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牛IgG Fc受体Ⅱ结合IgG1的Fc线性结合表位鉴定
1
作者 李青梅 杨继飞 +4 位作者 赵东 邢云瑞 范璐 郭军庆 张改平 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第5期1026-1035,共10页
旨在鉴定牛IgG Fc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)上的IgG1 Fc线性结合表位,解析IgG-Fcγ相互作用的分子基础。构建稳定表达boFcγRⅡ转染细胞,在COS-7细胞表面表达boFcγRⅡ分子,利用NS0细胞分泌表达boFcγRⅡ胞外区,以镍亲和层析从小鼠腹水中纯化b... 旨在鉴定牛IgG Fc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)上的IgG1 Fc线性结合表位,解析IgG-Fcγ相互作用的分子基础。构建稳定表达boFcγRⅡ转染细胞,在COS-7细胞表面表达boFcγRⅡ分子,利用NS0细胞分泌表达boFcγRⅡ胞外区,以镍亲和层析从小鼠腹水中纯化boFcγRⅡ重组蛋白。设计合成boFcγRⅡ膜远端胞外域(EC2)多肽,与IgG-free牛血清白蛋白(BSA)偶联,以Dot-blot检测牛IgG1与偶联多肽的结合能力,进一步对IgG结合多肽进行截短和突变分析,鉴定Fc结合表位及其关键氨基酸残基;通过竞争ELISA和玫瑰花环抑制试验测定Fc结合多肽对牛IgG1结合的抑制作用。结果显示,boFcγRⅡ分子在COS-7转染细胞表面稳定表达,其IgG1-RBC玫瑰花环形成率达90%左右;可溶性boFcγRⅡ重组蛋白特异结合牛IgG1。^(122)FYQDRKSKIF^(131)为boFcγRⅡ特异结合牛IgG1的最短多肽,为boFcγRⅡ的Fc线性结合表位,位于受体EC2结构域C-C′环;以Ala分别替换线性表位Phe^(122)、Tyr^(123)、Arg^(126)、Lys^(127)、Ser^(128)、Lys^(129)或Phe^(131)残基均导致该Fc结合表位多肽丧失结合牛IgG的活性,表明这些残基为boFcγRⅡFc线性结合表位的关键氨基酸。Fc结合表位多肽显著抑制牛IgG1与可溶性boFcγRⅡ重组蛋白的结合,其半数抑制浓度(IC_(50))为20.05μmol/L;并有效抑制牛IgG1致敏红细胞在boFcγRⅡ转染细胞的玫瑰花环形成,其IC_(50)为80.15μmol/L。结果表明,boFcγRⅡ存在Fc结合的线性结合表位,该表位多肽具有调节细胞表面boFcγRⅡ与牛IgG1相互作用的能力,为深入理解boFcγRⅡ-IgG相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 牛IgG Fc受体 Fc结合表位 牛igg1 合成多肽 玫瑰花环抑制
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重组嵌合抗CD20 IgG1型单克隆抗体的结构验证 被引量：13
2
作者 陶磊 饶春明 +3 位作者 高凯 史新昌 赵阳 王军志 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期752-755,共4页
本文选择一种重组嵌合抗CD20 IgG1型单抗,应用液质联用仪及N-末端测序仪对其进行结构验证。对该单抗进行还原、烷基化、酶解等处理后,对其氨基酸序列、二硫键配对方式、糖链类型及糖基化位点进行分析测定。结果显示,该单抗轻、重链氨基... 本文选择一种重组嵌合抗CD20 IgG1型单抗,应用液质联用仪及N-末端测序仪对其进行结构验证。对该单抗进行还原、烷基化、酶解等处理后,对其氨基酸序列、二硫键配对方式、糖链类型及糖基化位点进行分析测定。结果显示,该单抗轻、重链氨基酸序列与理论一致。通过液质肽图的解析,对单抗10条二硫键的配对方式进行了验证;通过比较单抗重链切糖前、后的相对分子质量,预测单抗所含糖链类型为岩藻糖化的双触角复杂型N-糖,糖基化位点位于重链的Asn301上。本方法可为该类重组单抗制品的质量控制及其参考品的结构确证提供参考。 展开更多
关键词 抗CD20igg1单克隆抗体 结构验证 高效液相色谱-质谱联用
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感染细粒棘球蚴绵羊诱发过敏性休克期间IgG、IgG1和IgE水平的探讨 被引量：10
3
作者 郑宏 徐志新 +1 位作者 杨戈雄 温浩 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期42-45,共4页
