小鼠Ipr1基因与EGFP基因融合表达载体的构建及其在鼠巨噬细胞中的表达 被引量：5

1

作者 李娜 朱道银 +1 位作者 帖儒修 王瑜伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期231-233,237,共4页

目的:构建小鼠胞内病原体抗性基因1(Ipr1)基因与EGFP基因融合表达载体,观察小鼠Ipr1基因在小鼠巨噬细胞株RAW 264.7中的表达。方法:从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pEGFP-C1载体中,筛选阳性克隆... 目的:构建小鼠胞内病原体抗性基因1(Ipr1)基因与EGFP基因融合表达载体,观察小鼠Ipr1基因在小鼠巨噬细胞株RAW 264.7中的表达。方法:从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pEGFP-C1载体中,筛选阳性克隆作PCR、酶切及测序鉴定后得到pEGFP-Ipr1,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW 264.7,以空质粒pEGFP-C1转染组作为对照。采用RT-PCR法检测Ipr1的RNA水平表达及用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的表达及细胞内定位。结果:扩增出小鼠Ipr1基因编码序列,经PCR、酶切及测序鉴定证明得到正确的重组质粒pEGFP-Ipr1,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW 264.7得到了成功表达,Ipr1基因表达产物定位于细胞核内。结论:成功地调取小鼠Ipr1基因,构建了小鼠Ipr1基因与EGFP基因融合表达载体并在小鼠巨噬细胞株RAW 264.7得到了成功表达。Ipr1编码蛋白定位于细胞核内,提示其是一种调节蛋白。 展开更多

关键词 ipr1基因 结核病 绿色荧光蛋白 定位

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牛胎儿皮肤成纤维细胞的分离培养及转染Ipr1基因 被引量：2

2

作者 宋永利 何小宁 +6 位作者 华松 兰杰 郑月茂 贺小英 李吉霞 权富生 张涌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期585-592,共8页

为了为核移植提供供体细胞,本研究构建了真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1,并研究了牛胎儿皮肤成纤维细胞的体外分离培养,进行了Ipr1基因转染。克隆Ipr1基因和SR-A启动子,并构建了巨噬细胞特异性真核表达载体。用组织块贴壁法分离培养牛胎儿... 为了为核移植提供供体细胞,本研究构建了真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1,并研究了牛胎儿皮肤成纤维细胞的体外分离培养,进行了Ipr1基因转染。克隆Ipr1基因和SR-A启动子,并构建了巨噬细胞特异性真核表达载体。用组织块贴壁法分离培养牛胎儿皮肤成纤维细胞,在体外经传代、纯化后,用电穿孔法将真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1转染至经体外纯化的第4～10代牛胎儿成纤维细胞,24h后观察荧光表达,48h后加入600μg.mL-1 G418,筛选1周,300μg.mL-1持续筛选,然后挑选单克隆,继续扩大培养。对稳定转染的牛胎儿成纤维细胞进行PCR检测和核型分析。结果,转染24h后有绿色荧光蛋白表达,并经G418筛选获得稳定转染PEG-FP-SRA-Ipr1的牛胎儿成纤维细胞株,经PCR检测在大约1 500bp处有目的片段,经流式细胞仪分析转染细胞染色体倍型未发生变化,仍是二倍体。说明目的基因已经成功整合,同时保持了遗传稳定性。可以作为核移植进行转基因克隆牛研究。 展开更多

关键词 供体细胞 真核表达载体 ipr1基因 牛胎儿成纤维细胞 电穿孔 绿色荧光蛋白

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Ipr1对巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染免疫相关基因表达的影响 被引量：3

3

作者 李娜 刘鹏飞 +2 位作者 李波清 乔媛媛 张玉梅 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期715-720,共6页

