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基于生物信息学的布鲁氏菌L7/L12蛋白结构与功能预测
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作者 毛春鹏 李凡 +5 位作者 白者春 杨玲 余梦莎 明雄攀 朱正玲 邓文航 《生物医学》 2025年第4期763-772,共10页
目的:通过生物信息学方法对布鲁氏菌L7/L12蛋白的结构与功能进行系统分析。方法:从NCBI数据库中获取L7/L12基因核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列信息;使用ProtParam和ProtScale对L7/L12蛋白的理化性质和亲疏水性进行分析;运用SignalP... 目的:通过生物信息学方法对布鲁氏菌L7/L12蛋白的结构与功能进行系统分析。方法:从NCBI数据库中获取L7/L12基因核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列信息;使用ProtParam和ProtScale对L7/L12蛋白的理化性质和亲疏水性进行分析;运用SignalP 6.0、TMHMM-2.0和NetPhos-3.1预测信号肽序列、跨膜区结构及磷酸化位点;SOPMA、SWISS-MODEL分别预测L7/L12蛋白的二级和三级结构;ABCpred和SYFPEITHI预测B细胞和T细胞抗原表位;MEGA 11.0对L7/L12蛋白的进化关系进行分析。结果:L7/L12蛋白由124个氨基酸组成,具有稳定疏水特性(亲水性指数0.119)和典型核糖体蛋白特征(α螺旋占比69.35%),无信号肽与跨膜区,有6个磷酸化位点,二级结构中α-螺旋(Hh) 69.35%、无规则卷曲(Cc)22.58%、β-折叠(Ee) 6.45%和β-转角(Tt) 1.61%,三级结构建模(GMQE = 0.78)显示高保守性。筛选出11个B细胞表位和26个T细胞表位(含7个HLA-A*02:01限制性CTL表位),L7/L12在布鲁氏菌属内高度保守。结论:生物信息学分析L7/L12蛋白具有良好的抗原优势表位,为布鲁氏菌病防控提供了新的分子靶点。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 L7/l12蛋白 生物信息学
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布氏杆菌pCDNA3.1-L7L12核酸疫苗的构建及其免疫学评价 被引量:26
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作者 曾政 王英 +6 位作者 赵光宇 周华 于三科 韩岳 罗德炎 马丽娟 王希良 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期208-212,共5页
目的 获得布氏杆菌保护性抗原L7 L12重组蛋白及pCDNA3.1 L7 L12重组质粒 ,并比较其诱导特异性免疫应答的能力。方法 PCR扩增布氏杆菌核蛋白L7 L12基因分别构建至原核表达载体PET32a(+)和真核表达载体pCDNA3.1(+)中 ;pET32a L7 L12重... 目的 获得布氏杆菌保护性抗原L7 L12重组蛋白及pCDNA3.1 L7 L12重组质粒 ,并比较其诱导特异性免疫应答的能力。方法 PCR扩增布氏杆菌核蛋白L7 L12基因分别构建至原核表达载体PET32a(+)和真核表达载体pCDNA3.1(+)中 ;pET32a L7 L12重组质粒转化BL2 1(DE3) ,所表达蛋白经SDS PAGE、免疫印迹分析、纯化后免疫小鼠 ;pCDNA3.1 L7 L12重组质粒配以GM CSF同时肌肉注射免疫小鼠 ,3次免疫后测定免疫功能进行免疫效果的评价。结果 ELISA、Westernblot检测到免疫鼠体内有特异性抗体产生 ,蛋白苗所诱导的抗体效价远远高于DNA疫苗 ;通过淋巴细胞增殖实验、细胞因子和CD分子测定表明DNA疫苗以诱发TH1 型免疫为主。结论 所构建的布氏杆菌DNA疫苗和蛋白苗均具有诱导特异性细胞和体液免疫应答的能力 ,DNA疫苗诱导产生的细胞免疫反应强于蛋白苗 ,可作为潜在的布氏菌新型疫苗 。 展开更多
关键词 布氏杆菌 L7/l12蛋白 DNA疫苗
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布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白B细胞线性抗原表位的预测与鉴定 被引量:10
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作者 成岩 白靓 +4 位作者 董丽刚 韩梅 王敏 张冬丽 霍万学 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第3期206-210,共5页