目的　测定感染细粒棘球蚴 (E.g)绵羊诱发过敏性休克期间特异性 Ig G、Ig G1和 Ig E抗体水平。了解抗原B对人工感染 E.g绵羊 Ig G抗体的反应性。　方法　从绵羊 E.g囊液中制备抗原 B和 E.g囊液粗制抗原 ,EL ISA测定感染 E.g绵羊诱发休... 目的　测定感染细粒棘球蚴 (E.g)绵羊诱发过敏性休克期间特异性 Ig G、Ig G1和 Ig E抗体水平。了解抗原B对人工感染 E.g绵羊 Ig G抗体的反应性。　方法　从绵羊 E.g囊液中制备抗原 B和 E.g囊液粗制抗原 ,EL ISA测定感染 E.g绵羊诱发休克期间特异性 Ig G、Ig G1和 Ig E抗体的动态变化。　结果　感染 E.g绵羊 6个月 ,特异性 Ig G、Ig G1和 Ig E抗体水平较正常绵羊显著升高 ;诱发休克后特异性 Ig E抗体水平显著下降 ,尤其因休克致死的绵羊下降更为明显 ;Ig G及 Ig G1抗体的衰减时间不同 ,趋势各不相同 ;抗原 B和 E.g囊液粗制抗原与血清 Ig G抗体反应阳性率分别为 91%、32 %。　结论　特异性 Ig E是导致棘球蚴病所致过敏性休克的主要抗体 ,而 Ig G和 Ig G1抗体也起着重要作用。抗原 B与感染 E.g绵羊 Ig G抗体的血清反应性较好 ,可作为一种血清免疫学诊断方法监测绵羊感染 E.g的状况。 展开更多
关键词 IGG igg1 IgE 细粒棘球蚴病 绵羊 过敏性休克 抗体 抗原B
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TPO模拟肽与人IgG1 Fc片段的融合表达及其生物学特性研究 被引量：6
4
作者 李越希 李朝 +3 位作者 陶开华 贾向红 程度胜 黄培堂 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期424-430,共7页
依据本室获得的人TPO模拟肽序列 ,合成了该模拟肽的DNA序列 ,分别连接至 4种不同长度的人IgG1Fc基因片段的 5′端 ,并克隆至质粒表达载体pET2 8a(+) ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,筛选获得了 4种重组工程菌 ,其中3种分别高效表达了 3种不... 依据本室获得的人TPO模拟肽序列 ,合成了该模拟肽的DNA序列 ,分别连接至 4种不同长度的人IgG1Fc基因片段的 5′端 ,并克隆至质粒表达载体pET2 8a(+) ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,筛选获得了 4种重组工程菌 ,其中3种分别高效表达了 3种不同长度的融合蛋白 ,而第 4种工程菌未表达。表达的 3种融合蛋白的分子量分别约为2 8kD、12kD和 12kD ,表达量约占菌体蛋白总量的 30 %左右 ,纯化获得了 3种TPO模拟肽融合蛋白。 3种融合蛋白均有较好的体外活性 ,维持TPO依赖细胞Ba F3-mp1生长的EC5 0分别为 :13、10、10nmol L。用血小板减少症小鼠动物模型 ,测定了它们的体内活性 ,3种融合蛋白均有升高血小板和缩短血小板恢复时间的功能 ,分别比TPO模拟肽活性提高了 18、8、8倍 ;而对白细胞及红细胞无显著影响。分别用 3种融合蛋白免疫BALB c小鼠 ,均未刺激小鼠产生抗TPO模拟肽抗体 ,并显示了较好的应用潜力。 展开更多
关键词 TPO模拟肽 人igg1Fc片段 融合表达 生物学特性
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CD80-IgG1Fc段融合蛋白真核表达载体的构建及表达 被引量：3
5
作者 李和军 李频 +1 位作者 周小玲 郑祥雄 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期40-42,46,共4页
目的构建人CD80-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并在CHO细胞中进行表达。方法应用T-A克隆技术和亚克隆技术,构建人CD80膜外段-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并将其转染入CHO细胞株... 目的构建人CD80-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并在CHO细胞中进行表达。方法应用T-A克隆技术和亚克隆技术,构建人CD80膜外段-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并将其转染入CHO细胞株并筛选,进行稳定表达。通过Western blot及ELISA法,检测融合蛋白的表达。结果成功地构建了真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcD-NA3.1(+),并建立CHO细胞稳定表达株。Western blot及ELISA法检测到细胞培养上清中有融合蛋白的表达。结论成功地构建了人CD80膜外段-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并在CHO细胞中稳定表达,为下一步抗肿瘤的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 CD80 igg1 FC段 融合蛋白 基因克隆 真核表达
