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应用单克隆抗体L2B12对恶性淋巴瘤与转移性癌的鉴别诊断
1
作者 许良中 涂莲英 +1 位作者 许世明 顾良宏 《肿瘤》 CAS 1983年第2期59-61,95-100,共5页
恶性淋巴瘤与转移性癌的鉴别诊断很重要,因为它们的治疗方法不同,预后也不一样。抗白细胞的单克隆抗体L3B12。是与全部B或T淋巴细胞起反应的抗体,但它不与上皮性细胞起反应。
关键词 何杰金氏病 恶性肉芽肿 转移性癌 l2b 单克隆抗体 淋巴瘤 慢性淋巴结炎 鉴别诊断
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2013年别克凯越打转向灯时车内抖动
2
作者 陈耀 《汽车维修技师》 2026年第1期110-112,共3页
车型:2013年别克凯越,配置L2B1.5L发动机、GF6自动变速器。VIN:LSGJA52H6DS××××××。行驶里程:140968km。故障现象:客户反馈车辆在怠速时有时会出现抖动情况。故障诊断:进站后,对故障车进行验证,判断分析... 车型:2013年别克凯越,配置L2B1.5L发动机、GF6自动变速器。VIN:LSGJA52H6DS××××××。行驶里程:140968km。故障现象:客户反馈车辆在怠速时有时会出现抖动情况。故障诊断:进站后,对故障车进行验证,判断分析车辆怠速情况,未出现客户所说的抖动现象。据客户描述,该故障间歇性发生。 展开更多
关键词 2013年 别克凯越 l2b1.5L发动机
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2016年别克英朗主驾驶玻璃不能一键快速升降
3
作者 王召兴 《汽车维修技师》 2025年第11期99-100,共2页
车型:2016年别克英朗,配置1.5L L2B发动机。VIN:LSGKE54H1GW××××××。行驶里程:60773km。故障现象:主驾驶玻璃不能一键快速升降。故障诊断:按下主驾驶玻璃升降器开关测试,确实没有快速上升或下降,只有普... 车型:2016年别克英朗,配置1.5L L2B发动机。VIN:LSGKE54H1GW××××××。行驶里程:60773km。故障现象:主驾驶玻璃不能一键快速升降。故障诊断:按下主驾驶玻璃升降器开关测试,确实没有快速上升或下降,只有普通升降。经确认车辆配置主驾驶玻璃有快速升降功能。初步检查及问诊,确认该车没有发生事故、加装自动升窗等维修历史。首先利用诊断仪GDS检测,没有故障码。初步怀疑电器件偶发故障,随即执行断电测试。断开蓄电池负极,几分钟后连接负极,再次测试后故障依旧,怀疑玻璃升降器开关或升降器故障。 展开更多
关键词 2016年 别克英朗 故障诊断 1.5L l2b发动机
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2021—2023年安徽省肉羊主产区羊口疮病毒感染情况调查及流行毒株B2L和F1L基因的遗传演化分析
4
作者 张留君 陈佳乐 +7 位作者 冯星 陈威振 邓亚飞 王波 左国林 贺绍君 辛洪雷 刘德义 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第7期697-703,共7页
目的为明确安徽省肉羊主产区羊口疮病毒(ORFV)感染情况及流行毒株的遗传演变特征。方法使用荧光定量PCR(qPCR)对2021—2023年从安徽省主要肉羊养殖地市采集的303份临床样本进行ORFV检测;采用常规PCR扩增阳性样本中ORFV的全长B2L和F1L基... 目的为明确安徽省肉羊主产区羊口疮病毒(ORFV)感染情况及流行毒株的遗传演变特征。方法使用荧光定量PCR(qPCR)对2021—2023年从安徽省主要肉羊养殖地市采集的303份临床样本进行ORFV检测;采用常规PCR扩增阳性样本中ORFV的全长B2L和F1L基因,并通过测序后进行遗传演化分析。结果qPCR检测显示,本次临床样本ORFV总阳性率为48.8%(148/303)。序列多重比对分析显示,本次56株样本毒株B2L基因间DNA和氨基酸序列相似性分别为96.7%~100.0%和97.4%~100.0%。同时,本次56株样本毒株F1L基因间DNA和氨基酸序列相似性分别为95.1%~100.0%和95.0%~100.0%。根据B2L基因DNA序列构建的遗传进化树结果显示,山羊源样本毒株FY-TYA与甘肃人源参考毒株Gansu位于同一小分支,而山羊源样本毒株FY-XQC与国内疫苗参考毒株China Vaccine和国内山羊源参考毒株OV-HLJ-04位于同一小分支。同时,根据F1L基因DNA序列构建的遗传进化树显示,山羊源样本毒株FY-XQA和FY-XQC均与新疆绵羊源参考毒株Xinjiang位于同一小分支。结论安徽省主要肉羊养殖地区ORFV感染较为普遍,且当前流行毒株B2L和F1L基因DNA及氨基酸序列均存在不同程度的遗传变异,其中F1L基因变异程度较大。此外,部分山羊源样本毒株与人源、疫苗及绵羊源参考毒株亲缘关系较近。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 B2L基因 F1L基因 遗传演化分析
