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基于多克隆抗体的糠氨酸ic-ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 杨敏仪 罗雯倩 +2 位作者 贾荣业 刘宇轩 王荣智 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期138-145,共8页
采用甲醛法制备了糠氨酸完全抗原,通过交叉验证确保了多克隆抗体的特异性,从而建立了基于该抗体的糠氨酸间接竞争酶联免疫吸附测定(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)检测方法。结果显示,建立的ic-ELIS... 采用甲醛法制备了糠氨酸完全抗原,通过交叉验证确保了多克隆抗体的特异性,从而建立了基于该抗体的糠氨酸间接竞争酶联免疫吸附测定(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)检测方法。结果显示,建立的ic-ELISA检测方法有效检测范围为12.20~2143.42 ng/mL,最低检测限为2.69 ng/mL。该方法操作简便、迅速,成本低廉,同时具备高灵敏度和优异特异性,为高效检测食品中糠氨酸质量浓度提供了新的选择,具有一定实际应用价值。 展开更多
关键词 糠氨酸 动物免疫 多克隆抗体 ic-elisa
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ic-ELISA法测定不同厂家双黄连口服液中黄芩苷的含量 被引量:4
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作者 赵灵灵 屈会化 +4 位作者 冯盛岚 贺娜娜 成金俊 任雅君 赵琰 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2294-2296,共3页
目的:建立一种快速、灵敏的黄芩苷免疫分析检测方法,并采用该新方法比较不同厂家双黄连口服液中黄芩苷含量的差异。方法:利用黄芩苷单克隆抗体,通过对线性关系、精密度、加样回收率等方法学指标的考察,建立黄芩苷的ic-ELISA分析方法... 目的:建立一种快速、灵敏的黄芩苷免疫分析检测方法,并采用该新方法比较不同厂家双黄连口服液中黄芩苷含量的差异。方法:利用黄芩苷单克隆抗体,通过对线性关系、精密度、加样回收率等方法学指标的考察,建立黄芩苷的ic-ELISA分析方法。结果:该研究建立的线性范围为256~4 096 ng/m L,板间差异不超过8.8%,板内差异最大为3.8%,平均回收率为100.1%(RSD为4.3%)。不同厂家生产的双黄连口服液中黄芩苷含量均符合2010年版中国药典一部规定。结论:该研究所建立的ic-ELISA方法准确、简便、可行,重现性好,为黄芩苷的含量测定提供了一种新方法,且新方法测得不同厂家的双黄连口服液中黄芩苷的含量没有显著差异。 展开更多
关键词 ic-elisa 黄芩苷 含量测定 双黄连口服液
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基于抗大豆苷单克隆抗体的Ic-ELISA方法的建立 被引量:1
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作者 贺娜娜 屈会化 +5 位作者 冯会宾 冯盛岚 赵灵灵 成金俊 任雅君 赵琰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期587-590,共4页
目的:建立大豆苷的快速免疫分析检测方法。方法:该研究通过大豆苷单克隆抗体与葛根素、芦丁等共9种中药小分子的交叉反应证明该抗体具有特异性,并以制备出的大豆苷特异性单克隆抗体为基础,建立了大豆苷间接竞争酶联免疫分析方法(Ic-E... 目的:建立大豆苷的快速免疫分析检测方法。方法:该研究通过大豆苷单克隆抗体与葛根素、芦丁等共9种中药小分子的交叉反应证明该抗体具有特异性,并以制备出的大豆苷特异性单克隆抗体为基础,建立了大豆苷间接竞争酶联免疫分析方法(Ic-ELISA),并用此方法检测大豆中大豆苷的含量。结果:抗体与葛根素的交叉反应率为115%,与芦丁、甘草酸、栀子苷等小分子无交叉反应。该方法线性范围为10~10 000 ng·m L^-1,孔内差和板间差均小于6.3%,平均回收率为105.4%%。采用该方法检测大豆中大豆苷的含量,所得结果与HPLC法的结果一致。结论:该研究建立了大豆苷的Ic-ELISA方法,可为含大豆苷的中药及复方的质量控制分析提供更加快速灵敏的检测方法。 展开更多
关键词 大豆苷 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫分析 大豆异黄酮 ic-elisa法含量测定 快速免疫分析