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活化淋巴细胞及其染色质诱导IgG1亚类抗双链DNA抗体生成 被引量：3
6
作者 吴厚生 奚华国 +1 位作者 卢琳 王美英 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第7期291-293,共3页
目的：抗双链ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）抗体的诱生机理不明，试图研究诱导该自身抗体产生的相应自身抗原。方法：取体外活化的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠脾细胞及其染色质免疫同系小鼠，用ＥＬＩＳＡ方法检测ＩｇＧ类抗双链ＤＮＡ抗体及其ＩｇＧ亚类... 目的：抗双链ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）抗体的诱生机理不明，试图研究诱导该自身抗体产生的相应自身抗原。方法：取体外活化的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠脾细胞及其染色质免疫同系小鼠，用ＥＬＩＳＡ方法检测ＩｇＧ类抗双链ＤＮＡ抗体及其ＩｇＧ亚类。结果：不同原因活化的脾细胞及其染色质均可诱导ＩｇＧ类抗双链ＤＮＡ抗体产生，且抗体均为ＩｇＧ１亚类。结论：活化淋巴细胞及其活性染色质是诱导双链ＤＮＡ抗体生成的自身免疫原。 展开更多
关键词 活化淋巴细胞 染色质 双链DNA抗体 igg1亚类
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支气管哮喘患者血清IgG1表达及临床意义 被引量：3
7
作者 王亮朝 耿爽 +1 位作者 王新荣 赵苏 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2016年第1期109-112,共4页
目的:观察IgG1在不同严重程度支气管哮喘患者外周血清中的表达水平,并探讨其与B细胞分化水平及肺功能之间的相关性。方法:观察健康志愿者、哮喘患者及其治疗后外周血清中IgG1水平变化;比较不同严重程度哮喘患者血清中IgG1水平;统计学分... 目的:观察IgG1在不同严重程度支气管哮喘患者外周血清中的表达水平,并探讨其与B细胞分化水平及肺功能之间的相关性。方法:观察健康志愿者、哮喘患者及其治疗后外周血清中IgG1水平变化;比较不同严重程度哮喘患者血清中IgG1水平;统计学分析IgG1与B细胞分化及肺功能指标(FEV1/FVC、FEV1/Pre)之间的相关性。结果:哮喘患血清中IgG1水平显著高于正常对照组(P<0.01),治疗后哮喘患者IgG1水平显著下降(P<0.05);轻度、中度及重度哮喘患者IgG1水平有显著差异;IgG1水平与外周血淋巴细胞中B细胞分化水平存在正相关,与肺功能指标FEV1/FVC、FEV1/Pre均存在负相关。结论:IgG1在哮喘中分泌增加,治疗后下降,可能参与了哮喘B细胞的细胞免疫功能,并可能反映患者气流受限程度及疾病严重程度。 展开更多
关键词 igg1 哮喘 B细胞
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免疫治疗对变应性鼻炎患者鼻分泌物中螨变应原特异性IgG1和IgG4抗体水平的影响 被引量：9
8
作者 肖水芳 王琦环 《中华耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 北大核心 2004年第12期725-729,共5页
目的　检测变应性鼻炎患者和健康人群鼻分泌物中螨变应原特异性IgG1和IgG4抗体水平 ,以了解变应原特异性IgG亚型抗体在人群鼻分泌物中的分布和免疫治疗对抗体浓度的影响。方法　利用负压吸引法收集健康人群、变应性鼻炎未治疗组和免疫... 目的　检测变应性鼻炎患者和健康人群鼻分泌物中螨变应原特异性IgG1和IgG4抗体水平 ,以了解变应原特异性IgG亚型抗体在人群鼻分泌物中的分布和免疫治疗对抗体浓度的影响。方法　利用负压吸引法收集健康人群、变应性鼻炎未治疗组和免疫治疗组患者的鼻分泌物 ,采用间接非竞争生物素 链亲和素酶联免疫法检测鼻分泌物中粗制螨变应原、螨纯化变应原DerfⅠ和DerfⅡ各变应原特异性IgG1和IgG4亚型抗体浓度。