为:PRV-FIP/BIP 0.8μmol/L,Bst DNA聚合酶0.7 U/μL,TaqDNA聚合酶0.24 U/μL,dNTPs 1.6 mmol/L,MgSO_(4)7.2 mmol/L;体系特异性好,不与其他病毒样本产生交叉反应,梯度样本的线性相关系数(R^(2))为0.995,重复性测试的变异系数小于3.000%,最低检出限可达2.81×10^(2)拷贝/μL;对实际样本的测试结果与市售恒温荧光法检测试剂完全一致。结果表明,基于LAMP-Taqman方法建立的PRV检测体系特异灵敏、稳定准确,是一种适用于猪群PRV精准检测的可靠技术方法。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 环介导等温扩增技术 TAQMAN 检测方法
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鸡圆圈病毒3型可视化LAMP检测方法的建立及应用 被引量:3
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作者 张民秀 谢芝勋 +6 位作者 张艳芳 谢志勤 谢丽基 李孟 罗思思 曾婷婷 王粲 《河南农业科学》 北大核心 2024年第4期128-136,共9页
建立鸡圆圈病毒3型(GyV3)可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为临床上快速检测鸡GyV3提供一种诊断方法。参考GyV3的VP3基因序列,设计1套LAMP特异性引物,分别通过温度优化、引物浓度优化和反应时间的优化,确定鸡GyV3可视化LAMP诊断方... 建立鸡圆圈病毒3型(GyV3)可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为临床上快速检测鸡GyV3提供一种诊断方法。参考GyV3的VP3基因序列,设计1套LAMP特异性引物,分别通过温度优化、引物浓度优化和反应时间的优化,确定鸡GyV3可视化LAMP诊断方法的扩增温度、引物浓度和反应时间,通过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测,验证鸡GyV3可视化LAMP诊断方法的特异性、敏感性、稳定性和可靠性。结果显示,鸡GyV3 LAMP检测方法的反应体系:总体积为20.0μL,包括DNA模板1.0μL,2×Master Mix 10.0μL,内引物GyV3-FIP和GyV3-BIP混合液(工作浓度16.0μmol/L)2.0μL,外引物GyV3-F3和GyV3-B3混合液(工作浓度2.0μmol/L)2.0μL,环引物GyV3-LF和GyV3-LB混合液(工作浓度8.0μmol/L)2.0μL,ddH_(2)O 3μL;鸡GyV3 LAMP检测方法的扩增程序:66℃反应20 min,80℃灭活5 min。鸡GyV3可视化LAMP检测方法能特异性检测GyV3,最低检测浓度为10^(1)拷贝/μL,组内和组间变异系数小于5%;与常规PCR方法检测临床样品的结果比较,两者结果符合率达100%。建立的鸡GyV3可视化LAMP检测方法能特异性检测GyV3,具有特异性好、敏感性高及污染小等优点,且检测结果可通过肉眼观察进行判断,适用于GyV3的临床快速筛查。 展开更多
关键词 鸡圆圈病毒3型(GyV3) 可视化lamp 特异性引物 诊断方法 敏感性
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鱼类致病鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)的LAMP检测技术建立与应用 被引量:19
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作者 王国良 刘璐 徐益军 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期27-31,共5页
针对鰤鱼诺卡氏菌16S—23SrRNA基因内转录间隔序列,设计了四条LAMP引物,在外内引物浓度比1:8、dNTP浓度0.8—1.2mmol/L、Mg2+浓度10—14mmol/L、反应温度60—65℃、反应时间60min的优化条件下,扩增产物经电泳后呈现特异性的LAMP梯形条带... 针对鰤鱼诺卡氏菌16S—23SrRNA基因内转录间隔序列,设计了四条LAMP引物,在外内引物浓度比1:8、dNTP浓度0.8—1.2mmol/L、Mg2+浓度10—14mmol/L、反应温度60—65℃、反应时间60min的优化条件下,扩增产物经电泳后呈现特异性的LAMP梯形条带,建立的LAMP法具有高灵敏度,达到10-7μg/μlDNA浓度,比常规PCR方法高100倍。将该方法应用于取自养殖场的乌鳢、大黄鱼、黄姑鱼组织样品检测,结果在16份组织样品中有7份检出自然感染的鰤鱼诺卡氏菌,与同步取样品鱼组织的细菌分离、培养检查结果相一致,并显示既能检测发病鱼,又能检出未发病且已感染的病鱼。分析表明,这是一种能快速、简易、特异、敏感的检测鱼类致病鰤鱼诺卡氏菌的诊断方法。 展开更多
关键词 鰤鱼诺卡氏菌 16S-23S RRNA基因 环介导恒温基因扩增检测法
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嗜水气单胞菌Lamp检测方法的建立及应用 被引量:18