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羊口疮病毒的F1L和B2L基因研究现状
5
作者 杨毅 阿安拉木 朵红 《动物医学进展》 北大核心 2025年第10期115-118,共4页
羊传染性脓疱(CE)是由羊传染性脓疱病毒(CEV)或学名羊口疮病毒(ORFV)引起的一种急性接触性人兽共患病。其基因组长约140 kb,编码130多个基因,其中,F1L和B2L基因保守程度高,蛋白免疫原性较好。论文介绍了F1L和B2L基因的研究现状,以期为O... 羊传染性脓疱(CE)是由羊传染性脓疱病毒(CEV)或学名羊口疮病毒(ORFV)引起的一种急性接触性人兽共患病。其基因组长约140 kb,编码130多个基因,其中,F1L和B2L基因保守程度高,蛋白免疫原性较好。论文介绍了F1L和B2L基因的研究现状,以期为ORFV的检测和新型疫苗的研制提供新的思路。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 F1L基因 B2L基因
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基于ERA-interim再分析资料的ASCAT风场产品在南海的精度评估及南海月平均风场特征分析 被引量：10
6
作者 张凯峰 项杰 +1 位作者 杨波 周成钧 《海洋预报》 2017年第2期27-36,共10页
利用ERA-interim再分析资料作为参照,统计分析了南海季风盛行时ASCAT散射计L2B和L3风场产品的误差特征。结果表明:季风盛行时,南海中南部大部分海域,ASCAT两种散射计风场产品精度较好,与设计精度一致,风速标准偏差小于2 m/s,偏差小于1 m... 利用ERA-interim再分析资料作为参照,统计分析了南海季风盛行时ASCAT散射计L2B和L3风场产品的误差特征。结果表明:季风盛行时,南海中南部大部分海域,ASCAT两种散射计风场产品精度较好,与设计精度一致,风速标准偏差小于2 m/s,偏差小于1 m/s,风向标准偏差小于20°,偏差小于5°,ASCATL2B相对L3产品表现更好,西南风盛行时,风场相关性强,在0.8以上,ASCAT与ERA-interim一致性好,东北风盛行时,风场也具有强相关,不过在南海东部海域,风向相关性较弱,小于0.7。另外,利用ASCAT L2B分析了南海月平均风场分布特征,结果表明:南海季风盛行时,存在两个风速大值中心,分别位于南海中南部和台湾海峡及巴士海峡一带,其位置和大小随时间而变化。 展开更多
关键词 ASCAT l2b L3 ERA—interim 海面风场
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羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒构建及其在MDBK细胞中的表达 被引量：17
7
作者 刘嫒 冯将 +3 位作者 鲜思美 刘宗胜 李鹏飞 罗代兵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1124-1128,共5页
目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和... 目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和测序鉴定,将鉴定正确的真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L转染至MDBK细胞,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)检测目的基因表达。结果双酶切鉴定和序列测定表明真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L构建成功,RT-PCR和IFA同时验证目的基因在MDBK细胞浆中能瞬时表达。结论本试验构建成功的真核表达质粒为下一步羊口疮病毒核酸疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 F1L基因 B2L基因 真核表达
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羊口疮病毒B2L基因DNA疫苗载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达 被引量：9
8
作者 张克山 刘永杰 +2 位作者 孔汉金 尚佑军 刘湘涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期951-954,共4页
