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基于DOE设计的IgG2型抗表皮生长因子受体单抗抗体依赖的细胞吞噬作用生物学活性报告基因检测法的建立及验证
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作者 赵沁 周勤 +4 位作者 王鸣人 李甜甜 王灿 段徐华 邵泓 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第7期859-865,共7页
目的通过实验设计(Design of Experiment,DOE)与单因素分析(one factor at a time,OFAT)相结合的方式,建立测定Ig G2型抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单抗抗体依赖的细胞吞噬作用(antibody dependent cellu... 目的通过实验设计(Design of Experiment,DOE)与单因素分析(one factor at a time,OFAT)相结合的方式,建立测定Ig G2型抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单抗抗体依赖的细胞吞噬作用(antibody dependent cellular phagocytosis,ADCP)生物学活性的报告基因法,并进行验证。方法以Jurkat/NFAT-Re/FcγRⅡa稳转细胞株为效应细胞,A431细胞株为靶细胞,利用JMP软件采取DOE与OFAT相结合的方式,以上下渐近线比值(D/A)为统计量,对实验中7个关键因素进行条件筛选及优化,建立测定Ig G2型抗EGFR单抗ADCP生物学活性的报告基因法,并按照《中国药典》三部/四部(2020版)通则<9401>进行验证。用建立的方法测定Ig G2型抗EGFR单抗注射液生物学活性。结果经过3轮试验,建立了测定Ig G2型抗EGFR单抗ADCP生物学活性的报告基因法,该方法存在量效关系,符合四参数回归方程y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,确定了7个关键条件的耐用范围,即效应细胞密度为(1.25~3.75)×10~4个/孔,效应细胞与靶细胞密度比值为1.0~2.0,靶细胞孵育时间为20~40 min,给药孵育时间为15~30 min,总作用时间为5.5~6.5 h,显色时间为5~30 min,显色剂为荧光素酶检测系统(Bright-Glo)。该方法专属性良好;对5个效价水平进行6次独立试验,线性回归方程相关系数(r)=0.9945,斜率为1.02;5个效价水平相对效价分别为(62.15±1.38)%、(78.53±2.82)%、(99.12±3.95)%、(123.27±4.59)%和(155.22±7.04)%,相对偏倚为-2.9%~0.2%,几何变异系数(generalized cross-validation,GCV)为2.2%~4.6%;在64%~156%范围内具有良好的线性、相对准确度和精密度。Ig G2型抗EGFR单抗生物学活性3次测定结果均值为(101.5±2.8)%。结论本研究建立的报告基因法可用于Ig G2型抗EGFR单抗ADCP生物学活性测定。 展开更多
关键词 igg2 表皮生长因子受体 单克隆抗体 抗体依赖的细胞吞噬作用 生物学活性 报告基因法 实验设计 单因素分析
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日本血吸虫感染大鼠血清特异性IgG及IgG2a IgG2c同型水平的动态观察 被引量:14
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作者 俞小淙 吴观陵 +2 位作者 吴宜琴 张耀娟 章子豪 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2000年第3期148-150,共3页
目的观察日本血吸虫感染大鼠血清中虫卵和成虫特异性抗体同型 IgG、IgG2a、IgG2c的动态变化。方法ELISA。结果三种特异性抗体同型均有明显升高,巨变化趋势基本一致,于感染后第3~8周升高,约在12周达高峰并维... 目的观察日本血吸虫感染大鼠血清中虫卵和成虫特异性抗体同型 IgG、IgG2a、IgG2c的动态变化。方法ELISA。结果三种特异性抗体同型均有明显升高,巨变化趋势基本一致,于感染后第3~8周升高,约在12周达高峰并维持至观察结束的第14周。结论提示IgG2a、IgG2c在日本血吸虫感染的免疫中可能具有一定的作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 抗体同型 igg2A igg2c
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牛IgG2 Fc受体在COS-7细胞表面的稳定表达 被引量:4
3
作者 李青梅 郭军庆 +5 位作者 张改平 杨艳艳 王选年 张华 乔松林 王丽 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期121-124,共4页
将牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)编码区cDNA亚克隆到真核表达载体pcDNA3的巨细胞病毒启动子下游,构建了重组表达质粒pc3bo2R;以重组质粒转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验检测boFcγ2R在转染细胞表面的表达,通过G418抗性筛选和连续克隆化,在转染... 将牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)编码区cDNA亚克隆到真核表达载体pcDNA3的巨细胞病毒启动子下游,构建了重组表达质粒pc3bo2R;以重组质粒转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验检测boFcγ2R在转染细胞表面的表达,通过G418抗性筛选和连续克隆化,在转染细胞表面稳定表达了boFcγ2R受体分子,转染细胞的玫瑰花环形成率达90%。最后获得稳定表达boFcγ2R受体分子的COS-7转染细胞系,为受体的功能研究提供了良好的技术平台。 展开更多
关键词 igg2 FC受体 COS-7细胞 细胞表面表达 玫瑰花环试验
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新型CpG ODN增强乙肝疫苗诱导IgG2a类抗体产生的实验研究 被引量:4
4
作者 丛中一 包木胜 +4 位作者 万敏 王莉 李大鹏 王丽颖 于永利 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期987-990,996,共5页
目的寻找能增强乙肝疫苗刺激IgG2a类抗体产生,使机体处于Th1样免疫环境的新型乙肝疫苗佐剂。方法选用自行设计的A、B、C型CpGODN,并以发表的A、B型CpGODN作为阳性对照,与重组乙肝疫苗混合后于第0、4周免疫BALB/c小鼠,用ELISA法检测免疫... 目的寻找能增强乙肝疫苗刺激IgG2a类抗体产生,使机体处于Th1样免疫环境的新型乙肝疫苗佐剂。方法选用自行设计的A、B、C型CpGODN,并以发表的A、B型CpGODN作为阳性对照,与重组乙肝疫苗混合后于第0、4周免疫BALB/c小鼠,用ELISA法检测免疫小鼠血清中HBsAb水平及种类。结果各型CpGODN都能增强乙肝疫苗刺激HBsAb的产生水平,CpGODN+乙肝疫苗免疫的小鼠血清中HBsAb类型为IgG2a>>IgG1,而单独应用商品化重组乙型肝炎疫苗的小鼠血清中HBsAb类型为IgG1>>IgG2a。结论各型CpGODN对重组乙型肝炎疫苗[含Al(OH)3佐剂]均具有增效作用,而且可以诱导机体产生倾向于Th1途径的免疫应答反应。 展开更多
关键词 CPG ODN 乙型肝炎疫苗 佐剂 igg2A
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基于毛细管区带电泳的IgG2型单抗电荷异质性分析方法的建立 被引量:2
5
作者 王文波 于传飞 +3 位作者 张峰 武刚 高凯 王兰 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期627-631,共5页
目的建立IgG2型单抗毛细管区带电泳(CZE)电荷异质性分析方法。方法通过对三乙基四胺(TETA)和6-氨基己酸(EACA)浓度,以及电泳缓冲液pH和毛细管分离温度等参数进行优化,建立能够有效分离和定量IgG2单抗电荷异构体的CZE分析方法,并对该方... 目的建立IgG2型单抗毛细管区带电泳(CZE)电荷异质性分析方法。方法通过对三乙基四胺(TETA)和6-氨基己酸(EACA)浓度,以及电泳缓冲液pH和毛细管分离温度等参数进行优化,建立能够有效分离和定量IgG2单抗电荷异构体的CZE分析方法,并对该方法进行方法学验证和应用评价。结果 TETA和EACA浓度,以及电泳缓冲液pH和毛细管分离温度的变化,会影响IgG2单抗的电荷异构体分离效果,通过一系列参数的优化,最终确定了方法参数(400 mmol·L^(-1)EACA/0.05%TETA,pH 6.2,分离电压30 kV,分离温度35℃)。建立的CZE分析方法可以有效地对IgG2单抗电荷异构体进行分离,并具有良好的精密度,峰面积的RSD值小于3.0%。该方法同样适用于IgG1和IgG4型单抗的电荷异质性分析,同时,根据电泳图谱和迁移时间,能够对不同亚型和靶点的单抗进行有效的区分鉴别。结论建立的IgG2型单抗毛细管区带电泳方法,可有效分离电荷异构体,并具有良好的精密度,可作为平台方法应用于IgG2型单抗的电荷异质性分析和鉴别。 展开更多
关键词 igg2单抗 电荷异质性 毛细管区带电泳 方法优化 质量控制
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TLR7/8配体R-848体外诱导小鼠脾细胞产生IgG2a的研究 被引量:3
6
作者 沈二霞 吴长有 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期674-678,共5页
目的检测TLR7/8配体R-848是否能够诱导naive小鼠的脾B细胞和纯化B细胞活化、增殖及产生抗体。方法磁珠分选出纯化的B细胞,将制备好的脾细胞或纯化B细胞,与R-848共培养,流式细胞术检测R-848对B细胞活化和增殖的影响;ELISA检测R-848是否... 目的检测TLR7/8配体R-848是否能够诱导naive小鼠的脾B细胞和纯化B细胞活化、增殖及产生抗体。方法磁珠分选出纯化的B细胞,将制备好的脾细胞或纯化B细胞,与R-848共培养,流式细胞术检测R-848对B细胞活化和增殖的影响;ELISA检测R-848是否能够诱导脾细胞产生IgG2a和IgG1,并检测与抗体产生相关的细胞因子的产生。结果 R-848上调B细胞表面活化分子CD25和CD80的表达,促进B细胞活化和分裂;R-848以剂量依赖方式诱导小鼠脾细胞产生IgG2a和IgG1;同时诱导脾细胞产生IFN-γ、IL-12P40、IL-10和IL-6。结论 R-848直接作用于B细胞促进其活化和分裂;R-848促进脾细胞产生大量的IgG2a,可能与其增强IFN-γ、IL-6和IL-10的产生有关。 展开更多
