应用多重PCR技术检测慢性淋巴细胞白血病IgVH基因突变 被引量：8

1

作者 郑文娟 陈丽娟 +3 位作者 吴雨洁 李丽 徐卫 李建勇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期1101-1104,共4页

免疫球蛋白重链可变区(IgVH)基因突变是慢性淋巴细胞白血病(CLL)最重要的独立预后因素之一,为探讨CLL患者IgVH基因突变状态,应用多重PCR技术检测9例CLL患者的IgVH基因,纯化PCR扩增产物后直接测序,应用IMGT/V-QUEST工具分析,明确有无IgV... 免疫球蛋白重链可变区(IgVH)基因突变是慢性淋巴细胞白血病(CLL)最重要的独立预后因素之一,为探讨CLL患者IgVH基因突变状态,应用多重PCR技术检测9例CLL患者的IgVH基因,纯化PCR扩增产物后直接测序,应用IMGT/V-QUEST工具分析,明确有无IgVH突变及突变位置。结果表明9例CLL患者皆扩增出395-465bp区域(MIXI)或290-360bp区域(MIXII)单克隆条带,测序结果显示5例患者有突变,IgVH基因分别为IGHV3-1103、IGHV3-901、IGHV3-2301、IGHV4-5901和IGHV4-3402;4例无突变,IgVH基因为IGHV3-5301、IGHV3-2303、IGHV3-3305和IGHV3-701。结论PCR检测IgVH基因突变,简化了繁琐的实验过程,缩短了实验时间,解决传统PCR对IgVH基因突变检测的桎梏,值得在临床和科研中推广使用。 展开更多

关键词 多重PCR igvh 基因突变

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弥漫大B细胞淋巴瘤中IgVH基因突变的初步研究 被引量：2

2

作者 梁云 周韧 +3 位作者 张伟 张焕兰 徐航娣 毛峥嵘 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期625-626,共2页

目前发现根据IgVH基因的体细胞突变状况有助于判断B细胞肿瘤的来源。IgVH基因以免疫球蛋白受体的形式表达于大多数B细胞淋巴瘤，检测IgVH基因的突变状况可能是追踪肿瘤发展阶段的一个有用方法。绝大多数弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）含有... 目前发现根据IgVH基因的体细胞突变状况有助于判断B细胞肿瘤的来源。IgVH基因以免疫球蛋白受体的形式表达于大多数B细胞淋巴瘤，检测IgVH基因的突变状况可能是追踪肿瘤发展阶段的一个有用方法。绝大多数弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）含有突变的VH基因，提示其曾经历过体细胞突变。然而在肿瘤细胞中这种体细胞突变是否仍在持续进行，即克隆内变异，以及如果存在克隆内变异， 展开更多

关键词 弥漫大B细胞淋巴瘤 igvh基因 基因突变 体细胞突变 B细胞肿瘤 蛋白受体 肿瘤发展 肿瘤细胞

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IgVH基因片段在慢性淋巴细胞白血病中的表达及其临床意义

3

作者 郑文娟 陈丽娟 李建勇 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期160-162,共3页

B细胞性慢性淋巴细胞白血病（B-CLL）是西方国家最常见的一种恶性淋巴细胞增殖性疾病，我国发病率虽然低于西方国家，但随着人口的老龄化，发病率呈现逐年上升趋势。B-CLL患者的临床病程和转归呈高度异质性，因此现阶段最重要的就是建... B细胞性慢性淋巴细胞白血病（B-CLL）是西方国家最常见的一种恶性淋巴细胞增殖性疾病，我国发病率虽然低于西方国家，但随着人口的老龄化，发病率呈现逐年上升趋势。B-CLL患者的临床病程和转归呈高度异质性，因此现阶段最重要的就是建立完善的预后参数分层，提供精确的预后信息，指导治疗。 展开更多

关键词 慢性淋巴细胞白血病 临床意义 基因片段 igvh 淋巴细胞增殖性疾病 西方国家 预后参数 B-CLL

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慢性淋巴细胞白血病患者IgVH基因突变研究 被引量：1

4

作者 张亚平 陈丽娟 +5 位作者 郑文娟 吴雨洁 仇红霞 钱思轩 徐卫 李建勇 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期164-167,共4页