目的应用基因芯片技术检测Ipr1的表达对巨噬细胞感染分枝杆菌H37Ra后参与免疫应答的相关基因的表达差异。方法实验组与对照组细胞分别感染分枝杆菌H37Ra,基因芯片检测实验组和对照组细胞感染H37Ra 96h后免疫相关基因表达差异。定量PCR... 目的应用基因芯片技术检测Ipr1的表达对巨噬细胞感染分枝杆菌H37Ra后参与免疫应答的相关基因的表达差异。方法实验组与对照组细胞分别感染分枝杆菌H37Ra,基因芯片检测实验组和对照组细胞感染H37Ra 96h后免疫相关基因表达差异。定量PCR反应检测芯片结果中上调的3个基因的表达差异用以验证芯片结果的可靠性。结果基因芯片检测结果显示Ipr1基因的表达上调了11个固有免疫机制中相关基因表达,其中与MΦ抗Mtb感染关系密切的基因有:TLR2、TLR4I、rak1、Traf6、Ifngr1、Tnfrsf1a,而参与调节适应性免疫应答的相关基因如:IL-1,IL-12无明显表达差异。结论 Ipr1增强MΦ抗Mtb感染的机制可能主要是通过上调MΦ抗感染固有免疫机制的有关基因的表达从而发挥抗菌作用。本实验为进一步研究Ipr1促进MΦ的活化及杀伤胞内吞噬的Mtb的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 ipr1 结核分枝杆菌 巨噬细胞

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小鼠巨噬细胞Ipr1基因真核表达载体的构建及表达

4

作者 李娜 朱道银 +1 位作者 何永林 张黎 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期216-219,共4页

目的构建小鼠Ipr1(intracellular pathogen resistance 1)基因真核表达载体。方法从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pMD19-Tsimple载体中,转化大肠杆菌JM109,筛选的阳性克隆作PCR及酶切鉴定后测... 目的构建小鼠Ipr1(intracellular pathogen resistance 1)基因真核表达载体。方法从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pMD19-Tsimple载体中,转化大肠杆菌JM109,筛选的阳性克隆作PCR及酶切鉴定后测序分析。其中的突变碱基经点突变修复后将Ipr1基因亚克隆于原核真核双系统表达质粒pQE-TriSystem中得到pQE-TriSystem-Ipr1,用脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞,RT-PCR鉴定Ipr1基因的表达。结果从C57BL/6J小鼠胸腺组织内扩增出大小为1338bp片段。阳性克隆测序鉴定发现一个点突变,经点突变修复后与GenBank报道的Ipr1基因序列一致。亚克隆获得重组质粒pQE-TriSystem-Ipr1,转染RAW264.7细胞经RT-PCR扩增出Ipr1基因相应大小的DNA片段。结论成功调取小鼠Ipr1基因并成功构建含Ipr1基因的真核表达载体,为进一步研究Ipr1基因的功能奠定基础。 展开更多

关键词 ipr1 结核病 真核表达载体 pQE-TriSystem

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Ipr1/PPE68穿梭质粒构建及诱导BALB/c小鼠免疫应答的探讨

5

作者 张壮苗 杨春 +5 位作者 靳志栋 何永林 徐蕾 王静娴 董志玲 李岱容 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期429-432,共4页

目的构建Ipr1/PPE68共表达穿梭质粒pBIPO(pBud-Ipr1-PPE68-OriM),探讨其诱导BALB/C小鼠的免疫应答特征。方法将Ipr1基因和PPE68编码序列以及结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的复制子OriM分别插入质粒pBudCE4.1的多克隆位... 目的构建Ipr1/PPE68共表达穿梭质粒pBIPO(pBud-Ipr1-PPE68-OriM),探讨其诱导BALB/C小鼠的免疫应答特征。方法将Ipr1基因和PPE68编码序列以及结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的复制子OriM分别插入质粒pBudCE4.1的多克隆位点,构建共表达穿梭质粒pBIPO,经酶切测序及Western blotting鉴定后,用其免疫BALB/c小鼠,于末次免疫后2w处死小鼠,ELISA法分别检测小鼠血清中lgG2a、IL-12及IFN-γ的水平,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞数量,MTT法检测特异性脾淋巴细胞增殖,同时观察肺脾组织病理学变化。结果酶切测序鉴定PPE68和Ipr1基因序列与理论值相符,Western-blotting鉴定PPE68和Ipr1蛋白表达成功。质粒pBIPO免疫后小鼠血清中的lgG2a、IFN-γ及IL-12水平与CD4+和CD8+T细胞表达均呈现出有意义的提高,脾淋巴细胞增殖与BCG组相比差异无统计学意义,肺脾组织未见病理学改变。结论成功构建DNA疫苗(pBIPO),该疫苗能够有效诱导BALB/c小鼠的细胞免疫应答,为进一步研究其抗MTB的免疫保护作用奠定基础。 展开更多

