禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量：1

1

作者 苏晓月 吕转平 +2 位作者 沈亚安 赵明明 唐思静 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第1期64-69,共6页

为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间... 为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测NDV、IBDV、IBV、AIV-H9、ILTV阳性血清均为阴性,最低抗体检出效价为1︰12800,与进口试剂盒的符合率为94.87%,检测临床血清样品的阳性率为14.02%。结果说明该研究建立的间接ELISA方法特异性强、敏感性高、符合性好,可为ALV的检测和净化等提供一种简单快速的方法。 展开更多

关键词 禽白血病病毒 间接elisa方法 抗体检测 净化

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新城疫病毒HN蛋白的截短表达及间接ELISA方法建立

2

作者 魏玲 王思怡 +4 位作者 熊荣园 梁洪 王怀禹 李彩虹 杨国淋 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第3期91-95,共5页

为了建立一种快速的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)抗体检测方法,试验采用原核表达技术表达HN蛋白,以HN蛋白为检测抗原建立酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。结果表明,获得了以包涵体形式表... 为了建立一种快速的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)抗体检测方法,试验采用原核表达技术表达HN蛋白,以HN蛋白为检测抗原建立酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。结果表明,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白,间接ELISA方法检测6种其它鸡病阳性血清均为阴性,其最低抗体检出效价为1∶10240,其与血凝抑制试验(Hemagglutination inhibition,HI)方法的阳性和阴性符合率分别为98.08%和92.31%,检测临床样品阳性率为91.48%。说明建立的间接ELISA方法可用于NDV免疫抗体检测和疫苗免疫效果评价。 展开更多

关键词 新城疫病毒 HN蛋白 截短表达 间接elisa 抗体检测

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鸭疫里默氏杆菌间接ELISA检测方法的建立与应用

3

作者 王梦迪 钟宁远 +4 位作者 冷楠楠 蒋蔚 余祖功 阿曼古丽·斯拉依 韩先干 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第12期1626-1634,共9页

为建立一种快速准确检测鸭疫里默氏杆菌(RA)抗体且便于基层推广应用的间接ELISA方法,通过方阵滴定法优化ELISA抗原包被条件、抗原稀释浓度、血清稀释浓度以及二抗孵育时间、二抗稀释度等,综合评估该检测方法的敏感性、特异性等。结果显... 为建立一种快速准确检测鸭疫里默氏杆菌(RA)抗体且便于基层推广应用的间接ELISA方法,通过方阵滴定法优化ELISA抗原包被条件、抗原稀释浓度、血清稀释浓度以及二抗孵育时间、二抗稀释度等,综合评估该检测方法的敏感性、特异性等。结果显示,建立的间接ELISA检测方法抗原最佳包被浓度为10^(9)CFU/mL、抗原的最佳包被条件为37℃包被2h,一抗的血清最佳稀释度为1:1600,封闭液以50g/L脱脂乳为最佳,最佳封闭条件为37℃1h,一抗最佳孵育条件为37℃2h,酶标二抗最佳反应条件为37℃2h、酶标二抗的最佳稀释度为1:5000,最佳显色时间为20min。以RA-CQ3(血清1型)为靶标抗原包被时,待检阳性血清稀释度达到1:12800时和以RA-NJ2(血清2型)为靶标抗原包被时,待检阳性血清稀释度达到1:25600时仍可用临界值判定,表明该方法具有良好的敏感性。特异性试验结果显示,RA抗原不与O1型禽致病性大肠杆菌、鸭病毒性肠炎病毒、呼肠孤病毒DRV-TH11、呼肠孤病毒DRV-Gu8、4型禽腺病毒、鸭甲肝病毒3型阳性血清发生反应,表明建立的ELISA方法特异性较好。结果表明,成功建立了一种快速、敏感的检测鸭疫里默氏杆菌抗体的方法,可为鸭疫里默氏杆菌病的流行病学调查和临床RA抗体检测提供技术支持。 展开更多

关键词 鸭疫里默氏杆菌 间接elisa 优化 方法建立

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基于IgY的ELISA法检测淋病奈瑟氏菌的效果及抗体敏感度影响分析