结果　变应性鼻炎患者鼻分泌物中螨粗制变应原特异性IgG1和IgG4抗体浓度均高于健康人 (Z =- 3.6 2 3、- 3.0 6 1,P均 <0 .0 1) ;免疫治疗组患者IgG1和IgG4抗体浓度均高于非治疗组 (Z =- 2 4 5 3、- 3 4 0 8,P均 <0 0 1)。免疫治疗组变应性鼻炎患者鼻分泌物中螨纯化变应原DerfⅠ特异性IgG4抗体水平较健康人群增高 (Z =- 3 5 18,P <0 0 1) ;而免疫治疗组DerfⅡ特异性IgG1和IgG4抗体水平均高于健康人 (Z =- 2 36 6、- 2 936 ,P均 <0 0 1)和未治疗组 (Z =- 2 36 6、- 2 937,P均 <0 0 1)。IgG1和IgG4亚群抗体中 ,螨粗制抗原、DerfⅠ和DerfⅡ特异性抗体水平相互间具有相关性 ;三类变应原特异性IgG1和IgG4抗体间存在相关性 ;免疫治疗组患者鼻分泌物中螨粗制变应原IgG1和IgG4抗体与血清中特异性IgE抗体间? 展开更多
关键词 免疫治疗 变应性鼻炎 鼻分泌物 螨变应原特异性 igg1抗体 IgG4抗体
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苗药防感香囊对小鼠呼吸道TLR2/4、SIgA、IgG1的影响 被引量：12
9
作者 张权 孟庆志 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期2905-2906,2908,共3页
目的探讨苗药防感香囊(苗药香囊)对小鼠呼吸道免疫功能影响的分子机制。方法小鼠吸入香囊4周后,定量PCR和免疫印迹法检测小鼠肺组织TLR2、TLR4基因和蛋白表达,ELISA法测肺泡灌洗液SIgA和IgG1含量。结果持续吸入香囊组小鼠肺泡灌洗液中S... 目的探讨苗药防感香囊(苗药香囊)对小鼠呼吸道免疫功能影响的分子机制。方法小鼠吸入香囊4周后,定量PCR和免疫印迹法检测小鼠肺组织TLR2、TLR4基因和蛋白表达,ELISA法测肺泡灌洗液SIgA和IgG1含量。结果持续吸入香囊组小鼠肺泡灌洗液中SIgA、IgG1含量较高,肺组织TLR2/4基因及蛋白表达水平较空白对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05),且与玉屏风散阳性对照组相当(P>0.05)。结论持续吸入香囊能上调小鼠呼吸道SIgA、IgG1、TLR2/4表达,增强呼吸道抵抗力。 展开更多
关键词 苗药防感香囊 玉屏风散 TLR2 4 SIGA igg1
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BP180NC16A-IgG1Fc融合蛋白真核表达体系构建 被引量：3
10
作者 王佩茹 王明悦 +1 位作者 朱学骏 陈喜雪 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2012年第9期797-800,共4页
目的构建BP180NC16A-IgG1Fc融合蛋白的真核表达体系。方法①以逆转录PCR(reverse transcrip-tion-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法从表皮组织提取总RNA中扩增编码人BP180NC16A的cDNA,与包含编码人免疫球蛋白IgG1Fc段恒定区基因... 目的构建BP180NC16A-IgG1Fc融合蛋白的真核表达体系。方法①以逆转录PCR(reverse transcrip-tion-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法从表皮组织提取总RNA中扩增编码人BP180NC16A的cDNA,与包含编码人免疫球蛋白IgG1Fc段恒定区基因的质粒pFUSE-hIgG1e4-Fc2融合,形成重组pFUSE-hIgG1e4-Fc2-BP180NC16A质粒。②重组质粒转染真核HEK293T细胞,48h后收集细胞培养上清。③通过免疫印迹的方法鉴定转染细胞上清中分泌的BP180NC16A-IgG1Fc融合蛋白。结果构建了pFUSE-hIgG1e4-Fc2-BP180NC16A真核表达质粒并在HEK293T细胞成功表达BP180NC16A-IgG1Fc融合蛋白。结论 BP180NC16A-IgG1Fc融合蛋白能够成功真核表达。 展开更多
关键词 BP180NC16A igg1Fc 融合蛋白 真核表达
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TNF-α受体-IgG1 Fc段融合蛋白对感染性休克大鼠的治疗作用 被引量：2
11
作者 王世婷 矫强 +2 位作者 徐芒华 徐旨梅 郭竹英 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期909-912,共4页
