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KPC1基因通过调节NF-κB p50/HIF-1α通路对WT小鼠肝切除后肝再生过程和修复过程的机制研究
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作者 李英明 唐俊明 +6 位作者 吴艳 何志凯 耿平美惠 黄龙 张璟璇 刘堂淞 安晓彤 《胃肠病学和肝病学杂志》 2025年第5期688-693,共6页
目的分析Kip1泛素-促进复合体1(Kip1 ubiquitination-promoting complex 1,KPC1)基因通过调节NF-κB p50/HIF-1α通路对WT小鼠肝切除后肝再生过程和修复过程的机制研究。方法60只WT小鼠分为假手术(Sham)组、PHx术后1 d组、2 d组、4 d组... 目的分析Kip1泛素-促进复合体1(Kip1 ubiquitination-promoting complex 1,KPC1)基因通过调节NF-κB p50/HIF-1α通路对WT小鼠肝切除后肝再生过程和修复过程的机制研究。方法60只WT小鼠分为假手术(Sham)组、PHx术后1 d组、2 d组、4 d组、6 d组、8 d组,Sham组仅打开腹腔暴露肝脏,不做肝切除手术,其余小鼠切除肝脏左叶、中叶,在对应术后天数处死小鼠。检测小鼠肝功能(ALT、AST)和肝脏再生指数,EdU实验检测肝组织再生情况,Western blotting检测细胞Ki67、TGF-β1、KPC1、NF-κB p50/HIF-1α通路蛋白,RT-qPCR检测KPC1 mRNA水平。40只WT小鼠分为PHx组、Ad-shKPC1组、Ad-shKPC1+p50抑制剂组、Ad-shKPC1+HIF-1α抑制剂组,用于探究NF-κB p50/HIF-1α通路在KPC1介导肝再生中的作用。结果与Sham组比较,PHx术后1 d、2 d、4 d、6 d、8 d肝脏比明显降低,ALT、AST显著升高(P<0.05);与Sham组比较,PHx术后1 d、2 d、4 d、6 d、8 d的EdU阳性率、Ki67、TGF-β1、p-p50、HIF-1α、VEGF-A蛋白表达显著升高,KPC1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),其中术后2 d达到峰值(P<0.05);与PHx组比较,Ad-shKPC1组、Ad-shKPC1+p50抑制剂组、Ad-shKPC1+HIF-1α抑制剂组EdU阳性率明显减少,Ki67、TGF-β1、p-p50、HIF-1α、VEGF-A蛋白表达显著降低(P<0.05),且Ad-shKPC1组上述各指标改善幅度小于Ad-shKPC1+p50抑制剂组、Ad-shKPC1+HIF-1α抑制剂组。结论敲除KPC1通过抑制NF-κB p50/HIF-1α通路进而抑制WT小鼠肝切除后肝再生和修复过程。 展开更多
关键词 kpc1 NF-κB p50/HIF-1α通路 肝切除术 肝再生 肝修复
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KPC1对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响 被引量：2
2
作者 周光明 金亮 +2 位作者 高成明 曹鹏博 周钢桥 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期254-260,共7页