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作者 程天印 刘洵 常小斌 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1013-1016,共4页
基于嗜水气单胞菌气溶素(aerolysin)基因的序列,设计了1套引物,通过条件优化,成功建立了针对致病性嗜水气单胞菌的环媒恒温基因扩增(Lamp)检测法。采用Lamp法对病原菌进行了扩增,并对病鱼血样进行了检测。结果表明,该法只检出... 基于嗜水气单胞菌气溶素(aerolysin)基因的序列,设计了1套引物,通过条件优化,成功建立了针对致病性嗜水气单胞菌的环媒恒温基因扩增(Lamp)检测法。采用Lamp法对病原菌进行了扩增,并对病鱼血样进行了检测。结果表明,该法只检出致病性嗜水气单胞菌。对不同浓度的细菌悬液扩增结果表明,Lamp检测嗜水气单胞菌的最低菌液浓度为1.4~14/μL。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 气溶素基因 环媒恒温基因扩增检测法
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景观灭蚊灯联合蚊虫孳生陷阱灭蚊效果现场研究 被引量:1
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作者 何明祯 谢轶青 +6 位作者 郭燕丽 朱仕英 邹永根 赵月琳 陆伊丽 王允华 时娜 《医学动物防制》 2025年第2期190-194,共5页
目的评估景观灭蚊灯联合蚊虫孳生陷阱的灭蚊效果,为制订蚊媒干预措施提供参考依据。方法2022年6—10月在常州市武进区礼嘉镇何墅村西坝头(对照组)、西巷头(景观灭蚊灯组)、胡家塘(蚊虫孳生陷阱组)、杨公岸(双法干预组,同时布置景观灭蚊... 目的评估景观灭蚊灯联合蚊虫孳生陷阱的灭蚊效果,为制订蚊媒干预措施提供参考依据。方法2022年6—10月在常州市武进区礼嘉镇何墅村西坝头(对照组)、西巷头(景观灭蚊灯组)、胡家塘(蚊虫孳生陷阱组)、杨公岸(双法干预组,同时布置景观灭蚊灯和蚊虫孳生陷阱)4个地点开展现场研究。采用人工小时法和布雷图指数法开展蚊媒密度及季节消长监测。计量数据比较采用非参数Wilcoxon秩和检验,计数资料比较采用χ^(2)检验。结果人工小时法监测显示,西坝头、西巷头和杨公岸蚊媒密度在7月有1个高峰,景观灭蚊灯组、双法干预组的蚊媒密度均显著低于对照组(Z=-2.38、-2.67,均P<0.05)。西坝头、胡家塘和杨公岸伊蚊密度监测显示,布雷图指数在6月下半月最高。双法干预组布雷图指数显著低于对照组和蚊虫孳生陷阱组(Z=-2.35、-2.40,P<0.05)。蚊虫孳生陷阱伊蚊卵总阳性率为86.13%,显著高于库蚊卵总阳性率的16.81%,差异有统计学意义(χ^(2)=228.98,P<0.05);伊蚊幼虫总死亡率为50.00%。结论景观灭蚊灯对库蚊和按蚊有较好的灭蚊效果。蚊虫孳生陷阱虽有较好的引诱伊蚊产卵效果,但其杀灭伊蚊幼虫效果不稳定。景观灭蚊灯联合蚊虫孳生陷阱对库蚊、按蚊和伊蚊均有较好的灭蚊效果。 展开更多
关键词 景观灭蚊灯 蚊虫孳生陷阱 人工小时法 布雷图指数法 灭蚊 效果
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导弹等直径舱段石英灯阵列辐射热流场计算方法
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作者 张肖肖 王彬文 +2 位作者 姚迟森 李昕昕 吴敬涛 《西北工业大学学报》 北大核心 2025年第5期906-915,共10页
针对导弹等直径舱段地面热试验中的结构表面热流场快速计算,提出了灯丝半圆柱面采用多个网格划分时圆柱形石英灯阵列辐射热流场解析计算方法,推导了外加热和内加热阵列中单根石英灯照射范围判据,得到了照射范围随微元顺序的变化规律,分... 针对导弹等直径舱段地面热试验中的结构表面热流场快速计算,提出了灯丝半圆柱面采用多个网格划分时圆柱形石英灯阵列辐射热流场解析计算方法,推导了外加热和内加热阵列中单根石英灯照射范围判据,得到了照射范围随微元顺序的变化规律,分析了不同网格数量下热流密度分布差异。建立舱段单灯辐射加热有限元模型,热流计算结果与解析法相比一致性良好,说明了该计算方法的正确性,对于导弹等直径舱段热试验设计的快速迭代具有重要的支撑作用。 展开更多
关键词 辐射热流 解析法 圆柱形阵列 等直径舱段 石英灯
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刺激隐核虫LAMP检测方法的建立 被引量:7
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作者 王国良 周旻曦 徐益军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期574-577,共4页