关键词 R-848 B细胞 igg2A IFN-Γ
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抗黄曲霉毒素B1重链IgG2b亚型单克隆抗体的制备及应用 被引量:1
7
作者 裴世春 李玉花 +1 位作者 张园园 才琳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期602-604,共3页
目的制备抗黄曲霉毒素B1(AFB1)的重链IgG2b亚型单克隆抗体,并建立黄曲霉毒素B1的间接竞争ELISA检测方法。方法采用AFB1-BSA偶联物为免疫抗原,AFB1-STI偶联物为检测抗原,利用间接竞争ELISA筛选分泌抗AFB1单抗的细胞株,并对抗体进行鉴定... 目的制备抗黄曲霉毒素B1(AFB1)的重链IgG2b亚型单克隆抗体,并建立黄曲霉毒素B1的间接竞争ELISA检测方法。方法采用AFB1-BSA偶联物为免疫抗原,AFB1-STI偶联物为检测抗原,利用间接竞争ELISA筛选分泌抗AFB1单抗的细胞株,并对抗体进行鉴定。结果筛选到1株能分泌特异性抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其染色体数目为(90±10)条;所分泌的单抗亚类重链为IgG2b,轻链为λ;间接ELISA检测该株杂交瘤细胞分泌上清效价在1∶12800~1∶25600,纯化腹水效价为1∶105~1∶106。传30代及液氮中保存6个月,抗体效价稳定;建立的间接竞争ELISA检测方法的最低检出限为0.001ng/ml,校正曲线的线性范围为0.005~5ng/ml,IC50为0.01ng/ml;与AFB1的结构类似物AFM1和化学结构有差异的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的交叉反应率分别为1.4%和<1%。结论所制备的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体具有高度特异性和稳定性,可应用于间接竞争ELISA检测方法。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 重链igg2b亚型 单克隆抗体 酶联免疫试验
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CIN患者血清HPV16病毒颗粒IgG1、IgG2亚类抗体变化及临床意义 被引量:2
8
作者 韩玲 李海荣 +3 位作者 张秉宜 佐满珍 薛月珍 张军 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期831-835,共5页
背景与目的:免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)是血清和细胞外液中含量最高的免疫球蛋白,其某个亚类的升高,可能与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的发生、发展及转归有密切相关。然而对于CIN患者血清人乳头... 背景与目的:免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)是血清和细胞外液中含量最高的免疫球蛋白,其某个亚类的升高,可能与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的发生、发展及转归有密切相关。然而对于CIN患者血清人乳头瘤病毒样颗粒(human papillomavirus virus-like particles,HPV VLPs)IgG1及IgG2抗体变化目前尚不明确。本研究旨在探讨CIN患者血清中HPV16VLPs-IgG1、IgG2亚类抗体的变化及其与不同级别宫颈病变的关系。方法:采用ELISA法检测HPV感染患者HPV感染患者CIN患者及子宫平滑肌瘤或宫颈炎患者血清中HPV16VLPs-IgG和HPV16VLPs-IgG1、IgG2亚类抗体的表达水平。结果:患者血清中HPV16VLPs-IgG和IgG1抗体含量随宫颈病变级别增高而增加,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、HPV感染组和CINⅠ组中以IgG2抗体为主(IgG2/IgG1>1),分别为100.00%、87.50%和75.00%,而CINⅡ~Ⅲ组中仅为9.52%,与前3组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV16-DNA阳性组的HPV16VLPs-IgG、IgG1、IgG2阳性率及吸光度A值明显高于非HPV16-DNA阳性组,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV16-DNA检测与血清HPV16VLPs-IgG抗体检测之间呈中度相关(r=0.531,P<0.05)。结论:宫颈癌前病变尤其是CINⅡ~Ⅲ患者血清HPV16VLPs-IgG及其亚类表达增高,可能与病毒持续时间、病变严重程度有关;机体感染HPV后,低级别宫颈病变组、对照组血清HPV16VLPs-IgG2抗体表达增高(IgG2/IgG1>1),可能与HPV清除和宫颈病变逆转有关。 展开更多
关键词 宫颈上皮内瘤变 IgG1、igg2亚类 酶联免疫吸附试验
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人源抗TLR4抗体IgG2对对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤的保护作用 被引量:3
9