目的研究早期应用可溶性肿瘤坏死因子-α受体-IgG1 Fc段融合蛋白(sTNF-αR-Fc)对于感染性休克大鼠的治疗作用及可能的作用机制。方法30只Sprague-Daw ley大鼠随机平均分为对照组(注射生理盐水)、模型组(注射脂多糖)和sTNF-αR-Fc处理组... 目的研究早期应用可溶性肿瘤坏死因子-α受体-IgG1 Fc段融合蛋白(sTNF-αR-Fc)对于感染性休克大鼠的治疗作用及可能的作用机制。方法30只Sprague-Daw ley大鼠随机平均分为对照组(注射生理盐水)、模型组(注射脂多糖)和sTNF-αR-Fc处理组(注射sTNF-αR-Fc和脂多糖)。多道生物信号分析系统监测各组大鼠平均动脉压变化并记录死亡情况;流式细胞仪检测脾细胞中TNF-α水平;RT-PCR检测肝脏及心脏组织TNF-α、IL-6 mRNA的表达水平。结果与对照组相比,模型组TNF-αmRNA表达水平升高,平均动脉压和生存率下降(P<0.05);与模型组相比,sTNF-αR-Fc处理组TNF-α、IL-6水平下降,生存率提高(P<0.05)。结论sTNF-αR-Fc可以显著降低脂多糖所致感染性休克大鼠的死亡率,其可能是通过降低TNF-α水平而起治疗作用。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子-Α 受体-igg1Fc段融合蛋白 肿瘤坏死因子-Α 脂多糖 感染性休克 大鼠
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从IgG1、IgG3亚型分析红细胞意外抗体的临床意义
12
作者 李竹 李丹红 +4 位作者 刘子豪 赵珺 杨程茹 王守梅 丁香 《中国输血杂志》 CAS 2024年第11期1241-1246,共6页
目的探究红细胞意外抗体IgG1、IgG3亚型的临床意义。方法对本院检测出的Rh、Duffy和Kidd 3个血型系统IgG型同种抗体进行IgG1、IgG3分型,同时对其中12例抗-E进行IgG1、IgG3效价测定及单核细胞单层试验,分析抗-E不同IgG亚型的特性。结果11... 目的探究红细胞意外抗体IgG1、IgG3亚型的临床意义。方法对本院检测出的Rh、Duffy和Kidd 3个血型系统IgG型同种抗体进行IgG1、IgG3分型,同时对其中12例抗-E进行IgG1、IgG3效价测定及单核细胞单层试验,分析抗-E不同IgG亚型的特性。结果115例IgG意外抗体中,81例单特异性抗体以IgG1(58.02%,47/81)为主;17例混合抗体以IgG1+IgG3(47.06%,16/34)为主。在单核细胞单层试验中,IgG1和IgG3单独存在的抗体中吞噬率和抗体效价均呈正性相关,而在IgG1+IgG3复合型的抗体中,主要与IgG3相关,其抗体效价越高,吞噬率越高。在抗-E效价均为32时,IgG1+IgG3复合型的吞噬率最高,IgG3单独的吞噬率次之,IgG1单独的最低。结论意外抗体中的单特异性抗体以IgG1为主,混合抗体以IgG1+IgG3为主。MMA结果表明IgG1+IgG3复合型引起的免疫反应更严重。因此当抗-E等抗体合并其他抗体存在时,即使效价低,引起的免疫反应也可能会严重,在临床工作中需要引起足够重视。 展开更多
关键词 意外抗体 IGG亚型 igg1 IGG3 抗体效价 单核细胞单层试验
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人源性胃癌抗体IgG1Fab噬菌体表面展示文库的构建
13
作者 韩者艺 何凤田 +6 位作者 陈宝军 乔泰东 王海燕 韩英 郑建勇 吴开春 樊代明 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第12期1061-1063,共3页
目的　利用噬菌体表面展示技术 ,构建人源性胃癌抗体 Ig G1Fab噬菌体表面展示文库 .方法　从胃癌手术患者胃一级站淋巴结中提取总 RNA,反转录成 c DNA后 ,用PCR扩增人 Ig G1Fd段及κ轻链 ,并克隆至噬菌粒载体p COMB3中 ,转化宿主菌株 XL... 目的　利用噬菌体表面展示技术 ,构建人源性胃癌抗体 Ig G1Fab噬菌体表面展示文库 .方法　从胃癌手术患者胃一级站淋巴结中提取总 RNA,反转录成 c DNA后 ,用PCR扩增人 Ig G1Fd段及κ轻链 ,并克隆至噬菌粒载体p COMB3中 ,转化宿主菌株 XL 1- Blue,以辅助噬菌体M13K0 7超感染噬菌粒文库 ,构建成人源性胃癌抗体 Ig G1Fab噬菌体表面展示文库 .结果　得到一个含克隆数为 1.2× 10 6 ,实际滴度约为 2 .5 6× 10 1 5 pfu· L- 1的 Ig G1Fab片段的噬菌体表面展示文库 .结论　Ig G1Fab片段的噬菌体表面展示文库的成功构建 ,为下一步利用亲和富集筛选技术 。 展开更多
关键词 胃肿瘤 肿瘤 噬菌体 胃癌 igg1Fab 展示文库