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糖皮质激素广谱特异性单克隆抗体的制备及其ic-ELISA方法的建立 被引量:5
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作者 姚添淇 劳翠瑜 +2 位作者 王士峰 胡桂平 张世伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第14期186-191,共6页
将氢化可的松半抗原HYD通过活化脂法与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联获得氢化可的松完整抗原KLH-HYD,并对小鼠肌肉注射此抗原,使小鼠免疫;通过杂交瘤技术获得1株能够稳定分泌氢化可的松的单克隆抗体细胞株HYD-C1,... 将氢化可的松半抗原HYD通过活化脂法与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联获得氢化可的松完整抗原KLH-HYD,并对小鼠肌肉注射此抗原,使小鼠免疫;通过杂交瘤技术获得1株能够稳定分泌氢化可的松的单克隆抗体细胞株HYD-C1,并通过腹水制备大量抗体。将氢化可的松半抗原HYD和地塞米松半抗原DEX通过活化脂法分别与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)偶联作为包被原,建立糖皮质激素的间接竞争酶联免疫吸附检测(indirect competitive-enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)方法。结果:在同源包被情况下氢化可的松灵敏度为1.63 ng/mL,异源包被情况下灵敏度为0.24 ng/mL;在交叉抑制实验中,异源策略中的各糖皮质激素灵敏度均高于同源策略中的结果,异源策略条件下很好地覆盖了本研究中所检测的糖皮质激素,使该抗体具备良好的广谱特异性。在异源策略添加回收实验中平均添加回收率在77.5%~111.3%之间,落在合理范围内,满足检测需求。结论:成功制备出氢化可的松单克隆抗体,建立了同源和异源策略糖皮质激素检测方法,结果发现异源策略中糖皮质激素的灵敏度高于同源策略,并使该方法具有更好的广谱特异性。 展开更多
关键词 糖皮质激素 同源策略 异源策略 广谱特异性 间接竞争酶联免疫吸附(ic-elisa)法
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抗噻菌灵单克隆抗体的制备及异源IC-ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 王玉燕 华修德 +2 位作者 钱国良 李刚 刘凤权 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期38-44,共7页
为建立噻菌灵酶免疫检测方法,制备3种噻菌灵的半抗原(H1、H2和H3)。利用活泼酯法制备免疫抗原H1-BSA、H3-BSA和包被抗原H1-OVA、H2-OVA、H3-OVA。采用杂交瘤细胞融合方法获得4株稳定分泌抗噻菌灵单克隆抗体的细胞株,分别命名为1-4G9、1-... 为建立噻菌灵酶免疫检测方法,制备3种噻菌灵的半抗原(H1、H2和H3)。利用活泼酯法制备免疫抗原H1-BSA、H3-BSA和包被抗原H1-OVA、H2-OVA、H3-OVA。采用杂交瘤细胞融合方法获得4株稳定分泌抗噻菌灵单克隆抗体的细胞株,分别命名为1-4G9、1-6D3、3-1F9和3-5D4。采用间接竞争酶联免疫法(IC-ELISA),将上述4株抗体分别与3种包被抗原进行组合,从中选择出一个最优组合:H3-OVA/1-6D3。据此建立的异源IC-ELISA检测方法对噻菌灵的IC50为10.9μg.L-1,检测限(IC10)为2.2μg.L-1,与3种噻菌灵类似物的交叉反应率均小于0.1%;在自来水、苹果、梨的添加回收试验中,IC-ELISA法测定的回收率依次为95.9%~118.1%、90.0%~117.6%、74.9%~95.6%;HPLC法测定的回收率依次为92.7%~97.6%、98.9%~100.9%、91.6%~105.4%,IC-ELISA法与HPLC法测定结果基本一致。上述结果表明:抗噻菌灵单克隆抗体酶免疫检测具有很强的特异性和准确性。 展开更多
关键词 噻菌灵 单克隆抗体 ic-elisa HPLC
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环丙沙星间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测方法的建立 被引量:4
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作者 李岩松 周玉 +1 位作者 谭成成 谭建华 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第8期1480-1481,1512,共3页
