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MeRIP-qPCR技术检测RNA m^(6)A甲基化修饰对t(8;21)AML细胞中KDM4B基因表达的调控作用
1
作者 李雨晴 邵杨柳 +2 位作者 李梦月 王莉莉 高晓宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期382-388,共7页
目的:通过MeRIP联合逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术,证明WTAP介导的RNA m^(6)A修饰对伴t(8;21)急性髓系白血病(AML)细胞中KDM4B基因的直接调控作用。方法:采用靶向WTAP或KDM4B基因的短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体沉默t... 目的:通过MeRIP联合逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术,证明WTAP介导的RNA m^(6)A修饰对伴t(8;21)急性髓系白血病(AML)细胞中KDM4B基因的直接调控作用。方法:采用靶向WTAP或KDM4B基因的短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体沉默t(8;21)AML细胞系Kasumi-1和SKNO-1中WTAP或KDM4B基因表达,以转染随机打乱序列(scramble)的shRNA的细胞为对照。用超纯RNA提取试剂盒(DNaseⅠ)提取细胞RNA,Magna MeRIP^(TM)m^(6)A Kit试剂盒富集甲基化修饰片段,并通过RT-qPCR检测m^(6)A甲基化修饰的RNA区域;采用蛋白免疫印迹实验(Western blot)和逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术检测细胞中WTAP、KDM4B蛋白和mRNA的表达水平。采用克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力。结果:沉默Kasumi-1细胞中WTAP的表达后,m^(6)A甲基化修饰在KDM4B mRNA 3’UTR的富集程度显著下降(P<0.01),沉默Kasumi-1和SKNO-1细胞中WTAP的表达可显著抑制KDM4B蛋白(P<0.001)和mRNA表达水平(Kasumi-1:P<0.001;SKNO-1:P<0.01)、细胞体外克隆形成能力下降(Kasumi-1:P<0.001;SKNO-1:P<0.01)。结论:t(8;21)AML细胞系中,WTAP通过调控KDM4B基因mRNA 3’UTR的m^(6)A修饰调控KDM4B的表达,沉默KDM4B表达可以抑制t(8;21)AML细胞增殖。 展开更多
关键词 MeRIP-qPCR 急性髓系白血病 t(8 21)染色体易位 kdm4b RNA m^(6)A甲基化修饰
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组蛋白去甲基化酶KDM4B促进根尖牙乳头干细胞中成骨和成牙本质分化 被引量：14
2
作者 姚睿 范志朋 《北京口腔医学》 CAS 2013年第4期181-184,共4页
目的研究组蛋白去甲基化酶KDM4B对根尖牙乳头干细胞定向分化能力的影响。方法人重组骨形成蛋白4(BMP4)刺激根尖牙乳头干细胞后检测KDM4B的表达;利用慢病毒转染过表达或者基因敲除KDM4B进行获得性或丧失性功能研究。通过检测碱性磷酸酶(A... 目的研究组蛋白去甲基化酶KDM4B对根尖牙乳头干细胞定向分化能力的影响。方法人重组骨形成蛋白4(BMP4)刺激根尖牙乳头干细胞后检测KDM4B的表达;利用慢病毒转染过表达或者基因敲除KDM4B进行获得性或丧失性功能研究。通过检测碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色、钙离子定量分析研究根尖牙乳头干细胞体外成骨和成牙本质分化能力。结果 BMP4促进根尖牙乳头干细胞KDM4B的表达。基因敲除KDM4B抑制根尖牙乳头干细胞ALP活性及体外矿化能力、促进转录因子PPAR-gamma的表达。过表达KDM4B增强根尖牙乳头干细胞ALP活性和体外矿化能力。结论组蛋白去甲基化酶KDM4B具有促进根尖牙乳头干细胞成骨和成牙本质分化的潜能。 展开更多
关键词 组蛋白去甲基化酶 根尖牙乳头干细胞 成骨和成牙本质分化 kdm4b