目的为构建羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因真核表达质粒并验证B2L基因在BHK-21细胞中的表达及表达的稳定性。方法以ORFV主要免疫原性基因B2L为目标,以pVAX1为表达载体,构建重组真核表达质粒pVAX1-B2L,鉴定正确后转染仓鼠肾细胞(BHK-21)... 目的为构建羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因真核表达质粒并验证B2L基因在BHK-21细胞中的表达及表达的稳定性。方法以ORFV主要免疫原性基因B2L为目标,以pVAX1为表达载体,构建重组真核表达质粒pVAX1-B2L,鉴定正确后转染仓鼠肾细胞(BHK-21),通过间接免疫荧光试验(IFA)验证B2L基因表达。结果扩增出目的片段经序列测定和分析证明为ORFV B2L基因,经双酶切鉴定和序列测定分析证明了pVAX1-B2L质粒的正确性,IFA证实目的基因在BHK-21细胞中能够瞬时表达。结论为进一步研制基于羊口疮病毒B2L基因的DNA疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 B2L基因 真核表达 DNA疫苗
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羊IL-2基因和羊口疮病毒B2L基因真核表达重组质粒联合免疫小鼠的效果评价 被引量：8
9
作者 鲜思美 李鹏飞 +5 位作者 冯将 刘嫒 李婷 包细明 张益 张素辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期663-667,共5页
为评价羊白介素2(IL-2)基因和羊口疮病毒(OrfV)B2L基因真核表达重组质粒联合接种小鼠的免疫效果,本研究将pVAX1-B2L、pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2及空载体pVAX1和PBS对照组通过肌肉注射的方式免疫KM小鼠,并采用ELISA方法和MTT方法检测免疫小... 为评价羊白介素2(IL-2)基因和羊口疮病毒(OrfV)B2L基因真核表达重组质粒联合接种小鼠的免疫效果,本研究将pVAX1-B2L、pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2及空载体pVAX1和PBS对照组通过肌肉注射的方式免疫KM小鼠,并采用ELISA方法和MTT方法检测免疫小鼠的体液和细胞免疫反应。结果表明,pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体效价和IL-2水平均显著高于pVAX1-B2L免疫组,与pVAX1和PBS对照组相比差异极显著(p<0.01)。而且pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2免疫组的脾淋巴细胞增殖水平高于pVAX1-B2L免疫组、空载体pVAX1组和PBS对照组(p<0.01)。因此,pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2联合免疫KM小鼠可以诱导特异性体液免疫和细胞免疫,并且IL-2具有免疫佐剂的作用,为进一步将其用于Orf的防制奠定了基础。 展开更多
关键词 OrfV B2L基因 IL-2 基因疫苗 联合免疫
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羊口疮病毒榆林株B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统的表达 被引量：4
10
作者 冯平 李云章 +2 位作者 孙丰廷 屈雷 闫海龙 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第6期1-8,共8页
【目的】克隆分析羊口疮病毒(ORFV)榆林株(ORFV-Yulin)的F1L基因序列,通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因,测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因(r ... 【目的】克隆分析羊口疮病毒(ORFV)榆林株(ORFV-Yulin)的F1L基因序列,通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因,测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因(r B2L)和F1L融合基因(c F1L),利用碱基linker连接,通过重叠PCR方法扩增获得ORFV r B2L-linker-c F1L重组基因(r B2Lc F1L),将其与昆虫杆状病毒表达载体pBac5连接构建表达载体pBac-rB2LcF1L。