作者 姚传霞 王怡雯 +5 位作者 龚丹丹 李丽莉 马艳 匡衡 周婷婷 汪茂荣 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期645-651,共7页
目的:研究人源抗TLR4抗体IgG2(human-TLR4 IgG2,h TLR4 IgG2)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导肝损伤的保护效应,探讨其在药物性肝损伤中的保护作用。方法:以人源抗TLR4抗体Fab基因为模板,扩增其可变区基因,构建人源抗TLR4抗体I... 目的:研究人源抗TLR4抗体IgG2(human-TLR4 IgG2,h TLR4 IgG2)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导肝损伤的保护效应,探讨其在药物性肝损伤中的保护作用。方法:以人源抗TLR4抗体Fab基因为模板,扩增其可变区基因,构建人源抗TLR4抗体IgG2真核表达载体,转染CHO-S细胞,筛选稳定表达细胞株,收集细胞上清,Protein G柱纯化抗TLR4抗体IgG2。将18只C57BL/6J小鼠随机分成3组:生理盐水组、APAP(600 mg/kg)组和APAP+hTLR4 IgG2(5 mg/kg)组,统计小鼠腹腔注射APAP后24 h的存活率;重复上述实验分组,检测小鼠腹腔注射APAP 8 h后,血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平,取肝脏做病理分析并使用Western blot检测凋亡蛋白的表达。结果:成功构建并表达纯化人源抗TLR4抗体IgG2;ELISA结果显示,抗体效价为1∶204800。与APAP组相比,APAP+hTLR4 IgG2组小鼠的24 h存活率显著增加(P<0.05);血清AST、ALT以及炎性细胞因子的表达水平显著降低,具有统计学意义(P<0.05);病理分析结果显示,与模型组相比,人源抗TLR4抗体IgG2治疗组的小鼠肝组织炎性细胞浸润、充血和坏死等症状明显改善;Western blot结果显示凋亡相关蛋白的表达减少。结论:人源抗TLR4抗体IgG2能够抑制炎症因子的表达及细胞凋亡,对APAP诱导的小鼠肝损伤有显著的保护作用。 展开更多
关键词 人源抗TLR4抗体igg2 对乙酰氨基酚 炎症因子 细胞凋亡
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牛IgG2 Fc受体的真核表达、纯化与结晶
10
作者 黄晓静 李睿 +4 位作者 马红芳 冯丽丽 乔松林 邓瑞广 张改平 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2019年第8期1-7,共7页
【目的】制备牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)蛋白并分析其结构与生物学功能,为进一步研究其免疫学功能奠定基础。【方法】PCR扩增boFcγ2R的胞外区基因片段,将其克隆至真核表达载体pMT/BiP/V5-His A构建重组pMT/BiP-boFcγ2R-His质粒,利用果... 【目的】制备牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)蛋白并分析其结构与生物学功能,为进一步研究其免疫学功能奠定基础。【方法】PCR扩增boFcγ2R的胞外区基因片段,将其克隆至真核表达载体pMT/BiP/V5-His A构建重组pMT/BiP-boFcγ2R-His质粒,利用果蝇胚胎Drosophila Schneider 2(S2)细胞表达boFcγ2R胞外区重组蛋白,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,利用Dot-blot验证其生物学功能;采用蒸汽扩散坐滴法对目的蛋白进行结晶,对晶体进行X-ray衍射分析;利用去糖基化酶Endo Hf和PNGase F对目的蛋白进行处理,以验证其糖基化修饰与晶体无衍射之间是否存在因果关系。【结果】PCR扩增获得了663 bp的boFcγ2R基因胞外区片段。成功构建了pMT/BiP-boFcγ2R-His载体,将其转染S2细胞后诱导表达出26 ku的boFcγ2R胞外区重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析的纯化方法得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白;Dot-blot结果显示,该蛋白具有较好的生物学功能。蛋白结晶的2个条件是:体积分数15%TacsimateTM(pH 7.0)、0.1 mol/L HEPES (pH 7.0)、20 g/L PEG 3350和0.1 mol/L HEPES (pH 7.5)、250 g/L PEG 3350。蛋白初筛晶体无衍射,去糖基化试验验证了boFcγ2R胞外区蛋白初筛晶体无衍射可能与其糖基化有关的推测。【结论】得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白,获得其初筛晶体。 展开更多
关键词 igg2 FC受体 蛋白表达 蛋白结晶
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定量ELISA检测小鼠血清中抗LDH-C4IgG2b抗体的水平
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作者 孙玲 许金菊 +4 位作者 黄生民 王晓蕾 张永振 曹筱梅 贲昆龙 《昆明医学院学报》 2001年第1期30-33,共4页