目的:建立环丙沙星残留的间接竞争ELISA检测方法。方法:用卵清白蛋白与环丙沙星偶联物做包被抗原,标准环丙沙星做竞争抗原,建立间接竞争ELISA方法,并用数学方法对结果进行了分析。结果:所建立的ELISA检测方法,最低检测限为2.77 ng/ml... 目的:建立环丙沙星残留的间接竞争ELISA检测方法。方法:用卵清白蛋白与环丙沙星偶联物做包被抗原,标准环丙沙星做竞争抗原,建立间接竞争ELISA方法,并用数学方法对结果进行了分析。结果:所建立的ELISA检测方法,最低检测限为2.77 ng/ml,检测范围为2.77~500 ng/ml。曲线回归方程为Y=-36.458X+110.98,相关系数r2=0.9946。结论:该ELISA方法可以用于环丙沙星残留的快速检测。 展开更多
关键词 环丙沙星(CPFX) 间接竞争ELISA 检测方法
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猪肉中2-(三氟甲基)吩噻嗪的Ic-ELISA检测
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作者 刘广兴 韩晓利 +1 位作者 李昳晴 王庭欣 《河北大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2023年第6期638-645,共8页
为了快速检测猪肉中的镇静剂2-(三氟甲基)吩噻嗪(2-(trifluoromethyl)phenothiazine,TFPTZ),分别用偶氮苯甲酸法、混合酸酐法合成了半抗原、完全抗原,通过免疫新西兰大耳白兔获得了多克隆抗体,采用间接竞争酶联免疫方法(Ic-ELISA)对猪肉... 为了快速检测猪肉中的镇静剂2-(三氟甲基)吩噻嗪(2-(trifluoromethyl)phenothiazine,TFPTZ),分别用偶氮苯甲酸法、混合酸酐法合成了半抗原、完全抗原,通过免疫新西兰大耳白兔获得了多克隆抗体,采用间接竞争酶联免疫方法(Ic-ELISA)对猪肉中TFPTZ进行了定量分析,实验条件:包被抗原浓度1.25μg/mL,多克隆抗体稀释16000倍,37℃包被3 h,封闭液为质量分数1%的牛血清白蛋白(BSA),TFPTZ稀释液为含体积分数10%的DMSO的PBS,竞争反应60 min.该方法相关系数R^(2)为0.9991,IC_(50)为1.5002μg/L,最低检测限IC_(10)为0.2841μg/L,线性(IC_(20)~IC_(80))为0.4307~5.2252μg/L,与5种TFPTZ结构类似物的交叉反应率小于1.2%,样品添加回收率为93.26%~109.13%,变异系数小于6%,实际样品检测结果与高效液相色谱法测定结果高度一致,表明建立的快速检测猪肉中TFPTZ的Ic-ELISA方法具有良好的准确度,适用于快速检测猪肉中TFPTZ的残留量. 展开更多
关键词 2-(三氟甲基)吩噻嗪 抗原合成 间接竞争酶联免疫方法(ic-elisa)
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烯酰吗啉人工抗原的合成及其ic-ELISA方法的建立 被引量:2
8
作者 冯荣虎 吴会玲 +2 位作者 王珍妮 张恒 张世伟 《食品科技》 CAS 北大核心 2022年第9期264-270,共7页
目的:旨在建立一种可定量检测果蔬中烯酰吗啉残留的间接竞争酶联免疫吸附检测(Indirect competitive-enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)方法。方法:首先合成烯酰吗啉半抗原,通过活泼酯法与钥孔血蓝蛋白(Keyhole limpet hemoc... 目的:旨在建立一种可定量检测果蔬中烯酰吗啉残留的间接竞争酶联免疫吸附检测(Indirect competitive-enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)方法。方法:首先合成烯酰吗啉半抗原,通过活泼酯法与钥孔血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)及牛血清白蛋白(Bovine albumin,BSA)偶联获得免疫抗原DMM-KLH和包被抗原DMM-BSA;通过杂交瘤技术获得1株能够稳定分泌烯酰吗啉的单克隆抗体细胞株DMM-2C4,并通过腹水制备大量抗体。建立烯酰吗啉的ic-ELISA检测方法。结果:烯酰吗啉IC_(50)为2.05 ng/mL,检测限为0.35 ng/mL,与其他真菌杀菌剂无交叉反应。在果蔬中的添加回收率为68.3%~115.5%。结论:该方法能有效应用于果蔬中烯酰吗啉的快速检测。 展开更多
关键词 烯酰吗啉 间接竞争酶联免疫吸附法(ic-elisa) 人工抗原
