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Spectrum-effect relationship of immunologic activity of Ganoderma lucidum by UPLC-MS/MS and component knock-out method 被引量:7
1
作者 Changqin Li Yiping Cui +5 位作者 Jie Lu Lijun Meng Changyang Ma Zhenhua Liu Yan Zhang Wenyi Kang 《Food Science and Human Wellness》 SCIE 2021年第3期278-288,共11页
This study was designed to elucidate the immunoregulation of Ganoderma lucidum.HPLC fingerprint and spectrum-effect relationship of G.lucidum were established to predict the active compounds and BP neural network mode... This study was designed to elucidate the immunoregulation of Ganoderma lucidum.HPLC fingerprint and spectrum-effect relationship of G.lucidum were established to predict the active compounds and BP neural network model was established to predict the efficacy.Then the target compounds were identified by high resolution mass spectrometry.The results indicated that there are both enhanced immunity and immunosuppressive components in G.lucidum.BP neural network was trained with the common peak area and immune effi cacy index of G.lucidum fi ngerprint as samples,and a combined evaluation system of G.lucidum fi ngerprint effi cacy was established.The correlation coeffi cient R of BP network model was 0.98643,and the error of pharmacodynamic prediction results was in the ideal range.Eight compounds were identifi ed by high resolution mass spectrometry.The compounds related to immune activity in G.lucidum were determined in this study. 展开更多
关键词 Ganoderma lucidum RAW 264.7 cell Spectrum-effect relationships Component knock-out BP neural network
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RF knock-out extraction in HITFiL 被引量:1
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作者 石健 杨建成 +5 位作者 夏佳文 原有进 李杰 柴伟平 宋明涛 张小虎 《Chinese Physics C》 SCIE CAS CSCD 2012年第10期1004-1008,共5页
A compact facility for cancer therapy has been designed and is presently under construction. A slow beam extraction system using the RF-Knock Out method and 3rd-order resonance is adopted in the synchrotron of this fa... A compact facility for cancer therapy has been designed and is presently under construction. A slow beam extraction system using the RF-Knock Out method and 3rd-order resonance is adopted in the synchrotron of this facility. Eight sextupoles are used, four of them are for correcting the chromaticity and the rest for driving the 3rd-order resonance. In order to save the aperture of vacuum chamber, a 3-magnet bump is adopted during the extraction process. The extraction phase space map and the last 3 turns’ particle trajectory before extraction are given. The matching betatron functions with HEBT (high energy beam transport) are also presented. 展开更多