用定量ELISA的方法检测背部携带分泌抗LDH -C4IgG2b抗体杂交瘤小鼠的血清中IgG2b抗体浓度 ,结果表明 :本法稳定 ,批间变异系数为 7 0 4%~ 13 30 % ,批内变异系数为 3 6 1%~ 10 2 0 % ;标准曲线相关性良好 ,相关系数从 0 96 2 884~ ... 用定量ELISA的方法检测背部携带分泌抗LDH -C4IgG2b抗体杂交瘤小鼠的血清中IgG2b抗体浓度 ,结果表明 :本法稳定 ,批间变异系数为 7 0 4%~ 13 30 % ,批内变异系数为 3 6 1%~ 10 2 0 % ;标准曲线相关性良好 ,相关系数从 0 96 2 884~ 0 996 795 ;灵敏度较高 ,最低检出浓度为 0 0 1mg/L ; 展开更多
关键词 定量ELISA LDH-C4 igg2b 乳酸脱氢酶-C4 血清诊断 单克隆抗体 抗体
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The association between IgG1,IgG2 subclasses toward human papillomavirus 16-like particles in the serum and cervical intraepithelial neoplasia
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作者 Ling Han Bingyi Zhang +3 位作者 Hairong Li Manzhen Zuo Yuezhen Xue Jun Zhang 《The Chinese-German Journal of Clinical Oncology》 CAS 2010年第5期278-282,共5页
Objective:The paper aimed to study the relationship between the expressions of immunoglobulin G(IgG) subclasses toward human papillomavirus 16-like particles(HPV16VLPs) in the serum of patients and different grades of... Objective:The paper aimed to study the relationship between the expressions of immunoglobulin G(IgG) subclasses toward human papillomavirus 16-like particles(HPV16VLPs) in the serum of patients and different grades of cervical lesions.Methods:The expressions of IgG subclasses in 32 cases of human papillomavirus(HPV) infection,30 cervical intraepithelial neoplasia(CIN I),43 CIN Ⅱ-Ⅲ,and 24 hysteromyoma and chronic cervicitis were examined by ELISA.Results:The absorbance values of HPV16VLPs-IgG,IgG1 increased with the grade of CIN(P < 0.05).The IgG2 dominance(IgG2/IgG1 ratio > 1) from control group was 100%,87.50% for HPV infection group,75% for CIN I group,compared with that from CIN Ⅱ-Ⅲ patients(9.52%)(P < 0.05).The positive rates and absorbance values of HPV16VLPs-IgG,IgG1 and IgG2 from HPV16-DNA positive group were significantly higher than those from non-HPV16-DNA positive group(P < 0.05).There was a moderate correlation between the HPV16-DNA testing and detection of HPV16VLPs-IgG(r = 0.531,P < 0.05).Conclusion:An increase of the expressions of HPV16VLPs-IgG and its subclasses in the serum of the patients with cervical precancerous lesions,especially those with CIN II-III,might be associated with duration of HPV infection and severity of cervical lesions.An increase of the IgG2 dominance(IgG2/IgG1 > 1) in serum from low grade cervical lesions group and normal control group,might indicate the clearance of HPV infection and the regression of cervical lesions. 展开更多
关键词 cervical intraepithelial neoplasia(CIN) IgG1 and igg2 subclasses ELISA