目的预测猪布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白B细胞线性抗原表位,并鉴定其抗原性。方法以布鲁氏菌S2株为对象,采用NCBI提供的BLAST程序分析其L7/L12蛋白与原核模式生物大肠埃希菌L7/L12蛋白的同源性;使用IEDB网络服务器初步预测B细胞线性表位;在... 目的预测猪布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白B细胞线性抗原表位,并鉴定其抗原性。方法以布鲁氏菌S2株为对象,采用NCBI提供的BLAST程序分析其L7/L12蛋白与原核模式生物大肠埃希菌L7/L12蛋白的同源性;使用IEDB网络服务器初步预测B细胞线性表位;在大肠埃希菌L7/L12蛋白空间结构的基础上,使用SWISS-MODEL服务器构建猪布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白空间结构模型,参考空间结构特点筛选符合形成表位的区域,同时分析区域内易形成表位的3种氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、半胱氨酸)所在位置,综合分析以上结果获得所预测表位;以预测表位序列为基础,人工合成表位多肽-匙孔血蓝蛋白复合抗原并包被酶标板,分别以rL7/L12多克隆抗体及小鼠布鲁氏菌免疫血清为一抗,采用间接ELISA方法验证所预测表位的抗原活性。结果 L7/L12含有潜在的B细胞线性抗原表位,所预测表位区位于N末端第51-66aa,60-75aa,87-102aa;ELISA检测合成的表位多肽蛋白复合物抗原性,60-75aa表位能够与rL7/L12多克隆抗体及布鲁氏菌免疫鼠血清抗体结合。结论筛选的猪布鲁氏菌L7/L12蛋白B细胞线性表位位于N末端第60-75aa区域,具有与特异性血清结合的能力,为布鲁氏菌的感染诊断与疫苗研发奠定了基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 L7/l12 表位 生物信息学
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羊布鲁氏菌BCSP31、OMP31、L7/L12基因的原核表达载体构建及表达 被引量:8
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作者 司瑞 白文涛 +5 位作者 张芳琳 刘艳丽 胡刚 吴兴安 阎岩 徐志凯 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第11期961-964,共4页
目的构建羊布鲁氏菌外膜蛋白BCSP31、OMP31和L7/L12基因的重组表达质粒,并在原核系统中表达。方法根据羊布鲁氏菌M5株外膜蛋白BCSP31、OMP31和抗原L7/L12蛋白基因序列设计引物,分别扩增出大小约为1kb、730bp和380bp的目的基因片断,插入p... 目的构建羊布鲁氏菌外膜蛋白BCSP31、OMP31和L7/L12基因的重组表达质粒,并在原核系统中表达。方法根据羊布鲁氏菌M5株外膜蛋白BCSP31、OMP31和抗原L7/L12蛋白基因序列设计引物,分别扩增出大小约为1kb、730bp和380bp的目的基因片断,插入pGEM7Zf(+)中测序并进行分析。将3种基因片段亚克隆入pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,用SDS-PAGE及Western-blot进行分析鉴定。结果SDS-PAGE结果表明3个目的蛋白均以融合蛋白的方式成功表达,在相对分子量57kDa、49kDa、38kDa处有表达条带,经薄层扫描分析,目的蛋白分别占全菌蛋白的42%、36%、40%。Western-blot证实3种融合蛋白均能被布鲁氏菌免疫兔血清识别。结论成功构建了3种蛋白的表达载体并进行了高效表达,3种蛋白均具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 羊布鲁氏菌 BCSP31蛋白 OMP31蛋白 L7/l12蛋白 基因表达
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布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:4
5
作者 成岩 白靓 +4 位作者 董丽刚 韩梅 王敏 张冬丽 霍万学 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第12期1067-1070,共4页
