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减蛋综合征病毒Knob-S蛋白的表达和免疫原性研究
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作者 王秀丽 时宏超 +4 位作者 刘新文 祝洪伟 刘大卫 于可超 夏娜 《家禽科学》 2024年第8期125-128,I0007,共5页
为研究减蛋综合征病毒亚单位疫苗,构建了表达减蛋综合征病毒(Egg drop syndrome virus,EDSV)Knob-S蛋白的大肠杆菌重组菌株,成功表达出可溶性的Knob-S蛋白,血凝(Hemagglutination,HA)和交叉血凝抑制(Hemagglutination inhibition,HI)试... 为研究减蛋综合征病毒亚单位疫苗,构建了表达减蛋综合征病毒(Egg drop syndrome virus,EDSV)Knob-S蛋白的大肠杆菌重组菌株,成功表达出可溶性的Knob-S蛋白,血凝(Hemagglutination,HA)和交叉血凝抑制(Hemagglutination inhibition,HI)试验结果表明,该蛋白具有良好的生物学活性。分别以HA效价为1:32、1:64、1:128的Knob-S蛋白制备油乳剂灭活疫苗,免疫147日龄SPF鸡21 d后的HI抗体检测结果显示,HA效价为1:64和1:128制备疫苗免疫组可产生良好的HI抗体(≥7.1log2),攻毒结果显示,当HI抗体效价≥6log2时可提供有效的攻毒保护。结果表明,表达的Knob-S蛋白具有良好免疫原性,可作为减蛋综合征病毒亚单位疫苗制备的候选毒株。 展开更多
关键词 knob-S蛋白 表达 免疫原性
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人工智能增强的数据库管理系统
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作者 王宏志 燕钰 +2 位作者 韩卓宸 耿健 程思佳 《计算》 2025年第6期68-82,共15页
随着大数据和云计算的发展,传统数据库管理系统在处理海量数据规模、复杂业务需求上面临显著挑战。人工智能技术的快速发展为数据库系统的智能化演进提供了新的解决方案。本文探讨了人工智能增强的数据库管理系统的关键技术及未来趋势,... 随着大数据和云计算的发展,传统数据库管理系统在处理海量数据规模、复杂业务需求上面临显著挑战。人工智能技术的快速发展为数据库系统的智能化演进提供了新的解决方案。本文探讨了人工智能增强的数据库管理系统的关键技术及未来趋势,重点分析了深度学习、强化学习在存储优化、索引优化、查询代价估计、自动调参等方面的应用,并展望了前沿人工智能技术与数据库融合的发展趋势。通过将人工智能技术与数据库系统深度融合,可显著提升系统的自治能力与性能表现,为下一代智能数据库管理系统发展提供重要技术支撑。 展开更多
关键词 人工智能 数据库管理系统 旋钮调优 智能存储 索引优化 代价估计
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基于组合加工的多齿形汽车旋钮注塑模设计 被引量:2
3
作者 刘敬祺 胡光良 +2 位作者 张跃飞 严胜义 朱少军 《工程塑料应用》 北大核心 2025年第1期105-112,共8页
汽车旋钮作为内饰面板上重要的功能零件,其操作表面常设计为多齿形结构并采用电镀后处理工艺,以赋予产品独特的人机交互体验。为了顺利成型脱模,齿形结构的成型应设计多向抽芯机构,并严格控制行位分型段差,以保证产品成型质量。以某汽... 汽车旋钮作为内饰面板上重要的功能零件,其操作表面常设计为多齿形结构并采用电镀后处理工艺,以赋予产品独特的人机交互体验。为了顺利成型脱模,齿形结构的成型应设计多向抽芯机构,并严格控制行位分型段差,以保证产品成型质量。以某汽车品牌内饰旋钮为例,分析建立了一套关于齿形结构与抽芯行位数量的计算方法,以此确定最优行位抽芯方案。行位成型齿面采用电火花放电成型工艺,根据加工对象离散程度,实际生产分为分体式加工和组合式加工。其中组合式加工需要五轴数控加工制备整体式电极,依赖模具装配关系组合行位实现一体化成型。通过合理拆分成型零件结构及加工定位孔系以实现行位成型过程的可靠定位,以此为基础设计了一套基于组合加工的多齿形汽车旋钮注塑模具,并详细叙述了模具结构设计方案。实践表明,组合式加工工艺比分体式加工在生产效率及质量方面均有明显提升,设计制造的模具安全可靠,塑件成型满足预期要求,分型段差明显改善,可控制在0.02mm以内,电镀表面质量良好,无积镀、毛刺、鼓包、起皮等缺陷。 展开更多
关键词 汽车旋钮 多齿形结构 电火花放电 组合加工 多向抽芯
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产蛋下降综合征病毒纤突蛋白Knob-S区原核表达及其活性分析 被引量:6