关键词 RF-knock out slow extraction 3rd order resonance cancer therapy
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自有外汇“对敲”行为的刑法认定
3
作者 汪明亮 《上海政法学院学报(法治论丛)》 2025年第4期100-111,共12页
自有外汇“对敲”行为是否构成非法经营罪存在截然相反的观点。界定自有外汇“对敲”行为性质应坚持形式判断与实质判断相结合理念、刑法最后手段性理念、社会效果与政治效果理念、治罪与治理并重理念。自有外汇“对敲”行为的刑法认定... 自有外汇“对敲”行为是否构成非法经营罪存在截然相反的观点。界定自有外汇“对敲”行为性质应坚持形式判断与实质判断相结合理念、刑法最后手段性理念、社会效果与政治效果理念、治罪与治理并重理念。自有外汇“对敲”行为的刑法认定必须考察“对敲型”非法经营罪的四个核心要件,即具有刑法意义上的非法经营行为、变相买卖外汇是变相倒买倒卖外汇、具有营利目的、属于地下钱庄或换汇中介。自有外汇“对敲”行为不具有“对敲型”非法经营罪的核心要件,不构成非法经营罪。可以通过反向行刑衔接,妥善解决自有外汇“对敲”行为的法律责任。 展开更多
关键词 自有外汇“对敲”行为 非法经营罪 司法理念 构成要件 反向行刑衔接
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宿主蛋白HERC4影响口蹄疫病毒复制的作用研究 被引量:1
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作者 郑东东 冯涛 +4 位作者 郝荣增 杨彪 晏子龙 齐晓兰 郑海学 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期435-440,共6页
本研究旨在探究宿主蛋白HERC4对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,首先利用CRISPR/Cas9技术在PK15细胞中构建了HERC4基因敲除细胞系,通过DNA测序和蛋白免疫印迹试验证明构建的基因敲除细胞系成功,然后在BHK21细胞中转染不同剂量的HERC4蛋白... 本研究旨在探究宿主蛋白HERC4对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,首先利用CRISPR/Cas9技术在PK15细胞中构建了HERC4基因敲除细胞系,通过DNA测序和蛋白免疫印迹试验证明构建的基因敲除细胞系成功,然后在BHK21细胞中转染不同剂量的HERC4蛋白表达质粒,制备了HERC4基因过表达细胞,随后在HERC4基因敲除细胞和过表达细胞中,分别利用蛋白免疫印迹、实时荧光定量和病毒滴度测定方法检测了HERC4蛋白对FMDV复制的影响,结果表明,HERC4蛋白对FMDV复制有影响,敲除可以抑制病毒复制,过表达可以促进病毒复制。该研究结果为后续开展HERC4蛋白调控FMDV复制机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 宿主蛋白HERC4 基因敲除 基因过表达
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烟草脂类合成关键基因NtLPAT的功能验证
5
作者 吉白璐 孙艺文 +12 位作者 刘万峰 钱亚新 蒋彩虹 耿锐梅 刘旦 程立锐 杨爱国 黄立钰 李晓旭 蒲文宣 高军平 张强 文柳璎 《作物学报》 北大核心 2025年第9期2527-2537,共11页
溶血磷脂酰基转移酶(LPAT)是负责催化溶血磷脂酸(LPA)和脂肪酰基-辅酶A(Acyl-CoA)酯化生成磷脂酸(PA)合成途径的关键酶,尚不清楚烟草中LPAT的基因功能。本研究从K326中克隆得到NtLPAT基因,利用CRISPR/Cas9技术获得NtLPAT敲除植株ntlpat... 溶血磷脂酰基转移酶(LPAT)是负责催化溶血磷脂酸(LPA)和脂肪酰基-辅酶A(Acyl-CoA)酯化生成磷脂酸(PA)合成途径的关键酶,尚不清楚烟草中LPAT的基因功能。本研究从K326中克隆得到NtLPAT基因,利用CRISPR/Cas9技术获得NtLPAT敲除植株ntlpat,对其农艺性状和抗病性以及外观质量进行鉴定,结合脂质组、转录组分析NtLPAT的功能。结果表明,NtLPAT受青枯病菌和黑胫病病菌的诱导。ntlpat株高降低,对黄瓜花叶病毒病(CMV)与青枯病的抗性提高。脂质组分析表明,ntlpat中甘油酯代谢发生了重排,三酰甘油含量显著降低,组成类囊体膜的甘油糖脂含量(MGDG,DGDG)随之上升,并且鞘脂和磷脂酰肌醇含量也发生变化。转录组分析表明,ntlpat的光合作用、碳固定代谢、鞘脂合成和磷脂酰肌醇信号转导途径的相关基因发生重编程,因此推测NtLPAT具有脂酰基转移酶活性,调控三酰甘油的从头合成途径,并参与细胞信号传导,影响烟草的生长和对CMV、青枯病菌的抗性,研究结果为挖掘烟草株型及抗性改良提供基因资源和试验依据。 展开更多