为提高大黄鱼刺激隐核虫病的病原体检出率,本研究针对刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)18S-ITS2基因序列设计4条LAMP引物,在内外引物浓度比2∶1~6∶1、Mg2+浓度2 mmol/L、反应温度61℃~66℃、反应时间60 min的优化条件下,扩增产物... 为提高大黄鱼刺激隐核虫病的病原体检出率,本研究针对刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)18S-ITS2基因序列设计4条LAMP引物,在内外引物浓度比2∶1~6∶1、Mg2+浓度2 mmol/L、反应温度61℃~66℃、反应时间60 min的优化条件下,扩增产物经电泳后呈现特异性的LAMP梯形条带。本研究建立的LAMP方法具有高灵敏度(10-7ng/μL DNA浓度),比常规PCR方法高100倍。将该方法应用于采集自不同地域的虫体样本、病鱼和水样以及不同组织样品的检测,结果在13份样品中有10份检出阳性,并显示该方法既能够检测发病鱼,也能够检出已感染但未发病的鱼。实验表明,该方法是一种能够快速、简易、特异、敏感地检测海水鱼类刺激隐核虫病的病原学检测方法。 展开更多
关键词 刺激隐核虫 18S-ITS2基因序列 环介导恒温基因扩增检测法
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LAMP法在水产动物病原快速检测中的应用 被引量:25
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作者 赵飞 邹为民 《南方水产》 2007年第2期71-75,共5页
近年来,一种新的恒温核酸扩增方法LAMP法(loop-mediated isothermal amplification),即环介导等温扩增法已经被开发利用。它采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶(Bst DNA polymerase),在恒... 近年来,一种新的恒温核酸扩增方法LAMP法(loop-mediated isothermal amplification),即环介导等温扩增法已经被开发利用。它采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶(Bst DNA polymerase),在恒温条件(60~65℃),不到1h的时间里进行核酸扩增,其扩增效率可达到10^9~10^10个数量级,具有特异性强、等温灵敏、操作简单、产物易检测等优点。LAMP法已经被用来快速检测水产动物病原(细菌、病毒、寄生虫)。文章就LAMP法的反应原理、引物设计及其在水产动物病原快速检测中的应用等做简要的综述。 展开更多
关键词 lamp 反应原理 病原 快速检测
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基于文献计量学的集鱼灯在海洋渔业中的发展趋势及热点分析 被引量:1
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作者 张英 孔祥洪 +2 位作者 黄小双 陈新军 刘必林 《海洋渔业》 北大核心 2025年第1期103-117,共15页
随着海洋渔业的快速发展,集鱼灯作为一种生态友好、低碳且高效的关键设备,在提升捕捞效率方面发挥了重要作用。采用文献计量分析方法,对集鱼灯技术在过去二十年的发展趋势、主要贡献者及研究热点进行了系统研究。根据中文核心期刊数据库... 随着海洋渔业的快速发展,集鱼灯作为一种生态友好、低碳且高效的关键设备,在提升捕捞效率方面发挥了重要作用。采用文献计量分析方法,对集鱼灯技术在过去二十年的发展趋势、主要贡献者及研究热点进行了系统研究。根据中文核心期刊数据库及Web of Science核心合集数据,考察了该领域的发文量、主要研究机构、学科领域、核心作者和主要研究方向等关键指标,全面展示了该领域的研究进展及研究重点的变化趋势,揭示了集鱼灯技术的演变路径。研究结果显示:1)该领域年发文量总体呈现波动上升的趋势,但在2018年后国内外发文量呈现相反的趋势。2)中国和日本是集鱼灯研究的主要贡献国,研究机构主要集中在沿海高校及科研院所。3)国内研究大致分为两个阶段,2004年至2013年偏重光诱捕捞的出海测试,而2012年至2022年则逐渐聚焦于集鱼灯合理配置、照度模型及照度分布等方面的研究。国际上,研究大致分为3个阶段:第一阶段(2003—2009年)聚焦于基础理论研究和早期技术探索;第二阶段(2010—2016年)转向节能减耗和光源技术革新,以响应环保需求的提升;第三阶段(2020年以后)关注集鱼灯性能优化及其生态影响,贴合全球可持续渔业发展的趋势。研究表明,集鱼灯技术已从传统光源逐步转向更加可持续、节能的技术,未来研究方向将集中在光因子对集群行为的深入研究、三维光场可视化技术的应用以及集鱼灯实际应用效能提升等方面。 展开更多
关键词 集鱼灯 海洋渔业 发展趋势 文献计量法
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禽流感病毒通用型RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量:5
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作者 石霖 王秀荣 +9 位作者 孙阮洋 李雁冰 程荣华 于学武 曹东 薛树山 赵培 徐晓龙 马勇 郑世民 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期383-386,共4页