4

作者 肖昕 张曼珂 +3 位作者 夏乐欢 罗艳 李勤 李红姣 《中国卫生标准管理》 2025年第8期172-176,共5页

目的 探讨高效价、高纯度、生物活性好的抗淋病奈瑟氏菌的特异性鸡卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin of yolk,IgY)应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测淋病奈瑟氏菌的效果。方法 采用超声破碎、研磨破碎、... 目的 探讨高效价、高纯度、生物活性好的抗淋病奈瑟氏菌的特异性鸡卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin of yolk,IgY)应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测淋病奈瑟氏菌的效果。方法 采用超声破碎、研磨破碎、共振裂解等方法裂解淋病奈瑟氏菌,筛选出最佳裂解抗原,然后将经甲醛灭活的全菌抗原或裂解抗原与佐剂充分乳化免疫产蛋母鸡;采用酶联免疫吸附试验检测水稀释后的IgY抗体效价变化;通过硫酸铵盐析,超滤法纯化抗体,并用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝电泳法和二喹啉甲酸法测定抗体纯度和浓度,ELISA法评价IgY检测效果。结果 超声破碎法裂解的淋病奈瑟氏菌抗原浓度最高且蛋白条带最为完整;0.5 mL的1×10^(9) CFU/mL灭活菌初次免疫4周后再次免疫的方案产生的抗体效价最高,可达1∶25 600。硫酸铵沉淀超滤纯化后的抗体纯度可达94%,浓度为27.02 mg/mL;建立的间接ELISA法制检测淋病奈瑟氏菌具有较高的特异性和敏感度。结论 基于IgY的ELISA法检测淋病奈瑟氏菌效果显著,可以提高制备抗体的敏感度。 展开更多

关键词 淋病奈瑟氏菌 鸡卵黄抗体 免疫球蛋白 间接elisa法 效能 价值

暂未订购

猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法的建立

5

作者 颜士琦 李复坤 +5 位作者 齐冬梅 赖月辉 黄福强 冯钰鑫 周晓敏 樊全宝 《广东畜牧兽医科技》 2025年第5期66-72,120,共8页

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的猪的一种高度传染性和致死性的病毒性疾病,疫苗接种是预防CSF的有效手段,抗体水平是评价免疫猪群免疫效果的重要指标。该研究通过原核表达系统成... 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的猪的一种高度传染性和致死性的病毒性疾病,疫苗接种是预防CSF的有效手段,抗体水平是评价免疫猪群免疫效果的重要指标。该研究通过原核表达系统成功表达了CSFV重组蛋白E2Y,将纯化的E2Y蛋白作为包被抗原,优化条件并建立了CSFV间接ELISA抗体检测方法。试验结果表明,蛋白包被浓度为0.25μg/mL,与常见猪病毒的阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性、灵敏性、可重复性,与商品化试剂盒一致性为91.67%。该研究成功建立了CSFV间接ELISA抗体检测方法,为进一步优化和研制CSFV抗体检测试剂盒提供了技术参考。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 抗体检测 间接elisa方法

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基于山羊痘病毒P32蛋白ELISA检测方法的建立 被引量：8

6

作者 吴锦艳 田宏 +3 位作者 陈妍 尚佑军 宋江伟 刘湘涛 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1906-1911,共6页

P32蛋白是羊痘病毒株中特异性很强的免疫原性结构蛋白,本研究利用原核表达系统对山羊痘病毒P32基因进行表达,并应用该蛋白建立了检测山羊痘病毒血清抗体检测方法。将P32基因克隆至pGEX-6P-1表达载体,经抗性筛选,测序鉴定获得重组阳性克... P32蛋白是羊痘病毒株中特异性很强的免疫原性结构蛋白,本研究利用原核表达系统对山羊痘病毒P32基因进行表达,并应用该蛋白建立了检测山羊痘病毒血清抗体检测方法。将P32基因克隆至pGEX-6P-1表达载体,经抗性筛选,测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了羊痘病毒重组pGEX-P32表达载体。经IPTG诱导表达,可稳定、高效地表达P32融合蛋白。融合蛋白纯化后SDS-PAGE结果表明,以终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导,8h后表达量最高,表达蛋白为融合蛋白,相对分子质量约56 000,表达产量约占菌体总蛋白的28%。Western-blotting检测表明,表达的融合蛋白能与羊痘阳性血清发生特异性反应,说明表达获得的产物具有良好的反应原性。用表达的融合蛋白建立了检测羊痘血清抗体的ELISA方法,经方阵滴定,确定抗原最佳包被质量浓度为每孔0.4mg/L,最佳血清稀释度为1∶20。符合率试验表明ELISA方法和琼脂扩散试验的阳性符合率为83.44%,并且所建立的方法具有很好的特异性、重复性和敏感性,这为应用该融合蛋白制备山羊痘病毒免疫血清学诊断试剂和疫苗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 山羊痘病毒 P32基因 表达 间接elisa方法