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作者 陈滔 唐应华 +5 位作者 陆吉虎 高峰 于漾 何家惠 黎满香 侯继波 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第6期41-44,共4页
通过PCR扩增得到产蛋下降综合征病毒(EDSV)纤突蛋白Knob-S区基因,将其克隆至原核表达载体pET-32(a)的多克隆位点构建了原核表达载体pET-32(a)-Knob-S,将其转化至感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了42ku的融合蛋白,用... 通过PCR扩增得到产蛋下降综合征病毒(EDSV)纤突蛋白Knob-S区基因,将其克隆至原核表达载体pET-32(a)的多克隆位点构建了原核表达载体pET-32(a)-Knob-S,将其转化至感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了42ku的融合蛋白,用纯化的融合蛋白免疫鸡制备抗血清,通过血凝试验、Western blot和血凝抑制试验分析,表明该融合蛋白不能凝集鸡红细胞,无血凝活性;但可与EDSV阳性血清发生特异反应,并诱导机体产生特异性抗体,具有很好的抗原性。 展开更多
关键词 产蛋下降综合征病毒 原核表达 knob—S区
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减蛋下降综合征病毒重组Knob-S基因在杆状病毒系统中的表达及其免疫原性鉴定 被引量:2
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作者 郑金 陈滔 +4 位作者 陆吉虎 高峰 候继波 黎满香 唐应华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期600-603,共4页
为以杆状病毒系统在Sf9细胞中表达含减蛋下降综合征病毒(EDSV)重组Knob-S蛋白质来制备亚单位疫苗,采用PCR方法从鸭胚繁殖的EDSV尿囊液中扩增Knob-S基因,并克隆到p Fast Bac1中,经转化DH10Bac获得重组r Bac-Knob-S。将r Bac-Knob-S转染Sf... 为以杆状病毒系统在Sf9细胞中表达含减蛋下降综合征病毒(EDSV)重组Knob-S蛋白质来制备亚单位疫苗,采用PCR方法从鸭胚繁殖的EDSV尿囊液中扩增Knob-S基因,并克隆到p Fast Bac1中,经转化DH10Bac获得重组r Bac-Knob-S。将r Bac-Knob-S转染Sf9细胞获得重组杆状病毒,利用重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白质。重组Knob-S蛋白质经Western blotting和间接免疫荧光试验鉴定均为阳性。将重组Knob-S蛋白质制备成疫苗,按1羽0.3 ml(含50μg的重组病毒)免疫6周龄非免海兰褐雏鸡,在免疫后第2周可检测到血凝抑制抗体效价达8.5 lg2,在第3周达到高峰(9.5 lg2),表明重组Knob-S蛋白质具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 减蛋下降综合征病毒 重组knob-S 真核表达 杆状病毒表达系统
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重组减蛋综合征病毒KnobS干酪乳杆菌的构建与表达 被引量:1
6
作者 郭建军 袁林 +2 位作者 曾静 邱小忠 付锦楠 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第2期81-86,共6页
以干酪乳杆菌为传递载体,以开发食品级安全的减蛋综合征病毒疫苗为目标,构建了一个温度敏感型自杀型质粒系统p ORZP-UKD。将该质粒电转化到干酪乳杆菌L.casei中,经过2次升温处理和5-氟尿嘧啶抗性筛选,挑选阳性克隆,采用PCR和SDS-PAGE方... 以干酪乳杆菌为传递载体,以开发食品级安全的减蛋综合征病毒疫苗为目标,构建了一个温度敏感型自杀型质粒系统p ORZP-UKD。将该质粒电转化到干酪乳杆菌L.casei中,经过2次升温处理和5-氟尿嘧啶抗性筛选,挑选阳性克隆,采用PCR和SDS-PAGE方法进行鉴定。KnobS基因整合到干酪乳酸杆菌基因组内,并实现融合蛋白KnobS的分泌表达。表明得到了一株具有无任何选择性标记、携带有KnobS表达盒元件的基因组整合的重组干酪乳酸杆菌KnobSΔupp L.casei,且整合的外源基因能够随着细菌的复制而进行表达,为减蛋综合征病毒免疫保护性抗原KnobS疫苗的进一步研制提供了试验数据。 展开更多
关键词 干酪乳杆菌 减蛋综合征病毒knobS蛋白 基因组表达