目的用大肠埃希菌表达布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白,制备其多克隆抗体。方法设计引物,以S2弱毒株DNA基因组为模板扩增目的基因片段L7/L12,构建pET28a-L7/L12质粒并转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,SDS-PAGE检测表达蛋白的可溶... 目的用大肠埃希菌表达布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白,制备其多克隆抗体。方法设计引物,以S2弱毒株DNA基因组为模板扩增目的基因片段L7/L12,构建pET28a-L7/L12质粒并转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,SDS-PAGE检测表达蛋白的可溶性及其分子质量;金属亲和层析法纯化目的蛋白,BCA法对纯化蛋白定量。将rL7/L12蛋白与弗氏完全佐剂混合(终浓度为0.5mg/ml),每次1ml分两次间隔21d免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。免疫结束后12d,颈静脉采血,分离血清,采用间接ELISA法检测血清抗体效价。以免疫血清1∶200倍稀释作为一抗,采用Western blot分析其与r-L7/L12、布鲁氏菌S2株全菌体蛋白及大肠埃希菌DH5α全菌体蛋白结合的特异性。结果经测序与酶切鉴定,成功构建表达载体pET28a-L7/L12,SDS-PAGA分析表达产物部分为可溶性,分子质量单位约为14ku;SDS-PAGE分析亲和纯化蛋白为单一条带,蛋白质含量为0.8mg/ml。间接ELISA检测免疫血清抗体效价为1∶12 800,该抗体能够与r-L7/L12、布鲁氏菌S2株全菌体蛋白结合,而不与大肠埃希菌DH5α菌体蛋白结合。结论成功克隆L7/L12基因并表达出目的蛋白,制备的抗布鲁氏菌S2株r-L7/L12多克隆抗体能特异识别该表达蛋白。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 L7/l12 基因克隆 多克隆抗体
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布鲁菌核糖体蛋白L7/L12的表达纯化及生物活性鉴定 被引量:5
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作者 司瑞 白文涛 +5 位作者 张芳琳 刘艳丽 胡刚 吴兴安 阎岩 徐志凯 《生物技术通讯》 CAS 2006年第6期872-874,共3页
目的:原核表达系统表达布鲁菌核糖体蛋白L7/L12与GST的融合蛋白GST-L7/L12,并纯化蛋白L7/L12,建立检测特异性抗体的间接ELISA方法。方法:对含有L7/L12的原核表达载体pGEX-4T-1-L7/L12进行了原核表达。利用亲和层析柱分别纯化融合蛋白GST... 目的:原核表达系统表达布鲁菌核糖体蛋白L7/L12与GST的融合蛋白GST-L7/L12,并纯化蛋白L7/L12,建立检测特异性抗体的间接ELISA方法。方法:对含有L7/L12的原核表达载体pGEX-4T-1-L7/L12进行了原核表达。利用亲和层析柱分别纯化融合蛋白GST-L7/L12和蛋白L7/L12,并用SDS-PAGE及Western印迹分析鉴定。以L7/L12为抗原包被微量板,优化抗原包被浓度和羊抗鼠IgG-HRP稀释度,建立间接ELISA方法,并检测其特异性。结果:SDS-PAGE结果显示在相对分子质量为38000和12000处可见纯化蛋白的条带,Western印迹分析表明这2条带均能被免疫兔血清识别,表明获得了纯化的有生物活性的融合蛋白GST-L7/L12和蛋白L7/L12。间接ELISA方法的L7/L12抗原包被浓度为5μg/mL,羊抗鼠酶标二抗稀释度为1∶1000。小鼠免疫血清与L7/L12抗原出现阳性反应,而与布鲁菌融合蛋白OMP31、结核分枝杆菌抗原85b及牛血清白蛋白则呈阴性。结论:成功地对布鲁菌核糖体蛋白L7/L12进行了原核表达和纯化,以其为基础建立的间接ELISA方法稳定且特异。 展开更多
关键词 布鲁菌 核糖体蛋白L7/l12 ELISA
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一个遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系F7基因信号肽区L12R和3''非翻译区c11814-insAA复合性突变与表型分析 被引量:2
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作者 刘珊 张敬宇 +3 位作者 李峥嵘 王艳 牛志云 林凤茹 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期508-515,共8页
