从车载移动测量系统定姿定位基本原理出发,重点讨论了In-Fusion组合技术的实时导航策略。选取西宁市POS测试数据进行基于In-Fusion Single Base后处理解算精度分析,同时分析GAMS和DMI的影响,测试数据POS定位精度小于2. 5 cm,满足工程测...从车载移动测量系统定姿定位基本原理出发,重点讨论了In-Fusion组合技术的实时导航策略。选取西宁市POS测试数据进行基于In-Fusion Single Base后处理解算精度分析,同时分析GAMS和DMI的影响,测试数据POS定位精度小于2. 5 cm,满足工程测绘精度要求,对车辆移动测量系统进行工程应用起到指导意义。展开更多
目的:构建Ⅰ型钠通道(Nav1.1)与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体及其突变载体。方法:利用In-Fusion技术将SCN1A基因亚克隆到绿色荧光蛋白真核细胞融合表达载体(p Ac GFP1-C In-Fusion Ready Linear Vector)。PCR扩增SCN1A基因(与线性载...目的:构建Ⅰ型钠通道(Nav1.1)与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体及其突变载体。方法:利用In-Fusion技术将SCN1A基因亚克隆到绿色荧光蛋白真核细胞融合表达载体(p Ac GFP1-C In-Fusion Ready Linear Vector)。PCR扩增SCN1A基因(与线性载体对应两端有15个相同碱基),In-Fusion技术进行融合即得到p CMV-GFP-C-SCN1A。将其转染HEK293T细胞,Western blot检测Nav1.1的表达。定点诱变试剂盒对其进行定点诱变。结果:1.成功构建Nav1.1与GFP融合表达载体p CMV-GFP-C-SCN1A;2.DNA测序表明:在预期位点已经发生突变,SCN1A基因第190位色氨酸密码子(TGG)突变为终止密码子(TGA)。结论:Nav1.1与GFP融合表达载体及其突变载体的构建成功,为进一步研究该突变位点导致Nav1.1功能的改变奠定了基础。展开更多
利用基因工程技术手段研究基因功能过程中,构建基因表达载体处于转基因植物的主导地位,采用合适的构建方法会使实验效果事半功倍。植物基因表达载体的构建方法除了传统构建法、Gateway技术、三段T-DNA法、一步克隆法等,还有近年来出现...利用基因工程技术手段研究基因功能过程中,构建基因表达载体处于转基因植物的主导地位,采用合适的构建方法会使实验效果事半功倍。植物基因表达载体的构建方法除了传统构建法、Gateway技术、三段T-DNA法、一步克隆法等,还有近年来出现的几种新型的载体构建方法:基于竞争性连接原理快速构建小片段基因表达载体;MicroRNA前体PCR置换法适用于构建小分子RNA表达载体;重组融合PCR法特别适用于插入片段中含有较多限制性酶切位点的载体构建;利用In-Fusion试剂盒可以将任何目的片段插入一个线性化载体的某个区域;构建多片段复杂载体可采用不依赖序列和连接的克隆方法(Sequence and ligation-independent cloning,SLIC)法;Gibson等温拼接法;Golden Gate拼接法。本文将在总结分析前人工作的基础上,结合自己工作的体会和经验分析这7种新方法的特点,期望通过这几种新的方法给植物基因工程表达载体的构建提供新的思路。展开更多
文摘从车载移动测量系统定姿定位基本原理出发,重点讨论了In-Fusion组合技术的实时导航策略。选取西宁市POS测试数据进行基于In-Fusion Single Base后处理解算精度分析,同时分析GAMS和DMI的影响,测试数据POS定位精度小于2. 5 cm,满足工程测绘精度要求,对车辆移动测量系统进行工程应用起到指导意义。
文摘目的:构建Ⅰ型钠通道(Nav1.1)与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体及其突变载体。方法:利用In-Fusion技术将SCN1A基因亚克隆到绿色荧光蛋白真核细胞融合表达载体(p Ac GFP1-C In-Fusion Ready Linear Vector)。PCR扩增SCN1A基因(与线性载体对应两端有15个相同碱基),In-Fusion技术进行融合即得到p CMV-GFP-C-SCN1A。将其转染HEK293T细胞,Western blot检测Nav1.1的表达。定点诱变试剂盒对其进行定点诱变。结果:1.成功构建Nav1.1与GFP融合表达载体p CMV-GFP-C-SCN1A;2.DNA测序表明:在预期位点已经发生突变,SCN1A基因第190位色氨酸密码子(TGG)突变为终止密码子(TGA)。结论:Nav1.1与GFP融合表达载体及其突变载体的构建成功,为进一步研究该突变位点导致Nav1.1功能的改变奠定了基础。
文摘利用基因工程技术手段研究基因功能过程中,构建基因表达载体处于转基因植物的主导地位,采用合适的构建方法会使实验效果事半功倍。植物基因表达载体的构建方法除了传统构建法、Gateway技术、三段T-DNA法、一步克隆法等,还有近年来出现的几种新型的载体构建方法:基于竞争性连接原理快速构建小片段基因表达载体;MicroRNA前体PCR置换法适用于构建小分子RNA表达载体;重组融合PCR法特别适用于插入片段中含有较多限制性酶切位点的载体构建;利用In-Fusion试剂盒可以将任何目的片段插入一个线性化载体的某个区域;构建多片段复杂载体可采用不依赖序列和连接的克隆方法(Sequence and ligation-independent cloning,SLIC)法;Gibson等温拼接法;Golden Gate拼接法。本文将在总结分析前人工作的基础上,结合自己工作的体会和经验分析这7种新方法的特点,期望通过这几种新的方法给植物基因工程表达载体的构建提供新的思路。
