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两种氨基修饰的基因芯片表面制备方法比较 被引量:2
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作者 吴清华 马文丽 +4 位作者 王洪敏 毛向明 张宝 李凌 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第7期794-798,共5页
目的探讨两种氨基化方法修饰玻片表面的过程及其在基因芯片制备中应用的可行性。方法玻片经清洗、硅烷化后,一种用多组分多氨化合物包被,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化;另一种方法采用的包被剂是丙烯酸-丙烯酰胺单体,活化剂是碳二亚胺... 目的探讨两种氨基化方法修饰玻片表面的过程及其在基因芯片制备中应用的可行性。方法玻片经清洗、硅烷化后,一种用多组分多氨化合物包被,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化;另一种方法采用的包被剂是丙烯酸-丙烯酰胺单体,活化剂是碳二亚胺/N-羟基琥珀亚胺酯官能团分子。将被修饰好的玻片用于λ噬菌体基因组DNA芯片的制备,并进行杂交检测分析。结果经两种方法修饰后玻片表面分别形成分支结构和聚合物涂层,与商业化的芯片比较发现,两种芯片杂交、扫描检测后显示所得点阵的杂交信号均匀、稳定、清晰,杂交点饱满、同一性好。结论两种方法修饰的玻片用于制备基因芯片均取得了成功,其中丙烯酸-丙烯酰胺聚合物包被法处理过程简单、成本低廉、能大规模生产,是一种较理想的芯片表面制备方法。 展开更多
关键词 基因芯片 氨基修饰 表而化学 Λ噬菌体
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显微注射Lambda DNA入去核中华蟾蜍卵细胞中进行核重构试验
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作者 陈吉龙 张五廉 +1 位作者 林金星 潘爱华 《应用基础与工程科学学报》 EI CSCD 1994年第1期104-109,共6页
用显微注射的方法将外源Lambda DNA导入去核的中华蟾蜍卵细胞中。DNA荧光染色显微观察和超微结构研究表明,在去核卵细胞中,外源Lambda DNA可诱发构建细胞核。注射后1h开始有核样结构形成,随后形成的重构核逐渐增多,3.5 h后基本恒定。重... 用显微注射的方法将外源Lambda DNA导入去核的中华蟾蜍卵细胞中。DNA荧光染色显微观察和超微结构研究表明,在去核卵细胞中,外源Lambda DNA可诱发构建细胞核。注射后1h开始有核样结构形成,随后形成的重构核逐渐增多,3.5 h后基本恒定。重构核直径在8—23μm,具有类染色质、核膜孔、双层核膜等结构、核周隙较宽。本文结果证明,外源DNA能在去核卵细胞中诱导核重构的发生。本研究建立了去核卵细胞中核重构的实验模式。 展开更多
关键词 核重构 中华蟾蜍 去核卵细胞 LAMBDA DNA
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DNA与蛋白质结合的荧光测定 被引量:2
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作者 王志珍 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第4期427-432,共6页
构建了插入λ阻抑蛋白(Rep)的操纵基因(OR)和BglⅡ识别位点的PBR322重组质粒。阻抑蛋白与该质粒的相互作用可用BglⅡ对它的水解作用引起的EB荧光变化来研究。在E.coli中表达的Rep表现了与该重组质粒结... 构建了插入λ阻抑蛋白(Rep)的操纵基因(OR)和BglⅡ识别位点的PBR322重组质粒。阻抑蛋白与该质粒的相互作用可用BglⅡ对它的水解作用引起的EB荧光变化来研究。在E.coli中表达的Rep表现了与该重组质粒结合的活力。核苷酸序列具精确二重对称性的OR(ORcons)对Rep的亲和力比天然的OR1小。 展开更多
关键词 DNA 蛋白 荧光 测定
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白念珠菌菌丝相全长cDNA文库的构建和鉴定 被引量:1
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作者 韩慧霞 王鲁 +2 位作者 宋秋荷 钟白玉 陆洪光 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2011年第4期260-263,291,共5页
目的利用SMART(Switching Mechanism At5′end of RNA Transcript Method)技术,构建高质量的白念珠菌菌丝相(芽管)全长cDNA文库。方法不完全1640培养基诱导高于95%的白念珠菌带芽管孢子,提取总RAN并纯化poly A+RNA作为模板,应用SM... 目的利用SMART(Switching Mechanism At5′end of RNA Transcript Method)技术,构建高质量的白念珠菌菌丝相(芽管)全长cDNA文库。方法不完全1640培养基诱导高于95%的白念珠菌带芽管孢子,提取总RAN并纯化poly A+RNA作为模板,应用SMART技术利用SMARTScribeTMMMLV反转录酶和经修饰的oligo(dT)引物(CDSⅢ/3′PCR引物)合成第一链cDNA,SMARTⅣTM寡核苷酸作为mRNA5′端延伸出去的模板,采用LD-PCR合成双链cDNA,经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切及过柱分级分离后,与λTriplE×2载体连接经噬菌体包装后转导大肠杆菌,构建全长cDNA文库。结果原始菌丝相白念珠菌cDNA噬菌体表达文库滴度为1.87×10^7PFU/mL,重组率达100%,库容量9.35×10^6;文库扩增后,滴度达5×10^9PFU/mL,插入cDNA长度多在0.4-2.5kb,平均长度在1.5kb左右。文库的代表性和重组片段的序列完整性均达建库要求。结论成功构建了菌丝相白念珠菌cDNA噬菌体表达文库,为进一步筛选和克隆白念珠菌芽管特异性抗原表达基因及致病性相关基因奠定了基础。 展开更多
关键词 白念珠菌 菌丝 基因文库 Λ噬菌体 DNA 重组
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利用非洲爪蟾卵的提取物与Lambda DNA进行核重构试验 被引量:12
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作者 蔡树涛 张博 +2 位作者 青婧 张传茂 翟中和 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1990年第16期1261-1264,共4页