目的:通过对一个遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)缺陷症患者家系成员表型与基因型分析,研究其基因突变与临床表型的关系,探讨其分子发病机制。方法:对先证者及其父母进行活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原和FⅦ活性(FⅦ:C)... 目的:通过对一个遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)缺陷症患者家系成员表型与基因型分析,研究其基因突变与临床表型的关系,探讨其分子发病机制。方法:对先证者及其父母进行活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原和FⅦ活性(FⅦ:C)、FⅦ抗原(FⅦ:Ag)检测,对其F7基因的全部外显子及侧翼、启动子区进行测序,以寻找致病基因突变。根据信号肽预测数据库构建包含所发现突变的FVII蛋白分子模型,进行功能预测,推断其对蛋白合成和功能的影响。结果:先证者APTT正常,PT明显延长(58.3 s),FⅦ:C显著下降(1.1%),FⅦ:Ag重度降低(0.9%),其父母的APTT、PT、FⅦ:C和FⅦ:Ag均在正常范围内。先证者和其父亲的F7基因第1a外显子第556位核苷酸发生杂合性T/G突变,导致相应氨基酸由亮氨酸(L)变成精氨酸(R),即L12R。功能预测分析提示,L12R突变影响到信号肽区不同区域的分割及其相应功能,进而导致成熟蛋白质的合成减少和因子活性明显降低。同时,先证者F7基因还存在自发性3'非翻译区c11814-ins AA杂合性突变,而其父母均无此突变。结论:发现1例F7基因L12R突变,位于信号肽区的该杂合突变是导致此例遗传性FVII缺乏症发生的主要分子基础,而位于3'非翻译区的自发性c11814-ins AA突变则进一步造成了FⅦ合成的减低。 展开更多
关键词 凝血因子Ⅶ缺陷 F7基因 信号肽区l12R 3'非翻译区 c11814-insAA复合性突变
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载体介导的布鲁氏菌L7/L12疫苗研制现状 被引量:4
8
作者 李文桂 陈雅棠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第7期864-866,共3页
布鲁氏菌感染引起的布鲁氏菌病是一种严重危害人类健康的人畜共患传染病,采用疫苗防治该菌是当前研究的热点领域之一。L7/L12蛋白是一种有效的疫苗候选分子,本文综述鼠伤寒沙门氏菌、乳酸乳球菌、大肠埃希菌、酿酒酵母和禽流感病毒等载... 布鲁氏菌感染引起的布鲁氏菌病是一种严重危害人类健康的人畜共患传染病,采用疫苗防治该菌是当前研究的热点领域之一。L7/L12蛋白是一种有效的疫苗候选分子,本文综述鼠伤寒沙门氏菌、乳酸乳球菌、大肠埃希菌、酿酒酵母和禽流感病毒等载体介导的布鲁氏菌L7/L12疫苗的研制现状。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 L7/l12蛋白 疫苗 综述
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布鲁氏菌L7/L12、OMP31基因的克隆、测序及免疫原性分析 被引量:4
9
作者 张广雷 苗利光 +3 位作者 刘艳环 李海涛 李庆超 庄风歧 《特产研究》 2009年第4期5-8,共4页
为研制鹿布鲁氏菌病工程疫苗,根据已发表的布鲁氏菌核糖体蛋白L7/L12、外膜蛋白OMP31基因设计两对引物进行扩增,PCR产物连接pGEM-Teasy载体,转化DH5α后测序,并进行基因分析。结果从布鲁氏菌疫苗株中克隆出L7/L12和OMP312个目的基因,同... 为研制鹿布鲁氏菌病工程疫苗,根据已发表的布鲁氏菌核糖体蛋白L7/L12、外膜蛋白OMP31基因设计两对引物进行扩增,PCR产物连接pGEM-Teasy载体,转化DH5α后测序,并进行基因分析。结果从布鲁氏菌疫苗株中克隆出L7/L12和OMP312个目的基因,同源分析L7/L12达97.1%,OMP31达100%,免疫原性分析可作为免疫优势抗原。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 核糖体蛋白L7/l12 OMP31 同源性
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硼替佐米上调fas、bcl2l12、caspase-9和caspase-3基因表达 被引量:1
10
作者 卓志红 牧启田 +3 位作者 张乐鸣 欧阳桂芳 张怡 楼燕如 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期883-887,共5页
