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题名hKCNE5基因克隆及其重组腺病毒表达载体的构建
被引量：1
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作者
杨奕清
刘懿
夏敏
董雄剑
林捷
陈义汉
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机构
同济大学附属同济医院医学科学研究所同济大学医学遗传研究所
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出处
《同济大学学报（医学版）》
CAS
2006年第5期1-5,共5页
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基金
国家杰出青年科学基金(30425016)
国家自然科学基金(3057076830330290)
+2 种基金
海外青年学者合作研究基金(30528011)
教育部科学技术研究重点项目(104081)
上海市优秀学科带头人计划项目(05XD14014)
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文摘
目的本研究旨在克隆人KCNE5(hKCNE5)基因,构建其重组腺病毒表达载体,以便研究hKCNE5基因过度表达对心房颤动的防治作用。方法首先利用PCR技术克隆hKCNE5基因,并将hKCNE5基因亚克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV;然后将该重组质粒线性化后电转化含有复制缺陷型腺病毒pAdEasy-1(Ad)的BJ5183-AD-1细胞,经过同源重组,获得复制缺陷型重组腺病毒hKCNE5-Ad,并经酶切鉴定、序列分析证实无误;接着将其转染超级感受态细胞XL10-Gold扩增、纯化、线性化,再感染AD-293细胞进行包装便可获得大量复制的重组腺病毒hKCNE5-Ad。结果hKCNE5基因被成功克隆后正确插入腺病毒载体Ad,其序列与GenBank公布的一致;hKCNE5-Ad可感染AD-293细胞并能在AD-293细胞内进行高效复制;收集含有hKCNE5-Ad的AD-293细胞悬液,-80℃保存备用。结论本研究成功地克隆了hKCNE5基因,构建了hKCNE5基因重组腺病毒表达载体,为进一步研究hKCNE5基因过度表达对心房颤动的防治作用奠定了基础。
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关键词
kcne5
克隆
转基因
腺病毒
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Keywords
kcne5
cloning
transgene
adenovirus
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
R541.75
[医药卫生—心血管疾病]
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