关键词 MTB ipr1 PPE68 DNA疫苗 免疫应答

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Ipr1/PPE68重组BCG诱导BALB/C小鼠免疫应答的探讨

6

作者 张壮苗 杨春 +4 位作者 徐蕾 何永林 王静娴 董志玲 杨静 《四川动物》 CSCD 北大核心 2013年第4期595-600,共6页

目的构建Ipr1/PPE68重组卡介苗(Recombinant BCG,rBCG),探讨其诱导BALB/C小鼠免疫应答的效果。方法将Ipr1和PPE68基因及结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)复制子OriM分别插入pBudCE4.1的多克隆位点,构建共表达穿梭质粒pBIPO... 目的构建Ipr1/PPE68重组卡介苗(Recombinant BCG,rBCG),探讨其诱导BALB/C小鼠免疫应答的效果。方法将Ipr1和PPE68基因及结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)复制子OriM分别插入pBudCE4.1的多克隆位点,构建共表达穿梭质粒pBIPO,将其电转入BCG,构建Ipr1/PPE68-rBCG并将rBCG免疫BALB/C小鼠,检测小鼠血清中IgG2a、IL-12、IFN-γ及IL-4的水平、特异性脾淋巴细胞增殖和CD4+和CD8+T细胞数量,同时观察脾、肺荷菌量及脾、肺组织病理学变化。结果酶切测序及菌落PCR鉴定Ipr1和PPE68以及OriM基因序列与理论值相符,Western-blotting结果显示Ipr1和PPE68蛋白成功表达。Ipr1/PPE68-rBCG免疫小鼠后,血清中的IgG2a和IL-12水平及脾淋巴细胞增殖情况明显高于对照组,但与BCG组相比没有显著意义;IFN-γ水平显著低于BCG组,与对照组相比无显著性差异;各组别IL-4的水平差异均不明显。脾、肺荷菌实验未见菌落生长,肺、脾组织未见病理学改变。结论成功构建Ipr1/PPE68-rBCG,该重组BCG能诱导BALB/C小鼠的细胞免疫应答。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 ipr1/PPE68重组BCG 免疫应答

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小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养及Ipr1基因真核表达载体的构建和表达 被引量：1

7

作者 陈元圆 马勋 +2 位作者 薄新文 王新华 黄新 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第6期21-24,229,共5页

为了获取Ipr1基因全长编码序列,构建与EGFP基因融合的表达载体,观察小鼠Ipr1基因在小鼠巨噬细胞中的表达情况及对细胞生长状态的影响,试验通过RT-PCR方法获得Ipr1基因,将获得的Iprl基因片段与pEGFP-C1载体片段连接后获得真核表达质粒pEG... 为了获取Ipr1基因全长编码序列,构建与EGFP基因融合的表达载体,观察小鼠Ipr1基因在小鼠巨噬细胞中的表达情况及对细胞生长状态的影响,试验通过RT-PCR方法获得Ipr1基因,将获得的Iprl基因片段与pEGFP-C1载体片段连接后获得真核表达质粒pEGFP-Ipr1,经PCR、酶切鉴定正确后,脂质体瞬时转染pEGFP-Ipr1至第5代的小鼠腹腔巨噬细胞内,以空质粒pEGFP-C1转染组作为对照,采用Western-blot检测Ipr1基因的表达并用荧光显微镜观察融合蛋白的表达情况。结果表明:研究构建了真核表达载体pEGFP-Ipr1并进行了Ipr1基因转染,通过Western-blot检测在大约50 ku处有目的条带,转染24 h后有绿色荧光蛋白表达,并经G418筛选获得稳定转染Ipr1基因的小鼠腹腔巨噬细胞株。说明试验获得了易于转染的小鼠腹腔巨噬细胞株,成功转染了Ipr1基因并得以表达。 展开更多