目的:探讨硼替佐米诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡及新基因bcl2l12在其中的作用。方法:MTT比色法观察硼替佐米对K562细胞的生长抑制作用;Annexin-V标记和线粒体跨膜电位(Δψm)分析细胞凋亡;RT-PCR方法检测0、6、12和24hfas、b... 目的:探讨硼替佐米诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡及新基因bcl2l12在其中的作用。方法:MTT比色法观察硼替佐米对K562细胞的生长抑制作用;Annexin-V标记和线粒体跨膜电位(Δψm)分析细胞凋亡;RT-PCR方法检测0、6、12和24hfas、bcl2l12、bcl-2、bim、bax、caspase-3和caspase-9基因表达变化。结果:硼替佐米抑制K562细胞生长呈时间和剂量依赖性,24h和48h半数抑制浓度分别为161.41nmol/L和96.33nmol/L;硼替佐米诱导K562细胞凋亡,12h Annexin-V阳性细胞就开始增高,并呈时间依赖性,Δψm减低;RT-PCR显示fas、bcl2l12、caspase-3和caspase-9表达增高,但bcl-2、bim和bax表达无明显改变。结论:硼替佐米可以抑制K562生长并诱导凋亡,上调fas、bcl2l12,使线粒体膜电位下降,激活caspase-9和caspase-3基因,促使DNA发生断裂可能是其诱导凋亡的机制之一。 展开更多
关键词 硼替佐米 K562细胞 基因 bcl2l12 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶类
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抗羊布鲁菌核糖体蛋白L7/L12单克隆抗体制备及初步鉴定
11
作者 司瑞 徐志凯 +5 位作者 张芳琳 白文涛 吴兴安 王海涛 于澜 胡刚 《科学技术与工程》 2006年第19期3043-3046,共4页
制备抗羊布鲁菌核糖体蛋白L7/L12的单克隆抗体(mAb),为进一步研制布鲁菌检测方法和免疫制剂提供基础。常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗核糖体蛋白L7/L12的mAb,并用Westernblot和ELISA方法对其特异性、抗原识别表位及相对亲和力等... 制备抗羊布鲁菌核糖体蛋白L7/L12的单克隆抗体(mAb),为进一步研制布鲁菌检测方法和免疫制剂提供基础。常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗核糖体蛋白L7/L12的mAb,并用Westernblot和ELISA方法对其特异性、抗原识别表位及相对亲和力等做了初步鉴定。获得了4株抗L7/L12蛋白的mAb:1B1,2A2,2H9和2H10,相对亲和力为2A2>2H10>2H9>1B1,4株mAb识别的抗原表位相近,但仍存在一定的差异。得到的4株稳定的杂交瘤细胞系分泌的mAb能特异结合L7/L12蛋白。 展开更多
关键词 羊布鲁菌 核糖体蛋白L7/l12 单克隆抗体
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布鲁氏菌L7/L12蛋白的基因克隆与原核表达 被引量:3
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作者 胡祥坤 卢天成 +2 位作者 王岩 刘思阳 王秀然 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期3046-3050,共5页
本研究对羊布鲁氏菌L7/L12蛋白进行了表达和纯化。首先从布鲁氏菌M5基因组中克隆L7/L12目的基因片段,连接至pMD-19T载体,转化入E.coli DH5α感受态细胞,PCR鉴定及测序鉴定正确后对其进行双酶切,构建重组质粒pGEX-6P-1-L7/L12并利用E.col... 本研究对羊布鲁氏菌L7/L12蛋白进行了表达和纯化。首先从布鲁氏菌M5基因组中克隆L7/L12目的基因片段,连接至pMD-19T载体,转化入E.coli DH5α感受态细胞,PCR鉴定及测序鉴定正确后对其进行双酶切,构建重组质粒pGEX-6P-1-L7/L12并利用E.coli BL21(DE3)进行诱导表达。羊布鲁氏菌L7/L12基因片段大小为375 bp。SDS-PAGE检测蛋白大小为13 kD,与预测值相符。Western blotting方法检测其免疫学特性。实验结果表明,成功构建了pGEX-6P-1-L7/L12原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了L7/L12重组蛋白,Western blotting法检测其具有免疫反应。本实验为下一步研究蛋白功能及布鲁氏菌新型疫苗的研制提供了实验基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 L7/l12基因 原核表达 纯化
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牛布鲁菌L7/L12蛋白的原核表达及纯化 被引量:1
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作者 梁晓英 赵娜 +3 位作者 王贤平 郑经成 吴威 闫广谋 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第8期762-764,共3页