将pBac-rB2LcF1L包装出杆状病毒,侵染sf9细胞,通过SDS-PAGE、Western-blotting以及质谱鉴定等方法验证目的基因r B2Lc F1L的表达。【结果】克隆获得了1 029bp的F1L全长基因,该基因高度保守,与FJ-MH2015株的序列相似性最高,核苷酸和氨基酸的相似性分别为99.0%和99.4%。系统进化分析表明,ORFV-Yulin株与XP(KU199840.1)、FJ-MH2015(KM675409.1)以及Shanxi(HQ221964.1)株同处于一个分支。PCR扩增获得了855bp的c F1L基因、1 180bp的r B2L基因及1 983bp的r B2Lc F1L基因,成功构建了pBacrB2LcF1L载体,并包装出相应的杆状病毒。B2L和F1L串联基因通过昆虫杆状病毒表达系统获得成功表达,表达产物的分子质量为80ku,且有部分重组蛋白能分泌到细胞培养基中。【结论】ORFV-Yulin株的B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统表达成功。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 F1L基因 F1L+B2L串联表达 昆虫杆状病毒 基因表达
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羊传染性脓疱病毒松原分离株的分离鉴定及B2L基因的克隆与序列分析 被引量：8
11
作者 赵魁 贺文琦 +4 位作者 宋德光 孟伶俐 陈克研 张学慧 高丰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1162-1166,共5页
利用原代犊牛睾丸细胞从临床上表现口疮症状的羔羊痂皮材料中分离获得1株病毒,对该株病毒进行病毒形态学、理化学、PCR检测与动物回归试验等系统鉴定后,证实该分离株为羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV),命名为ORFV-sy。利用PCR方法克... 利用原代犊牛睾丸细胞从临床上表现口疮症状的羔羊痂皮材料中分离获得1株病毒,对该株病毒进行病毒形态学、理化学、PCR检测与动物回归试验等系统鉴定后,证实该分离株为羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV),命名为ORFV-sy。利用PCR方法克隆出其B2L基因,并将该基因序列和推导的氨基酸序列与6个不同来源的ORFV毒株进行同源性和亲缘关系的比较分析。结果表明,各毒株间核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.8%～99.5%和97.6%～99.5%;系统发育进化树结果表明,ORFV-sy毒株与印度分离绵羊株ORFV-Mukteswar67/04、ORFV-Izatnagar79/04的亲缘关系较近,表明不同地区分离毒株的B2L基因差异不大。 展开更多
关键词 ORFV—sy 分离鉴定 B2L基因 序列分析
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抗羊口疮病毒囊膜蛋白B2L小鼠多克隆抗体的制备和应用 被引量：9
12
作者 周祺 顾香雪 +8 位作者 许泽军 黄荣 黄军生 李浩然 李涛 周晓雅 苏观志 殷冬冬 王桂军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1036-1040,共5页
目的获取羊口疮病毒(ORFV)囊膜蛋白B2L并制备鼠抗B2L蛋白多克隆抗体。方法采用PCR扩增获得B2L基因,并将其分别克隆至原核表达载体p ET-32a和真核表达载体p3×FLAG-CMV-14。两个重组表达载体均经过鉴定,重组原核表达载体使用BL21大... 目的获取羊口疮病毒(ORFV)囊膜蛋白B2L并制备鼠抗B2L蛋白多克隆抗体。方法采用PCR扩增获得B2L基因,并将其分别克隆至原核表达载体p ET-32a和真核表达载体p3×FLAG-CMV-14。两个重组表达载体均经过鉴定,重组原核表达载体使用BL21大肠杆菌表达,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白。通过Tris-尿素溶液洗去非目的蛋白,Western blot法鉴定。将定量的纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗ORFV B2L多克隆抗体。将真核表达重组质粒p3×FLAG-B2L转染Vero细胞、BHK-21细胞,使用间接免疫荧光法(IFA)对抗B2L蛋白的多克隆抗体鉴定,并应用于免疫组织化学染色检测患病羊唇部组织ORFV的表达。结果 Western blot法确定了制备的B2L蛋白的特异性; IFA结果表明制备的小鼠抗B2L多克隆抗体有特异性和反应原性,免疫组织化学染色法结果表明该抗体可以检测出患病羊唇部组织的ORFV。结论成功制备了特异性的小鼠抗B2L多克隆抗体。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 B2L 多克隆抗体
