抗菌肽Cecropin B—肿瘤血管生长抑制因子Kringle5融合蛋白表达载体的构建及其表达 被引量：4

1

作者 樊钰虎 冯瑄 +1 位作者 杨晓燕 边六交 《药物生物技术》 CAS CSCD 2005年第5期281-284,290,共5页

通过重叠区扩增法人工合成抗菌肽Cecropin B(CB)基因,从ThioA/L15-7上卸下肿瘤血管生长抑制因子Kringle5(K5)基因,将两者按正确的阅读框架融合并定向克隆至大肠杆菌高效表达载体pET32a上,构建成pET32a/CB-K5重组载体。重组载体转化BL21(... 通过重叠区扩增法人工合成抗菌肽Cecropin B(CB)基因,从ThioA/L15-7上卸下肿瘤血管生长抑制因子Kringle5(K5)基因,将两者按正确的阅读框架融合并定向克隆至大肠杆菌高效表达载体pET32a上,构建成pET32a/CB-K5重组载体。重组载体转化BL21(DE3)细胞后,提取质粒进行PCR鉴定和序列分析,证明重组质粒pET32a/CB-K5阅读框架和融合基因序列均与预期相符。实验结果显示,成功地构建了抗菌肽CecropinB(CB)和肿瘤血管生长抑制因子Kringle5(K5)融合蛋白的表达载体pET32a/CB-K5。转化E.coliBL21(DE3),SDS-PAGE分析显示,在IPTG诱导下,融合蛋白以包涵体的形式在重组转化菌株中获得高效表达,表达量达到菌体总蛋白的50%。 展开更多

关键词 抗菌肽CECROPIN B 肿瘤血管生长抑制因子kringle5 重叠区扩增法 融合表达载体

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纤溶酶原Kringle5缺失突变体抑制血管内皮细胞增生的研究 被引量：6

2

作者 马建芳 杨中汉 +7 位作者 李朝阳 蔡卫斌 宋志宏 郭颖 郭琳琅 李民友 刘祖国 高国全 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第12期1245-1248,共4页

目的纤溶酶原蛋白水解片段Kringle 5(K5)具有治疗血管增生性疾病的潜在临床应用价值,但是K5已获得美国专利。本研究应用基因突变和基因重组技术获得缺失突变型(K5Mut1)并检测其体外活性。方法除去K5外环两端的N端和C端15个氨基酸残基以... 目的纤溶酶原蛋白水解片段Kringle 5(K5)具有治疗血管增生性疾病的潜在临床应用价值,但是K5已获得美国专利。本研究应用基因突变和基因重组技术获得缺失突变型(K5Mut1)并检测其体外活性。方法除去K5外环两端的N端和C端15个氨基酸残基以降低其相对分子质量,但同时保留K5分子中的所有3个二硫键以保留完整的外环结构域,并在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,获得突变型K5 Mut1 (Cys1-80);MTT法分析突变型K5对牛视网膜毛细血管内皮细胞和周皮细胞的抑制作用。结果K5 Mut1以浓度依赖的方式抑制原代培养的视网膜内皮细胞,EC50(抑制50%细胞增生的药物浓度)约为35 nmol/L,是完整K5活性的2倍。在同样浓度范围内,K5 Mut1并不抑制同源的周皮细胞,表明K5 Mut1特异性抑制血管内皮细胞增生。结论K5 Mut1是一种比K5作用更强的血管增生抑制因子,在糖尿病性视网膜病、年龄相关性黄斑变性和实体肿瘤等血管增生性疾病的治疗中具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 纤溶酶原缺失 血管内皮细胞增生 纤溶酶原蛋白水解片段 血管增生性疾病 突变型kringle5