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Development of ic-ELISA and colloidal cold-based immunochromatographic assay for red 2G detection in fruit drinks, red wine, and yoghurts
9
作者 Xiaoling Li Xinxin Xu +6 位作者 Lingling Guo Shanshan Song Liqiang Liu Yingyue Zhu Hua Kuang Chuanlai Xu Liguang Xu 《Food Bioscience》 SCIE 2023年第2期865-871,共7页
Red 2G(R2G),a cheap industrial colorant,cannot be added to food.An anti-R2G monoclonal antibody(mAb)was prepared by immunizing mice with the conjugate of R2G hapten and protein,which based on the 1-ethyl-3-(3-dimethyl... Red 2G(R2G),a cheap industrial colorant,cannot be added to food.An anti-R2G monoclonal antibody(mAb)was prepared by immunizing mice with the conjugate of R2G hapten and protein,which based on the 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide(EDC)method.Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay(ic-ELISA)and colloidal gold-based immunochromatographic assay(CG-ICA)methods were used to determine R2G in fruit drinks,red wine,and yoghurts.A standard curve of the developed ic-ELISA showed that the IC50 of the anti-R2G mAb was 1.02 ng/mL,and limit of detection value(LOD)was 0.21 ng/mL.For the CG-ICA developed,the visual limit of detection values(vLOD)were 2 ng/mL and cut-off values of 100 ng/mL in samples.The results indicated that these two methods could be used to quickly detect R2G in fruit drinks,red wine,and yoghurts. 展开更多
关键词 Monoclonal antibody Red 2G ic-elisa HAPTEN Colloidal gold-based immunochromatographic assay
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莫米松糠酸酯高特异性抗体制备及酶联免疫分析方法 被引量:1
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作者 谢桂勉 黄莹星 +1 位作者 林俊虹 张世伟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期126-131,共6页
莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫... 莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫半抗原和包被半抗原。免疫半抗原以活泼脂法连接钥孔血蓝蛋白获得全抗原,通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得能够稳定分泌抗MF单克隆抗体的细胞株,制备并纯化了抗体。该抗体的主要识别区域为MF的五元环区域,因此不和常见的64种糖皮质激素发生交叉反应。建立了基于异源包被的MF间接竞争酶联免疫检测法,其半抑制浓度(IC_(50))为1.2 ng/mL,对肌肉和肝脏的最低检出限分别为0.52μg/kg和0.59μg/kg。灵敏度相比于同源包被提升了20倍。使用60%甲醇水溶液提取动物组织的添加回收率为70%~82%。该方法能有效应用于动物组织中MF的快速筛查。 展开更多
关键词 糖皮质激素 莫米松糠酸酯 单克隆抗体 异源包被 间接竞争酶联免疫检测法(ic-elisa)