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累及Hand knob区的分水岭梗死致“垂腕”1例及文献复习 被引量:3
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作者 王继蕊 林梅青 +1 位作者 徐家欢 商秀丽 《中国实用神经疾病杂志》 2020年第16期1462-1465,共4页
目的探讨以“垂腕”为主要临床表现的分水岭梗死的临床特点及影像学特点。方法收集1例以“垂腕”为主要临床表现的分水岭梗死患者的临床资料并复习相关文献。结果Hand knob区受累的分水岭梗死也可使患者出现单纯“垂腕”症状。结论“垂... 目的探讨以“垂腕”为主要临床表现的分水岭梗死的临床特点及影像学特点。方法收集1例以“垂腕”为主要临床表现的分水岭梗死患者的临床资料并复习相关文献。结果Hand knob区受累的分水岭梗死也可使患者出现单纯“垂腕”症状。结论“垂腕”不仅是周围神经系统受累的标志,也可由于Hand knob区受累的分水岭梗死所致。 展开更多
关键词 分水岭梗死 垂腕 Hand knob 临床特点 影像学特点
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The NDT detection of knobs' shape by video treatment technique 被引量:3
8
作者 任洪娥 马岩 +2 位作者 唐晓华 张瑞滨 朱晓明 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 1999年第3期191-193,共3页
The NDT detection of knobs of logs and timbers was conducted by using computer video technique.The key detection points were taken from these knobs for mathematics description. It can make the drawing ofthese knobs qu... The NDT detection of knobs of logs and timbers was conducted by using computer video technique.The key detection points were taken from these knobs for mathematics description. It can make the drawing ofthese knobs quantitatively and establish corresponding mathematics models. Using the grayness of pictures andcartoon if eatment made the mathemstics reappearance of the knobs become more access to video pictures. 展开更多
关键词 knob. VIDEO treatment. NDT DETECTION
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FBO:基于联邦学习的云数据库旋钮调优技术
9
作者 燕钰 戴志宇 +1 位作者 吕泽楷 王宏志 《软件学报》 北大核心 2025年第3期962-980,共19页
近年来,随着软硬件的发展,数据库上云已经成为了新兴发展趋势,能够降低中小型企业和个人用户的数据库运维成本.进一步地,云数据库的发展带来了庞大的运维市场需求,研究者们提出了诸多数据库自调优技术来支持数据库旋钮自动优化.为了提... 近年来,随着软硬件的发展,数据库上云已经成为了新兴发展趋势,能够降低中小型企业和个人用户的数据库运维成本.进一步地,云数据库的发展带来了庞大的运维市场需求,研究者们提出了诸多数据库自调优技术来支持数据库旋钮自动优化.为了提高调优效率,现有技术从仅关注调优问题本身,到开始关注如何复用历史经验来为当前数据库实例找到最佳参数配置.然而,随着云数据库的发展,用户逐渐提高了对隐私保护的要求,期望在拥有高效数据存取效率的同时避免隐私泄露.现有方法并未考虑到保护用户的历史调优经验隐私,可能会使得用户负载特征被感知,带来经济损失.详细分析了云数据库调优任务的特点,有机结合服务端和用户端,提出了一种基于联邦学习的云数据库旋钮调优技术.首先,为了解决联邦学习中数据异构的问题,提出了基于元特征匹配的经验筛选方法提前将数据分布差异较大的历史经验剔除,以提高联邦学习的效率.为了实现保护用户隐私,结合云数据库服务特性,提出了以节点端为训练中心的联邦贝叶斯调优算法,通过随机傅里叶特征来完成保证调优经验不失真的前提下保护用户隐私.在多个公开benchmark上的结果表明,方法可以达到与现有调优方法相当的调优结果,并且由于复用了历史经验,可以大大提高调优效率. 展开更多