关键词 溶血磷脂酰基转移酶 烟草 基因敲除 脂质组学 转录组学
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SlBON1调控番茄植株营养生长机制的研究
6
作者 李芮 王稳 +3 位作者 杜明辉 刘根忠 马方放 包志龙 《园艺学报》 北大核心 2025年第1期73-87,共15页
BONZAI1(BON1)是高度保守的钙依赖膜结合蛋白Copine家族成员,具有调控生长发育的重要作用。番茄SlBON1与拟南芥BON1的蛋白序列相似度为66.84%。通过CRISPR-Cas9技术获得两个番茄SlBON1敲除突变体cr6和cr8,分别为61个碱基缺失突变和1个... BONZAI1(BON1)是高度保守的钙依赖膜结合蛋白Copine家族成员,具有调控生长发育的重要作用。番茄SlBON1与拟南芥BON1的蛋白序列相似度为66.84%。通过CRISPR-Cas9技术获得两个番茄SlBON1敲除突变体cr6和cr8,分别为61个碱基缺失突变和1个碱基插入突变。与野生型相比,SlBON1敲除突变体的地上和地下部生长均受到显著抑制,下胚轴中核内周期下降,叶片光合速率显著下降,淀粉含量升高。转录组分析显示SlBON1敲除突变体中激素信号转导信号通路、MAPK信号通路以及细胞周期的差异基因富集度较高。推测SlBON1通过调控植物激素代谢、细胞周期及光合作用等促进了番茄植株的营养生长。 展开更多
关键词 番茄 SlBON1 敲除 营养生长 转录组分析
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基于目标成分敲出/敲入的丹参抑制NLRP3炎症小体活化的关键活性成分研究
7
作者 王贤铃 许颖杰 +7 位作者 李欣雨 郭龙鑫 文金财 郑维军 赵旭 柏兆方 肖小河 湛小燕 《中草药》 北大核心 2025年第21期7783-7794,共12页
目的探讨隐丹参酮在丹参抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)炎症小体活化中的作用。方法采用骨髓源性巨噬细胞(bone marrow derived macrophage,BMDMs)建立NLRP... 目的探讨隐丹参酮在丹参抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)炎症小体活化中的作用。方法采用骨髓源性巨噬细胞(bone marrow derived macrophage,BMDMs)建立NLRP3炎症小体活化模型,评价丹参提取物对NLRP3炎症小体活化的影响。利用目标成分敲出/敲入评价隐丹参酮在丹参抑制NLRP3炎症小体活化中的作用,采用薄层色谱法“敲出”隐丹参酮得到目标成分样品(隐丹参酮样品)及阴性样品(丹参提取物中敲出隐丹参酮的样品),并利用NLRP3炎症小体活化模型,比较其对NLRP3炎症小体活化的抑制作用,通过ELISA和Western blotting检测相关炎症因子的释放和蛋白的表达;利用“敲入”方法,在阴性样品中加入目标成分样品,并将之与丹参提取物进行比较,评价二者对NLRP3炎症小体活化的调控作用;同时利用质谱对目标成分样品、阴性样品进行检测。结果丹参提取物对NLRP3炎症小体的活化有抑制作用;“敲出”隐丹参酮后丹参提取物对NLRP3炎症小体活化的抑制作用减弱,“敲入”后抑制作用回升。结论隐丹参酮是丹参抑制NLRP3炎症小体活化的关键成分。 展开更多
关键词 丹参 隐丹参酮 NLRP3炎症小体 成分敲出/敲入 炎症因子
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C11ORF94基因缺陷导致精卵融合失败的机制研究
8
作者 王文静 《生物化工》 2025年第1期33-37,共5页
目的:配子的受精、融合是个体发育的起点,其中精子-卵子细胞膜融合是受精过程中关键步骤之一。本研究旨在利用敲除小鼠探寻精卵融合的潜在机制。方法:利用CRISPR/Cas9系统敲除睾丸特异高表达基因C11ORF94,观察敲除小鼠生育情况及体外受... 目的:配子的受精、融合是个体发育的起点,其中精子-卵子细胞膜融合是受精过程中关键步骤之一。本研究旨在利用敲除小鼠探寻精卵融合的潜在机制。方法:利用CRISPR/Cas9系统敲除睾丸特异高表达基因C11ORF94,观察敲除小鼠生育情况及体外受精情况。利用HEK293T-卵母细胞结合实验及精子-卵母细胞融合实验观察C11ORF94蛋白对精卵结合与融合的影响。针对睾丸组织进行体外Pull-down和质谱分析以筛选C11ORF94的互作蛋白。结果:C11ORF94基因敲除小鼠严重不育并表现精卵融合障碍,卵胞浆内单精子注射可挽救该表型。针对C11ORF94互作蛋白的聚类分析表明C11ORF94参与细胞分泌途径以及小GTP酶信号转导通路。结论:实验证实,C11ORF94通过影响分泌途径来影响精子与卵子的融合能力。此外,卵胞浆内单精子注射可挽救该基因缺陷的表型。 展开更多
关键词 C11ORF94 基因敲除 精卵融合障碍
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基于成分敲除/敲入的中药药效组分辨识与质量控制模式的商建 被引量:59
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作者 肖小河 鄢丹 +2 位作者 袁海龙 王伽伯 金城 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1345-1348,1488,共5页
