【目的】明确PLC4×2基因在蓖麻(Ricinus communis L.)叶片中的瞬时表达效果及亚细胞定位特征,为基因功能解析奠定基础。【方法】采用农杆菌介导法,将构建的瞬时过表达载体pBI121-EGFPPLC4×2导入蓖麻叶片;通过琼脂糖凝胶电泳...【目的】明确PLC4×2基因在蓖麻(Ricinus communis L.)叶片中的瞬时表达效果及亚细胞定位特征,为基因功能解析奠定基础。【方法】采用农杆菌介导法,将构建的瞬时过表达载体pBI121-EGFPPLC4×2导入蓖麻叶片;通过琼脂糖凝胶电泳检测总RNA完整性,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证基因表达量;采用酶解、过滤、离心法提取蓖麻原生质体,结合荧光倒置显微镜观察进行亚细胞定位分析。【结果】总RNA提取结果显示,28S rRNA与18S rRNA条带清晰,完整性良好;RT-qPCR检测证实,PLC4×2瞬时过表达植株的基因相对表达量显著高于野生型对照(P<0.001),瞬时过表达成功;亚细胞定位结果表明,PLC4×2基因编码的蛋白质主要定位于蓖麻原生质体的叶绿体上。【结论】采用农杆菌介导法,将构建的瞬时过表达载体pBI121-EGFP-PLC4×2导入蓖麻叶片,实现了PLC4×2基因在蓖麻叶片中的瞬时过表达,明确其主要定位于蓖麻原生质体的叶绿体上。展开更多
文摘【目的】明确PLC4×2基因在蓖麻(Ricinus communis L.)叶片中的瞬时表达效果及亚细胞定位特征,为基因功能解析奠定基础。【方法】采用农杆菌介导法,将构建的瞬时过表达载体pBI121-EGFPPLC4×2导入蓖麻叶片;通过琼脂糖凝胶电泳检测总RNA完整性,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证基因表达量;采用酶解、过滤、离心法提取蓖麻原生质体,结合荧光倒置显微镜观察进行亚细胞定位分析。【结果】总RNA提取结果显示,28S rRNA与18S rRNA条带清晰,完整性良好;RT-qPCR检测证实,PLC4×2瞬时过表达植株的基因相对表达量显著高于野生型对照(P<0.001),瞬时过表达成功;亚细胞定位结果表明,PLC4×2基因编码的蛋白质主要定位于蓖麻原生质体的叶绿体上。【结论】采用农杆菌介导法,将构建的瞬时过表达载体pBI121-EGFP-PLC4×2导入蓖麻叶片,实现了PLC4×2基因在蓖麻叶片中的瞬时过表达,明确其主要定位于蓖麻原生质体的叶绿体上。