关键词 云数据库 联邦学习 旋钮调优
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一体化成型汽车旋钮总成双色注塑模设计
10
作者 刘敬祺 胡光良 +2 位作者 严胜义 张跃飞 朱少军 《工程塑料应用》 北大核心 2025年第9期147-154,共8页
汽车旋钮总成由旋钮主体、内壳构成,受零件结构及模具复杂程度等多方面限制,通常在分体注塑后采用卡扣人工组装的传统制造工艺实现。该方式存在装配间隙小、组装过程控制难、结构磨损后使用稳定性差等缺陷。基于多年模具设计制造的实践... 汽车旋钮总成由旋钮主体、内壳构成,受零件结构及模具复杂程度等多方面限制,通常在分体注塑后采用卡扣人工组装的传统制造工艺实现。该方式存在装配间隙小、组装过程控制难、结构磨损后使用稳定性差等缺陷。基于多年模具设计制造的实践总结,提出了一种旋钮总成一体化成型的工艺方案,利用双色注塑过程,第1色成型聚碳酸酯内壳,第2色成型丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物的旋钮主体。结合塑件结构特征,模具采用了四次分型的细水口标准模架,选取主体外形最大轮廓作为主分型面,并分析确定最优的多行位拆镶方案。双色子模的浇注系统、成型零部件、温控系统及行位机构设计存在差异,分别实现第1色前模预抽、第2色子模多行位分段抽芯等不同过程的成型需求。实践表明,模具设计结构合理、动作可靠。对比传统工艺,批量生产节拍缩至32 s,废品率减少23%,质量提升的同时生产效率大幅提升,相关客诉数量大幅降低。 展开更多
关键词 旋钮总成 一体化成型 双色模具 前模预抽 分段抽芯
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共表达KnobS蛋白与LTB蛋白的重组干酪乳杆菌构建 被引量:1
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作者 付锦楠 郭建军 +2 位作者 袁林 傅筱冲 何顺华 《江西科学》 2014年第2期143-146,171,共5页
在干酪乳杆菌中表达减蛋综合征病毒纤维蛋白KnobS,并分析其抗原性。分别将编码减蛋综合征病毒主要免疫保护性抗原纤维蛋白KnobS与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因插入干酪乳酸杆菌分泌表达载体pMG36e-UP/L中,成功构建重组表达载体... 在干酪乳杆菌中表达减蛋综合征病毒纤维蛋白KnobS,并分析其抗原性。分别将编码减蛋综合征病毒主要免疫保护性抗原纤维蛋白KnobS与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因插入干酪乳酸杆菌分泌表达载体pMG36e-UP/L中,成功构建重组表达载体pMG36e-UP/LTB-KnobS,获得表达融合蛋白KnobS-LTB的重组乳酸菌干酪乳杆菌表达系统;经SDS-PAGE和Western-blot检测表明,有大小约41kD的蛋白表达,具有与天然病毒蛋白一样的抗原特异性。在干酪乳杆菌中成功地表达了含减蛋综合征病毒抗原的融合蛋白KnobS-LTB,且具有较好的抗原性,为减蛋综合征病毒重组乳酸菌活菌口服疫苗的研制奠定重要的物质基础。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 干酪乳杆菌 knobS蛋白 LTB 共表达
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腺病毒5型knob蛋白的原核表达、纯化及其单克隆抗体的制备
12
作者 王鹏 王华茂 +4 位作者 周敏 刘素霞 林志新 徐宇虹 李宗海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1038-1040,共3页
目的:表达、纯化腺病毒5型knob蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法:克隆并表达腺病毒的knob蛋白,其氨基端带有6-His标签。纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb。结果:成功表达了knob蛋白。SDS-PAGE显示所表达蛋白的... 目的:表达、纯化腺病毒5型knob蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法:克隆并表达腺病毒的knob蛋白,其氨基端带有6-His标签。纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb。结果:成功表达了knob蛋白。SDS-PAGE显示所表达蛋白的相对分子质量(Mr)约为23000。获得了2株分泌针对knob的杂交瘤细胞系(8D7和6D4),其分泌的mAb的Ig亚类(型)均为IgG2b。ELISA检测,对应腹水mAb的效价分别为1:2.1×105,1:2.2×105。Western blot结果显示抗knobmAb具有良好的特异性。结论:成功地制备了knob蛋白及其mAb。 展开更多