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小鼠IgG2b单克隆抗体Fab、Fc和Fab/c片段的制备和纯化(文摘)
13
作者 DenignotS. 刘建军 赵洪礼 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第4期29-29,共1页
本文报道了用小鼠IgG2b单克隆抗体制备和纯化Fab、Fc和Fab/c片段。由于IgG2b抗体具有对蛋白酶敏感的特性,用胃蛋白酶在酶与抗体之比为1:30,pH4.8的条件下消化抗体.可获得的Fab/c片段产量高达30%。消化液经DEAE—纤维素初步层析... 本文报道了用小鼠IgG2b单克隆抗体制备和纯化Fab、Fc和Fab/c片段。由于IgG2b抗体具有对蛋白酶敏感的特性,用胃蛋白酶在酶与抗体之比为1:30,pH4.8的条件下消化抗体.可获得的Fab/c片段产量高达30%。消化液经DEAE—纤维素初步层析,可以含有Fc片段的混合液中分离出Fab片段。 展开更多
关键词 igg2b B/C 单克隆抗体 小鼠 纯化 文摘 FAB片段 抗体制备 胃蛋白酶 DEAE Fc片段 B抗体 纤维素 消化液 混合液
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分枝杆菌ESAT-6序列插入DNA疫苗增强鼠抗原特异性IFN-γ和IgG2a应答
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作者 姚娟 《国外医学(预防.诊断.治疗用生物制品分册)》 2004年第2期84-85,共2页
关键词 分枝杆菌 ESAT-6序列插入 DNA疫苗 抗原特异性 IFN—γ igg2A 免疫应答
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毛细管电泳法测定重组人源化IgG2抗体的纯度 被引量:5
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作者 黄碧君 黄艳 +1 位作者 胡红琴 郭占云 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第3期287-293,298,共8页
目的建立利用毛细管电泳法测定重组人源化免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)纯度的方法,并进行优化和验证。方法采用单因素法,对稀释液、碘乙酰胺浓度(非还原条件)、加热方式、进样电压、进样时间、分离电压、样品盘和卡盒温度进行多... 目的建立利用毛细管电泳法测定重组人源化免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)纯度的方法,并进行优化和验证。方法采用单因素法,对稀释液、碘乙酰胺浓度(非还原条件)、加热方式、进样电压、进样时间、分离电压、样品盘和卡盒温度进行多水平优化,并利用优化的方法测定IgG2的纯度。以峰面积对样品加样量进行线性回归,确定该方法的线性范围,并对该方法进行精密度、准确度及溶液稳定性验证。结果最佳电泳条件为:选用超纯水作为稀释液,250 mmol/L碘乙酰胺(非还原条件),70℃干热10 min,进样电压为5 kV,进样时间为30 s,分离电压为15 kV,样品盘和卡盒温度为20℃。在优化的色谱条件下,在还原条件下,IgG2纯度检测的线性范围为50~150μg,相关系数为0.998,重复性的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.14%,中间精密度的RSD为0.24%,且20℃放置13 h稳定;在非还原条件下,IgG2纯度检测的线性范围为50~150μg,相关系数为0.999,重复性的RSD为0.36%,中间精密度的RSD为0.16%,且20℃放置13 h稳定。结论该方法线性关系良好,且精密度、准确度、灵敏度较高,测定结果稳定可靠,适用于重组人源化IgG2的纯度分析。 展开更多
关键词 免疫球蛋白G 纯度 毛细管电泳法
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广州管圆线虫脑膜脑炎患者IgG1、IgG2和IgE的鞘内合成情况
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作者 Dorta-Contreras A.J. Noris-Garca E. +2 位作者 Escobar-Pérez X. Docal B.P. 周永 《世界核心医学期刊文摘(神经病学分册)》 2006年第3期17-17,共1页
Introduction: Angiostrongylus cantonensis meningoencephalitis is an emergent zoonotic disease in the Caribbean basin, characterized by the presence of eosinophils and third stage larva of the helmint. Objective: To an... Introduction: Angiostrongylus cantonensis meningoencephalitis is an emergent zoonotic disease in the Caribbean basin, characterized by the presence of eosinophils and third stage larva of the helmint. Objective: To analyze the IgG subclasses