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纤溶酶原Kringle5的抑制血管增生作用 被引量：4

3

作者 蔡卫斌 刘倩平 高国全 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期159-162,共4页

纤溶酶原Kringle 5是纤溶酶原中与血管抑素相连的另一个联环结构域 ,它能抑制内皮细胞的增殖、迁移 ,并能诱导内皮细胞凋亡和细胞周期停滞 ,具有很强的抑制血管生成活性 ,是抑制活性最强的纤溶酶原水解片段。同时它具有分子量小、性质... 纤溶酶原Kringle 5是纤溶酶原中与血管抑素相连的另一个联环结构域 ,它能抑制内皮细胞的增殖、迁移 ,并能诱导内皮细胞凋亡和细胞周期停滞 ,具有很强的抑制血管生成活性 ,是抑制活性最强的纤溶酶原水解片段。同时它具有分子量小、性质稳定、毒副作用小、特异性高等优点 。 展开更多

关键词 纤溶酶原 kringle5 血管增生 内皮细胞 细胞凋亡

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重组人纤溶酶原Kringle5的标记及其肿瘤显像 被引量：3

4

作者 李彪 赵龙 +3 位作者 张一帆 尹桂芝 张志勇 朱承谟 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第12期1218-1220,共3页

目的探讨放射性碘标记纤溶酶原Kringle5(K5)用于肿瘤显像的可行性。方法采用基因工程方法制备的重组人纤溶酶原Kringle5(rhK5),以Iodogen法制备^(125)I-rhK5和^(131)I-rhK5,进行荷瘤裸鼠体内分布和肿瘤显像研究。结果^(125)I-rhK5和^(13... 目的探讨放射性碘标记纤溶酶原Kringle5(K5)用于肿瘤显像的可行性。方法采用基因工程方法制备的重组人纤溶酶原Kringle5(rhK5),以Iodogen法制备^(125)I-rhK5和^(131)I-rhK5,进行荷瘤裸鼠体内分布和肿瘤显像研究。结果^(125)I-rhK5和^(131)I-rhK5的标记率为86%和84%,放化纯度为96%和95%。竞争结合实验表明,rhK5标记后其生物活性没有改变;荷瘤裸鼠体内分布显示,12h肿瘤肌肉组织比可达4.94±0.89;^(131)I-rhK5肿瘤显像示肿瘤部位放射性浓聚随时间逐渐增加,3h可见肿瘤清晰显影。结论Iodogen法制备^(125)I-rhK5和^(131)I-rhK5纯度高、稳定性好。^(131)I-rhK5可进行肿瘤的显像,为肿瘤的显像和治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 kringle5 肿瘤 新生血管 放射性核素显像

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重组腺伴随病毒载体介导Kringle5基因对SD大鼠视网膜神经细胞及血管内皮细胞的影响 被引量：1

5

作者 宋哲 黎晓新 +2 位作者 于文贞 董建强 闫征 《国际眼科杂志》 CAS 2007年第2期380-382,共3页

目的:研究腺伴随病毒载体介导Kringle5基因对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUC)及视网膜神经细胞影响作用。方法:亚克隆构建pSNAV-Kringle5-gfp载体,腺伴随病毒包装形成rAAV-Kringle5-gfp;HUC培养及SD大鼠... 目的:研究腺伴随病毒载体介导Kringle5基因对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUC)及视网膜神经细胞影响作用。方法:亚克隆构建pSNAV-Kringle5-gfp载体,腺伴随病毒包装形成rAAV-Kringle5-gfp;HUC培养及SD大鼠视网膜神经细胞培养;按设计分为试验组、阴性对照组和空白对照组;聚合酶链反应(PCR),MTT法对各组进行细胞活力测定;荧光显微镜照相。结果:腺伴随病毒载体介导Kringle5基因产生Kringle5物质对HUC有抑制作用,实验组与对照组比较P<0.01,实验组与空白对照组比较P>0.05;腺伴随病毒载体介导Kringle5基因产生Kringle5物质对SD大鼠视网膜神经细胞实验组和空白对照组没有影响,实验组与对照组及实验组与空白对照组比较P>0.05。结论:腺伴随病毒载体介导Kringle5基因能够对新生血管有抑制作用而对视网膜神经细胞无不良影响作用。 展开更多

关键词 腺伴随病毒载体 血管抑制素kringle5 血管内皮细胞 SD大鼠视网膜神经细胞

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人纤溶酶原kringle5功能区基因在大肠杆菌中的表达 被引量：1

6

作者 陈广南 罗进贤 +1 位作者 卢文菊 张添元 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期62-66,共5页