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基于酶联免疫分析方法检测畜禽饲料中恩拉霉素 被引量:1
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作者 蔡永辉 王康 +1 位作者 陈敏 王冰清 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期571-576,共6页
本文建立了一种应用于检测畜禽饲料中恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法。采用羰基二咪唑法将生物活性高的恩拉霉素A组分合成的半抗原偶联卵清蛋白,构建检测原;同时将杂交瘤细胞株2H1F91免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别恩拉霉素的单克隆... 本文建立了一种应用于检测畜禽饲料中恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法。采用羰基二咪唑法将生物活性高的恩拉霉素A组分合成的半抗原偶联卵清蛋白,构建检测原;同时将杂交瘤细胞株2H1F91免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别恩拉霉素的单克隆抗体。在此基础上,构建了恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法的标准曲线,该曲线IC_(50)为91.61ng/mL,线性范围为25.73~471.39ng/mL,检出限为13.11ng/mL。猪饲料样品的添加回收率为91.60%~95.75%,鸡饲料的添加回收率为89.33%~94.80%,并且二者的变异系数均低于12%,这表明建立的方法结果可靠,适用于畜禽饲料中恩拉霉素含量的快速检测。 展开更多
关键词 恩拉霉素 单克隆抗体 间接竞争性酶联免疫吸附分析 猪饲料 鸡饲料
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食品中黄曲霉毒素M_(1)的间接竞争酶联免疫法的建立 被引量:2
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作者 侯悦 陈瑞鹏 +3 位作者 芦然 高志贤 周焕英 杨仕平 《食品研究与开发》 CAS 2024年第3期181-186,共6页
该文建立一种间接竞争酶联免疫法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)快速测定食品中黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))的分析方法。AFM_(1)标准品用甲醇稀释,AFM_(1)标准品与AFM_(1)全抗原竞... 该文建立一种间接竞争酶联免疫法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)快速测定食品中黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))的分析方法。AFM_(1)标准品用甲醇稀释,AFM_(1)标准品与AFM_(1)全抗原竞争结合AFM_(1)单克隆抗体,利用3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine,TMB)单组分显色液显色后,酶标仪测定吸光度。在优化好的条件下,浓度范围为9.743~2.605×10^(3)pg/mL时具有良好的线性关系,相关系数(determination coefficient,R^(2))为0.9927,检出限IC_(10)为3.84 pg/mL,加标回收率为88.43%~105.75%。该方法适用性好、操作简单、灵敏度高,满足食品中AFM_(1)分析检测的需求。 展开更多
关键词 间接竞争酶联免疫法 黄曲霉毒素M_(1) 快速检测 食品 试剂盒
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精喹禾灵酶联免疫吸咐分析(ELISA)研究 被引量:9
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作者 曾得意 王鸣华 +1 位作者 施海燕 李波 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期443-449,共7页