and IgE intrathecal synthesis patterns obtained by reibergrams in pediatric patients suffering from eosinophilic meningoencephalitis due to A. cantonensis. Patients and methods: 20 pediatric patients with the disease were studied. During the first diagnostic lumbar puncture an eosinophilic pleocytosis was found. Simultaneously a serum sample was taken. Eight days later, a second lumbar and venous puncture was performed. IgA, IgM, IgG, albumin in serum and cerebrospinal fluid samples were quantified by immunodiffusion in addition to a differential cel l count in cerebrospinal fluid. IgG subclasses were quantified in 10 patients by immunodiffusion and IgE in four patients by nephelometry. Results: During the first diagnostic lumbar puncture, all the cases had a blood-cerebrospinal fluid barrier dysfunction with absence of immunoglobulins intrathecal synthesis, a mean of 450 cells/μl and an average of 48%of eosinophils. In the second lumbar puncture 40%of the patients had a dysfunction of the blood-cerebrospinal fluid barrier and an intrathecal synthesis pattern of IgA +IgM +IgG in 50%of the patients. Eight patients had an intrathecal IgA +IgG class response. The synthesis pattern of IgG subclasses was IgG1 +IgG2 in six patients, IgG1+IgG2 +IgG3 in one patient, IgG1 +IgG2 +IgG4 in one more patient. Two patients from the seco nd lumbar puncture remained without intrathecal synthesis. IgE intrathecal synthesis was observed in the four analyzed patients in the first diagnostic lumbar puncture. Conclusions: The IgG1 +IgG2 and IgE intrathecal synthesis pattern demonstrated the complexity of the antigenic mosaic of the helmint and it can contribute to diagnosis of eosinophilic meningoencephalitis due to A. cantonensis. 展开更多
关键词 IGG1 IGE igg2 广州管圆线虫 腰椎穿刺 血-脑脊液屏障 散射比浊法 免疫扩散法 脑脊液细
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黄芪皂苷对不同证型C57BL/6小鼠血清IL-2、IL-4、IgG1、IgG2水平的影响 被引量:12
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作者 陈健明 黄健英 +1 位作者 秦璐 黄绮云 《儿科药学杂志》 CAS 2018年第8期1-4,共4页
目的:观察黄芪皂苷对不同证型C57BL/6小鼠血清中白细胞介素(IL)-2、IL-4、Ig G1、Ig G2水平的调节作用,探讨黄芪皂苷的作用机制。方法:将84只C57BL/6小鼠(雌雄各半)随机分为正常组、肺气虚模型组、肺气虚治疗组、脾气虚模型组、脾气虚... 目的:观察黄芪皂苷对不同证型C57BL/6小鼠血清中白细胞介素(IL)-2、IL-4、Ig G1、Ig G2水平的调节作用,探讨黄芪皂苷的作用机制。方法:将84只C57BL/6小鼠(雌雄各半)随机分为正常组、肺气虚模型组、肺气虚治疗组、脾气虚模型组、脾气虚治疗组、肾阳虚模型组、肾阳虚治疗组各12只。除正常组外,其余各组小鼠复制3种不同证型的小鼠模型,分别摘眼球取血,采用ESILA法检测各组小鼠血清中IL-2、IL-4、Ig G1、Ig G2水平。结果:肺气虚治疗组小鼠的IL-2、Ig G1、Ig G2水平高于肺气虚模型组,IL-4水平明显低于肺气虚模型组(P均<0.05);脾气虚治疗组小鼠的IL-2、Ig G1水平高于脾气虚模型组,IL-4水平低于脾气虚模型组(P均<0.05);肾阳虚治疗组小鼠的IL-2水平高于肾阳虚模型组(P<0.05)。结论:黄芪皂苷可调节不同证型小鼠血Ig G1、Ig G2水平,提高小鼠对细菌、病毒等外来病原体的抵抗力,能调节小鼠的IL-2/IL-4平衡,使免疫因子水平朝着更有利于机体状况的方向变化。 展开更多