将人纤溶酶原kringle5功能区基因插入融合基因表达载体pET17bBamHⅠ位点,构建成重组质粒pETK23,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下,纤溶酶原kringle5功能区基因在重组转化菌株BL21(DE3,pETK23)中获得高效表达,表达产物以可溶性蛋白形... 将人纤溶酶原kringle5功能区基因插入融合基因表达载体pET17bBamHⅠ位点,构建成重组质粒pETK23,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下,纤溶酶原kringle5功能区基因在重组转化菌株BL21(DE3,pETK23)中获得高效表达,表达产物以可溶性蛋白形式存在,表达量占菌体总蛋白的528%. 展开更多

关键词 人纤溶酶原 kringle5功能区 基因表达 大肠杆菌

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Kringle5的真核植物细胞穿梭表达载体的构建 被引量：1

7

作者 郑合明 薛乐勋 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2002年第2期156-159,共4页

目的 :构建含有目的基因kringle5的真核植物细胞穿梭表达载体。方法 :应用RT PCR方法 ,从正常人肝脏组织中获得kringle 5基因 ,测序后 ,再通过DNA重组技术 ,将kringle 5基因片段克隆到真核植物细胞表达载体pBI12 1和pCAMBIA330 1上。结... 目的 :构建含有目的基因kringle5的真核植物细胞穿梭表达载体。方法 :应用RT PCR方法 ,从正常人肝脏组织中获得kringle 5基因 ,测序后 ,再通过DNA重组技术 ,将kringle 5基因片段克隆到真核植物细胞表达载体pBI12 1和pCAMBIA330 1上。结果 :得到的kringle 5基因序列测定结果与文献相符 ,重组载体pB1k5和pC33k5经酶切鉴定正确 ,含有植物高效表达CaMV35S启动子。结论 :重组载体pB1k5和pC33k5不仅可以在大肠杆菌中稳定复制 。 展开更多

关键词 血管抑素 kringle5基因 穿梭表达载体 反转录PCR 启动子CaMV35S 真核植物细胞

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Kringle5基因的克隆、原核表达载体构建和蛋白表达 被引量：1

8

作者 毕城伟 柯昌兴 +3 位作者 王剑松 胡明宇 管莹 刘龙丁 《昆明医学院学报》 2010年第1期32-35,共4页

目的寻求一条高效且快速获得kingle5蛋白的途径.方法从人膀胱癌组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增出kringle5基因,构建出原核表达载体pGEX-5X-1/kringle5,运用工程菌表达蛋白.结果测序表明kringle5基因与GenBank上报道的基因序列相同,并成... 目的寻求一条高效且快速获得kingle5蛋白的途径.方法从人膀胱癌组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增出kringle5基因,构建出原核表达载体pGEX-5X-1/kringle5,运用工程菌表达蛋白.结果测序表明kringle5基因与GenBank上报道的基因序列相同,并成功表达出kringle5融合蛋白.结论成功构建了人原核表达载体(pGEX-5X-1/kringle5),为获得抗肿瘤药物kringle5提供了一种切实可行的途径,为实体瘤的抗血管生成治疗研究奠定了初步基础. 展开更多

关键词 kringle5 RT—PCR 原核表达载体 融合蛋白

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Kringle5基因工程制备方法的研究进展

9

作者 陈显久 牛勃 赵荣瑞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第1期121-123,共3页

Kringle5是血浆纤维蛋白溶酶原的第5个饼环区结构,在体外具有抑制内皮细胞增殖、迁移的生物学活性,在体内可抑制多种血管新生模型的新生血管形成及肿瘤的生长和转移,在实体瘤、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎等疾病的治疗中具有广阔的... Kringle5是血浆纤维蛋白溶酶原的第5个饼环区结构,在体外具有抑制内皮细胞增殖、迁移的生物学活性,在体内可抑制多种血管新生模型的新生血管形成及肿瘤的生长和转移,在实体瘤、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎等疾病的治疗中具有广阔的应用前景。本文对国内外采用基因工程方法制备Kringle5的研究进展作一综述,为Kringle5蛋白基因工程药物的开发提供参考。 展开更多