【目的】制备精喹禾灵的特异性抗体并建立精喹禾灵的间接竞争ELISA测定方法。【方法】精喹禾灵在碱性条件下水解合成了半抗原精喹禾灵酸,并与载体蛋白BSA和OVA偶联,分别合成了免疫抗原和包被抗原,偶联比分别为29.23和7.87。将Hapten-BS... 【目的】制备精喹禾灵的特异性抗体并建立精喹禾灵的间接竞争ELISA测定方法。【方法】精喹禾灵在碱性条件下水解合成了半抗原精喹禾灵酸,并与载体蛋白BSA和OVA偶联,分别合成了免疫抗原和包被抗原,偶联比分别为29.23和7.87。将Hapten-BSA免疫兔子获得多克隆抗体。【结果】抗血清的效价为200000。经酶联免疫吸附反应分析(ELISA)测定,精喹禾灵的抑制中浓度(IC50)为0.03495μg·ml-1,最低检测浓度(IC10)为0.002μg·ml-1,检测范围为0.002~0.5μg·ml-1。其与结构相似的物质几乎没有交叉反应,表明该方法具有很强的特异性,且在水样中的添加回收率为89.02%~108.88%。【结论】成功获得精喹禾灵特异性抗体并建立了水样中精喹禾灵农药残留的ELISA测定方法。 展开更多
关键词 精喹禾灵 半抗原 多克隆抗体 ic-elisa
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纸质玩具中BPA和BPS化合物的迁移 被引量:2
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作者 葛文亮 吴慧慧 +4 位作者 王领军 徐立伟 匡华 胥传来 刘丽强 《包装工程》 CAS 北大核心 2021年第23期84-91,共8页
目的研究纸质玩具中双酚A(BPA)和双酚S(BPS)经口暴露途径下的迁移规律,并考察BPA和BPS迁移的适用性。方法采用间接酶联免疫(IC-ELISA)检测方法和Fick第二定律研究不同温度(4,37,60℃)、盐浓度(0.001,0.01,0.1 mol/L)、pH(4,7,9)条件下... 目的研究纸质玩具中双酚A(BPA)和双酚S(BPS)经口暴露途径下的迁移规律,并考察BPA和BPS迁移的适用性。方法采用间接酶联免疫(IC-ELISA)检测方法和Fick第二定律研究不同温度(4,37,60℃)、盐浓度(0.001,0.01,0.1 mol/L)、pH(4,7,9)条件下双酚类物质经口暴露下的迁移规律,模拟纸质玩具中BPA和BPS的迁移过程。结果双酚类物质迁移量与温度和盐离子浓度呈正相关,且在酸性和碱性条件的模拟液中溶出增加,纸质玩具中BPA和BPS经口暴露途径下的迁移规律符合Fick第二定律。正常迁移模拟条件下(37℃、盐浓度0.01 mol/L、pH=7的唾液模拟液)测得BPA和BPS的迁移系数分别为1.3×10^(-17),6.6×10^(18)cm^(2)/s。结论基于酶免疫检测方法,构建了纸质玩具中BPA和BPS的迁移模型,并成功应用于预测纸质玩具中双酚类化合物的迁移情况,根据纸质玩具中双酚类物质的迁移模拟实验,计算双酚类物质在不同条件下的扩散系数,并拟合迁移模型,预测盲样中BPA和BPS的迁移情况,与实际迁移情况对比,结果表明理论预测值与实际迁移量基本一致,此项工作对于儿童纸质玩具中双酚类物质的风险性评估具有重要意义。 展开更多
关键词 双酚 ic-elisa FICK第二定律 扩散系数 迁移模型
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双酚A二环氧甘油醚的免疫检测方法研究 被引量:1
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作者 葛文亮 林璐 胥传来 《包装工程》 CAS 北大核心 2019年第23期59-63,共5页
目的快速检测湖水中的双酚A二环氧甘油醚。方法试验设计一种新型双酚A二环氧甘油醚半抗原,并成功与载体蛋白偶联,经过小鼠免疫、细胞融合技术和三次亚克隆等方法,成功筛选出了可以稳定分泌BADGE单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果成功制备... 目的快速检测湖水中的双酚A二环氧甘油醚。方法试验设计一种新型双酚A二环氧甘油醚半抗原,并成功与载体蛋白偶联,经过小鼠免疫、细胞融合技术和三次亚克隆等方法,成功筛选出了可以稳定分泌BADGE单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果成功制备了高灵敏度高特异性的双酚A二环氧甘油醚单克隆抗体,可以用于针对双酚A二环氧甘油醚的间接竞争酶联免疫吸附测定(ic-ELISA)。基于单克隆抗体,绘制了标准曲线,结果显示,单克隆抗体的IC50=1.15 ng/mL,检测线性范围IC20~IC80为0.16~8.15 ng/mL。通过加标回收实验,BADGE在湖水的添加回收率均在80%~120%之间。结论双酚A二环氧甘油醚单克隆抗体在实际湖水样品检测中的运用具有可行性。 展开更多
关键词 双酚A二环氧甘油醚 单克隆抗体 ic-elisa 加标回收
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抗3,4,4'-三氯联苯单克隆抗体的制备及其特性鉴定
16
作者 郑佐娅 杨光昕 +1 位作者 王从朱 庄惠生 《化学试剂》 CAS 北大核心 2015年第7期643-646,共4页
