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IgG1类抗IgE Fc单克隆抗体抑制人肥大细胞脱颗粒作用研究
1
作者 周翔鱼 曹羿堃 +4 位作者 李娜 储晨晨 华冰 王佳 张秋丽 《宁夏医学杂志》 CAS 2022年第4期305-307,F0003,共4页
目的探究IgG1类抗IgE Fc单克隆抗体对人肥大细胞脱颗粒作用的影响。方法采用骨髓杂交瘤技术制备IgG1类大鼠抗人IgE Fc单克隆抗体,ELISA法鉴定杂交瘤细胞分泌的特异性抗体亚类;进一步体外培养人LAD2肥大细胞,分别以Compound 48/80、Compo... 目的探究IgG1类抗IgE Fc单克隆抗体对人肥大细胞脱颗粒作用的影响。方法采用骨髓杂交瘤技术制备IgG1类大鼠抗人IgE Fc单克隆抗体,ELISA法鉴定杂交瘤细胞分泌的特异性抗体亚类;进一步体外培养人LAD2肥大细胞,分别以Compound 48/80、Compound 48/80+hum-IgE-Fc、Compound 48/80+anti-IgE-Fc mAb、Compound 48/80+IgE-Fc+anti-IgE-Fc mAb致敏LAD2肥大细胞48 h,Compound 48/80刺激45 min后甲苯胺蓝染色,收各组上清液,用ELISA检测HIS和TPS的释放浓度,Western blot检测各组TPS和CD32b分子表达水平。结果成功制备2株分泌IgG1类Anti-IgE-Fc mAb的杂交瘤细胞株,与对照组相比,Compound 48/80促进LAD2细胞脱颗粒效应,HIS和TPS的释放浓度明显增加(P<0.05),且肥大细胞TPS蛋白表达上调。Compound 48/80+hum-IgE-Fc及Compound 48/80+anti-IgE-Fc mAb组较Compound48/80组LAD2细胞颗粒释放浓度HIS和TPS及CD32b蛋白差异无统计学意义(P>0.05);Compound48/80联合hum-IgE-Fc和anti-IgE-Fc mAb时显著抑制肥大细胞脱颗粒反应,同时肥大细胞TPS蛋白表达下调,表面抑制性分子CD32b表达上调(P<0.05)。结论IgG1类大鼠抗人IgE Fc单克隆抗体在游离IgE-Fc存在时可抑制人肥大细胞脱颗粒,这种作用可能主要由CD32b介导。 展开更多
关键词 人肥大细胞脱颗粒 ige fc抗原 抗ige fc单克隆抗体 CD32b
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人IgE Fc基因的克隆、纯化、真核表达载体的构建及序列测定
2
作者 李雪飞 陆海涛 +5 位作者 刘利君 杨宁 马丽娜 吴景良 牛艳东 段昕所 《现代医学》 2019年第6期631-636,共6页
目的:构建重组质粒pEGFP-N1/IgE Fc,为建立一种以IgE分子Fc段为佐剂的高效安全的抗肿瘤免疫治疗奠定基础。方法:分离急性荨麻疹病人的外周静脉血淋巴细胞,Trizol一步法提取总RNA,甲醛变性琼脂糖凝胶电泳证实所提RNA没有明显降解后,在AM... 目的:构建重组质粒pEGFP-N1/IgE Fc,为建立一种以IgE分子Fc段为佐剂的高效安全的抗肿瘤免疫治疗奠定基础。方法:分离急性荨麻疹病人的外周静脉血淋巴细胞,Trizol一步法提取总RNA,甲醛变性琼脂糖凝胶电泳证实所提RNA没有明显降解后,在AMV逆转录酶作用下进行逆转录反应,Pfu DNA聚合酶作用下进行聚合反应得到目的片断。提取质粒pEGFP-N1,将pEGFP-N1及IgE Fc基因的cDNA分别用限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切,电泳分离,纯化回收试剂盒回收IgE Fc基因cDNA片断和质粒pEGFPN1,T4DNA连接酶连接两片断,连接产物转化感受态细胞Top10,小量提取质粒,限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ初步酶切鉴定,重组质粒送大连宝生物工程有限公司测序。结果:酶切及测序结果表明pEGFP-N1/IgE Fc真核表达质粒构建成功。结论:成功构建重组质粒p EGFP-N1/IgE Fc,为进一步研究其功能及探索新的抗肿瘤方向奠定了基础。 展开更多