中药药效物质辨识与中药质量控制一直是中药现代化研究的难点和热点问题。为了探寻中药药效物质与质量控制标准研究的重大突破,在回顾性研究和前瞻性分析的基础上,首次提出"基于成分敲除/敲入的中药药效物质辨识与质量控制模式&qu... 中药药效物质辨识与中药质量控制一直是中药现代化研究的难点和热点问题。为了探寻中药药效物质与质量控制标准研究的重大突破,在回顾性研究和前瞻性分析的基础上,首次提出"基于成分敲除/敲入的中药药效物质辨识与质量控制模式"的研究设想,以期为又快又准地辨识中药药效关键组分,实现中药质量标准"关联药效,量而又准,可控可评"的愿景,提供具有原创性和实用性的研究思路和方法体系。 展开更多
关键词 中药药效组分辨识 成分敲除/敲入 质量控制
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利用CRISPR/Cas9技术敲除水稻Pi21基因的效率分析 被引量:23
10
作者 王芳权 范方军 +4 位作者 李文奇 朱金燕 王军 仲维功 杨杰 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期469-478,共10页
利用CRISPR/Cas9技术,针对Pi21基因的两个靶位点(靶位1和靶位2),构建基因敲除载体,转化水稻品种南粳9108。经PCR鉴定,获得了28株T0代阳性转基因植株。对靶位点酶切检测发现,靶位1突变效率为78.57%,靶位2突变效率为92.86%;靶位1和靶位2... 利用CRISPR/Cas9技术,针对Pi21基因的两个靶位点(靶位1和靶位2),构建基因敲除载体,转化水稻品种南粳9108。经PCR鉴定,获得了28株T0代阳性转基因植株。对靶位点酶切检测发现,靶位1突变效率为78.57%,靶位2突变效率为92.86%;靶位1和靶位2同时突变的效率为78.57%,突变效率较高。通过对靶位点进行测序,发现靶位点突变类型较多,包括碱基缺失、碱基插入、碱基缺失后插入其他碱基和大片段DNA缺失等类型。对突变株系进行氨基酸预测,发现大部分株系都存在移码突变现象而使基因突变彻底,少数株系表现为部分氨基酸的缺失或变异。成功敲除了水稻Pi21基因,并对突变效率和类型进行了分析,为进一步验证Pi21基因功能、培育广谱抗稻瘟病的水稻新品系奠定了基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 稻瘟病 Pi21 基因敲除
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基于成分敲出策略辨识四制香附抗痛经的主要效应成分 被引量:27
11
作者 郭慧玲 董能峰 +4 位作者 胡律江 赵晓娟 胡志方 骆云霞 高文军 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期7-11,共5页
目的:基于成分敲出策略对四制香附抗痛经的主要药效成分进行初步辨识,为该药材的后续研究提供参考。方法:采用硅胶柱色谱技术结合制备高效液相色谱法(HPLC)对四制香附石油醚部位中具有抗痛经作用的活性成分α-香附酮(A),香附烯酮(B)和su... 目的:基于成分敲出策略对四制香附抗痛经的主要药效成分进行初步辨识,为该药材的后续研究提供参考。方法:采用硅胶柱色谱技术结合制备高效液相色谱法(HPLC)对四制香附石油醚部位中具有抗痛经作用的活性成分α-香附酮(A),香附烯酮(B)和sugeonol(C)分别按照敲出A,B,C,AB,AC,BC,ABC的方法不断敲出,从而得到各目标敲出成分A+,B+,C+,AB+,AC+,BC+,ABC+及其相应的阴性样品A-,B-,C-,AB-,AC-,BC-,ABC-,利用HPLC对各目标敲出成分及其阴性样品进行检测,通过小鼠离体子宫平滑肌收缩试验,探究各敲出目标成分及其对应阴性样品、石油醚部位对小鼠离体子宫平滑肌的影响。结果:α-香附酮、香附烯酮和sugeonol这3种成分分别组合敲出的目标成分的抗痛经作用比单独敲出的目标成分强;与石油醚部位比较,阴性样品A-,B-,C-抗痛经作用明显下降;目标成分AB+的抗痛经作用强于敲出目标成分后的阴性样品AB-;阴性样品ABC-仍具有抗痛经作用;各敲出目标成分与其阴性样品的平均抑制率之和均比石油醚部位的平均抑制率大。结论:在中药整体水平上,证明α-香附酮、香附烯酮和sugeonol这3种成分都是香附抗痛经作用的活性成分,并且三者之间可能存在着协同作用,其中α-香附酮与香附烯酮是香附抗痛经作用的主要药效物质,除了目标成分α-香附酮、香附烯酮和sugeonol外,香附中还存在着其他的抗痛经活性成分,各敲出目标成分与其阴性样品(其他成分的混合物)之间均可能存在着拮抗作用。 展开更多
关键词 四制香附 抗痛经 Α-香附酮 香附烯酮 sugeonol 成分敲出/敲入
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大肠杆菌ptsG基因敲除及其缺陷株生长特性研究 被引量:26
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作者 韩聪 张惟材 +1 位作者 游松 黄留玉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期16-20,共5页