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去甲基化酶KDM4B在牦牛卵泡发育过程中的表达 被引量：3
3
作者 马鸿程 熊显荣 +3 位作者 海卓 闵星宇 郝振宇 李键 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1016-1022,共7页
采集牦牛卵巢组织,利用免疫组织化学法分析KDM4B在不同发育阶段牦牛卵泡中的表达与定位;根据牦牛卵泡直径大小,将卵泡分为大卵泡(≥7 mm)、中卵泡(3.0~6.9 mm)和小卵泡(≤2.9 mm)组,采用注射器抽取的方法分别收集各组别卵泡中卵丘卵母... 采集牦牛卵巢组织,利用免疫组织化学法分析KDM4B在不同发育阶段牦牛卵泡中的表达与定位;根据牦牛卵泡直径大小,将卵泡分为大卵泡(≥7 mm)、中卵泡(3.0~6.9 mm)和小卵泡(≤2.9 mm)组,采用注射器抽取的方法分别收集各组别卵泡中卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complex, COCs)及壁层颗粒细胞,对COCs进行体外成熟培养并统计各组别卵母细胞成熟率;分别提取各组别卵泡卵母细胞、卵丘颗粒细胞及壁层颗粒细胞总RNA,采用RT-qPCR方法检测卵泡细胞中KDM4B mRNA的相对表达量。结果显示,KDM4B在各发育阶段的牦牛卵泡中均有表达,主要定位于卵母细胞及颗粒细胞,而在膜细胞中表达较少,且随着卵泡发育进程KDM4B表达信号增强。体外培养结果显示,卵母细胞成熟率随着卵泡的发育程度上升,其中大卵泡组(91.30%)、中卵泡组(85.77%)成熟率显著高于小卵泡组(63.51%,P<0.05);RT-qPCR结果显示,KDM4B mRNA在各组卵泡细胞中均有表达,其中卵母细胞中表达量随卵泡发育呈下降趋势,且大卵泡组、中卵泡组显著低于小卵泡组(P<0.05),大卵泡组、中卵泡组间差异不显著(P>0.05)。卵丘颗粒细胞与壁层颗粒细胞中KDM4B mRNA表达规律基本一致,即随卵泡发育进程其表达均呈上升趋势,大卵泡组、中卵泡组表达极显著高于小卵泡组(P<0.01);此外,各组别的卵丘颗粒细胞中KDM4B的表达量约为同组中壁层颗粒细胞的2倍(P<0.01)。结果表明,KDM4B在牦牛卵泡发育过程中呈动态变化,参与了牦牛卵泡发育过程,其具体调控机制有待进一步研究。本研究旨在分析组蛋白去甲基化酶4B(histone demethylase 4B,KDM4B/JMJD2B)基因在牦牛不同发育阶段卵泡中的表达规律,探究其对牦牛卵泡发育成熟的影响,为深入探讨KDM4B在卵巢卵泡发育中的调控机理提供依据。 展开更多
关键词 牦牛 kdm4b 卵泡发育 表达
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敲除KDM4B通过减少上皮间质转化抑制结肠癌转移与侵袭
4
作者 杜恒 余洁 +2 位作者 简辉 张红英 吴安定 《现代消化及介入诊疗》 2022年第9期1117-1121,共5页
目的 构建KDM4B敲除的人结肠癌HCT116和SW260细胞,研究KDM4B对结肠癌细胞迁移与侵袭的影响并探讨其机制。方法 利用免疫组化染色,检测临床组织样本KDM4B的表达量;利用CRISPR/Cas9技术,通过慢病毒侵染HCT116与SW260细胞,构建KDM4B敲除细... 目的 构建KDM4B敲除的人结肠癌HCT116和SW260细胞,研究KDM4B对结肠癌细胞迁移与侵袭的影响并探讨其机制。方法 利用免疫组化染色,检测临床组织样本KDM4B的表达量;利用CRISPR/Cas9技术,通过慢病毒侵染HCT116与SW260细胞,构建KDM4B敲除细胞系;利用细胞划痕实验及transwell小室实验评价KDM4B敲除细胞与野生型细胞迁移及侵袭能力的差异;利用Western blotting检测EMT标志蛋白E-cadherin、 N-cadherin和Vimentin的表达情况。结果 免疫组化表明结肠癌组织中KDM4B显著高表达;通过Western blotting成功验证了KDM4B敲除结肠癌细胞系;敲除KDM4B显著抑制HCT116及SW260细胞的迁移与侵袭;敲除KDM4B显著上调HCT116及SW260细胞中E-cadherin的表达,显著下调N-cadherin和Vimentin的表达。结论 KDM4B能够通过介导EMT促进结肠癌细胞HCT116和SW260的迁移与侵袭,将其敲除可以显著减弱这种作用。 展开更多