目的原核表达并纯化牛布鲁菌L7/L12蛋白。方法提取牛布鲁菌S19基因组DNA,PCR法扩增L7/L12基因,经测序正确后,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-L7/L12,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形... 目的原核表达并纯化牛布鲁菌L7/L12蛋白。方法提取牛布鲁菌S19基因组DNA,PCR法扩增L7/L12基因,经测序正确后,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-L7/L12,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式及表达量,经亲和层析纯化后,Western blot鉴定纯化产物。结果所构建的重组原核表达质粒pET-L7/L12经酶切鉴定表明构建正确。重组蛋白以包涵体形式表达,表达量占全菌总蛋白的33%;纯化的重组蛋白纯度可达94%,可与布鲁菌小鼠免疫血清发生特异反应。结论已成功表达并纯化了牛布鲁菌L7/L12蛋白,为建立高特异性的新型布鲁菌检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 牛布鲁菌 L7/l12蛋白 原核表达 纯化
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以核糖体蛋白L7/L12为分子标志物精准检测肺炎链球菌的研究 被引量:2
14
作者 王猛 宋慧茹 +3 位作者 程雨洁 王毅 杨波 胡征 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期34-41,共8页
目的:以核糖体蛋白L7/L12为标志物,探索一种胶体金免疫层析法快速检测肺炎链球菌的方法。方法:分析核糖体蛋白L7/L12基因序列,构建原核表达载体,表达纯化重组蛋白,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体;利用无标记分子相互作用仪检测抗原抗体... 目的:以核糖体蛋白L7/L12为标志物,探索一种胶体金免疫层析法快速检测肺炎链球菌的方法。方法:分析核糖体蛋白L7/L12基因序列,构建原核表达载体,表达纯化重组蛋白,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体;利用无标记分子相互作用仪检测抗原抗体亲和力;以双抗夹心法研制胶体金免疫层析检测试纸条,并对其特异性、敏感性及稳定性进行验证分析。结果:筛选得到两株高效分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,两种单克隆抗体均与抗原有高的亲和力并且无竞争,制作的试纸最低检出限为1.0×10^5CFU/ml;其与肺炎链球菌有特异性反应,而与其它9种常见呼吸道病原菌均无交叉反应;试纸条在25℃下保存12个月仍具有良好的重复性和稳定性。结论:RP-L7/L12可作为肺炎链球菌的检测标志物,以其单抗制备的胶体金免疫层析试纸可适用于肺炎链球菌的快速检测。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 核糖体蛋白L7/l12 单克隆抗体 胶体金免疫层析法
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布鲁菌L7/L12蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:4
15
作者 成璐 张冬星 +1 位作者 吴娟 李影 《动物医学进展》 北大核心 2018年第12期10-14,共5页
为制备布鲁菌(Brucella)L7/L12蛋白及其小鼠源多克隆抗体,根据猪布鲁菌(Brucella suis)S2株L7/L12基因序列,设计合成特异性引物,PCR扩增L7/L12基因并将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a-L7/L12,经鉴定正确后转化... 为制备布鲁菌(Brucella)L7/L12蛋白及其小鼠源多克隆抗体,根据猪布鲁菌(Brucella suis)S2株L7/L12基因序列,设计合成特异性引物,PCR扩增L7/L12基因并将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a-L7/L12,经鉴定正确后转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,重组菌经IPTG诱导后成功表达出分子质量为17ku的重组蛋白。将诱导表达的蛋白经镍柱亲和层析纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,并测定其抗体效价。Western blot结果表明,原核表达后纯化的L7/L12蛋白能够与制得的小鼠抗L7/L12蛋白多克隆抗体特异性结合。成功获得了纯化的L7/L12重组蛋白和小鼠抗L7/L12多克隆抗体,为进一步研究L7/L12蛋白对布鲁菌感染的诊断方法和基因工程疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 布鲁菌 L7/l12蛋白 原核表达 多克隆抗体