关键词 knob蛋白 原核表达 单克隆抗体
原文传递
改进KNOB法实用化开关电容滤波器设计程序
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作者 李松银 郑君里 李梅 《电子学报》 EI CAS CSCD 北大核心 1993年第2期55-63,共9页
本文给出一个开关电容滤波器(SCF)设计程序。利用作者提出的改进KNOB法自动生成等效电路,借助通用电路模拟程序SPICE计算SCF频响特性。同时考虑了运放的有限增益带宽等非理想因素的影响,方法简便易行,几种实例硬件测试与计算机模拟结果... 本文给出一个开关电容滤波器(SCF)设计程序。利用作者提出的改进KNOB法自动生成等效电路,借助通用电路模拟程序SPICE计算SCF频响特性。同时考虑了运放的有限增益带宽等非理想因素的影响,方法简便易行,几种实例硬件测试与计算机模拟结果一致。 展开更多
关键词 开关电容 滤波器 knob 等效电路
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Ad5-knob蛋白在大肠杆菌中可溶性表达及其活性检测
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作者 赵颜忠 陈玉祥 +2 位作者 文路 刘霆 朱晒红 《中国病毒学》 CSCD 2005年第2期193-196,共4页
采用PCR技术, 从AdEasy 1质粒DNA中获得knob全长序列, 克隆入pGEM T vector中。DNA测序鉴定后, 构建pQE 30/knob重组表达载体, 转化大肠杆菌M15 pREP4),IPTG诱导表达腺病毒5 型纤维蛋白的knob功能域(Ad5 knob), SDS PAGE分析,表达产物... 采用PCR技术, 从AdEasy 1质粒DNA中获得knob全长序列, 克隆入pGEM T vector中。DNA测序鉴定后, 构建pQE 30/knob重组表达载体, 转化大肠杆菌M15 pREP4),IPTG诱导表达腺病毒5 型纤维蛋白的knob功能域(Ad5 knob), SDS PAGE分析,表达产物主要以可溶性蛋白的形式存在于细菌裂解液上清之中。经Ni2+ NTA亲和层析一步分离纯化后,洗脱产物中Ad5 knob蛋白纯度超过95%。N 端氨基酸测序证实了纯化产物为Ad5 knob蛋白,细胞受体结合实验检测到所得蛋白能够与Hela细胞上的相应受体特异性结合。上述结果表明在大肠杆菌中已经高效表达了可溶性Ad5 knob蛋白,一步即纯化该蛋白,并具有良好的生物活性,为其下阶段的深入研究提供了重要的实验材料。 展开更多
关键词 腺病毒 原核表达 knob蛋白 活性检测
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基于Tuning-Knobs的智能化自校正控制CAD
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作者 黄战 戴冠中 《控制理论与应用》 EI CAS CSCD 北大核心 1991年第3期308-315,共8页
本文提出了一种很适合于专家系统开发的基于Tuning-Knobs的自校正控制系统启发式CAD过程,并讨论了一些典型的Tuning-Knobs调整规则,在此基础上,我们用Turbo Prolog语言为某自校正控制系统CAD软件包(SELFPAC,用C语言编写)开发了智能前端。
关键词 智能化 自校正控制 CAD 专家系统
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犬Ⅰ型腺病毒结构蛋白Knob的可溶性表达及免疫原性研究 被引量:2
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作者 孙杰 秦飞燕 +6 位作者 朱言柱 薛向红 廉士珍 赵辉 王洋 柴秀丽 闫喜军 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第15期10-14,共5页