采用含有4个碳原子臂长的PCB37半抗原衍生物合成PCB37全抗原,以人工抗原免疫BALB/C小鼠,通过鼠-鼠杂交瘤技术制备抗PCB37单克隆抗体。建立间接竞争ELISA(ic-ELISA)分析方法,对抗PCB37单克隆抗体的特性进行评估,最终获得了一株能够稳... 采用含有4个碳原子臂长的PCB37半抗原衍生物合成PCB37全抗原,以人工抗原免疫BALB/C小鼠,通过鼠-鼠杂交瘤技术制备抗PCB37单克隆抗体。建立间接竞争ELISA(ic-ELISA)分析方法,对抗PCB37单克隆抗体的特性进行评估,最终获得了一株能够稳定分泌抗PCB37单克隆抗体的细胞株。使用该抗体建立了ic-ELISA,在PCB37浓度为0.10~50μg/L时,抑制率与PCB37的浓度呈线性关系,半数抑制浓度(IC50)为1.23μg/L,最低检测限(IC15)为0.027μg/L,与其他物质的交叉反应率〈5.5%。结果表明,成功研制了抗PCB37单克隆抗体,为进一步建立检测PCB37的免疫分析检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 3 4 4’-三氯联苯 单克隆抗体 ic-elisa
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高灵敏度黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及其在中药材酸枣仁污染快速检测中的应用 被引量:11
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作者 蒋佳伊 张磊 +6 位作者 秦露 骆骄阳 付延伟 秦家安 王长健 欧阳臻 杨美华 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第16期3900-3907,共8页
该研究制备了一种高灵敏度的黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)单克隆抗体并基于该抗体建立间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competition enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA),用于中药材中AFB1污染的高通量、快速筛查,以保障... 该研究制备了一种高灵敏度的黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)单克隆抗体并基于该抗体建立间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competition enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA),用于中药材中AFB1污染的高通量、快速筛查,以保障中药用药安全性。研究中以改进的肟化法修饰AFB1后,用EDC-NHS法偶联载体蛋白获得AFB1完全抗原,更加简便且减少环境污染。并利用加大免疫剂量、多种方式注射等对Balb/c雌鼠进行免疫,最终制备得AFB1单克隆抗体。通过对其免疫特性进行鉴定,结果显示该AFB1单克隆抗体属于IgG2b型免疫球蛋白,其灵敏度(IC50)可达0.15μg·L^-1,亲和力为2.81×108 L·mol^-1,与AFB2,AFG1和AFG2交叉反应率分别为35.07%,8.75%,1.15%,且与其他类真菌毒素几乎不存在交叉反应。基于该高灵敏度、高特异性抗体建立了ic-ELISA法,并用于中药材酸枣仁样品的检测。采用基质匹配的标准曲线进行计算,AFB1在0.05~0.58μg·L^-1线性良好(R^2=0.992),加样回收率为88.00%~119.0%,检测限为1.69μg·kg-^1。采用所建立的方法测定了33批酸枣仁样品中AFB1的污染情况,其污染水平为3.62~206.58μg·kg^-1,其检测结果与UHPLC-MS/MS测定结果的线性相关系数为0.996,并且无假阳性和假阴性情况,表明所建立的ic-ELISA准确、可靠,可为中药材酸枣仁中AFB1污染的快筛提供一种简便、有效的技术手段,同时可为其他中药中AFB1的检测与监控提供参考。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 单克隆抗体 ic-elisa 酸枣仁
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玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA方法的建立 被引量:5
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作者 唐颂 李岩松 +5 位作者 尚翠玲 胡盼 卢士英 任洪林 柳增善 周玉 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第4期300-304,共5页