为建立一种禽流感病毒(AIV)的快速检测方法,本研究根据环介导等温扩增技术(LAMP)原理,设计了针对AIV M基因4个不同区段的特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了AIV的RT-LAMP方法。结果表明,该方法对AIV H1~H16亚型的检... 为建立一种禽流感病毒(AIV)的快速检测方法,本研究根据环介导等温扩增技术(LAMP)原理,设计了针对AIV M基因4个不同区段的特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了AIV的RT-LAMP方法。结果表明,该方法对AIV H1~H16亚型的检测结果均为阳性,而对其他禽类病毒的扩增均为阴性,具有良好的特异性。对AIV的最低检测限为13.43 EID50/m L,灵敏度为普通一步RT-PCR的10倍;扩增反应可以在恒温水浴内60 min内完成;在反应体系中添加荧光染料后,肉眼即可判定检测结果。该检测方法与RT-PCR方法和荧光定量RT-PCR方法对临床样品检测的符合率均为81.8%。该方法能够简便、快速、灵敏、特异地检测AIV。 展开更多
关键词 禽流感 RT-lamp 诊断方法
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牛呼吸道合胞体病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:6
14
作者 李家伟 王建科 +2 位作者 张淑琴 张加力 郭利 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期867-871,共5页
牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)是引起牛呼吸道疾病的一种病毒性病原体。本研究建立一种利用环介导等温扩增技术(RT-LAMP)快速检测BRSV的新的方法,针对BRSV N基因(GeneBank:AF054668.1)设计4对特异性LAMP引物,每组引物特异性识别靶基因序列上... 牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)是引起牛呼吸道疾病的一种病毒性病原体。本研究建立一种利用环介导等温扩增技术(RT-LAMP)快速检测BRSV的新的方法,针对BRSV N基因(GeneBank:AF054668.1)设计4对特异性LAMP引物,每组引物特异性识别靶基因序列上4个独立区域,利用扩增靶DNA的Bst2.0 DNA聚合酶,63℃恒温水浴50 min完成病毒检测,使用钙黄绿素检测荧光目视和琼脂糖凝胶电泳方法,同时对牛的其他主要病毒进行特异性检测,结果证明特异性好。该RT-LAMP检测方法的灵敏度达到BRSV模板稀释的10^(-6)倍,可成功检测到临床样本中的BRSV基因组,为BRSV的临床检测提供了一种快速的试验手段,更适合BRS的诊断和临床现场快速检测。 展开更多
关键词 牛呼吸道合胞体病毒 环介导等温扩增技术 检测方法
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应用LAMP方法检测动物源性食品中沙门菌 被引量:3
15
作者 何翠华 刘志强 +2 位作者 王丹云 孙启明 黄纪徽 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2010年第5期411-414,共4页
目的运用两种方法对动物源性食品中沙门菌进行检测,找出一种更加快速、敏感、特异、简便的检验方法。方法采集60份市售的禽、畜等生肉及60份奶制品,分别采用LAMP方法和国家标准方法GB/T4789.4—2008对沙门菌进行分离与鉴定。结果 120份... 目的运用两种方法对动物源性食品中沙门菌进行检测,找出一种更加快速、敏感、特异、简便的检验方法。方法采集60份市售的禽、畜等生肉及60份奶制品,分别采用LAMP方法和国家标准方法GB/T4789.4—2008对沙门菌进行分离与鉴定。结果 120份采集样品中,LAMP方法检出2例,阳性率1.67%;国家标准方法检出1例,阳性率0.83%。LAMP方法的符合率为99.2%,敏感性为100%,特异性为99.2%。结论 LAMP检测法快速、特异、简便,该方法与国标法的阳性率差异无显著性。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 沙门菌 动物源性食品
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猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法研究 被引量:5
16
作者 杨素 沙才华 +6 位作者 顾海洋 董尚智 廖秀云 徐海聂 薄清如 罗宝正 陈伟生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期136-141,共6页
应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,... 应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,该检测方法不需要复杂仪器,仅用一台普通恒温水浴锅,在等温条件(63℃)保温1 h,即可完成核酸扩增反应,加入核酸染料SYBR GreenⅠ后,用肉眼即可对试验结果进行准确判定,为田间和基层部门检测猪繁殖与呼吸综合征病毒提供了一种廉价、简便、快速、敏感、特异的新方法。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 RT-lamp 检测方法 研究