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pSLX-CMV/TβRII-IgG1Fc载体的构建
14
作者 高巍 周永兴 +1 位作者 张惠中 聂青和 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2005年第3期230-234,共5页
目的构建表达人TGFβ1II型受体细胞外结合区和人IgG1Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础。方法以RTPCR方法扩增目的基因TβRIIIgG1Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEMTEasy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测... 目的构建表达人TGFβ1II型受体细胞外结合区和人IgG1Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础。方法以RTPCR方法扩增目的基因TβRIIIgG1Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEMTEasy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA技术,将TβRIIIgG1Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pSLXCMV中,重组质粒pSLXCMV/TβRIIIgG1Fc在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度。结果经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定,载体插入基因序列、大小、位置均正确无误,并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系。结论成功构建了重组质粒pSLXCMV/TβRIIIgG1Fc,可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径。 展开更多
关键词 Fc 逆转录病毒载体 RT-PCR方法 重组DNA技术 PA317细胞 病毒滴度测定 基因治疗 肝纤维化 重组质粒 人igg1 TGF-β 脂质体介导 限制性酶切 1型受体 构建表达 融合蛋白 目的基因 产物纯化 酶切鉴定 阳性克隆 包装细胞 抗性克隆
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抗豚鼠IgG1单克隆抗体的制备
15
作者 赵育莹 谭瀞澜 +2 位作者 赵明 王玲 钟学宽 《生物技术》 CAS CSCD 1991年第4期33-35,共3页
本研究应用B淋巴细胞杂交瘤技术,建立了能持续稳地分泌豚鼠IgG1 McAb的杂交瘤细胞株NB_(11)B_6和NB_(11)N_3。两株细胞分泌的单克隆抗体(MeAb)经间接血凝检测效价均达到1:12400以上,本McAb经检测属小鼠IgG_1亚类。该杂交瘤细胞株染色体... 本研究应用B淋巴细胞杂交瘤技术,建立了能持续稳地分泌豚鼠IgG1 McAb的杂交瘤细胞株NB_(11)B_6和NB_(11)N_3。两株细胞分泌的单克隆抗体(MeAb)经间接血凝检测效价均达到1:12400以上,本McAb经检测属小鼠IgG_1亚类。该杂交瘤细胞株染色体的数目为93.12±12.3和103.25±11.2对,经半年的冻存与复苏分泌McAb性能稳定。 展开更多
关键词 单克隆抗体 豚鼠 igg1
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OX40-IgG1融合基因重组表达载体的构建及鉴定
16
作者 付苏 郭树忠 +4 位作者 李立文 夏炜 易成刚 郝晓艳 刘蓓 《中国美容医学》 CAS 2009年第7期960-963,共4页
目的:构建含人OX40-IgG1融合基因的真核表达载体pDC315-OX40Ig,表达具有生物学活性的OX40Ig融合蛋白,为诱导异体复合组织移植免疫耐受的基因治疗作准备。方法:全基因合成目的基因OX40Ig,即人OX40胞外段序列及人IgG1 Fc段序列,将该片段... 目的:构建含人OX40-IgG1融合基因的真核表达载体pDC315-OX40Ig,表达具有生物学活性的OX40Ig融合蛋白,为诱导异体复合组织移植免疫耐受的基因治疗作准备。方法:全基因合成目的基因OX40Ig,即人OX40胞外段序列及人IgG1 Fc段序列,将该片段插入到pUC57(+)载体后,亚克隆至真核表达载体pDC315(+),构建pDC315-OX40Ig重组质粒。构建的重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定后,用脂质体法转染于NI H/3T3细胞。