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新疆羊口疮病毒分离鉴定及B2L基因分析与表达 被引量：6
13
作者 李瑞芳 李国华 +3 位作者 孟仁 乔军 张辉 陈创夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期202-205,共4页
为研究新疆地区羊口疮(Orf)病毒(ORFV)的生物学特性及流行特征,本研究采集新疆地区疑似Orf的羔羊结痂病料,用MDBK传代细胞进行病毒分离培养及电镜观察,进行动物回归实验;对ORFV B2L基因进行PCR扩增,并构建B2L基因原核表达重组质粒pET-32... 为研究新疆地区羊口疮(Orf)病毒(ORFV)的生物学特性及流行特征,本研究采集新疆地区疑似Orf的羔羊结痂病料,用MDBK传代细胞进行病毒分离培养及电镜观察,进行动物回归实验;对ORFV B2L基因进行PCR扩增,并构建B2L基因原核表达重组质粒pET-32a-B2L,转化至大肠杆菌BL21。将表达产物进行SDS-PAGE及western blot检测,结果证明所获得的分离株ORFV-shz为ORFV,与India 67/04分离株的亲缘关系最近,其重组B2L蛋白大小为60 ku,并具有良好反应原性。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 B2L基因 原核表达 反应原性
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羊口疮病毒B2L和VIR基因原核表达及抗原性鉴定 被引量：10
14
作者 李杰 李前瑞 +3 位作者 田婷婷 许君艳 姚运亮 陈德坤 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第3期1-6,共6页
为检测羊口疮病毒(Orf virus)B2L和VIR蛋白的抗原性,通过PCR方法扩增出羊口疮病毒B2L和VIR基因,与原核表达载体pET-32a连接,将重组质粒转化到BL21(DE3)感受态中,对其进行BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和测序验证。对鉴定为阳性的菌液进行诱... 为检测羊口疮病毒(Orf virus)B2L和VIR蛋白的抗原性,通过PCR方法扩增出羊口疮病毒B2L和VIR基因,与原核表达载体pET-32a连接,将重组质粒转化到BL21(DE3)感受态中,对其进行BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和测序验证。对鉴定为阳性的菌液进行诱导表达,并进行SDS-PAGE分析。用灭活的羊口疮病毒免疫家兔,制备多克隆抗体,Western blot、ELISA鉴定B2L和VIR蛋白的抗原性。结果显示B2L、VIR蛋白均能与兔抗羊口疮病毒抗血清结合,证明B2L、VIR蛋白具有与羊口疮病毒共同的B细胞表位。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 B2L基因 VIR基因 原核表达 抗原性
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羊口疮病毒B2L基因DNA疫苗的构建及其诱导的免疫应答 被引量：10
15
作者 李鹏飞 冯将 +5 位作者 鲜思美 刘嫒 李婷 包细明 张益 张素辉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期704-708,715,共6页
为研究所构建羊口疮病毒（OrfV）B2L基因DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答效果，本研究对pMD18T-B2L质粒进行PCR扩增，克隆B2L片段至pVAX1载体中构建pVAX1-B2L重组质粒，进行酶切和测序鉴定；采用脂质体法将pVAX1-B21。真核表达质粒转染MDBK... 为研究所构建羊口疮病毒（OrfV）B2L基因DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答效果，本研究对pMD18T-B2L质粒进行PCR扩增，克隆B2L片段至pVAX1载体中构建pVAX1-B2L重组质粒，进行酶切和测序鉴定；采用脂质体法将pVAX1-B21。真核表达质粒转染MDBK细胞，RTPCR和IFA法检测B2L基因在MDBK细胞中的转录和表达；将构建的DNA疫苗免疫KM系小鼠，采用间接ELISA、MTT和FACS法对其诱导的免疫应答进行研究。结果显示，成功构建pVAX1-B2L真核表达质粒，并在MDBK细胞中表达；免疫小鼠后，DNA疫苗能诱导小鼠产生Orfv特异性抗体；脾淋巴细胞增殖、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞亚群百分比和IL-2、IFN-γ、IL-4细胞因子均高于pVAX1组和PBS组。结果表明，本研究制备的DNA疫苗能够诱导小鼠产生较高水平的体液免疫和细胞免疫应答。 展开更多