关键词 kdm4b CRISPR/Cas9 上皮间质转化 结肠癌 肿瘤转移
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脲基琥珀酸缓解小鼠肥胖引起非酒精脂肪肝的作用机制
5
作者 孙畅 王雨薇 +4 位作者 齐心语 张若馨 李一凡 孙武平 周磊 《南方农业学报》 北大核心 2025年第4期1268-1279,共12页
【目的】探究脲基琥珀酸在体外与生物体内调节脂质及能量代谢的功效,明确其对非酒精脂肪肝的影响及潜在机制,为脲基琥珀酸在防治非酒精脂肪肝方面的应用提供理论依据。【方法】使用油酸/棕榈酸(OA/PA)诱导的HepG2细胞为细胞模型,从细胞... 【目的】探究脲基琥珀酸在体外与生物体内调节脂质及能量代谢的功效,明确其对非酒精脂肪肝的影响及潜在机制,为脲基琥珀酸在防治非酒精脂肪肝方面的应用提供理论依据。【方法】使用油酸/棕榈酸(OA/PA)诱导的HepG2细胞为细胞模型,从细胞氧化应激、线粒体ATP含量和线粒体荧光强度3个层面验证脲基琥珀酸在细胞水平缓解非酒精脂肪肝的作用;以高脂饮食(HFD)饲喂的C57BL/6雄性小鼠为生物模型,通过测量小鼠体重、肝脏重量、甘油三酯(TG)含量、总胆固醇(TC)含量,制作肝脏组织切片,以及实时荧光定量PCR检测脂肪肝相关基因表达变化,进一步验证脲基琥珀酸在生物体内缓解非酒精脂肪肝的功效;同时采用反向找靶和分子对接技术筛选脲基琥珀酸缓解脂肪肝的潜在靶点。【结果】100μmol/L脲基琥珀酸能有效降低诱导HepG2细胞内的TG积累,极显著抑制脂肪沉积基因Pparγ基因表达(P<0.01,下同),极显著降低细胞内的ROS水平,同时极显著提高CAT活性,显著提高GSH水平及SOD活性(P<0.05,下同),以及显著提高细胞线粒体DNA(mtDNA)转录水平和ATP含量。在小鼠试验中,100 mg/kg脲基琥珀酸能降低高脂饮食饲喂小鼠的肝脏重量和体重,显著抑制TG和TC在肝脏中的积累,并显著下调Pparγ表达及显著上调促进线粒体生物合成基因Pgc1α表达。组蛋白赖氨酸去甲基化酶4B(KDM4B)可能是脲基琥珀酸缓解非酒精脂肪肝的潜在靶点,其结合能为-78.2345 kJ/mol,结合相互作用能为-77.9353 kJ/mol。【结论】脲基琥珀酸通过减轻与肥胖有关的氧化应激,促进脂质的分解与代谢及改善能量代谢,还可能通过与KDM4B蛋白相互作用,而改善高脂饮食诱导的小鼠非酒精脂肪肝。 展开更多
关键词 小鼠 非酒精脂肪肝 脲基琥珀酸 氧化应激 能量代谢 kdm4b
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基于PARP-1/KDM5B/H3K4me3信号轴探讨温阳复元方含药血清对OGD/R诱导BV-2细胞损伤的保护机制
6
作者 周珂青 张鼎 +3 位作者 孙春英 秦红玲 陈炜 胡跃强 《中药材》 北大核心 2024年第11期2852-2858,共7页
目的:基于PARP-1/KDM5B/H3K4me3信号轴探讨温阳复元方含药血清对OGD/R诱导BV-2细胞损伤的保护机制。方法:通过OGD/R诱导BV-2细胞,构建氧糖剥夺体外模型。CCK-8检测最佳干预浓度和时间点,Transwell观察各组细胞迁移,Hoechst 33342染色观... 目的:基于PARP-1/KDM5B/H3K4me3信号轴探讨温阳复元方含药血清对OGD/R诱导BV-2细胞损伤的保护机制。方法:通过OGD/R诱导BV-2细胞,构建氧糖剥夺体外模型。CCK-8检测最佳干预浓度和时间点,Transwell观察各组细胞迁移,Hoechst 33342染色观察细胞凋亡,免疫荧光化学法观察PARP-1、KDM5B蛋白表达,Western Blotting检测PARP-1、KDM5B、H3K4me3蛋白表达。结果:10%温阳复元方含药血清干预12 h细胞活力最高。与空白对照组比较,模型组细胞迁移能力显著减弱,凋亡显著增多,PARP-1、KDM5B蛋白表达显著升高,H3K4me3蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,Olaparib(PAPP-1抑制剂)组、温阳复元方含药血清组细胞迁移能力显著增强,凋亡显著减少,PARP-1、KDM5B蛋白表达显著降低,H3K4me3蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:温阳复元方可抑制PARP-1/KDM5B/H3K4me3信号轴的过度激活,减轻神经细胞损伤,发挥脑保护作用。 展开更多