原文传递

坦布苏病毒NS1蛋白的表达及ELISA检测方法的建立 被引量：7

7

作者 提金凤 李志杰 +3 位作者 李秀丽 张敏敏 张媛媛 刁有祥 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期970-977,共8页

为了建立坦布苏病毒(TMUV)感染鸭群的抗体检测方法,以TMUV NS1的原核表达蛋白质作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,并对该方法进行了检测条件的优化。将TMUV NS1全基因序列克隆至pET-28a(+),利用BL21(DE3)表达NS1蛋白,纯化后其质量浓度... 为了建立坦布苏病毒(TMUV)感染鸭群的抗体检测方法,以TMUV NS1的原核表达蛋白质作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,并对该方法进行了检测条件的优化。将TMUV NS1全基因序列克隆至pET-28a(+),利用BL21(DE3)表达NS1蛋白,纯化后其质量浓度为4.16μg·μL^(-1)。通过方阵试验,确定了NS1蛋白的最佳包被质量浓度是100ng·孔-1,检测血清的最佳稀释倍数为40倍。随后对检测条件进行了优化,优化后的结果:抗原的最佳包被条件是4℃作用过夜;酶标二抗的最佳工作条件是稀释5 000倍,37℃作用1h;阴阳血清的临界值为0.278。一系列试验验证了该检测方法具有很强的特异性、敏感性、重复性。对采集自山东各地的80份血清样品进行检测,其检测结果显示,该方法与经典的鸡胚中和试验检测结果的符合率为93.5%以上,且比传统的中和试验更敏感。对TMUV感染鸭群的血清进行检测,描述了TMUV感染后鸭群抗体水平的消长规律,为该病的防治提供重要的理论依据。以NS1蛋白为包被抗原的间接ELISA方法的建立为临床上TMUV的感染提供了一种新的抗体检测方法,尤其是在TMUV早期感染的检测方面有着更为广泛的应用前景。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 NS1蛋白 间接elisa 检测方法

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鱼肠道弧菌间接ELISA快速检测法的建立 被引量：7

8

作者 吴晓春 邓灯 +2 位作者 程顺峰 刘慧 姜令绪 《水产科学》 CAS 北大核心 2013年第5期284-288,共5页

为准确、快速诊断鱼肠道弧菌感染所致的海水鱼类全身性败血症,以鱼肠道弧菌为抗原,制备抗鱼肠道弧菌多克隆抗体,建立了鱼肠道弧菌间接酶联免疫吸附检测方法。该方法最佳反应条件为:抗原包被密度为107 cfu/mL,免疫血清稀释度为1∶211。... 为准确、快速诊断鱼肠道弧菌感染所致的海水鱼类全身性败血症,以鱼肠道弧菌为抗原,制备抗鱼肠道弧菌多克隆抗体,建立了鱼肠道弧菌间接酶联免疫吸附检测方法。该方法最佳反应条件为:抗原包被密度为107 cfu/mL,免疫血清稀释度为1∶211。病原菌检测灵敏度为每孔105 cfu/mL。抗血清与迟缓爱德华氏菌、杀鲑气单胞菌、恶臭假单胞菌、鱼肠道弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻胶弧菌、秦皇岛弧菌8种水产致病菌的交叉反应结果呈阴性。用该法检测人工感染后的牙鲆和健康牙鲆,在发病鱼的肝脏、肾脏、脾脏、腹水等处检测出病原菌而健康鱼则为阴性。该技术能够准确、快速检测出鱼肠道弧菌。 展开更多

关键词 鱼肠道弧菌 间接elisa技术 检测方法

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间接竞争ELISA检测大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白 被引量：9

9

作者 彭楠 刘建峰 +1 位作者 梁运祥 葛向阳 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期661-664,共4页