关键词 kringle5 血浆纤维蛋白溶酶原 基因工程

原文传递

血管新生抑制剂Kringle5结构及改造研究进展

10

作者 陈显久 牛勃 赵荣瑞 《中国药物与临床》 CAS 2010年第12期1325-1327,共3页

Kringle5是血浆纤维蛋白溶酶原（plasminogen,Pgn）的第5个饼环区结构（kringle domain）,在体外具有抑制内皮细胞增殖,抑制内皮细胞迁移的生物学活性，在体内可抑制多种血管新生模型的新生血管形成（angiogenesis），甚至可抑制肿瘤的... Kringle5是血浆纤维蛋白溶酶原（plasminogen,Pgn）的第5个饼环区结构（kringle domain）,在体外具有抑制内皮细胞增殖,抑制内皮细胞迁移的生物学活性，在体内可抑制多种血管新生模型的新生血管形成（angiogenesis），甚至可抑制肿瘤的生长和转移，在实体瘤、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎等疾病的治疗中有广泛的应用前景。现将其近几年的研究情况综述如下。 展开更多

关键词 kringle5 血管新生抑制剂 结构 糖尿病视网膜病变 纤维蛋白溶酶原 改造 内皮细胞增殖 内皮细胞迁移

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腺伴随病毒载体介导Kringle5-GFP基因在眼组织中的表达

11

作者 宋哲 黎晓新 《国际眼科杂志》 CAS 2012年第7期1251-1253,共3页

目的:探寻腺伴随病毒载体介导Kringle5基因注入玻璃体腔后,在眼球组织中的分布规律,为基因治疗视网膜病变提供实验依据。方法:将已经构建包装好的rAAV-Kringle5-GFP,滴度为2.5×1012vg/mL10μL注入SD大鼠玻璃体腔后,分别在1,5,10,20... 目的:探寻腺伴随病毒载体介导Kringle5基因注入玻璃体腔后,在眼球组织中的分布规律,为基因治疗视网膜病变提供实验依据。方法:将已经构建包装好的rAAV-Kringle5-GFP,滴度为2.5×1012vg/mL10μL注入SD大鼠玻璃体腔后,分别在1,5,10,20,40,60,90d处死SD大鼠,在荧光显微镜下观察GFP在玻璃体、视网膜、脉络膜、虹膜等眼组织分布及表达情况。根据表达强度从无表达到强表达分别记为-,+,++,+++,++++。结果:在注射后第1d,玻璃体中有轻度表达,随着时间的推移表达缓慢增强,分布较广泛;在玻璃体注射后第5d视网膜有表达,分布范围从视盘到周边部视网膜组织均出现且随着时间的推移表达增强;在虹膜、脉络膜组织表达也有较强表达;甚至在角膜内皮及晶状体组织也有表达。结论:选用腺伴随病毒载体介导目的基因能够在视网膜组织和色素膜组织有较强表达,腺伴随病毒载体介导目的基因是治疗ROP视网膜新生血管较为理想的载体。 展开更多

关键词 rAAV—kringle5-GFP 眼组织 动物实验

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重组人纤溶酶原Kringle5的标记及其肿瘤显像

12

作者 李彪 赵龙 +3 位作者 张一帆 尹桂芝 张志勇 朱承谟 《世界肿瘤杂志》 2005年第4期277-277,共1页

目的 探讨放射性碘标记纤溶酶原Kringle5（K5）用于肿瘤显像的可行性。方法 采用基因工程方法制备的重组人纤溶酶原Kringle5（rhK5），以Iodogen法制备^125I-rhK5和^131I-rhK5，进行荷瘤裸鼠体内分布和肿瘤显像研究。结果 ^125I-rhK5和^... 目的 探讨放射性碘标记纤溶酶原Kringle5（K5）用于肿瘤显像的可行性。方法 采用基因工程方法制备的重组人纤溶酶原Kringle5（rhK5），以Iodogen法制备^125I-rhK5和^131I-rhK5，进行荷瘤裸鼠体内分布和肿瘤显像研究。结果 ^125I-rhK5和^13lI-rhK5的标记率为86％和84％，放化纯度为96％和95％。竞争结合实验表明，rhK5标记后其生物活性没有改变；荷瘤裸鼠体内分布显示，12h肿瘤肌肉组织比可达4．94±0．89；^131I-rhK5肿瘤显像示肿瘤部位放射性浓聚随时间逐渐增加，3h可见肿瘤清晰显影。结论 Iodogen法制备^125I-rhK5和^131I-rhK5纯度高，稳定性好。^131I-rhK5可进行肿瘤的显像，为肿瘤的显像和治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 人纤溶酶原 肿瘤显像 kringle5 重组 IODOGEN法 放射性碘标记 基因工程方法 体内分布 荷瘤裸鼠 放化纯度

