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中国花鲈IgM重链(IgMH)和MHCⅡβ基因的克隆及表达分析
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作者 雷丽娜 高谦 +3 位作者 王伟 孙兆盛 罗璋 刘其根 《水产学报》 北大核心 2025年第6期24-41,共18页
【目的】进一步了解中国花鲈适应性免疫机制在病害防治中的作用。【方法】本研究通过荧光定量PCR(RT-PCR)和快速扩增c DNA末端(RACE)技术克隆获得了免疫球蛋白M重链(IgMH)和主要组织兼容性复合体MHC Ⅱβ基因的全长;通过实时荧光定量PCR... 【目的】进一步了解中国花鲈适应性免疫机制在病害防治中的作用。【方法】本研究通过荧光定量PCR(RT-PCR)和快速扩增c DNA末端(RACE)技术克隆获得了免疫球蛋白M重链(IgMH)和主要组织兼容性复合体MHC Ⅱβ基因的全长;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其在中国花鲈各组织的分布情况以及LPS、Poly(I:C)刺激及迟缓爱德华氏菌人工感染后其对应mRNA水平的表达变化情况;实验构建了IgMH-pET21d、IgMCH1-2-pET21d和MHCⅡβ-pET21d原核重组表达质粒,进行重组蛋白表达,并通过分子筛层析技术纯化中国花鲈IgMH、IgMCH1-2和MHCⅡβ重组蛋白,进而制备了抗中国花鲈IgMH的多克隆抗体。【结果】中国花鲈IgMH和MHCⅡβ的cDNA全长分别为1977 bp和1242 bp;二者在鳃、脾脏和头肾等免疫相关组织中对应mRNA表达量较高;LPS、Poly(I:C)刺激及迟缓爱德华氏菌人工感染中国花鲈导致鳃、脾脏和头肾中这两个基因的表达水平发生显著变化,表明IgMH和MHCⅡβ均参与了中国花鲈的抗感染免疫反应;此外,抗中国花鲈IgM的多克隆抗体能与中国花鲈全血清发生强烈反应,与鳜全血清弱反应,与大口黑鲈和草鱼血清不发生反应,推测其反应强度反映了物种间亲缘关系的远近。【结论】本研究首次克隆了中国花鲈的IgMH和MHCⅡβ基因全长,表达了IgMH和MHCⅡβ原核重组蛋白,制备了抗中国花鲈IgM的多克隆抗体,揭示了IgMH和MHCⅡβ参与中国花鲈的抗感染免疫应答,为深入研究中国花鲈的免疫调控机制和疾病防控策略奠定了基础。 展开更多
关键词 中国花鲈 igmh MHCⅡβ 表达调控 蛋白纯化
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大黄鱼免疫球蛋白M重链基因全长cDNA序列的克隆与表达 被引量：3
2
作者 刘卫刚 韩坤煌 +3 位作者 谢芳靖 邹鹏飞 张子平 王艺磊 《集美大学学报（自然科学版）》 CAS 2018年第6期407-415,共9页
从本实验室自建的大黄鱼表达标签数据库中获取了大黄鱼免疫球蛋白M重链(LcIgMH)基因片段,并以此设计SMART-RACE引物,最终得到1917 bp的全长c DNA序列。经分析发现其含6 bp的5'非编码区(5'UTR)、176 bp的3'UTR以及1738 bp的... 从本实验室自建的大黄鱼表达标签数据库中获取了大黄鱼免疫球蛋白M重链(LcIgMH)基因片段,并以此设计SMART-RACE引物,最终得到1917 bp的全长c DNA序列。经分析发现其含6 bp的5'非编码区(5'UTR)、176 bp的3'UTR以及1738 bp的开放阅读框(ORF);预测的ORF共编码584个氨基酸,蛋白质分子量为65. 2 ku,等电点为5. 84;利用Singal P 4. 1 Server发现其5'端含有信号肽(1-19 aa);Blast P Server的结果显示,其与红笛鲷的IgMH序列一致性最高,达到64%;利用IMGT/Domain Gap Align进行重链可变区与恒定区预测,发现含有1个重链可变区与4个重链恒定区,同时,预测还发现可变区含有典型的3个高变区与4个骨架区结构。实时荧光定量PCR结果显示该基因在头肾与脾脏中大量表达,并显著高于其他各组织,同时雌雄鱼LcIgMH在各组织中表达量均无显著性差异,表明LcIgMH表达与性别无关。注射副溶血弧菌进行感染4 d后,脾脏内LcIgMH表达量最高,并且与对照组之间存在显著性差异(P <0. 05),但感染后第8天的表达水平已与对照组无显著性差异(P> 0. 05),显示LcIgMH与大黄鱼的免疫应答反应相关。 展开更多
关键词 大黄鱼 igmh 副溶血弧菌 基因表达 定量PCR
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