在大肠杆菌磷酸转移酶系统中 ,葡萄糖主要由ptsG基因编码的酶ⅡCBGlc转运入细胞。利用代谢工程技术构建ptsG基因缺陷株 ,有望降低葡萄糖的摄取速率 ,减少乙酸累积 ,促进菌体生长。运用PCR技术 ,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源 ,中... 在大肠杆菌磷酸转移酶系统中 ,葡萄糖主要由ptsG基因编码的酶ⅡCBGlc转运入细胞。利用代谢工程技术构建ptsG基因缺陷株 ,有望降低葡萄糖的摄取速率 ,减少乙酸累积 ,促进菌体生长。运用PCR技术 ,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源 ,中间为氯霉素抗性基因的DNA片段。经电转化 ,将外源DNA片段分别转入EscherichiacoliDH5α、JM10 9中。在Red重组酶的作用下 ,外源DNA片段与染色体上同源区域重组 ,将基因ptsG敲除 ,构建ptsG基因缺陷株DH5αP、JM10 9P。在LB培养基中 ,ptsG基因缺陷株的生长状况与亲株无明显差异。在含有葡萄糖的LB培养基中 ,DH5αP、JM10 9P的最高菌密度分别是对照菌株DH5α、JM10 9的 3 4 7倍和 4 2 5倍 ,ptsG基因缺陷株对葡萄糖的摄入量也明显高于对照菌株。重组蛋白肿瘤坏死因子 (TNF)在DH5αP、JM10 9P中的表达量分别占全菌蛋白的2 4 3%、2 0 8% ,A6 0 0 分别为 8 2 8、7 6 2 ,TNF在缺陷株中单位体积的表达量明显高于对照菌株。以上结果说明 ,大肠杆菌ptsG基因缺陷株具有良好的生长能力和表达外源蛋白的能力 ,在大肠杆菌高密度发酵研究方面具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 大肠杆菌 ptsG基因 缺陷株 生长特性 基因敲除 代谢工程
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黄连解毒汤对高脂饮食apoE^(-/-)小鼠全身和主动脉血管局部免疫反应影响的研究 被引量:23
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作者 马雅銮 王蓓蓓 +7 位作者 韩俊燕 李蕊 张卫梅 李彤 陈冰 苏静 王宪波 曾辉 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1520-1525,共6页
目的观察黄连解毒汤对高脂饮食喂养的apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠全身和主动脉血管局部免疫反应的影响。方法以8只野生型C57BL6小鼠为野生普食组,24只apoE-/-小鼠随机分为apoE-/-普食组、apoE-/-高脂组、apoE-/-高脂加中药组,每组8只。... 目的观察黄连解毒汤对高脂饮食喂养的apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠全身和主动脉血管局部免疫反应的影响。方法以8只野生型C57BL6小鼠为野生普食组,24只apoE-/-小鼠随机分为apoE-/-普食组、apoE-/-高脂组、apoE-/-高脂加中药组,每组8只。普食组与高脂组分别给予普食和高脂饮食4周。ApoE-/-高脂加中药组同时给予黄连解毒汤5 g/(kg·d)灌胃,其他小鼠采用等量纯净水灌胃。4周后,检测血脂水平、外周血单核细胞比例及其表面Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)和清道夫受体CD36的表达;检测主动脉病理变化和主动脉血管局部细胞因子表达水平;进一步采用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激检测血浆细胞因子的水平。结果 (1)与野生普食组比较,apoE-/-普食组TC、TG和LDL-C水平显著升高(P<0.05,P<0.01);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组TC和LDL-C水平显著增高(P<0.05);apoE-/-高脂组与apoE-/-高脂加中药组血脂各项指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与野生普食组比较,apoE-/-普食组外周血单核细胞比例无明显变化,TLR4表达水平显著增多(P<0.05);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组小鼠外周血单核细胞比例及TLR4表达水平显著增多(P<0.05);与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组外周血单核细胞比例及其表面TLR4表达显著降低,清道夫受体CD36表达水平亦显著降低(P<0.05)。(3)LPS刺激3 h后,与野生普食组比较,apoE-/-普食组血浆TNF-α和IL-10表达显著增加(P<0.05);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组小鼠血浆IL-12、TNF-α、MCP-1和IL-10表达增加,但差异无统计学意义(P>0.05);黄连解毒汤干预4周后,与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组MCP-1表达显著下调,而IL-10水平进一步显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)与野生普食组比较,apoE-/-普食组主动脉血管壁炎症因子IFN-γ、MCP-1、TNF-α和IL-1βmRNA水平显著升高,抑炎因子IL-10亦显著升高(P<0.05,P<0.01);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组主动脉血管壁不仅IFN-γ、MCP-1、TNF-α和IL-1β水平进一步显著升高,且抑炎因子IL-12、IL-10和TGF-β亦显著升高(P<0.05,P<0.01);黄连解毒汤干预4周后,与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组主动脉血管壁炎症因子MCP-1、TNF-α、IL-1β和IL-12显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论高脂饮食引发apoE-/-小鼠全身性炎症反应和血管局部炎症反应,血管局部炎症反应程度超过全身性炎症反应。