目的探讨我国慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者IgVH基因各家族成员的发生频率以及突变情况。方法应用多重PCR技术检测29例CLL患者的IgVH基因突变，纯化PCR扩增产物后直接测序，测序结果应用IMGT／V—QUEST数据库进行比对分析，明确有无IgV... 目的探讨我国慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者IgVH基因各家族成员的发生频率以及突变情况。方法应用多重PCR技术检测29例CLL患者的IgVH基因突变，纯化PCR扩增产物后直接测序，测序结果应用IMGT／V—QUEST数据库进行比对分析，明确有无IgVH突变及突变位置。结果21例患者有体细胞突变，占CLL患者的72.4％；8例无突变。VH3家族16例，占CLL患者的55．2％，其中体细胞突变13例，占81．2％；VH4家族11例，占CLL患者的37．9％，其中突变7例，占63．6％；1例（3．5％）IgVH2-5＊10发生体细胞突变；1例（3．5％）IgVH7-4-1＊02无突变；未发现VH1、VH5和VH6家族成员。结论我国CLL患者IgVH基因家族表达比例与西方国家存在显著差异，可能与种族和环境因素有关，这也可能是西方国家与我国CLL发病率差异的原因之一。 展开更多

关键词 白血病 淋巴细胞 慢性 免疫球蛋白重链可变区 基因突变

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40例慢性淋巴细胞白血病临床分析 被引量：5

5

作者 许贞书 张金燕 +3 位作者 战榕 郑志宏 吴顺泉 陈志哲 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期583-586,共4页

本研究旨在分析慢性淋巴细胞白血病(CLL)的临床和实验室特点及其对预后的影响。对2004年1月至2010年12月收住本院的40例CLL患者进行了回顾性分析。结果表明,本病主要发生于老年男性,中位年龄66岁(42-80岁);25例(62.5%)可见典型CLL免疫表... 本研究旨在分析慢性淋巴细胞白血病(CLL)的临床和实验室特点及其对预后的影响。对2004年1月至2010年12月收住本院的40例CLL患者进行了回顾性分析。结果表明,本病主要发生于老年男性,中位年龄66岁(42-80岁);25例(62.5%)可见典型CLL免疫表型,所有病例均表达CD19和CD5,表达CD38和Zap70的分别有7例(17.5%)和14例(35%);8例检测出IgVH基因突变,其中有4例为VH3家族;FISH检测出P53基因缺失6例,RB1缺失3例,12三体1例,正常核型5例;31例患者接受了含氟达拉滨的化疗,中位无进展生存(PFS)时间为48个月(95%CI:39-57个月),其中有27例(87.1%)获完全缓解(CR)+部分缓解(PR),而接受其他治疗方法的患者有9例,PFS仅为14个月(95%CI:10-18个月,P<0.001),只有3例(33.3%)获CR+PR。诊断时β2微球蛋白水平正常者,36个月的总生存率为78%(95%CI:69%-87%),明显高于β2微球蛋白水平异常者的总生存率47%(95%CI:35%-59%,P=0.004)。Zap70表达阳性的患者中有7例(50%)治疗后获CR+PR,疗效差于表达阴性者,后者中有23例(88.5%,P=0.006)治疗后获CR+PR。IgVH基因突变者,治疗后都获CR,无IgVH基因突变者,治疗后只有4例(66.7%)获CR。结论:CLL具有独特的临床特征和分子遗传学标记,如Zap70、CD38和IgVH基因突变,并与预后相关。氟达拉滨治疗方案能明显提高CLL患者的长期生存率。 展开更多

关键词 慢性淋巴细胞白血病 回顾性分析 Zap70 CD38 igvh 氟达拉滨

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鼠抗hTNF-α单克隆抗体重链基因片段的克隆和cDNA序列测定 被引量：1

6

作者 邓健蓓 韩骅 苏成芝 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第1期24-27,共4页

采用反转录ＰＣＲ方法，以一对锚ＰＣＲ引物和一对针对鼠ＩｇＶＨ区基因的引物，从分泌鼠抗ｈＴＮＦ－α单克隆抗体的Ｅ６杂交瘤细胞株中，分别扩增和克隆了自５′非翻译区至Ｃγ１近３′端的重链基因片段和重链可变区基因片段，并测定... 采用反转录ＰＣＲ方法，以一对锚ＰＣＲ引物和一对针对鼠ＩｇＶＨ区基因的引物，从分泌鼠抗ｈＴＮＦ－α单克隆抗体的Ｅ６杂交瘤细胞株中，分别扩增和克隆了自５′非翻译区至Ｃγ１近３′端的重链基因片段和重链可变区基因片段，并测定了其核苷酸序列。计算机分析表明，系重排的鼠Ｉｇ重链基因。 展开更多

关键词 igvh基因 HTNF-Α 单克隆抗体 核苷酸序列

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抗凋亡基因XIAP在慢性淋巴细胞白血病中的异常表达及其临床意义