关键词 ige分子fc段 真核表达载体 质粒
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靶向IgE重链Fc段潜在拮抗药物筛选及拮抗效果分析
3
作者 唐蕾 王海 +2 位作者 张颖宜 张转铃 黄艳 《中国药业》 2026年第8期38-43,共6页
目的筛选靶向免疫球蛋白E(IgE)重链可结晶(Fc)段的潜在拮抗药物并评价其拮抗效果。方法采用表面等离子体共振(SPR)技术,从美国食品和药物管理局批准的药物库中高通量筛选出与人重组IgE的Fc段(rhIgE-Fc,500、250、125、62.5、31.3 nmol/L... 目的筛选靶向免疫球蛋白E(IgE)重链可结晶(Fc)段的潜在拮抗药物并评价其拮抗效果。方法采用表面等离子体共振(SPR)技术,从美国食品和药物管理局批准的药物库中高通量筛选出与人重组IgE的Fc段(rhIgE-Fc,500、250、125、62.5、31.3 nmol/L)结合的药物。模拟候选药物与rhIgE蛋白的分子对接模型,采用间接竞争性酶联免疫吸附试验法评估不同候选药物对rhIgE的拮抗效果。结果筛选出3个与rhIgE-Fc段蛋白结合力强的药物,分别为穿心莲内酯琥珀酸钾盐、匹维溴铵和硫辛酸,三者结合力与rhIgE-Fc段蛋白浓度呈正相关。分子对接结果显示,3种候选药物均能有效占据rhIgE蛋白的Fc段结合口袋,分子对接结合能分别为-6.0,-5.3,-4.4 kcal/mol;与目前临床常用的IgE单克隆抗体奥马珠单抗(120µg/mL时拮抗rhIgE效果31.57%)相比,达到同等拮抗效果时穿心莲内酯琥珀酸钾盐、匹维溴铵和硫辛酸所需质量浓度分别为86.04,60.86,167.23 ng/mL。结论穿心莲内酯琥珀酸钾盐、匹维溴铵和硫辛酸可作为潜在的IgE拮抗药物应用于急性过敏和慢性炎性变态反应疾病的治疗。 展开更多
关键词 ige fc 高通量筛选 表面等离子体共振 拮抗药物
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过敏煎通过IgE/FcεRⅠ途径抑制肥大细胞脱颗粒改善特应性皮炎的作用机制 被引量：6
4
作者 高娟 陈桂芳 +4 位作者 谭伟 张洁 饶高雄 王睿睿 张祎 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2024年第9期135-140,I0025,I0026,共8页
目的通过体内外实验,研究过敏煎改善特应性皮炎的作用机制。方法采用2,4-二硝基氯苯(2,4-dimethyl sulfoxide,DNCB)反复刺激皮肤建立特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)模型,给予氯雷他定片及过敏煎低、中、高剂量(1.32、2.64、5.28 g/kg... 目的通过体内外实验,研究过敏煎改善特应性皮炎的作用机制。方法采用2,4-二硝基氯苯(2,4-dimethyl sulfoxide,DNCB)反复刺激皮肤建立特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)模型,给予氯雷他定片及过敏煎低、中、高剂量(1.32、2.64、5.28 g/kg)进行干预,ELISA法检测血清总IgE、IL-4、IL-13水平,IHC法测定皮损组织中IL-4、IL-13的表达水平。体外运用anti-DNP-IgE/DNP-HSA诱导RBL-2H3细胞复制脱颗粒模型,MTS法检测过敏煎对RBL-2H3活力,通过ELISA法检测细胞上清中β-hex酶释放率,Histamine、LTB4、IL-4、IL-13水平,RT-PCR法检测细胞Histamine、IL-4、IL-13mRNA表达,Western blotting法检测p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38/p-38蛋白表达。结果与模型组比较,过敏煎各剂量组显著减轻AD小鼠血清总IgE、IL-4、IL-13水平(P<0.05,P<0.01),减轻AD小鼠皮损组织中IL-4、IL-13表达。