以SDS-PAGE与Western Blotting检测细胞培养上清中OX40I g融合蛋白的表达情况;MTT法观察OX40Ig对混合淋巴细胞反应(MLR)的抑制作用。结果:合成的目的基因全长1320bp,构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定正确。SDS-PAGE与West ern Blotting证实OX40Ig融合蛋白在3T3细胞中实现表达,表达产物相对分子量为48000左右,与理论预期值相符。体外实验证实OX40Ig蛋白能够抑制异基因淋巴细胞的MLR。结论:成功构建了人OX40-IgG1融合基因真核表达载体pDC315-OX40Ig,体外实验证实表达的OX40Ig蛋白可抑制淋巴细胞增殖,为干预同种异体复合组织移植排斥反应奠定了基础。 展开更多
关键词 OX40-igg1 融合基因 真核表达载体
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人IgG1FccDNA的克隆与鉴定
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作者 安云庆 柯岩 陈金栋 《首都医科大学学报》 CAS 2000年第2期93-96,共4页
根据编码人IgG1Fc(Fcγ1 )的基因序列 ,设计合成 1对与之相匹配的引物。采用RT PCR法 ,从正常人白细胞mRNA中扩增获得预期目的基因Fcγ1 70 0bp基因片段 ,成功构建PUC1 8 Fcγ1 70 0 重组克隆载体 ,酶切、酶谱分析与预期结果相符 ;DNA... 根据编码人IgG1Fc(Fcγ1 )的基因序列 ,设计合成 1对与之相匹配的引物。采用RT PCR法 ,从正常人白细胞mRNA中扩增获得预期目的基因Fcγ1 70 0bp基因片段 ,成功构建PUC1 8 Fcγ1 70 0 重组克隆载体 ,酶切、酶谱分析与预期结果相符 ;DNA测序结果与GenBank报道一致。 展开更多
关键词 igg1Fe(Fcγ1) RT-PCR 克隆 鉴定
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新生儿Rh溶血病与IgG1、IgG3相关性分析 被引量：21
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作者 高婉卿 郑必霞 +2 位作者 杨劲 李凌波 孙喜东 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第5期789-792,共4页
目的研究Rh血型系统新生儿溶血病与IgG1、IgG3的相关性。方法研究Rh-HDN患儿64例。新生儿出生后抽取患儿及其母亲外周静脉血,检测患儿母亲Rh系统抗体、患儿IgG亚型以及血清总胆红素、间接胆红素水平,分析患儿不同IgG亚型与其血清总胆红... 目的研究Rh血型系统新生儿溶血病与IgG1、IgG3的相关性。方法研究Rh-HDN患儿64例。新生儿出生后抽取患儿及其母亲外周静脉血,检测患儿母亲Rh系统抗体、患儿IgG亚型以及血清总胆红素、间接胆红素水平,分析患儿不同IgG亚型与其血清总胆红素、间接胆红素水平的相关性,并分析不同Rh系统抗体对患儿血清总胆红素、间接胆红素水平的影响。结果 Rh系统抗-D占65.63%,抗-E(包括Rh-E、Rh-cE)占26.56%,引起新生儿Rh-HDN发病的IgG抗体亚型主要为IgG1(23例,35.94%)、IgG1、3(35例,54.68%)两类。IgG1、3组患儿血清总胆红素、间接胆红素水平明显高于IgG1或IgG3组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示:患儿血清总胆红素、间接胆红素水平与患儿IgG1水平和IgG1、3水平呈显著正相关(P<0.05),与患儿IgG3水平无显著相关性;抗-D组患儿血清总胆红素、间接胆红素水平明显高于非抗-D组(P<0.05)。结论新生儿Rh溶血症患儿黄疸严重程度与IgG水平呈显著正相关,对于疑有Rh溶血症的患儿,进行IgG1或IgG1、3水平的检测,对该类患儿早期治疗有指导意义。 展开更多
关键词 RH血型 新生儿溶血病 igg1 IGG3 抗-D
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CIN患者血清HPV16病毒颗粒IgG1、IgG2亚类抗体变化及临床意义 被引量：2
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作者 韩玲 李海荣 +3 位作者 张秉宜 佐满珍 薛月珍 张军 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期831-835,共5页