黄连解毒汤干预后能够减轻炎症反应,并且对血管局部的作用更为显著,同时增强全身抗炎反应。 展开更多
关键词 黄连解毒汤 APO E基因敲除小鼠 高脂血症 单核细胞 细胞因子
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不同强度电针、热灸样刺激对香草酸瞬时受体亚型1基因敲除小鼠痛阈的影响 被引量:26
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作者 辛娟娟 宿杨帅 +6 位作者 杨兆坤 石宏 尚红艳 杨佃会 何伟 景向红 朱兵 《针刺研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期431-439,共9页
目的:探讨不同强度电针、热灸样刺激"后三里"穴对小鼠痛阈的影响及其感受器受体机制。方法:清洁级小鼠20只,分为香草酸瞬时受体亚型1基因敲除(TRPV 1-/-)组和C 57BL/6同源野生型对照组,每组10只。在"后三里"穴进行... 目的:探讨不同强度电针、热灸样刺激"后三里"穴对小鼠痛阈的影响及其感受器受体机制。方法:清洁级小鼠20只,分为香草酸瞬时受体亚型1基因敲除(TRPV 1-/-)组和C 57BL/6同源野生型对照组,每组10只。在"后三里"穴进行电针(强度分别为0.3mA、1.0mA或3.0mA,持续20min)或热灸样刺激(强度分别为38℃、43℃或46℃,持续10min)干预,在电针和热灸样刺激干预结束即刻测量小鼠同位和异位机械痛阈和热痛阈,并在0.3mA、3.0mA电针和38℃、46℃热灸样刺激结束5min后再次测量小鼠同位和异位痛阈。结果:①与对照组相比,TRPV 1-/-组的基础热痛阈显著升高(P<0.001)。②1.0mA、3.0mA电针和43℃、46℃热灸样刺激干预均可引起C 57BL/6小鼠同位和异位机械痛阈和热痛阈显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001),而0.3mA电针和38℃热灸样刺激干预仅能引起C 57BL/6小鼠同位机械痛阈和热痛阈显著升高(P<0.05,P<0.01)。3.0mA电针可显著提高TRPV 1-/-小鼠同位和异位的痛阈(P<0.05,P<0.01)。1.0mA电针可显著提高TRPV 1-/-小鼠同位痛阈和异位机械痛阈(P<0.05,P<0.01)。0.3mA电针和43℃、46℃热灸样刺激干预仅能引起TRPV 1-/-小鼠同位痛阈的显著升高(P<0.05,P<0.01),而38℃热灸样刺激仅可引起TRPV 1-/-小鼠同位机械痛阈的升高(P<0.05)。③与对照组相比,电针或热灸样刺激预处理对TRPV 1-/-组小鼠痛阈的升高效应均有不同程度的减弱。④电针或热灸样刺激干预结束5min后,两组小鼠痛阈基本恢复至干预前水平。结论:电针和热灸样刺激均可对痛阈有一定的升高效应,说明电针和热灸样刺激具有预防性抗痛效应,而且TRPV 1参与了这一镇痛效应。 展开更多
关键词 电针 机械痛阈 热痛阈 小鼠 香草酸瞬时受体亚型1基因敲除
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泽泻萜类化合物对ApoE基因敲除动脉粥样硬化小鼠肝脏基底膜HSPG的调节作用 被引量:23
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作者 秦建国 王亚红 +3 位作者 梁晋普 张莹 王硕仁 郭维琴 《中华中医药学刊》 CAS 2007年第4期696-698,共3页
目的:观察泽泻萜类化合物对ApoE基因敲除小鼠实验性动脉粥样硬化肝脏基底膜硫酸乙酰肝素蛋白多糖的调节作用。方法:将8周龄C57/BL小鼠12只设为正常对照组,8周龄ApoE基因缺陷小鼠36只随机分为3组:模型组、中药组、舒降之阳性对照组。正... 目的:观察泽泻萜类化合物对ApoE基因敲除小鼠实验性动脉粥样硬化肝脏基底膜硫酸乙酰肝素蛋白多糖的调节作用。方法:将8周龄C57/BL小鼠12只设为正常对照组,8周龄ApoE基因缺陷小鼠36只随机分为3组:模型组、中药组、舒降之阳性对照组。正常对照组、模型组予0.9%生理盐水灌胃,给药组正常人每kg体重的10倍量灌胃90天后,全自动生化仪测定血清血脂含量,用免疫印记法测定各组肝脏基底膜硫酸乙酰肝素蛋白多糖的表达,用Quantity One 6.0软件进行光密度分析。结果:中药组、阳性对照药组与模型组比较,总胆固醇、低密度脂蛋白水平均明显降低。中药组、阳性对照药组肝脏基底膜HSPG表达与模型组比较明显上调,但与正常对照组比较则明显下调。结论:泽泻萜类化合物对apoE-基因敲除高脂饲料喂养所致动脉粥样硬化小鼠具有降低血清总胆固醇、低密度脂蛋白的作用,对该模型小鼠的肝脏基底膜HSPG表达有调节作用。 展开更多