7

作者 范磊 朱丹霞 +5 位作者 董华洁 吴雨洁 乔纯 王荣 徐卫 李建勇 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1683-1686,共4页

目的:探讨抗凋亡基因XIAP在慢性淋巴细胞白血病中的表达,分析其与IgVH突变、CD38等临床重要预后指标的相关性。方法:采用SyberGreen法实时定量PCR(qPCR)技术检测37例CLL患者肿瘤细胞中抗凋亡基因XIAP的mRNA表达水平,同时利用28例年龄匹... 目的:探讨抗凋亡基因XIAP在慢性淋巴细胞白血病中的表达,分析其与IgVH突变、CD38等临床重要预后指标的相关性。方法:采用SyberGreen法实时定量PCR(qPCR)技术检测37例CLL患者肿瘤细胞中抗凋亡基因XIAP的mRNA表达水平,同时利用28例年龄匹配的正常人作为阴性对照,分析其临床意义。结果:经过qPCR检测正常对照组XIAP表达中位数为0.04040(95%CI:0.01610～0.06471),CLL组XIAP表达为0.07502(0.04383～0.1062),两者具有显著统计学差异(P=0.0025);亚组分析发现耐药组XIAP表达为0.08295(0.02575～0.1402),药物敏感组为0.07020(0.03042～0.1100),耐药组XIAP表达高于药物敏感组,但是未达到统计学差异(P=0.3978)。进一步分析显示XIAP mRNA表达水平和IgVH突变状态和CD38表达相关:IgVH无突变和CD38高表达的CLL患者XIAP表达显著升高(P值分别为0.0265和0.0388)。结论:利用qPCR技术发现抗凋亡基因XIAP在CLL患者中存在异常高表达,耐药组有高于药物敏感组的趋势,并且与CLL临床预后因素IgVH突变状态和CD38表达密切相关。 展开更多

关键词 凋亡 慢性淋巴细胞白血病 XIAP igvh突变 CD38

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CD_(38)和VH基因对慢性B淋巴细胞白血病临床过程的影响

8

作者 张文艺 胡小梅 董作仁 《医学综述》 2004年第5期304-306,共3页

关键词 慢性B淋巴细胞白血病 CD38 igvh

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ZAP-70在慢性淋巴细胞白血病中的表达及意义

9

作者 吴雨洁 李建勇 《国外医学（输血及血液学分册）》 2005年第3期216-218,共3页

慢性淋巴细胞白血病是预后异质性很大的疾病。ZAP-70是一种蛋白酪氨酸激酶,在约50％ B-CLL表达,与IgVH基因突变、细胞遗传学改变和CD38有明显相关性,已被作为一项独立预后指标,对临床指导治疗有重要价值。

关键词 慢性淋巴细胞白血病 ZAP-70 表达及 蛋白酪氨酸激酶 B-CLL 遗传学改变 基因突变 igvh CD38 预后指标 指导治疗 异质性 相关性

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抗人B细胞淋巴瘤DNA疫苗的构建

10

作者 张云生 仲凯励 +3 位作者 原野 张明伟 张毅 毛宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期79-82,共4页

目的 :探讨人B细胞淋巴瘤活检组织中肿瘤细胞膜表面免疫球蛋白VH(smIgVH)基因片段能否在动物体内激发特异性抗独特型抗体。方法 :以RT PCR法获得IgVH 基因片段 ,以小鼠单核细胞趋化因子 (MCP 3)基因作为佐剂分子 ,进行重组PCR获得MCP 3... 目的 :探讨人B细胞淋巴瘤活检组织中肿瘤细胞膜表面免疫球蛋白VH(smIgVH)基因片段能否在动物体内激发特异性抗独特型抗体。方法 :以RT PCR法获得IgVH 基因片段 ,以小鼠单核细胞趋化因子 (MCP 3)基因作为佐剂分子 ,进行重组PCR获得MCP 3和VH 基因片段的融合基因 ,克隆在真核表达载体 pcDNA3.1中 ,构建DNA疫苗质粒 pcDNA/MCP BVH。通过脂质体转染验证该质粒在真核细胞COS 7中的表达。结果 :通过上述方法获得了以活检组织肿瘤细胞mIgVH区基因片段 ;成功地构建了DNA疫苗质粒 pcDNA/MCP BVH。体外瞬时转染实验证明 ,该质粒能够在真核细胞COS 7中正确表达。结论 :成功地构建重组表达质粒 pcDNA/MCPBVH,在体外能够正确表达 。 展开更多

关键词 DNA疫苗 独特位 igvh

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转基因树突状细胞激活细胞毒性T细胞特异性杀伤淋巴瘤的体外实验 被引量：1