关键词 黄芪皂苷 白细胞介素2 白细胞介素4 免疫球蛋白G1 免疫球蛋白G2
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血小板糖蛋白Ⅰbα抗体IgG1和IgG2a亚型在诱导血小板清除中的作用
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作者 张赛 夏月 +5 位作者 叶红磊 周康熙 孙成林 陈梦醒 戴克胜 闫荣 《中华血液学杂志》 北大核心 2025年第6期558-563,共6页
目的研究血小板糖蛋白(glycoprotein, GP)Ⅰbα抗体亚型IgG1和IgG2a在诱导血小板清除中的作用。方法取健康志愿者静脉血并分离血小板, 流式细胞术检测抗人GPⅠbα单抗AN51、AK2、HIP1、TM60、VM16d、WM23、SZ2诱导人急性单核细胞白血病... 目的研究血小板糖蛋白(glycoprotein, GP)Ⅰbα抗体亚型IgG1和IgG2a在诱导血小板清除中的作用。方法取健康志愿者静脉血并分离血小板, 流式细胞术检测抗人GPⅠbα单抗AN51、AK2、HIP1、TM60、VM16d、WM23、SZ2诱导人急性单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)吞噬人血小板的情况;流式细胞术检测比较AN51全抗体、F(ab’)2和Fab片段诱导THP-1细胞吞噬血小板的情况;将Fc封闭抗体2.4G2或大鼠IgG2a及IgG1分别通过小鼠眼球后静脉丛注射到C57BL/6J小鼠体内, 血细胞分析仪检测2.4G2、IgG2a和IgG1对抗小鼠血小板GPⅠbα抗体R300引起的小鼠血小板数减少的影响。结果与抗GPⅠbα抗体IgG1亚型相比, IgG2a亚型的抗GPⅠbα抗体(AN51、TM60)诱导THP-1细胞在体外吞噬血小板的作用更加显著(P<0.05)。与AN51全抗体不同, AN51 F(ab’)2和Fab片段均不能诱导THP-1细胞吞噬血小板(P<0.05)。与对照组相比, 注射Fc封闭抗体2.4G2后2、4、6 h时能够减轻R300诱导的血小板减少(P<0.05)。此外, 注射大鼠IgG2a在2、4、6 h时能够减轻R300引起的小鼠体内血小板减少(P<0.05)。结论 IgG2a亚型在抗GPⅠbα抗体诱导的血小板清除中起作用。 展开更多
关键词 血小板糖蛋白Ⅰbα igg2A 血小板减少
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几种方法纯化小鼠腹水IgG2b类单抗的比较 被引量:2
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作者 杨威 李小兵 +7 位作者 刘国文 王哲 孔涛 张燚 刘磊 唐佳佳 李东娜 陈灰 《畜牧与兽医》 北大核心 2011年第1期48-50,共3页
分别采用硫酸铵-蛋白A亲和层析法、改进后的硫酸铵-蛋白A亲和层析法、辛酸-硫酸铵-蛋白A亲和层析法纯化小鼠腹水IgG2b类抗体。经SDS-PAGE和间接ELISA分析纯化产物的纯度及其活性。结果表明:3种方法纯化后的单抗的免疫活性均未降低;纯化... 分别采用硫酸铵-蛋白A亲和层析法、改进后的硫酸铵-蛋白A亲和层析法、辛酸-硫酸铵-蛋白A亲和层析法纯化小鼠腹水IgG2b类抗体。经SDS-PAGE和间接ELISA分析纯化产物的纯度及其活性。结果表明:3种方法纯化后的单抗的免疫活性均未降低;纯化后单抗的亚类为IgG2b;经改进后的硫酸铵-蛋白A亲和层析法纯化制备的IgG2b类抗体纯度可达到87.1%;经辛酸-硫酸铵-蛋白A亲和层析法纯化制备的IgG2b类单克隆抗体纯度可达到100%,是一种制备高纯度小鼠腹水IgG2b类单克隆抗体简便而有效的方法。 展开更多
关键词 单克隆抗体 igg2b 蛋白A亲和层析
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狼疮性肾炎相关自身抗体的致病机制及临床应用进展
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作者 刘峻宏 翟俊斌 +1 位作者 徐士兰 徐学静 《临床检验杂志》 2025年第6期436-439,共4页
系统性红斑狼疮(SLE)是一种复杂的慢性自身免疫病,其中狼疮性肾炎(LN)是常见且严重的脏器受累之一。尽管肾活检仍然是诊断LN的金标准,但有创性限制了其在疾病动态监测中的应用。因此,寻找无创的生物标志物用于LN的早期诊断和疾病活动度... 系统性红斑狼疮(SLE)是一种复杂的慢性自身免疫病,其中狼疮性肾炎(LN)是常见且严重的脏器受累之一。尽管肾活检仍然是诊断LN的金标准,但有创性限制了其在疾病动态监测中的应用。因此,寻找无创的生物标志物用于LN的早期诊断和疾病活动度的动态监测显得尤为重要。该文详细阐述了自身抗体的产生机制及其致病机理,重点介绍了抗核小体组分抗体、抗补体抗体、与中性粒细胞胞外陷阱相关的抗体以及抗α-actinin、抗annexin A1、抗α-enolase等抗体在LN诊断、疾病活动度评估和预后判断中的价值,并阐明了IgG_(2)亚型自身抗体的重要性及多种自身抗体联合应用的优势。通过总结自身抗体的致病机制及其临床应用研究进展,为LN的早期诊断、精准治疗和预后评估提供新的思路和潜在标志物。 展开更多
关键词 狼疮性肾炎 系统性红斑狼疮 自身抗体 生物标志物 igg2
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