采用酸沉淀、亲和层析(ConA-Sepharose 4B)等手段,成功地分离纯化了大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白,SDS-PAGE检测表明2种蛋白纯度分别达到95%和90%。将纯化的11S球蛋白和7S伴球蛋白分别免疫大白兔获得抗血清,并建立起间接竞争ELISA检测大豆... 采用酸沉淀、亲和层析(ConA-Sepharose 4B)等手段,成功地分离纯化了大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白,SDS-PAGE检测表明2种蛋白纯度分别达到95%和90%。将纯化的11S球蛋白和7S伴球蛋白分别免疫大白兔获得抗血清,并建立起间接竞争ELISA检测大豆豆粕及其深加工产品中11S和7S抗原蛋白含量的方法。 展开更多

关键词 11S球蛋白 7S伴球蛋白 亲和层析 间接竞争elisa法

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胸腺素α1间接ELISA测定方法的建立及其在转基因蓝藻中的应用 被引量：2

10

作者 朱笃 陈天圣 +3 位作者 李元广 叶勤 章军 周克夫 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1-4,共4页

利用胸腺素α1(Tα1)_小牛血清白蛋白融合蛋白免疫新西兰兔获得的抗体 ,建立了Tα1间接酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,以定量检测转Tα1基因聚球藻7942外源基因表达产物胸腺素α1 ,实验结果表明该方法灵敏度高、专一性强、重复性好 ,可... 利用胸腺素α1(Tα1)_小牛血清白蛋白融合蛋白免疫新西兰兔获得的抗体 ,建立了Tα1间接酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,以定量检测转Tα1基因聚球藻7942外源基因表达产物胸腺素α1 ,实验结果表明该方法灵敏度高、专一性强、重复性好 ,可用于转基因微藻Tα1表达量的定量检测 ,同时表明Tα1基因能在聚球藻7942中稳定表达。 展开更多

关键词 胸腺素Α1 间接elisa 测定方法 转基因蓝藻 应用 酶联免疫测定法 聚球藻7942

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重组小反刍兽疫病毒H蛋白的真核表达与间接ELISA检测方法的建立 被引量：3

11

作者 曹丽萍 卢旺银 +6 位作者 李晓霞 王瑞红 王睿男 史琳 王亚丽 宋晓晖 孙雨 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1080-1086,共7页

本研究利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了小反刍兽疫病毒(PPRV)重组H蛋白,并以该H蛋白为包被抗原建立了检测PPRV抗体的间接ELISA方法。通过检测已知背景的绵羊血清,评价了间接ELISA的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该ELISA对其他... 本研究利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了小反刍兽疫病毒(PPRV)重组H蛋白,并以该H蛋白为包被抗原建立了检测PPRV抗体的间接ELISA方法。通过检测已知背景的绵羊血清,评价了间接ELISA的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该ELISA对其他相关的羊类病原无交叉反应,组内与组间变异系数均低于10%。利用建立的I-ELISA法和血清中和试验分别对550份绵羊临床样本进行检测,结果显示,Ⅰ-ELISA法检测的阳性率为76.55%,血清中和试验检测的阳性率为76.73%,敏感性符合率为98.58%;Ⅰ-ELISA法检测的阴性率为23.45%,血清中和试验检测的阴性率为23.27%,特异性符合率为96.09%,两种方法的总符合率为98%。上述结果表明,本研究建立的检测小反刍兽疫病毒血清中和抗体的间接ELISA方法与血清中和试验比较,具有良好的特异性、敏感性和重复性,可开发为临床适应的检测试剂盒。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 H蛋白 杆状病毒 真核表达 蛋白纯化 间接elisa

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甘蔗宿根矮化病的I-ELISA快速检测 被引量：10

12

作者 李文凤 黄应昆 +5 位作者 卢文洁 杨显华 李俊 赵俊 杨洪昌 罗志明 《中国糖料》 2008年第1期33-34,共2页

利用从澳大利亚引进的RSD标准抗原抗体,研究建立了I-ELISA检测甘蔗宿根矮化病(RSD)的方法。通过对田间采集的样本进行检测,同时以电镜负染检测法印证,检测结果一致,表明I-ELISA能简便、快速、准确、有效地检测出RSD,为甘蔗宿根矮化病的... 利用从澳大利亚引进的RSD标准抗原抗体,研究建立了I-ELISA检测甘蔗宿根矮化病(RSD)的方法。通过对田间采集的样本进行检测,同时以电镜负染检测法印证,检测结果一致,表明I-ELISA能简便、快速、准确、有效地检测出RSD,为甘蔗宿根矮化病的诊断和防治、脱毒种苗的生产、对外甘蔗品种/材料交换检疫检测提供了技术支撑。 展开更多