关键词 ipr1基因 结核病 转染 巨噬细胞 真核表达载体

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PPE68/Ipr1真核共表达质粒的构建及鉴定 被引量：3

8

作者 靳志栋 张丹 +4 位作者 何永林 徐蕾 佘茜 张壮苗 杨春 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期410-413,共4页

目的构建结核分枝杆菌PPE68基因和小鼠胞内病原体抗性基因1(Intracellular pathogen resistance 1,Ipr1)的真核共表达质粒,并在小鼠巨噬细胞RAW264.7中表达。方法将结核分枝杆菌PPE68基因和小鼠Ipr1基因分别亚克隆至含多启动子的共表达... 目的构建结核分枝杆菌PPE68基因和小鼠胞内病原体抗性基因1(Intracellular pathogen resistance 1,Ipr1)的真核共表达质粒,并在小鼠巨噬细胞RAW264.7中表达。方法将结核分枝杆菌PPE68基因和小鼠Ipr1基因分别亚克隆至含多启动子的共表达载体pBudCE4.1中,构建真核共表达质粒pBud68-Ipr1,转染RAW264.7细胞,通过RT-PCR及Western blot法检测PPE68和Ipr1基因的转录和表达。结果重组表达质粒pBud68-Ipr1经PCR、双酶切及测序证实,插入的PPE68和Ipr1基因片段序列正确;质粒转染RAW264.7细胞后,PPE68和Ipr1基因进行了转录和表达,基因编码产物相对分子质量分别为37 000和50 000。结论已成功构建了真核共表达质粒pBud68-Ipr1,并在RAW264.7细胞中获得表达,为PPE68/Ipr1重组BCG的构建及其免疫保护作用的进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 结核病 PPE68 胞内病原体抗性基因1 巨噬细胞

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拟南芥低磷诱导根构型重塑不敏感突变体ipr1的筛选和初步分析

9

作者 隋立乾 刘栋 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1383-1391,共9页

植物在缺磷条件下,会做出一系列的应答反应以维持自身磷稳态,其中一个重要的应答反应是根构型的重塑。本文报道一个对低磷胁迫诱导的根构型重塑表现为不敏感的拟南芥突变体ipr1。对ipr1的生长和生理表型的分析表明,IPR1只参与了局部的... 植物在缺磷条件下,会做出一系列的应答反应以维持自身磷稳态,其中一个重要的应答反应是根构型的重塑。本文报道一个对低磷胁迫诱导的根构型重塑表现为不敏感的拟南芥突变体ipr1。对ipr1的生长和生理表型的分析表明,IPR1只参与了局部的低磷信号对植物生长发育的调控。als3是一个对低磷胁迫诱导根构型重塑超敏的突变体,其突变表型是由于其根部表面超积累Fe^(3+)引起的。与之相反,ipr1根表面较野生型积累较少的Fe^(3+)。遗传分析表明,IPR1作用于ALS3下游,通过调控根表面积累的Fe^(3+)水平来影响植物对低磷胁迫的敏感性。ipr1突变体为进一步解析低磷胁迫诱导根构型重塑的分子机制提供了理想的实验材料。 展开更多

关键词 低磷胁迫 根构型重塑 ipr1 Fe^3+积累

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Ipr1重组卡介苗对小鼠结核病的治疗效果 被引量：1

10

作者 候艳 陈全 +3 位作者 王瑜伟 严莎 吕玉春 郭荫广 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第22期2262-2265,共4页