关键词 中药学 泽泻萜类化合物 血脂 硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG) 动脉粥样硬化 APOE基因敲除小鼠
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Red重组系统及在微生物基因敲除中的应用 被引量:20
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作者 胡堃 史兆兴 +1 位作者 赛道建 黄留玉 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期628-632,共5页
在完成了对各种微生物基因组的测序以后,功能基因学的研究变得尤为重要。研究基因功能最直接的方法便是将待研究的基因失活。最初构建基因突变体是采用大肠杆菌的RecA系统,但是RecA重组系统操作复杂,重组效率低。最近建立了Red重组系统... 在完成了对各种微生物基因组的测序以后,功能基因学的研究变得尤为重要。研究基因功能最直接的方法便是将待研究的基因失活。最初构建基因突变体是采用大肠杆菌的RecA系统,但是RecA重组系统操作复杂,重组效率低。最近建立了Red重组系统,该系统由3个蛋白组成:α蛋白(即λ核酸外切酶),β蛋白,Gam蛋白。应用Red系统进行基因敲除,可以直接利用线性打靶DNA,两侧同源臂长度在35~60bp即可发生同源重组,且重组效率高。 展开更多
关键词 RED重组系统 基因敲除 抗药性基因 微生物
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基于“有故无殒”莪术对正常和血瘀证小鼠毒性差异机制的研究 被引量:13
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作者 于春磊 徐天娇 +2 位作者 张晓杰 董妙先 牛英才 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期329-334,共6页
为了明确正常和血瘀证的孕鼠子代莪术神经发育毒性的差异及其生物机制,采用冰水浸入法制备寒凝血瘀证小鼠模型,雌性小鼠随机分为正常对照组、血瘀证对照组、正常+莪术(2.5、5、10 g·kg^(-1))组、血瘀证+莪术(2.5、5、10 g·kg^... 为了明确正常和血瘀证的孕鼠子代莪术神经发育毒性的差异及其生物机制,采用冰水浸入法制备寒凝血瘀证小鼠模型,雌性小鼠随机分为正常对照组、血瘀证对照组、正常+莪术(2.5、5、10 g·kg^(-1))组、血瘀证+莪术(2.5、5、10 g·kg^(-1))组、血瘀证Nrf2敲除组、血瘀证Nrf2敲除+莪术(10 g·kg^(-1))组、正常+tBHQ (Nrf2的激动剂)组和正常+莪术(10 g·kg^(-1))+tBHQ组,共12组。交配成功的莪术暴露组小鼠于妊娠期第5~18天灌胃给予莪术水煎液。行为学方法检测子代小鼠断崖回避达标日龄,分光光度法检测子代小鼠脑组织谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量,实时定量PCR检测子代小鼠脑组织Nrf2、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate cysteine ligase catalytic subunit,GCLc)和修饰亚基(glutamate cysteine ligase modifier subunit, GCLm) mRNA表达,蛋白质印迹法检测子代小鼠脑组织Nrf2、GCLc和GCLm蛋白表达。动物福利和实验过程均遵循齐齐哈尔医学院动物伦理委员会的规定执行。结果显示,正常小鼠灌胃莪术水煎液(10.0 g·kg^(-1))导致子代断崖回避达标日龄显著延长(P<0.05),而血瘀证小鼠子代无显著差异(P>0.05)。与正常对照组比较,血瘀证孕小鼠显著增加子代脑组织GSH含量、GCLc、Nrf2 mRNA和蛋白表达(均P<0.05),而莪术处理对GSH含量、GCLc、Nrf2 mRNA和蛋白表达并没有影响(均P>0.05)。Nrf2基因敲除显著延长血瘀证孕小鼠子代断崖回避的达标日龄(P<0.05)。总之,莪术对正常小鼠子代神经发育毒性效应较血瘀证小鼠明显, Nrf2分子参与莪术"有故无殒"现象。 展开更多
关键词 莪术 神经发育毒性 血瘀证 基因敲除小鼠 氧化应激 NRF2
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基于选择性剔除的红花抗氧化效应物质基础研究 被引量:12
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作者 王林艳 唐于平 +4 位作者 刘欣 葛雅辉 李淑娇 尚尔鑫 段金廒 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1285-1289,共5页
目的:建立一种从整体角度研究中药效应物质的方法。方法:以红花为例,利用制备液相色谱剔除其主要成分,然后分别对剔除后的样品进行抗氧化效应评价,进而比较分析得出红花抗氧化活性的主要效应物质及各成分的贡献度。结果:从红花样品中分... 目的:建立一种从整体角度研究中药效应物质的方法。方法:以红花为例,利用制备液相色谱剔除其主要成分,然后分别对剔除后的样品进行抗氧化效应评价,进而比较分析得出红花抗氧化活性的主要效应物质及各成分的贡献度。结果:从红花样品中分别剔除了7个主要物质,并通过质谱数据分析和对照品对照鉴定了其中6个成分。通过对包括剔除物质在内的所有样品进行抗氧化效应比较评价,结果发现羟基红花黄色素A,脱水红花黄色素B,6-羟基山柰酚-3,6-二氧葡萄糖-7-氧葡萄醛酸苷是红花抗氧化活性的主要效应物质。结论:该研究探索了一种较新颖而有效的中药效应物质的研究方法,通过这种方法,能从一定程度上阐明不同成分对中药效应表达直接或间接的贡献以及贡献度,使得中药效应物质表达更加明晰。 展开更多