关键词 甘蔗宿根矮化病 I-elisa 检测

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检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立 被引量：16

13

作者 刘茂军 靳岷 +2 位作者 杜改梅 邵国青 张映 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2007年第5期437-441,共5页

选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法。结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间... 选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法。结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间为90 min,酶标抗体1∶10 000(体积比)稀释,最佳作用时间为60 min。对136份样品检测结果表明,建立的猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法与美国IDEXX公司生产的猪肺炎支原体抗体检测试剂盒检测的符合率达到83.8%,假阴性率8.8%,假阳性率1.5%。 展开更多

关键词 猪肺炎支原体 检测方法 间接elisa

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7脂多糖抗原的提取鉴定及间接ELISA法的建立 被引量：9

14

作者 刘红亮 陈学忠 +6 位作者 李克生 杜惠芬 陈应泰 连晓雯 鲁学萍 袁明 叶文华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期637-640,644,共5页

目的提取并纯化具有强免疫反应性和高特异性的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(E.coliO157∶H7)脂多糖(LPS)抗原,并研究其在E.coliO157∶H7 LPS抗体检测中的应用。方法应用热酚水法提取E.coliO157∶H7 LPS抗原,同时收集水相和酚相LPS,并对其... 目的提取并纯化具有强免疫反应性和高特异性的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(E.coliO157∶H7)脂多糖(LPS)抗原,并研究其在E.coliO157∶H7 LPS抗体检测中的应用。方法应用热酚水法提取E.coliO157∶H7 LPS抗原,同时收集水相和酚相LPS,并对其产率、纯度及免疫反应性进行分析比较,用酸解法制备O-特异性多糖(O-SP),并以不同的LPS为包被抗原,建立间接ELISA法检测E.coliO157∶H7 LPS抗体。结果大分子量的E.coliO157∶H7 LPS优先溶于酚相,而水相中含有更多的小分子量LPS,与水相LPS相比酚相LPS具有更高的免疫反应性和纯度,酚相LPS经酸解去脂得到的O-SP具有更高的反应特异性。结论酚相LPS和O-SP都可用于E.coliO157∶H7 LPS抗体的ELISA检测,O-SP具有更高的特异性,是检测E.coliO157∶H7 LPS特异性抗体的理想材料。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157∶H7 热酚水法 脂多糖 O-SP 间接elisa

暂未订购

环丙沙星完全抗原的制备和间接竞争ELISA检测方法的初步研究

15

作者 赵银丽 刘庆堂 +2 位作者 藤蔓 柴书军 张改平 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第2期11-13,共3页

为了研究检测环丙沙星（CIP）残留的间接竞争ELISA方法，试验采用1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺盐酸盐（EDC）一步法将环丙沙星分别与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）偶联制备免疫原（CIP—BSA）和包被原（CIP—OV... 为了研究检测环丙沙星（CIP）残留的间接竞争ELISA方法，试验采用1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺盐酸盐（EDC）一步法将环丙沙星分别与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）偶联制备免疫原（CIP—BSA）和包被原（CIP—OVA），用免疫原免疫Balb／c小鼠制备血清多克隆抗体（CIPpAb），并对其血清抗体效价、灵敏度、半数抑制浓度（IC50）、特异性等进行测定。结果表明：血清抗体的效价为1：25600，间接竞争ELISA的线性检测范围为O．54～500ng／mL，灵敏度为0．54ng／mL，IC50为8．13ng／mL，与恩诺沙星的交叉反应率（CR）为100％，与达氟沙星的交叉反应率为50％，与其他化合物的交叉反应率均小于0．8％。说明这种研究方法可以同时检测食品中的环丙沙星和恩诺沙星残留。 展开更多

关键词 环丙沙星 完全抗原 间接竞争elisa 检测方法

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不同包被抗原检测PRRS抗体间接ELISA方法的建立 被引量：7