目的评估携带小鼠胞内病原体抗性基因1(intracellular pathogen resistance1,Ipr1)质粒(pBOGI)的重组卡介苗(BCG)对结核分枝杆菌(Mtb)感染的治疗效果。方法BALB/c小鼠30只,随机分为3组:分别滴鼻给予磷酸盐缓冲液(PBS)、BCG和重组BCG,2... 目的评估携带小鼠胞内病原体抗性基因1(intracellular pathogen resistance1,Ipr1)质粒(pBOGI)的重组卡介苗(BCG)对结核分枝杆菌(Mtb)感染的治疗效果。方法BALB/c小鼠30只,随机分为3组:分别滴鼻给予磷酸盐缓冲液(PBS)、BCG和重组BCG,2周后用人型Mtb H37Rv标准株感染所有小鼠;感染后分别用PBS、BCG和重组BCG治疗7次;末次治疗后处死小鼠,检测肺脾荷菌量,肺脾脏器指数,血清IFN-γ、IL-10及TNF-α分泌水平和肺脾组织中Ipr1的表达,同时观察小鼠肺脾组织病理改变情况。结果重组BCG组肺脾荷菌量比PBS组和BCG组显著降低(P<0.01);重组BCG组肺脾脏器指数比PBS组和BCG组显著降低(P<0.05);重组BCG组血清IFN-γ分泌水平比PBS组和BCG组显著升高(P<0.01)。用免疫组化检测到小鼠肺脾组织中有Ipr1表达。PBS组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛;重组BCG组肺部病变最轻,肺泡结构基本正常;BCG组病变范围局限,病变程度界于PBS组与重组BCG组之间;各组间比较脾脏病理改变不明显。结论携带小鼠Ipr1基因的重组BCG对结核分枝杆菌感染有一定的治疗作用。 展开更多

关键词 细胞内病原体抗性基因1 结核分枝杆菌 卡介苗

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抗结核病基因及相关因子的研究进展

11

作者 陈元圆 马勋 +2 位作者 薄新文 黄新 贾文俊 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期28-30,共3页

结核病以其高传染性和高死亡率受到世界各国的普遍关注。尽管,结核病的治疗还是以药物为主,但抗结核病基因Ipr1、SP110以及相关因子的发现,将结核病的治疗与研究推上了一个新的台阶。文章就抗结核基因和相关因子的研究概况以及今后的发... 结核病以其高传染性和高死亡率受到世界各国的普遍关注。尽管,结核病的治疗还是以药物为主,但抗结核病基因Ipr1、SP110以及相关因子的发现,将结核病的治疗与研究推上了一个新的台阶。文章就抗结核基因和相关因子的研究概况以及今后的发展趋势进行综述,旨在为有效控制结核病的发生、发展提供帮助。 展开更多

关键词 抗结核基因 相关因子 天然抗性巨噬细胞蛋白(NRAMP) ipr1 Sp110

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维甲酸核受体RARα真核表达载体的构建、突变纠正及表达

12

作者 候艳 陈全 王瑜伟 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2009年第10期898-901,共4页

目的构建维甲酸核受体RARα真核表达载体,并检测其在人肺腺癌细胞A549中表达。方法从小鼠巨噬细胞RAW264.7中提取总RNA,以RT-PCR法扩增RARαcDNA,克隆至真核表达载体pDsRed1-C1中,测序结果显示RARα第1040位A→G,导致其编码蛋白的氨基... 目的构建维甲酸核受体RARα真核表达载体,并检测其在人肺腺癌细胞A549中表达。方法从小鼠巨噬细胞RAW264.7中提取总RNA,以RT-PCR法扩增RARαcDNA,克隆至真核表达载体pDsRed1-C1中,测序结果显示RARα第1040位A→G,导致其编码蛋白的氨基酸发生改变。通过二次PCR将其纠正,重组载体RedC1-RARα转化大肠埃希菌Top10,筛选阳性克隆做酶切及测序鉴定。脂质体瞬时转染A549细胞,在荧光显微镜下观察RARα的表达。RT-PCR法检测RARα的mRNA水平表达。结果通过RT-PCR及二次PCR得到RARαcDNA,构建其真核表达载体,脂质体瞬时转染A549细胞得到了成功表达,RARα基因产物定位于细胞核内。结论成功构建维甲酸核受体RARα真核表达载体,且证实RARα编码蛋白定位于细胞核内,本研究结果为进一步探讨结核分枝杆菌固有免疫机制奠定了基础。 展开更多

关键词 维甲酸核受体 细胞内病原体抗性基因1 二次PCR 突变纠正 转染

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