关键词 温阳复元方 BV-2细胞 OGD/R PARP-1/KDM5B/H3K4me3信号轴 机制研究
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循环机械牵张对骨髓间充质干细胞成纤维分化的促进作用 被引量：3
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作者 王肖帆 王莹莹 +10 位作者 王君敏 陈璐璐 徐锋 乔艳华 张志磊 任琛琛 胡孟彩 吴惠琰 王鲁文 崔世红 赵冰 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2019年第3期372-377,共6页
目的:研究循环机械牵张(CMS)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外定向分化为成纤维细胞的作用及可能机制。方法:用0%(对照)、1%、2%、4%、10%的CMS刺激BMSCs,采用Western blot法检测BMSCs中组蛋白去甲基化酶KDM4B及成纤维细胞标志蛋白赖氨酰... 目的:研究循环机械牵张(CMS)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外定向分化为成纤维细胞的作用及可能机制。方法:用0%(对照)、1%、2%、4%、10%的CMS刺激BMSCs,采用Western blot法检测BMSCs中组蛋白去甲基化酶KDM4B及成纤维细胞标志蛋白赖氨酰氧化酶(LOX)、弹性蛋白(Elastin)的表达。另取BMSCs分为5组,空白对照组、KDM4B-shRNA组及阴性对照shRNA(NC-shRNA)组、KDM4B过表达组及过表达对照组,采用Western blot检测沉默和过表达KDM4B后细胞中LOX及Elastin蛋白的表达。分别用0%和10%CMS刺激BMSCs,用染色质免疫沉淀法结合qRT-PCR技术分析细胞中Elastin和LOX启动子区域组蛋白3第9位赖氨酸的三甲基化(H3K9me3)和KDM4B的表达。结果:CMS刺激后KDM4B、LOX、Elastin蛋白的表达均高于对照组,其中10%的CMS刺激下LOX和Elastin蛋白的表达最高,诱导分化效果最好(P <0. 05)。上调KDM4B的表达可以诱导BMSCs中Elastin和LOX蛋白的表达;反之,则抑制二者的表达(P <0. 05)。CMS通过调节Elastin和LOX启动子区域中KDM4B和H3K9me3的基因水平上调LOX和Elastin的表达(P <0. 05)。结论:CMS可能通过诱导KDM4B的分泌和抑制H3K9me3的修饰水平上调Elastin和LOX的表达,从而促进BMSCs向成纤维细胞分化。 展开更多
关键词 循环机械牵张 骨髓间充质干细胞 kdm4b 弹性蛋白 赖氨酰氧化酶
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过表达H3K9me3去甲基化酶对猪克隆胚胎体外发育效率的影响 被引量：4
8
作者 吴霄 李果 +5 位作者 敖政 石俊松 蔡更元 刘德武 吴珍芳 李紫聪 《广东农业科学》 CAS 2017年第10期96-101,176,共7页
为了探索过表达组蛋白H3K9me3去甲基化酶KDM4B/KDM4D对猪克隆胚胎体外发育效率的影响,研究构建了鼠源KDM4B/KDM4D表达载体,通过体外转录获得KDM4B/KDM4D mRNA并将其分别显微注射至猪克隆胚胎。结果显示两组注射的克隆胚胎的H3K9me3水平... 为了探索过表达组蛋白H3K9me3去甲基化酶KDM4B/KDM4D对猪克隆胚胎体外发育效率的影响,研究构建了鼠源KDM4B/KDM4D表达载体,通过体外转录获得KDM4B/KDM4D mRNA并将其分别显微注射至猪克隆胚胎。结果显示两组注射的克隆胚胎的H3K9me3水平、卵裂率和囊胚率与对照克隆胚胎无显著差异,但两组注射的克隆胚胎的H3K9me3去甲基化酶表达水平显著高于无注射的对照克隆胚胎,且注射KDM4B mRNA的克隆胚胎的囊胚细胞数显著高于注射KDM4D mRNA的克隆胚胎及对照克隆胚胎,表明过表达组蛋白H3K9me3去甲基化酶KDM4B可以显著提高猪克隆胚胎的体外发育效率。 展开更多
关键词 猪 克隆胚胎 H3K9me3 kdm4b KDM4D
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