关键词 羊口疮病毒(OrfV) B2L基因 DNA疫苗 体液免疫 细胞免疫
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口疮病毒AH-GY13株的分离鉴定及B2L基因的原核表达 被引量：9
16
作者 宫晓华 殷冬冬 +8 位作者 王瑞 唐井玉 周晓雅 梅楠 张雪梅 兰梦蝶 陈鹏 王勇 王桂军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期185-191,共7页
为确定安徽地区某山羊场发生的疑似口疮（orf）的病原,经过临床诊断、PCR检测以及HeLa细胞培养等途径,确定其为口疮病毒（ORFV）,并命名为AH-GY13株。根据GenBank中公布的口疮病毒B2L囊膜蛋白基因序列,设计引物,用PCR方法扩增口疮病毒B2... 为确定安徽地区某山羊场发生的疑似口疮（orf）的病原,经过临床诊断、PCR检测以及HeLa细胞培养等途径,确定其为口疮病毒（ORFV）,并命名为AH-GY13株。根据GenBank中公布的口疮病毒B2L囊膜蛋白基因序列,设计引物,用PCR方法扩增口疮病毒B2L基因,并将此基因序列及其推导的氨基酸序列与其他不同来源的ORFV分离株进行比较。结果显示,AH-GY13株与选取的10株毒株的核苷酸序列同源性在97.4%~99.3%之间,氨基酸同源性在97.9%~99.7%之间;进化树分析显示,此毒株与辽宁省分离株属于同一分支。将该基因定向插入到原核表达载体pET-32a（＋）中,构建原核表达载体pET-32a（＋）-B2L。转化BL21,经IPTG诱导,B2L基因获得表达,以包涵体的形式存在,通过优化诱导时间和IPTG的浓度,确定了表达B2L基因的最佳诱导条件：IPTG终浓度为1 mmol/L,37℃诱导4 h。Western-blot分析表明,表达产物具有良好的免疫活性。上述结果为进一步研究ORFV B2L囊膜蛋白的结构与功能奠定了基础。 展开更多
关键词 口疮病毒 分离鉴定 B2L基因 序列分析 原核表达 蛋白质免疫印迹
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一株羊口疮病毒分离株的生物学特性研究 被引量：9
17
作者 唐娜 刘吉山 +5 位作者 王玉茂 王金良 张倩 谢金文 曲光刚 沈志强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第6期49-53,共5页
为深入开展羊口疮病毒特性研究与羊口疮的防控，通过细胞分离培养、B2L 基因序列测定及分析等试验，对从山东某羊场分离的一株羊口疮病毒分离株 SD1201进行病毒学及分子生物学特性研究。结果表明，该分离株能够引起绵羊睾丸细胞、Vero E... 为深入开展羊口疮病毒特性研究与羊口疮的防控，通过细胞分离培养、B2L 基因序列测定及分析等试验，对从山东某羊场分离的一株羊口疮病毒分离株 SD1201进行病毒学及分子生物学特性研究。结果表明，该分离株能够引起绵羊睾丸细胞、Vero E6细胞、MDCK 细胞发生不同程度的病变，绵羊睾丸细胞病变最为明显，在18 h 内迅速发生细胞病变，病毒 TCTD50浓度为10^-4．5/mL。通过 PCR 扩增分离株 B2L基因特定片段并克隆测序，分析结果表明，该分离株与3株羊口疮病毒中国分离株亲缘关系最近，同源性为98．0％～98．2％。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 SD1201株 生物学特性 B2L基因 序列分析
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羊口疮病毒B2L蛋白二级结构及其细胞表位的预测 被引量：10
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作者 王光祥 尚佑军 +3 位作者 吕占禄 田宏 张克山 刘湘涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1133-1138,共6页