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人源性纤溶酶原Kringle5基因杆状病毒表达载体构建及蛋白表达纯化

13

作者 董丽 郭睿 李彪 《世界感染杂志》 2009年第2期106-106,共1页

目的构建重组人源性纤溶酶原Kringle5（rhK5）杆状病毒表达载体并进行真核表达。方法采用bac-to—bac杆状病毒表达系统制备杆状病毒Bacmid—rhK5，感染草地贪夜蛾卵巢细胞sf21昆虫细胞，经Westernblot确定rhK5在sf21细胞中的表达方式和... 目的构建重组人源性纤溶酶原Kringle5（rhK5）杆状病毒表达载体并进行真核表达。方法采用bac-to—bac杆状病毒表达系统制备杆状病毒Bacmid—rhK5，感染草地贪夜蛾卵巢细胞sf21昆虫细胞，经Westernblot确定rhK5在sf21细胞中的表达方式和表达量。用血管内皮细胞抑制实验检测纯化蛋白活性。结果杆状病毒表达载体pFastBacHTB-rhK5构建成功，Westernblot检测发现，rhK5在sf21细胞中呈胞内表达，纯化后重组蛋白的产量约为90μg／L。血管内皮细胞抑制实验显示，半数有效剂量（ED50）为4μg／mL。结论rhK5杆状病毒表达载体于悬浮培养的sf21细胞中高效表达，为大量表达更接近天然的具有生物学活性的rhK5蛋白奠定了基础。 展开更多

关键词 杆状病毒表达载体 kringle5基因 蛋白表达 纤溶酶原 表达载体构建 人源性 纯化 WESTERNBLOT

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基因重组可溶性非融合血管生成抑制剂Kringle5的色谱分离和纯化 被引量：2

14

作者 马丽娜 吴丹 边六交 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期822-826,共5页

Kringle 5是血纤维蛋白溶酶原中特异抑制内皮细胞增生和迁移活性最高的一种血管生成抑制剂。该实验在前期成功克隆和表达可溶性非融合血管生成抑制剂Kringle 5的基础上,建立了一种两步色谱法分离纯化Kringle5的方法。首先用SP Sepharose... Kringle 5是血纤维蛋白溶酶原中特异抑制内皮细胞增生和迁移活性最高的一种血管生成抑制剂。该实验在前期成功克隆和表达可溶性非融合血管生成抑制剂Kringle 5的基础上,建立了一种两步色谱法分离纯化Kringle5的方法。首先用SP Sepharose Fast Flow强阳离子交换色谱柱对Kringle 5重组菌体破碎上清液进行初步分离,然后再用丙烯葡聚糖凝胶S-100HR凝胶排阻色谱柱对其进行进一步的纯化。采用本方法得到的可溶性非融合血管生成抑制剂Kringle 5经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效凝胶排阻色谱检测其纯度大于98%,通过鸡胚尿囊膜法确定这种蛋白质具有抑制内皮毛细血管生长的活性。 展开更多

关键词 阳离子交换色谱 凝胶排阻色谱 血管生长抑制剂kringle5 分离 纯化

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重组蛋白ES-Kringle5的表达、纯化及活性检测 被引量：1

15

作者 陈悦 付中平 +1 位作者 李景荣 殷晓进 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期60-65,共6页