16

作者 马思续 崔春晓 +6 位作者 张留君 冯延 魏凤灵 许瑞勤 杨国宇 夏平安 张改平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1082-1087,共6页

为了建立更加敏感、特异、准确、有效地检测抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体的间接ELISA方法，本研究利用RT—PCR方法分别扩增出PRRSVVR2332毒株的GP4和N蛋白完整编码基因，将2种基因片段分别和共同插入原核表达载体pET-32a中，... 为了建立更加敏感、特异、准确、有效地检测抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体的间接ELISA方法，本研究利用RT—PCR方法分别扩增出PRRSVVR2332毒株的GP4和N蛋白完整编码基因，将2种基因片段分别和共同插入原核表达载体pET-32a中，成功构建重组质粒pET32a—GP4、pET-32a-N和pET-32a—GP4-N。将3种重组质粒分别转化至大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达出GP4蛋白、N蛋白和GP4N融合蛋白，并对表达出的蛋白进行纯化。将3种已纯化的重组蛋白分别作为间接ELISA的包被抗原，通过不断优化反应条件，最终建立了检测抗PRRSV抗体的间接ELISA方法。分别使用该3种方法检测从河南省多个地区收集的200份猪血清样品中的抗PRRSV抗体，并与商品化试剂盒进行比较，结果显示，GP4蛋白做抗原时检测阳性符合率为82．7％，N蛋白做抗原时检测阳性符合率为87．2％，GP4-N融合蛋白做抗原时检测阳性符合率为85．5％；因此，N蛋白是间接ELISA方法检测抗PRRSV抗体的优势包被抗原。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP4蛋白 N蛋白 原核表达 间接elisa方法

原文传递

A型塞内卡病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用 被引量：2

17

作者 柴茂 马震原 +8 位作者 王淑娟 赵雪丽 刘影 王东方 杨海波 谢彩华 王翠 王华俊 闫若潜 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第2期133-139,共7页

为建立基于VP2蛋白、VP3蛋白检测猪塞内卡病毒A(SVA)抗体血清学方法。本研究扩增SVA VP2基因和VP3基因(VP23基因),基因全长1569 bp,并与原核表达载体pGEX-6p-1构建重组载体,IPTG诱导表达可溶性rVP23蛋白,经蛋白酶切除标签蛋白得到sVP23... 为建立基于VP2蛋白、VP3蛋白检测猪塞内卡病毒A(SVA)抗体血清学方法。本研究扩增SVA VP2基因和VP3基因(VP23基因),基因全长1569 bp,并与原核表达载体pGEX-6p-1构建重组载体,IPTG诱导表达可溶性rVP23蛋白,经蛋白酶切除标签蛋白得到sVP23蛋白,分子量约为58 kDa。通过矩阵优化、确定临界值、敏感性分析、特异性鉴定,建立了SVA抗体间接ELISA方法。该方法的S/P临界值标准为0.35,批内批间变异系数均小于7%,与中和试验结果符合率为95.49%。上述结果表明,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于塞内卡病毒血清抗体检测和流行病学调查。 展开更多

关键词 塞内卡病毒 VP23基因 间接elisa方法 血清学

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ASFV多表位融合基因MeP72基因的克隆、表达及其间接ELISA检测方法建立 被引量：7

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作者 郭晶 孟庆玲 +5 位作者 乔军 李重阳 伍晔晖 王立霞 马帅 才学鹏 《生物技术》 CAS 2018年第6期548-553,共6页

[目的]建立以重组多表位融合蛋白reMeP72为包被抗原的ASFV间接ELISA检测方法。[方法]预测分析ASFV结构蛋白P72的优势抗原表位,串连优势抗原表位并优化稀有密码子以合成多表位融合抗原基因MeP72。在毕赤酵母表达系统中诱导表达,分析重组... [目的]建立以重组多表位融合蛋白reMeP72为包被抗原的ASFV间接ELISA检测方法。[方法]预测分析ASFV结构蛋白P72的优势抗原表位,串连优势抗原表位并优化稀有密码子以合成多表位融合抗原基因MeP72。在毕赤酵母表达系统中诱导表达,分析重组融合蛋白的反应原性。用reMeP72做包被抗原,建立ASFV的ELISA间接检测方法。[结果]成功构建了402bp的MeP72基因片段。SDS-PAGE和WesternBlotting分析该蛋白在14kDa有条带,证明其反应原性良好。经ELISA反应条件优化,建立的ELISA方法与猪的其他病原的阳性血清不发生交叉反应,且可检测到稀释倍数为1∶512ASFV阳性血清,证明其特异性和敏感性良好。[结论]建立了抗原包被浓度为15μg/mL,一抗、二抗稀释倍数分别为1∶200、1∶5000倍的特异性和敏感性良好的reMeP72-ELISA检测方法。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 MeP72 毕赤酵母表达 间接elisa检测方法