11

作者 张耀 张伟京 朱平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期193-196,共4页

目的 探讨转基因树突状细胞激活细胞毒性T细胞产生抗淋巴瘤的特异性细胞免疫反应。方法 采用人骨髓来源的髓系前体细胞,在人细胞因子IL-4、GM-CSF和INF-α诱导下,在体外生成大量树突状细胞。将制备好的含有IgVH1核酸质粒,用脂质体法转... 目的 探讨转基因树突状细胞激活细胞毒性T细胞产生抗淋巴瘤的特异性细胞免疫反应。方法 采用人骨髓来源的髓系前体细胞,在人细胞因子IL-4、GM-CSF和INF-α诱导下,在体外生成大量树突状细胞。将制备好的含有IgVH1核酸质粒,用脂质体法转染树突状细胞。转染成功的树突状细胞与外周血T淋巴细胞共培养,激活特异性CTL细胞,与阳性表达IgVH1的人淋巴瘤Namalwa细胞反应,用3H-TdR掺入法观察CLLs对瘤细胞的特异性杀伤效应。结果 树突状细胞能够用脂质体方法转染IgVH1核酸质粒,并且有效递呈给外周血T细胞,对表达IgVH1的人淋巴瘤Namalwa细胞产生特异性免疫杀伤活性,与对照组相比差异有显著意义（P<0.01）。结论 体外诱导扩增的 DC能够转染 IgVH1核酸质粒,体外激活T淋巴细胞,产生特异性细胞毒效应。 展开更多

关键词 转基因树突状细胞 激活 细胞毒性T细胞 特异性杀伤 淋巴瘤 体外实验

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ZAP-70和CD38在B细胞慢性淋巴细胞白血病患者中的表达及临床意义

12

作者 马洪兵 刘霆 +1 位作者 孟文彤 蒋能刚 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期561-563,共3页

慢性淋巴细胞白血病（CLL）的病程差异很大，可以从数月到数十年。目前认为免疫球蛋白重链可变区（IgVH）基因突变状态是CLL最好的预后指标，但由于IgVH基因序列分析技术难度大、费时、成本高而不适合应用于临床。因此寻找可靠的替代指... 慢性淋巴细胞白血病（CLL）的病程差异很大，可以从数月到数十年。目前认为免疫球蛋白重链可变区（IgVH）基因突变状态是CLL最好的预后指标，但由于IgVH基因序列分析技术难度大、费时、成本高而不适合应用于临床。因此寻找可靠的替代指标成为研究的热点。近几年的研究表明，ZAP-70有希望成为IgVH基因突变状态的替代指标。ZAP-70是一种与TCRξ链相联系的相对分子质量为70×10^3的胞质内蛋白酪氨酸激酶，广泛表达在T细胞和NK细胞，还可高表达于IgVH基因没有发生突变的B—CLL细胞，而B细胞在正常情况下ZAP-70的表达则非常低[（4．0±2．5）％]。 展开更多

关键词 慢性淋巴细胞白血病 ZAP-70 临床意义 B细胞 白血病患者 CD38 免疫球蛋白重链可变区 igvh基因

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人大肠癌细胞蛋白质组中免疫球蛋白重链可变区和B7-1的表达 被引量：2

13

作者 张盈涛 耿宜萍 +2 位作者 来宝长 司履生 王一理 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期648-652,共5页

目的分析人大肠癌LS174T及SW 480细胞株的蛋白质表达谱。方法通过固相pH梯度双向凝胶电泳分离人大肠癌LS174T及SW 480细胞总蛋白质,经基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALD I-TOF-MS)获得肽质量指纹图(PMFs),通过M ascot软件查询蛋... 目的分析人大肠癌LS174T及SW 480细胞株的蛋白质表达谱。方法通过固相pH梯度双向凝胶电泳分离人大肠癌LS174T及SW 480细胞总蛋白质,经基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALD I-TOF-MS)获得肽质量指纹图(PMFs),通过M ascot软件查询蛋白质数据库进行蛋白质的初步鉴定。结果获得了分辨率较高的人大肠癌LS174T及SW 480细胞的双向电泳图谱,初步鉴定了一批蛋白质,包括免疫球蛋白重链可变区(IgVH)和共刺激分子B7-1,并通过电喷雾离子阱串联质谱(ESI-MS/MS)分析和免疫细胞化学染色得到进一步证实。结论在人大肠癌LS174T和SW 480细胞中存在IgVH和B7-1的表达,这一发现有助于进一步阐明肿瘤的免疫逃逸机制。 展开更多

关键词 大肠癌 蛋白质组 免疫球蛋白重链可变区 B7-1

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