近年,在国际重要学术刊物上先后发表多篇有关“核重构(或核组装)”的论文,一些科学家认为这是近年细胞生物学领域重要进展之一。我们认为虽然对其理论意义及其在生物工程实践中应用前途的评估还为时过早,但这项研究的前景是令人鼓舞的... 近年,在国际重要学术刊物上先后发表多篇有关“核重构(或核组装)”的论文,一些科学家认为这是近年细胞生物学领域重要进展之一。我们认为虽然对其理论意义及其在生物工程实践中应用前途的评估还为时过早,但这项研究的前景是令人鼓舞的。体外核重构实验模式的建立对阐明细胞核、染色质、核膜与核骨架的组装及其功能的相互关系以及一系列重要生命现象,无疑将提供一个良好的实验模式。 展开更多
关键词 核重构 卵细胞提取物 lambda-dna
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NUCLEAR RECONSTITUTION IN THE Xenopus laevis EGG EXTRACTS CELL-FREE SYSTEM
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作者 蔡树涛 张博 +2 位作者 青婧 张传茂 翟中和 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1991年第6期508-513,共6页
Ⅰ. INTRODUCTIONNuclear reconstitution (nuclear assembly )was reported by several laboratories in recent years and regarded as an important advance in cell biology. In vitro nuclear assembly system provides a good mod... Ⅰ. INTRODUCTIONNuclear reconstitution (nuclear assembly )was reported by several laboratories in recent years and regarded as an important advance in cell biology. In vitro nuclear assembly system provides a good model to study the organization and function of nucleus, chromatin, nuclear envelope and nuclear matrix. Although it is too early to evaluate its significance in theory and in bioengineering, there is no doubt that the prospect in this field is inspiring. 展开更多
关键词 nuclear RECONSTITUTION CELL-FREE system XENOPUS LAEVIS EGG extracts LAMBDA DNA.
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Direct visualization of the formation of a new structure of lambda DNA in vitro
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作者 方晔 白春礼 +4 位作者 魏莹 张平城 唐有祺 曹恩华 何裕建 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1995年第10期1166-1172,共7页
A DNA component(referred to as new DNA structure),which has higher melting point(~ 73.5℃)and is resistant to DNase I-digestion,has suocessfully been isolated from lambda DNA Hind Ⅲtreated by cooling down quickly fo... A DNA component(referred to as new DNA structure),which has higher melting point(~ 73.5℃)and is resistant to DNase I-digestion,has suocessfully been isolated from lambda DNA Hind Ⅲtreated by cooling down quickly following thermal denaturation.Transmission electron microscope(TEM)andatomic force microscope(AFM)visualizations of the DNA molecule have shown that their lenghts fall mainly inthree regions(300 — 500 nm,750 — 1 000 nm and ~ 1 500 nm),indicating that longer fragments of λ-DNA HindⅢ are apt to form the new structure of DNA under experimental conditions;moreover,the apparent width inthe middle part of TEM imagesof a few longer molecules of the new structure of DNA is relatively thinner,wwhich may be reasonably deduced from the inhibition of DNase I(an endonuclease)binding to the new struc-ture of DNA.CD spectrum of the new structure contains a broad positive band centred at 245um anda weak negative band at 220 nm,indicating that the DNA molecule is distinctly different from all the known struc-tures of DNA. 展开更多
关键词 LAMBDA DNA Hind new structure of DNA transmission electronic MICROSCOPY ATOMIC force MICROSCOPY CIRCULAR DICHROISM spectroscopy
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