背景与目的:免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)是血清和细胞外液中含量最高的免疫球蛋白,其某个亚类的升高,可能与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的发生、发展及转归有密切相关。然而对于CIN患者血清人乳头... 背景与目的:免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)是血清和细胞外液中含量最高的免疫球蛋白,其某个亚类的升高,可能与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的发生、发展及转归有密切相关。然而对于CIN患者血清人乳头瘤病毒样颗粒(human papillomavirus virus-like particles,HPV VLPs)IgG1及IgG2抗体变化目前尚不明确。本研究旨在探讨CIN患者血清中HPV16VLPs-IgG1、IgG2亚类抗体的变化及其与不同级别宫颈病变的关系。方法:采用ELISA法检测HPV感染患者HPV感染患者CIN患者及子宫平滑肌瘤或宫颈炎患者血清中HPV16VLPs-IgG和HPV16VLPs-IgG1、IgG2亚类抗体的表达水平。结果:患者血清中HPV16VLPs-IgG和IgG1抗体含量随宫颈病变级别增高而增加,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、HPV感染组和CINⅠ组中以IgG2抗体为主(IgG2/IgG1>1),分别为100.00%、87.50%和75.00%,而CINⅡ～Ⅲ组中仅为9.52%,与前3组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV16-DNA阳性组的HPV16VLPs-IgG、IgG1、IgG2阳性率及吸光度A值明显高于非HPV16-DNA阳性组,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV16-DNA检测与血清HPV16VLPs-IgG抗体检测之间呈中度相关(r=0.531,P<0.05)。结论:宫颈癌前病变尤其是CINⅡ～Ⅲ患者血清HPV16VLPs-IgG及其亚类表达增高,可能与病毒持续时间、病变严重程度有关;机体感染HPV后,低级别宫颈病变组、对照组血清HPV16VLPs-IgG2抗体表达增高(IgG2/IgG1>1),可能与HPV清除和宫颈病变逆转有关。 展开更多
关键词 宫颈上皮内瘤变 igg1、IgG2亚类 酶联免疫吸附试验
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共价连接β2m的HLA-A2/IgG1二聚体的构建、表达与纯化
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作者 郝娟 段红霞 +4 位作者 李庆 孙伟 钟茂华 翁秀芳 吴雄文 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期1-5,共5页
目的HLA-A2/IgG1二聚体经蛋白A(SPA)亲合层析柱浓缩纯化时容易发生β2 m解离,为了解决这个问题,研究构建与表达β2 m-HLA-A2/IgG1融合蛋白。方法利用基因重组技术构建β2 m-HLA-A2/IgG1融合基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-[β2 m-HLA-A2/I... 目的HLA-A2/IgG1二聚体经蛋白A(SPA)亲合层析柱浓缩纯化时容易发生β2 m解离,为了解决这个问题,研究构建与表达β2 m-HLA-A2/IgG1融合蛋白。方法利用基因重组技术构建β2 m-HLA-A2/IgG1融合基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-[β2 m-HLA-A2/IgG1],将其转染721.221细胞系,筛选高表达β2 m-HLA-A2/IgG1融合蛋白的细胞株;收集细胞培养上清,SPA亲合层析柱浓缩纯化,检测该蛋白的纯化效率。结果β2 m-HLA-A2/IgG1融合基因转染721.221细胞后可表达正确构象的β2 m-HLA-A2/IgG1二聚体,Western blot显示β2 m-HLA-A2/IgG1融合蛋白的分子量与预期大小一致;经SPA亲合层析柱纯化后,β2 m-HLA-A2/IgG1融合蛋白较HLA-A2/IgG1融合蛋白的纯化效率约高5倍。结论共价连接β2 m的HLA-A2二聚体有助于HLA-A2二聚体在低pH值的环境下保持构象完整。 展开更多
关键词 β2m-HLA—A2/igg1融合蛋白 真核表达 亲合层析 构象完整
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