为了探究犬Ⅰ型腺病毒(Canineadenovirus type1,CAdV-1)F1301株结构蛋白Knob的免疫原性,试验采用原核表达技术将Knob蛋白基因克隆到pColdⅡ原核表达载体中进行低温诱导,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中实现可溶性表达。利用纯化后的... 为了探究犬Ⅰ型腺病毒(Canineadenovirus type1,CAdV-1)F1301株结构蛋白Knob的免疫原性,试验采用原核表达技术将Knob蛋白基因克隆到pColdⅡ原核表达载体中进行低温诱导,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中实现可溶性表达。利用纯化后的重组蛋白Knob免疫Balb/c小鼠,监测免疫后小鼠血清中重组蛋白Knob特异性抗体ELISA效价、病毒中和抗体效价,测定脾脏T淋巴细胞增殖活性,研究重组蛋白Knob的免疫原性。结果表明:表达的重组蛋白Knob为可溶性蛋白,分子质量约为20ku。第2次免疫后7,14天,试验组小鼠血清ELISA抗体效价分别为1∶6400和1∶3200,中和抗体效价分别为1∶118和1∶96。第2次免疫后7天,试验组小鼠T淋巴细胞增殖指数为1.322,显著高于对照组(P<0.05)。说明试验成功表达出CAdV-1重组蛋白Knob,所表达的重组蛋白Knob具有良好的免疫原性且存在CAdV-1的中和抗原表位。 展开更多
关键词 犬Ⅰ型腺病毒 knob蛋白 原核表达 免疫原性 中和抗体
原文传递
Flash MX模拟横波——兼谈knobs & faders的用法
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作者 王阳生 《计算机教与学》 2003年第11期55-57,共3页
我们知道,Flash MX提供了一个公用库,其中包括knobs&faders类按钮,可以通过调节相关部件的位置来控制变量的数值,方便而直观。更重要的是,只要搞懂了原理,制作的过程非常简捷。近日在用Flash MX模拟横波时再次用到它。
关键词 Flash-MX 用法 knobs faders 构思 素材 课件制作
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Development of a tune knob for lattice adjustment in the HLS-II storage ring 被引量:2
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作者 Si-Wei Wang Wei Xu +4 位作者 Xian Zhou Wen-Bo Wu Bing Li Ke Xuan Jing-Yi Li 《Nuclear Science and Techniques》 SCIE CAS CSCD 2018年第12期46-53,共8页
The betatron tune is an important parameter in a storage ring to enable stable operation. A tune adjustment tool with a small impact on the beam dynamics is useful for user operation and machine studies. Therefore, a ... The betatron tune is an important parameter in a storage ring to enable stable operation. A tune adjustment tool with a small impact on the beam dynamics is useful for user operation and machine studies. Therefore, a tune knob is developed for the Hefei light source-II(HLS-II) storage ring. Owing to the compactness of the storage ring, a global adjustment mechanism is adopted. To reduce the impact on beam injection, only quadrupole families outside the injection section are used by the tune knob, and the b functions of the injection section remain unchanged. A code is developed based on the accelerator simulation software, MAD-X, to calculate the adjustment of the quadrupole strengths. The accelerator toolbox is used to double check the accuracy of the tune knob. Online measurement of the tune knob is also performed. The result shows that the tune knob works well when the tune is adjusted in a specific range. Betatron coupling measurement is also carried out, showing an application of the tune knob on machine studies. In this paper, the development of the tune knob and its experimental results in the HLS-II storage ring are reported in detail. 展开更多