明显下调RBL-2H3细胞脱颗粒后β-Hex酶释放率(P<0.05,P<0.01)和Histamine、LTB4、IL-4、IL-13水平(P<0.05,P<0.01),显著减少细胞Histamine、IL-4、IL-13mRNA表达(P<0.01)和p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38/p38蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论过敏煎通过调控Th2型反应和血清中总IgE水平改善特应性皮炎,其作用机制可能是通过IgE/FcεRⅠ途径抑制肥大细胞脱颗粒。 展开更多
关键词 过敏煎 特应性皮炎 ige/fcεRⅠ 肥大细胞 脱颗粒
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树鼩IgE高亲和力受体α亚基的原核表达、抗体制备及鉴定
5
作者 张晶晶 肖红剑 +3 位作者 李育中 宫悦 毕研伟 寸韡 《生物技术通讯》 CAS 2018年第5期641-646,722,共7页
目的:原核表达树鼩IgE高亲和力受体α亚基(FcεR1α)并制备抗体,为研究树鼩过敏反应动物模型奠定基础。方法:提取树鼩肝脏及脾脏组织RNA,用巢式PCR法扩增树鼩FcεR1α基因,连接至pMD-19T载体后进行DNA测序,将测序正确的目的片段与表达载... 目的:原核表达树鼩IgE高亲和力受体α亚基(FcεR1α)并制备抗体,为研究树鼩过敏反应动物模型奠定基础。方法:提取树鼩肝脏及脾脏组织RNA,用巢式PCR法扩增树鼩FcεR1α基因,连接至pMD-19T载体后进行DNA测序,将测序正确的目的片段与表达载体pET30a(+)连接,构建重组表达质粒,转入表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化;将纯化的蛋白作为免疫原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;Western印迹检测多克隆抗体的特异性,ELISA检测多克隆抗体的效价。结果:调取了树鼩FCεRIα基因,并将该序列去信号肽的胞外结构(第26~213氨基酸)构建到pET30a(+)载体上,通过IPTG诱导表达并纯化了FCεRIα蛋白,蛋白纯度在90%以上。ELISA效价检测结果表明免疫动物制备的多克隆抗体效价为100000,且该抗体能够检测到真核细胞表达的树鼩IgE FCεRIα蛋白。结论:在大肠杆菌中表达并纯化获得树鼩FcεRIα,免疫动物制备了多克隆抗体。 展开更多
关键词 树鼩 ige高亲和力受体α亚基(fcεR1α) 原核表达 过敏性反应
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G蛋白偶联受体在肥大细胞激活中的作用研究进展 被引量：3
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作者 魏钰倩 苏文星 +5 位作者 季江 王娟娟 赵莹 丁瑜洁 单芳芳 焦晴晴 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期565-569,共5页
G蛋白偶联受体(GPCRs)是人体内最大的表面受体超家族,能够识别周围环境中特定的化学物质并与之结合。肥大细胞(MCs)是变态反应中重要的效应细胞,活化后通过释放细胞因子和炎症介质在变态反应中起关键作用,参与多种疾病的炎症进程。MCs... G蛋白偶联受体(GPCRs)是人体内最大的表面受体超家族,能够识别周围环境中特定的化学物质并与之结合。肥大细胞(MCs)是变态反应中重要的效应细胞,活化后通过释放细胞因子和炎症介质在变态反应中起关键作用,参与多种疾病的炎症进程。MCs的激活包括IgE依赖性和非依赖性两种主要途径,而GPCRs对这两个途径介导的MCs活化都具有调节作用。本文就主要的GPCRs在肥大细胞激活中的作用作一综述。 展开更多
关键词 肥大细胞 G蛋白偶联受体 ige fcεRI 过敏
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