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核糖体蛋白L12(RPL12)在猪繁殖与呼吸综合征病毒复制中的作用 被引量:1
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作者 殷杰 赵永祥 +3 位作者 薛江东 刘锴 李彬 马德慧 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第3期686-693,共8页
为研究宿主细胞核糖体蛋白L12(RPL12)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)复制中的作用,本研究通过荧光定量PCR和Western-blotting等方法,检测了PRRSV感染对Marc-145细胞中RPL12表达... 为研究宿主细胞核糖体蛋白L12(RPL12)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)复制中的作用,本研究通过荧光定量PCR和Western-blotting等方法,检测了PRRSV感染对Marc-145细胞中RPL12表达的影响,以及过表达或敲减RPL12对PRRSV复制的影响。结果显示,PRRSV感染可上调Marc-145细胞中RPL12基因的表达。过表达RPL12可促进PRRSV的复制,而敲减RPL12可抑制PRRSV的复制。通过免疫共沉淀和共聚焦显微镜检测,进一步研究发现RPL12蛋白与PRRSV GP2b蛋白存在相互作用,并共定位于细胞质中。本研究首次发现了宿主蛋白RPL12能够促进PRRSV复制,并与PRRSV GP2b蛋白存在相互作用,为进一步研究PRRSV的感染与复制机制以及与宿主的相互作用提供了新的切入点,为抗病毒药物的研发提供了有益的探索。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 核糖体蛋白l12(RPl12) PRRSV GP2b蛋白
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Bcl2l12在乳腺癌中的研究进展 被引量:4
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作者 韩洋 任建强 +1 位作者 盛宇伟 潘炯 《中国医药指南》 2018年第10期37-38,40,共3页
Bcl2L12作为Bcl-2家族的成员在细胞凋亡、肿瘤发生和抗癌治疗的细胞反应中发挥了重要作用。在不同的临床研究中,已经发现Bcl2L12的表达与乳腺癌患者的预后存在明显相关性。在不同类型的乳腺癌中,Bcl2L12的表达也存在明显差异。同时Bcl2... Bcl2L12作为Bcl-2家族的成员在细胞凋亡、肿瘤发生和抗癌治疗的细胞反应中发挥了重要作用。在不同的临床研究中,已经发现Bcl2L12的表达与乳腺癌患者的预后存在明显相关性。在不同类型的乳腺癌中,Bcl2L12的表达也存在明显差异。同时Bcl2L12的表达与乳腺癌的分期以及淋巴结转移的数量存在相关性。不同的抗癌药物治疗也会引起Bcl2L12在m RNA表达水平上的改变。然而,需要进一步研究Bcl2L12与乳腺癌预后、与乳腺癌细胞生物学行为的相关关系,为乳腺癌的治疗提供更有意义的临床价值和社会效益。 展开更多
关键词 Bcl2家族 Bcl2l12 乳腺癌
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BCL2L12基因治疗对于小鼠阿尔兹海默病的影响及机制 被引量:2
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作者 邹良玉 张丰 +4 位作者 黄鹤鸣 何奕涛 秦海燕 曹旭 潘建青 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期380-385,共6页