关键词 调子 旋钮 调整 戒指 存储 开发 电子加速器 格子
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禽4型腺病毒knob蛋白的原核表达及纯化蛋白的免疫原性研究 被引量:1
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作者 黄冬 卜德新 +3 位作者 王睿智 张伯顺 于春梅 丛雁方 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第5期87-92,共6页
为研究Knob蛋白的免疫效果,将合成的mknob基因克隆至pET28a(+)表达载体,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,低温诱导表达,knob蛋白纯化后去内毒素,按不同剂量免疫SPF鸡。结果表明:重组质粒pET28a-mknob可以高效表达目的蛋白;Western blot结... 为研究Knob蛋白的免疫效果,将合成的mknob基因克隆至pET28a(+)表达载体,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,低温诱导表达,knob蛋白纯化后去内毒素,按不同剂量免疫SPF鸡。结果表明:重组质粒pET28a-mknob可以高效表达目的蛋白;Western blot结果表明,表达的蛋白可与禽腺病毒特异性血清发生特异性结合;免疫保护试验分析发现,10μg蛋白免疫SPF鸡即可产生100%保护。本研究为禽4型腺病毒亚单位疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 禽4型腺病毒 knob蛋白 原核表达 纯化 免疫原性
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人55型腺病毒Fiber Knob蛋白原核表达、纯化及活性检测
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作者 陈楠 吴同鑫 +5 位作者 章汝 李晓月 顾欣雨 唐香平 李云 易永祥 《生物技术》 CAS 2023年第5期544-550,共7页
[目的]构建Fiber Knob原核表达载体,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导其表达,纯化具有良好生物活性的Fiber Knob重组蛋白。[方法]从人55型腺病毒(HAdV-55)中通过PCR扩增目的基因片段Fiber Knob,将该片段与原核表达载体pET15... [目的]构建Fiber Knob原核表达载体,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导其表达,纯化具有良好生物活性的Fiber Knob重组蛋白。[方法]从人55型腺病毒(HAdV-55)中通过PCR扩增目的基因片段Fiber Knob,将该片段与原核表达载体pET15b-His连接,构建重组原核表达质粒pET15b-Fiber Knob-His,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达目的蛋白,通过镍柱亲和层析对目的蛋白进行纯化,SDS-PAGE和Western Blotting检测目的蛋白的表达与纯度。ELISA检测目的蛋白的生物学活性。[结果]重组表达质粒经双酶切和测序鉴定证明构建正确。重组蛋白主要以包涵体形式存在,上清中也有少量表达,重组蛋白相对分子质量约为25 kDa且纯度95%以上,ELISA结果显示制备的Fiber Knob蛋白与CD46胞外域蛋白之间存在直接的相互作用,并且这种相互作用是剂量依赖性的。[结论]成功构建了原核表达质粒pET15b-Fiber Knob-His,在大肠杆菌中成功诱导表达了Fiber Knob蛋白,纯化的Fiber Knob蛋白具有明显结合CD46胞外域蛋白的生物学活性,为其单克隆抗体的制备及人55型腺病毒新的细胞受体的发现奠定了基础。 展开更多
关键词 Fiber knob蛋白 人55型腺病毒 原核表达 纯化 活性检测
原文传递
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