目的:利用基因工程方法原核表达重组融合蛋白ES-Kringle5并进行纯化及活性检测。方法:ES-Kringle5是将内皮抑素N端的前27个氨基酸与Kringle5通过连接肽相连的重组融合蛋白,合成该重组蛋白的基因片段并插入载体pMD18-T中,然后克隆至大肠... 目的:利用基因工程方法原核表达重组融合蛋白ES-Kringle5并进行纯化及活性检测。方法:ES-Kringle5是将内皮抑素N端的前27个氨基酸与Kringle5通过连接肽相连的重组融合蛋白,合成该重组蛋白的基因片段并插入载体pMD18-T中,然后克隆至大肠杆菌表达载体pET25b中并转化E.coli BL21(DE3)。乳糖诱导表达后经Ni-NTA亲和层析纯化后获得目的蛋白。通过抑制HUVEC细胞增殖实验检测其生物学活性。结果:重组质粒构建正确。利用乳糖诱导表达并降低诱导温度能增加目的蛋白的产量及可溶性表达。纯化后的重组蛋白纯度大于95%。生物学活性证明该重组蛋白具有抑制HUVEC的增殖能力。结论:具有生物学活性的重组蛋白ESKringle5可在大肠杆菌中高效表达,为研究其体内药效、药代及安全性评价奠定了基础。 展开更多

关键词 原核表达 抗血管生成 抗肿瘤 kringle5 内皮抑素

原文传递

无血清悬浮培养昆虫细胞表达人纤溶酶原Kringle5的研究

16

作者 刘戈飞 黄东阳 《汕头大学医学院学报》 2006年第1期1-5,共5页

目的:使用杆状病毒载体表达系统在无血清悬浮培养的条件下进行Kringle5的表达。方法:对草地夜蛾卵巢细胞(Sf9)进行无血清培养驯化。构建Kringle5重组杆状病毒,通过三级扩增的方法制备重组病毒贮存液。Western方法确定Krin-gle5在Sf9细... 目的:使用杆状病毒载体表达系统在无血清悬浮培养的条件下进行Kringle5的表达。方法:对草地夜蛾卵巢细胞(Sf9)进行无血清培养驯化。构建Kringle5重组杆状病毒,通过三级扩增的方法制备重组病毒贮存液。Western方法确定Krin-gle5在Sf9细胞中的表达形式和表达条件。在培养体积为500 mL的无血清悬浮培养条件下对Kringle5进行表达。应用Ni2+亲合层析纯化了表达的重组蛋白,去除了氨基端融合的His-tag。应用原代培养人脐静脉内皮细胞测定了重组Kringle5的活性。结果:重组Kringle5蛋白的产量为1.7 mg/L,半数有效剂量(ED50)为109.2 nmol/L,去除氨基端His-tag序列后获得的Kringle5ED50为59.59 nmol/L。结论:Kringle5可以在无血清悬浮培养Sf9细胞中进行高效表达,研究结果为进行Kringle5的大规模高效表达奠定了基础。 展开更多

关键词 无血清培养 昆虫细胞 杆状病毒载体表达系统 kringle5

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Kringle5基因的表达、纯化及其抗膀胱肿瘤作用的初步研究

17

作者 胡明宇 王剑松 +3 位作者 柯昌兴 韦海荣 赵献 张启波 《昆明医学院学报》 2010年第11期37-40,共4页

目的获得高纯度并且有活性的K5蛋白.方法继构建了重组质粒pGEX-5X-1-K5的基础上,转化感受态细胞BL-21、DH-5α、Top10,并优化了表达条件,经过裂解、洗涤、溶解包涵体后,用带GST标签的谷胱甘肽琼脂糖4B亲和柱进行纯化,Bradford法测蛋白浓... 目的获得高纯度并且有活性的K5蛋白.方法继构建了重组质粒pGEX-5X-1-K5的基础上,转化感受态细胞BL-21、DH-5α、Top10,并优化了表达条件,经过裂解、洗涤、溶解包涵体后,用带GST标签的谷胱甘肽琼脂糖4B亲和柱进行纯化,Bradford法测蛋白浓度,分别用ECV304细胞和裸鼠皮下移植瘤模型对蛋白进行了活性测定.结果获得了表达量最高的条件:BL21感受态细胞,诱导时间:6 h,纯化后的K5蛋白纯度达到95%以上,K5浓度为5μg/mL时抑制率最高.裸鼠模型上,K5组肿瘤的生长速度明显慢于PBS对照.结论含有GST的融合蛋白表达载体,表达量多、易于纯化、成本低、蛋白纯度高,并能有效的抑制ECV304细胞,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,为K5的工业化大规模生产奠定了基础. 展开更多