采用网络平台的SOPMA服务器和DNAStar软件预测羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的二级结构;综合利用DNAStar软件、二级结构预测及ABCpred方案预测羊口疮病毒B2L蛋白的B细胞表位;分别采用人工神经网络法(ANNA)和在线程序预测羊口疮病毒B2L蛋白的... 采用网络平台的SOPMA服务器和DNAStar软件预测羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的二级结构;综合利用DNAStar软件、二级结构预测及ABCpred方案预测羊口疮病毒B2L蛋白的B细胞表位;分别采用人工神经网络法(ANNA)和在线程序预测羊口疮病毒B2L蛋白的细胞毒性T细胞和辅助T细胞的抗原表位。结果显示,羊口疮病毒B2L蛋白的整个结构中α-螺旋区域和无规则卷曲区域出现得较多,其中α-螺旋占30.42%,β-片层占24.34%,β-转角占5.56%,无规则卷曲占39.68%;有6个优势B细胞表位,3个细胞毒性T细胞表位和2个辅助T细胞表位。本研究为ORFV诊断方法的建立、单克隆抗体的制备及表位疫苗的研制提供了理论依据。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 B2L基因 二级结构 B细胞表位 T细胞表位 预测
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羊口疮病毒湖北株B2L基因的克隆与遗传进化分析 被引量：5
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作者 郭锐 田永祥 +5 位作者 周丹娜 段正赢 杨克礼 刘泽文 袁芳艳 刘威 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第2期37-39,共3页
为了分析羊口疮病毒湖北株(ORFV-HB-YX株)B2L基因遗传变化规律,参照Gen Bank公布的ORFV-B2L基因序列设计特异性引物,对ORFV-HB株B2L基因进行PCR扩增、克隆、测序以及遗传进化分析。结果显示,B2L基因PCR扩增产物大小为1 137 bp,编码379... 为了分析羊口疮病毒湖北株(ORFV-HB-YX株)B2L基因遗传变化规律,参照Gen Bank公布的ORFV-B2L基因序列设计特异性引物,对ORFV-HB株B2L基因进行PCR扩增、克隆、测序以及遗传进化分析。结果显示,B2L基因PCR扩增产物大小为1 137 bp,编码379个氨基酸,系统进化树显示HB-YX株与Gen Bank参考毒株的核苷酸序列同源性为97.0%~99.0%,与福建FJ-GS株同源性高达99%亲缘关系最近,属于同一分支。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 B2L基因 克隆 遗传进化分析
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口疮病毒B2L蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量：2
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作者 庞文静 张琪 +3 位作者 郭抗抗 何亚鹏 付明哲 许信刚 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期150-156,共7页
将口疮病毒(orf virus,ORFV)ORFV B2L蛋白基因克隆至原核表达载体p ET-28a(+)中进行重组B2L蛋白的诱导表达;对纯化复性后的B2L蛋白进行Western-blot鉴定;用复性后的B2L蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立检测血清ORFV抗体水平的间接ELI... 将口疮病毒(orf virus,ORFV)ORFV B2L蛋白基因克隆至原核表达载体p ET-28a(+)中进行重组B2L蛋白的诱导表达;对纯化复性后的B2L蛋白进行Western-blot鉴定;用复性后的B2L蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立检测血清ORFV抗体水平的间接ELISA,并进行特异性、灵敏性和重复性试验,最后对临床样品进行检测。结果,原核表达出42 ku的重组B2L蛋白。Western-blot结果表明,重组蛋白具有良好的特异性和抗原反应性。最佳优化反应条件为:抗原包被量每孔600 ng,血清以1∶200倍稀释作用1 h,酶标二抗以1∶5 000倍稀释作用30 min,TMB显色时间为10 min。在该优化条件下,D_(450)≥0.342为阳性,D_(450)<0.342为阴性;特异性试验表明,此间接ELISA对其他阳性血清的检测结果为阴性;对121份阳性血清进行检测,敏感性为99.2%;重复性试验表明,批内和批间D_(450)值的变异系数分别在1.81%~6.23%和1.70%~7.45%之间。本试验建立的体系对临床上676份山羊血清样品进行检测,阳性率为99.4%。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA可用于ORFV抗体的检测。 展开更多
关键词 山羊 绵羊 口疮病毒 B2L蛋白 原核表达 间接ELISA
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