目的观察BCL2L12基因治疗对于阿尔茨海默病模型小鼠行为学及分子病理学的影响。方法应用立体定向仪将携带空壳基因及BCL2L12基因的腺相关病毒注射至C57小鼠海马CA1区,2周后相同部位注射Aβ(1μg),2周后进行行为学实验及免疫组织化学染色... 目的观察BCL2L12基因治疗对于阿尔茨海默病模型小鼠行为学及分子病理学的影响。方法应用立体定向仪将携带空壳基因及BCL2L12基因的腺相关病毒注射至C57小鼠海马CA1区,2周后相同部位注射Aβ(1μg),2周后进行行为学实验及免疫组织化学染色(6E10及AT8)。结果旷场实验发现,空壳基因治疗组与目的基因治疗组在中心区的时间与记录总时间的比值显著低于空白对照小鼠,两治疗组之间差异无统计学意义。水迷宫实验发现,目的基因治疗组及空白对照组平均潜伏期均于第2天显著缩短,而空壳基因治疗组平均潜伏期于第3天显著缩短。6E10及AT8免疫荧光染色发现空壳基因治疗组及目的基因治疗组小鼠染色脑片平均吸光度显著高于空白对照组小鼠,空壳基因治疗组小鼠染色脑片平均吸光度高于目的基因治疗组小鼠,但差异无统计学意义。结论应用BCL2L12基因治疗无法改善AD小鼠的焦虑情绪,但是可以提高AD小鼠的学习记忆功能,可能与BCL2L12基因治疗减少Aβ沉积以及Tau蛋白磷酸化有关。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 Β-淀粉样蛋白 BCL2l12基因 TAU蛋白 行为学实验 小鼠
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Bcl2L12蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义 被引量:3
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作者 韩洋 任建强 盛宇伟 《南昌大学学报(医学版)》 CAS 2018年第3期53-55,共3页
目的探讨Bcl2like 12(Bcl2L12)蛋白在乳腺癌组织中的表达水平及其临床意义。方法收集乳腺癌患者的石蜡包埋组织标本132例,采用免疫组织化学EnVision二步法检测Bcl2L12蛋白的表达水平,并分析Bcl2L12与临床病理学特征之间的关系,以及与患... 目的探讨Bcl2like 12(Bcl2L12)蛋白在乳腺癌组织中的表达水平及其临床意义。方法收集乳腺癌患者的石蜡包埋组织标本132例,采用免疫组织化学EnVision二步法检测Bcl2L12蛋白的表达水平,并分析Bcl2L12与临床病理学特征之间的关系,以及与患者的无病生存期(DFS)、总生存期(OS)之间的关系。结果乳腺癌组织中Bcl2L12蛋白阳性表达呈棕黄色弥漫染色或颗粒状,主要定位于胞质。原发肿瘤>2cm、有淋巴结转移、组织学分级为Ⅱ—Ⅲ级Bcl2L12蛋白表达阳性率均明显高于原发肿瘤≤2cm、无淋巴结转移、组织学分级为Ⅰ级(均P<0.05)。Bcl2L12蛋白表达与原发肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级呈正相关(r=0.206、0.197、0.179,均P<0.05),Bcl2L12蛋白表达与年龄无关(r=-0.002,P>0.05)。Bcl2L12蛋白低表达者有更高的无病生存率(85.7%)和总生存率(96.4%)。结论 Bcl2L12蛋白的高表达与乳腺癌的发生、发展有关,其表达对乳腺癌患者具有病情判断和预后评估的价值。 展开更多
关键词 乳腺癌 Bcl2l12蛋白 免疫组织化学 Kaplan-Meier生存分析 临床意义
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BCL2-L12在子宫内膜癌中的表达及其与病理参数的关系 被引量:3
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作者 杨迪 马晓欣 《现代肿瘤医学》 CAS 2017年第4期610-613,共4页
目的:通过测定BCL2-L12在正常子宫内膜组织和子宫内膜癌组织中的表达情况,探讨BCL2-L12在子宫内膜癌中的表达及其与病理参数的相关性。方法:应用Real time PCR法检测36例良性病变切除子宫患者(对照组)的正常内膜组织及64例子宫内膜癌患... 目的:通过测定BCL2-L12在正常子宫内膜组织和子宫内膜癌组织中的表达情况,探讨BCL2-L12在子宫内膜癌中的表达及其与病理参数的相关性。方法:应用Real time PCR法检测36例良性病变切除子宫患者(对照组)的正常内膜组织及64例子宫内膜癌患者(实验组)病变内膜组织中BCL2-L12的表达情况,并分析其与临床病理参数的关系。结果:BCL2-L12在子宫内膜癌组织中的表达低于正常子宫内膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);BCL2-L12在子宫内膜癌组织中的表达水平与肌层浸润程度有关,差异有统计学意义(P<0.05)。BCL2-L12在子宫内膜癌组织中的表达与其他临床病理特征(比如病理学分期、组织学分化程度等)差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BCL2-L12在子宫内膜癌组织中呈现低表达,且表达水平与肌层浸润程度有关,提示BCL2-L12可能在子宫内膜癌的发生发展中起抑制作用。 展开更多
关键词 BCL2-l12 子宫内膜癌 REAL-TIME PCR
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