目的探讨Kip1泛素化促进复合体蛋白1(KPC1)对肝癌细胞系Bel-7402和SMMC-7721细胞增殖与迁移能力的影响以及可能的分子机制。方法通过慢病毒包装的方法将KPC1过表达重组质粒转染进肝癌细胞系Bel-7402和SMMC-7721,筛选得到稳定过表达KPC1... 目的探讨Kip1泛素化促进复合体蛋白1(KPC1)对肝癌细胞系Bel-7402和SMMC-7721细胞增殖与迁移能力的影响以及可能的分子机制。方法通过慢病毒包装的方法将KPC1过表达重组质粒转染进肝癌细胞系Bel-7402和SMMC-7721,筛选得到稳定过表达KPC1的肝癌细胞系;采用小干扰RNA(siRNA)瞬转敲低肝癌细胞系中的KPC1;蛋白质免疫印迹法(WB)检测肝癌细胞系中KPC1蛋白的表达水平,验证过表达和敲低KPC1的效果;CCK-8法检测KPC1对肝癌细胞系增殖能力的影响;Transwell法验证KPC1对肝癌细胞系迁移能力的影响;WB法检测扰动KPC1后p105蛋白表达水平的影响;Log-rank检验比较KPC1高表达组和低表达组肝癌患者的生存期差异。结果过表达KPC1可显著抑制Bel-7402和SMMC-7721细胞的增殖和迁移能力;而敲低KPC1显著促进Bel-7402和SMMC-7721细胞的增殖和迁移能力。过表达KPC1抑制p105的表达水平、提升p50的表达水平;而敲低KPC1则促进p105的表达水平、抑制p50的表达水平。临床相关性分析显示KPC1在肝癌癌组织中下调表达,且与肝癌患者的不良预后显著相关。结论 KPC1通过抑制肝癌细胞系的增殖和迁移能力而发挥抑癌基因的功能。 展开更多
关键词 肝肿瘤 kpc1 细胞增殖 细胞迁移 细胞运动 RNA 小分子干扰 泛素化
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泛素蛋白连接酶1在大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜中的表达及意义
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作者 杨波 林新铎 +6 位作者 王星人 唐俊明 杨建业 张蕾 曹腾 姜峰波 王家宁 《实验动物与比较医学》 CAS 2016年第3期161-167,共7页
目的 研究胞质泛素蛋白连接酶1（KPC1）在大鼠颈动脉球囊损伤后的蛋白表达情况,探讨其在新生内膜形成过程中的生物学功能.方法 将成年雄性SD大鼠（450 ～ 500 g）随机分为假手术组和颈动脉球囊损伤模型组,建模后以左侧损伤动脉为实验组... 目的 研究胞质泛素蛋白连接酶1（KPC1）在大鼠颈动脉球囊损伤后的蛋白表达情况,探讨其在新生内膜形成过程中的生物学功能.方法 将成年雄性SD大鼠（450 ～ 500 g）随机分为假手术组和颈动脉球囊损伤模型组,建模后以左侧损伤动脉为实验组,同时以假手术组的左侧正常颈动脉为对照组.实验组大鼠于损伤后1d、3d、7d、14d、28d分别处死并取材,采用Western blot检测KPC1蛋白、内膜增殖细胞核抗原（PCNA）表达情况,以qRT-PCR检测KPC1的mRNA表达,苏木精-伊红（HE）染色后比较内膜增生程度;采用体外培养血管平滑肌细胞（VSMC）建立增殖模型,运用Western blot及qRT-PCR检测其KPC1蛋白、KPC1 mRNA表达特征.结果 Western blot结果显示,颈动脉球囊损伤后实验组KPC1蛋白表达水平明显低于正常对照组（P＜0.05）,而PCNA蛋白表达量明显高于正常对照组（P＜0.05）;qRT-PCR检测结果显示,实验组KPC1的mRNA水平明显低于对照组（P＜0.05）;HE染色结果示颈动脉球囊损伤后1d、3d时光镜下血管内膜增生不明显;7d时光镜下可见新生内膜,增生的VSMC向内膜下迁移,管腔开始狭窄;14d时,可见明显新生内膜,VSMC排列紊乱,内弹力膜断裂,管腔明显狭窄,内膜厚度超过中膜;28d时,血管内膜继续不规则增生,血管腔狭窄程度继续加重,狭窄超过50％.体外培养并模拟VSMC增殖,提取细胞进行Western blot和qRT-PCR检测显示,KPC1蛋白、KPC1 mRNA表达在血小板源性生长因子-BB刺激增殖后开始逐渐减低.结论 抑制KPC1基因表达可促进损伤内膜增生,其作用机制可能与促进VSMC增殖有关. 展开更多
关键词 胞质泛素蛋白连接酶1(kpc1) 新生内膜 血管平滑肌细胞(VSMC) 增生
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