关键词 kringle5 蛋白纯化 膀胱肿瘤

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膀胱癌组织Kringle5基因的克隆、表达、纯化及活性鉴定

18

作者 柯昌兴 王剑松 +5 位作者 胡明宇 毕城伟 陈慧诚 刘龙丁 颜汝平 詹辉 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期951-951,共1页

Krigle 5（K5）是纤溶酶原裂解片段，生物活性高于内皮抑素和血管抑素，其相对分子质量小、穿透力强，是更有研究前途的内源性血管生成抑制因子。本研究旨在对膀胱癌组织Kringle 5基因的克隆、表达、纯化及活性鉴定。

关键词 kringle5基因 膀胱癌组织 活性鉴定 内源性血管生成抑制因子 克隆 纯化 相对分子质量 裂解片段

原文传递

膀胱癌患者血、尿及癌组织中血管生成因子和抑制因子的表达变化 被引量：4

19

作者 柯昌兴 李昊 +5 位作者 王剑松 石永福 杨德林 左毅刚 颜汝平 徐鸿毅 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第26期89-90,共2页

目的观察膀胱癌患者血、尿及癌组织中血管生成因子和抑制因子的表达水平与膀胱癌分级、分期的关系。方法 ELISA法检测20例不同分级、不同分期膀胱癌患者血清、尿液中的血管内皮生长因子(VEGF)、血管抑素(AS)、内皮抑素(ES)、Kringle 5(... 目的观察膀胱癌患者血、尿及癌组织中血管生成因子和抑制因子的表达水平与膀胱癌分级、分期的关系。方法 ELISA法检测20例不同分级、不同分期膀胱癌患者血清、尿液中的血管内皮生长因子(VEGF)、血管抑素(AS)、内皮抑素(ES)、Kringle 5(K5)基因蛋白,免疫组织化学法(IHC)检测膀胱癌组织中的VEGF、AS、ES、K5蛋白。结果高分级、高分期组膀胱癌患者血清及尿液中的VEGF、AS、ES、K5蛋白表达水平较低分级、低分期组高(P均<0.05);VEGF、AS、ES在浅表和浸润膀胱癌组织中表达有差异(P均<0.05)。结论不同分级、不同分期膀胱癌患者癌组织及血清、尿液中VEGF、AS、ES、K5的表达不同。 展开更多

关键词 膀胱肿瘤 血管生成因子 血管生成抑制因子 内皮抑素 血管抑素 kringle5基因

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人纤溶酶原Kringle 5基因的克隆、表达及产物纯化和性质鉴定 被引量：3

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作者 陈浩 陈于红 +2 位作者 张菁 刘建宁 朱德煦 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期218-222,共5页

根据人纤溶酶原的cDNA序列 ,利用PCR技术获得人纤溶酶原kringle 5结构域的基因 ,并将其克隆至表达质粒 pET2 5b(+)中 .重组载体 pET2 5b(+) /kringle 5转化至大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导表达 ,在 12kD处可见明显的表达条带 ,表达... 根据人纤溶酶原的cDNA序列 ,利用PCR技术获得人纤溶酶原kringle 5结构域的基因 ,并将其克隆至表达质粒 pET2 5b(+)中 .重组载体 pET2 5b(+) /kringle 5转化至大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导表达 ,在 12kD处可见明显的表达条带 ,表达产物大部分以无活性的包涵体形式存在 .包涵体经过体外变复性 ,SP SepharoseFF离子交换柱一步纯化 ,15%SDS PAGE鉴定考染一条带 ,纯度达 95%以上 .所得到的目标蛋白能明显的抑制bFGF诱导的牛毛细血管内皮细胞增生 . 展开更多

关键词 血管生成抑制素 kringle5 包涵体 人纤溶酶原基因 克隆 表达 纯化 鉴定 肿瘤治疗

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