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新型鸭细小病毒重组VP2蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立 被引量：3

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作者 刘铭 袁万哲 刘聚祥 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期85-91,共7页

为了建立新型鸭细小病毒(novel duck Parvovirus, NDPV)感染鸭群的抗体检测方法,试验采用PCR方法扩增新型鸭细小病毒的VP2基因,将其克隆至pET-32a(+)载体中,获得重组质粒pET-32a(+)-VP2;将该重组质粒转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中,经... 为了建立新型鸭细小病毒(novel duck Parvovirus, NDPV)感染鸭群的抗体检测方法,试验采用PCR方法扩增新型鸭细小病毒的VP2基因,将其克隆至pET-32a(+)载体中,获得重组质粒pET-32a(+)-VP2;将该重组质粒转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中,经优化诱导表达后通过SDS-PAGE电泳分析表达产物,并对表达的蛋白质进行纯化、复性;再利用阳性血清对表达的蛋白质进行Western-blot鉴定;以纯化的重组蛋白作为抗原包被ELISA酶标板,通过优化抗原包被量、一抗稀释度、抗原封闭条件、一抗和二抗的孵育条件等最终建立间接ELISA方法,并对该方法进行评定。结果表明:成功构建出NDPV重组VP2蛋白,在37℃、1.0 mmol/L IPTG条件下诱导5 h的表达量最大,蛋白质的分子质量约为49 ku,主要以不溶性的包涵体形式存在。纯化、复性后的重组VP2蛋白浓度为2.378 mg/mL,纯度为97%。Western-blot鉴定得到的条带单一,大小为49 ku。间接ELISA检测方法的最佳抗原包被量为200 ng/孔,一抗稀释度为1∶200;其他检测条件最优结果为4℃包被过夜,37℃封闭2 h,一抗37℃孵育1 h,二抗稀释10 000倍,二抗37℃孵育1 h。间接ELISA检测方法的检测临界值为0.445,该方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,对临床样品的阳性检出率为93.3%。说明以重组VP2蛋白为包被抗原建立的间接ELISA检测方法效果良好,为临床NDPV的感染提供了一种新的检测方法。 展开更多

关键词 新型鸭细小病毒 原核表达 重组VP2蛋白 WESTERN-BLOT 间接elisa方法

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猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立 被引量：1

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作者 沙娜瓦尔.塔希 王传锋 +4 位作者 买买提艾力.斯迪克 张伟 茹鲜古丽.木明 吴星星 冉多良 《新疆农业大学学报》 CAS 北大核心 2011年第1期53-58,共6页

在最佳条件下,通过对重组质粒pGEX-6P-N进行诱导表达,并利用Glutathione Sepharose 4B亲和吸附柱对表达产物(重组N蛋白)进行纯化。用重组N蛋白作为包被抗原,通过对相关条件进行优化(如抗原包被量,血清稀释度,酶标二抗最佳工作浓度,底物... 在最佳条件下,通过对重组质粒pGEX-6P-N进行诱导表达,并利用Glutathione Sepharose 4B亲和吸附柱对表达产物(重组N蛋白)进行纯化。用重组N蛋白作为包被抗原,通过对相关条件进行优化(如抗原包被量,血清稀释度,酶标二抗最佳工作浓度,底物作用时间等),确定判定标准,最终初步建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。用建立的间接ELISA方法检测360份血清样品,并与IDEXX公司研制的ELISA试剂盒检测的结果相比较,批内重复性试验变异系数均值为1.52%,批间变异系数为6.17%,符合率达92.5%,试验表明,建立的间接ELISA检测方法具有良好的重复性和特异性,可用于PRRSV血清抗体的检测。 展开更多

关键词 重组质粒 重组N蛋白 猪繁殖与呼吸综合征病毒 间接elisa检测方法

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