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牛病毒性腹泻病毒LAMP检测方法的建立与应用 被引量:27
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作者 李家伟 郭利 +4 位作者 杨勇 王建科 张淑琴 张加力 程世鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第12期3111-3118,共8页
针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR基因(GenBank登录号:AY278459.1)序列设计4条特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,特异性识别靶基因序列上4个独立区域,采用LAMP技术,利用实时浊度仪实时检测LAMP反应过程中所产生的焦磷酸镁白色沉淀,实时... 针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR基因(GenBank登录号:AY278459.1)序列设计4条特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,特异性识别靶基因序列上4个独立区域,采用LAMP技术,利用实时浊度仪实时检测LAMP反应过程中所产生的焦磷酸镁白色沉淀,实时监测反应液浊度来判断反应结果,实现对扩增反应全过程的监控,建立BVDV的LAMP快速检测方法。通过实时浊度仪在恒温63℃下50min完成检测,对方法的特异性、灵敏度、重复性进行了评价。结果显示,经优化该方法只检测BVDV阳性,特异性强;病毒10-6倍稀释时仍能被检测到,比PCR方法灵敏度至少高100倍;重复性良好。LAMP实时浊度法具有简单、快速、灵敏度高、特异性强的优势,为BVDV的临床检测提供了一种简单快速的试验手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 环介导等温扩增技术 PCR
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桑脉带相关病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:6
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作者 吴凡 李杨秀 +2 位作者 黄海娟 陈保善 蒙姣荣 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期116-120,共5页
桑脉带相关病毒Mulberry vein banding-associated virus (MVBaV)是广西桑树病毒病的主要病原病毒。本研究根据MVBaV基因组的核外壳蛋白(nucleocapsid protein, N)基因序列设计了5组引物,筛选获得了1组有效引物,建立了该病毒的反转录环... 桑脉带相关病毒Mulberry vein banding-associated virus (MVBaV)是广西桑树病毒病的主要病原病毒。本研究根据MVBaV基因组的核外壳蛋白(nucleocapsid protein, N)基因序列设计了5组引物,筛选获得了1组有效引物,建立了该病毒的反转录环介导等温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP)检测方法。该方法能在恒温条件(63℃)下1 h内检测MVBaV,其灵敏度是RT-PCR检测方法的10倍。对6个田间样品进行RT-LAMP检测,其结果与RT-PCR的结果一致。该方法可直接在反应管中加入SYBR GreenⅠ,通过颜色变化即可判定结果,无需经过琼脂糖电泳或专门仪器,具有灵敏、快速和特异性好的优点,可应用于MVBaV的快速诊断及其田间监测。 展开更多
关键词 桑脉带相关病毒 反转录环介导等温扩增技术 检测方法
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室外石质陈设保存状况评价方法探讨———以故宫景福宫前院石灯座为例
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作者 高宇 张琼 胡钢 《文物保护与考古科学》 北大核心 2025年第2期156-166,共11页
故宫室外石质陈设种类繁多,数量庞大,但保存情况不甚理想,部分面临较严重病害,开展这批文物保存状态评价,是做好文物保护的前提。本研究对故宫石质陈设的病害状况、物理性能等数据进行分析,对汉白玉大理石文物的整体保存状况进行评价。... 故宫室外石质陈设种类繁多,数量庞大,但保存情况不甚理想,部分面临较严重病害,开展这批文物保存状态评价,是做好文物保护的前提。本研究对故宫石质陈设的病害状况、物理性能等数据进行分析,对汉白玉大理石文物的整体保存状况进行评价。在此基础上,对已有的石质文物保存状况评价方法进行评估,并提出了一种新的评价方法——“平均分析法”。与常用的几种方法进行比较,“平均分析法”所得结果能更准确评估石质文物保存状态。 展开更多
关键词 石质文物 评价方法 保存状况 石灯座 平均分析法
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