关键词 选择性剔除 红花 抗氧化 效应物质
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银杏内酯B对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响 被引量:18
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作者 刘熹昀 赵革新 +3 位作者 鲍利 陈北冬 吴伟 齐若梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期81-84,共4页
目的探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响。方法 12只8周龄C57BL/6J小鼠为正常组,24只8周龄♂ApoE-/-小鼠为阳性模型组以及药物组;药物组每天给予GB 0.6 mg灌胃。8周后处死小鼠,用病理学方法... 目的探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响。方法 12只8周龄C57BL/6J小鼠为正常组,24只8周龄♂ApoE-/-小鼠为阳性模型组以及药物组;药物组每天给予GB 0.6 mg灌胃。8周后处死小鼠,用病理学方法观察小鼠动脉斑块、脂质沉积以及巨噬细胞表达。用ELISA方法测定血浆RAN-TES含量。结果电镜结果显示模型组动脉斑块较大,血管内膜损伤明显,而GB组小鼠动脉内表面损伤明显减轻,斑块较小。HE染色显示了同样的结果,模型组斑块较大,GB组斑块较小。血浆RANTES测定正常组为123.81 ng.L-1,模型组为359.16 ng.L-1,GB组为193.36 ng.L-1,各组之间差异存在统计学意义(P<0.01)。结论 GB能有效地减轻ApoE-/-小鼠的动脉粥样硬化损伤,并降低血浆RANTES含量,其药理学机制可能与抑制血小板功能相关。 展开更多
关键词 银杏内酯B APOE基因敲除小鼠 动脉粥样硬化 RANTES PAF受体拮抗剂 血小板释放
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解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉NF-κB与MMP-9表达的调控作用 被引量:36
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作者 张京春 陈可冀 +4 位作者 郑广娟 张文高 史大卓 殷惠军 刘龙涛 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期40-44,共5页
目的观察解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠[apolipoprotein E knocked-out mice, ApoE(-/-)mice]主动脉核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的调控作用。方法13周龄ApoE(-/-)小鼠分为高脂组(给予高脂饲料)和... 目的观察解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠[apolipoprotein E knocked-out mice, ApoE(-/-)mice]主动脉核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的调控作用。方法13周龄ApoE(-/-)小鼠分为高脂组(给予高脂饲料)和普通饲料组(给予普通饲料),同时设13周龄C57 BL/6J小鼠对照组(给予普通饲料)。19周后进行干预,普通饲料模型组、C57BL/6J小鼠对照组灌服生理盐水,高脂组随机分为解毒组[灌服虎杖苷26.6 mg/(kg·d)],活血组[灌服芎芍胶囊110 mg/(kg·d)],解毒活血配伍高剂量组[灌服虎杖提取物53.2 mg/(kg·d),芎芍胶囊220 mg/(kg·d)];解毒活血配伍中剂量组[灌服虎杖提取物26.6 mg/(kg·d),芎芍胶囊110 mg/(kg·d)];解毒活血配伍低剂量组[灌服虎杖提取物13.3 mg/(kg·d),芎芍胶囊55 mg/(kg·d)],洛伐他汀组[灌服洛伐他汀3.3 mg/(kg·d)],高脂饲料模型组(灌服生理盐水)。17周后,取主动脉做常规石蜡切片,免疫组化观察其NF-κB和MMP-9表达的程度。结果模型组ApoE(-/-)小鼠主动脉及粥样斑块NF-κB和MMP-9表达明显增加,虎杖苷、芎芍胶囊、洛伐他汀及解毒活血配伍治则的虎杖苷与芎芍胶囊配伍均可降低其主动脉NF-κB和MMP-9表达(P<0.01),且以解毒活血配伍高剂量组疗效最好(P<0.01)。结论解毒活血配伍可降低ApoE(-/-)小鼠主动脉NF-κB和MMP-9表达,且优于单纯解毒和活血组。 展开更多
关键词 解毒活血配伍 载脂蛋白E基因敲除小鼠 核因子-ΚB 基质金属蛋白酶-9 动脉粥样硬化 易损斑块 芎芍胶囊
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