本研究以玉米面为例,建立了玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法。采用棋盘滴定法确定抗原和单抗的最佳工作浓度,并确定了抗原37℃包被1 h、不封闭、酶催化底物作用时间15 min的反应条件进行检测。该方法的检测范围(IC_(20)~IC_(8... 本研究以玉米面为例,建立了玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法。采用棋盘滴定法确定抗原和单抗的最佳工作浓度,并确定了抗原37℃包被1 h、不封闭、酶催化底物作用时间15 min的反应条件进行检测。该方法的检测范围(IC_(20)~IC_(80))为11~292 pg/mL,检测限(IC_(10))为6 pg/mL。玉米赤霉烯酮在玉米面中的加标回收率为81.29%~105.80%。本研究建立的ic-ELISA方法与赭曲霉素A、黄曲霉素B_(1)、呕吐毒素、伏马毒素B_(1)、T-2毒素无交叉反应,可用于玉米面中玉米赤霉烯酮的初筛检测。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 真菌毒素 检测 间接竞争酶联免疫分析(ic-elisa)
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4-戊基苯酚单克隆抗体的制备及其可变区的同源建模 被引量:2
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作者 成磊 吴海珍 +3 位作者 费静 张鲁嘉 叶江 张惠展 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期390-396,399,共8页
目的制备4-戊基苯酚(4-AP)单克隆抗体(mAb),通过分子生物学方法对其可变区cDNA克隆和同源建模,为4-AP单链抗体制备及抗体分子层面改造奠定基础,同时为4-AP的免疫学检测提供一种新方法。方法将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0细胞融合,筛选出F1... 目的制备4-戊基苯酚(4-AP)单克隆抗体(mAb),通过分子生物学方法对其可变区cDNA克隆和同源建模,为4-AP单链抗体制备及抗体分子层面改造奠定基础,同时为4-AP的免疫学检测提供一种新方法。方法将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0细胞融合,筛选出F10阳性单抗细胞株。通过其mRNA的抽提,克隆出可变区cDNA序列,利用生物软件进行同源建模和分子对接。结果在最适条件下,其间接竞争ELISA(ic-ELISA)公式为y=A_2+(A_1-A_2)/(1+(x/x_0)~p)(A_1=1.28;A_2=-0.07;x_0=12 560.75;p=0.74),相关系数(R^2)为0.997,其最低检测限为0.65μg/mL。mAb重链和轻链分别属于IgG1型和Kappa型,其与4-AP的结合力为氢键和疏水作用。结论成功制备出1株稳定分泌的4-AP mAb的杂交瘤细胞株。通过同源建模对抗体可变区空间结构进行深入研究,为单链抗体及抗体改造提供参考,同时为4-AP含量检测提供新方法。 展开更多
关键词 4-戊基苯酚(4-AP) 单克隆抗体 间接竞争ELISA(ic-elisa) 同源建模 分子对接
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DPPs类有机磷农药宽谱酶联免疫吸附分析方法的建立 被引量:9
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作者 吕丽兰 张娅 +7 位作者 陆覃昱 邹承武 甘志勇 李冬桂 吴静娜 王艺霖 李鑫生 何丽珊 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第11期2659-2666,共8页
【目的】制备识别二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA),为实现农产品有机磷农药残留快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酰氧基)-肉桂酸为半抗原,制备完全... 【目的】制备识别二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA),为实现农产品有机磷农药残留快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酰氧基)-肉桂酸为半抗原,制备完全抗原。筛选免疫小鼠,制备稳定分泌可识别DPPs抗体的单克隆细胞株,筛选出抗原和抗体最佳工作浓度组合,建立该单抗的ic-ELISA标准曲线,并分析该单抗与6种DPPs的交叉反应率,评估ic-ELISA的广谱性。利用所得抗体与喹硫磷交叉反应最强的特性对采购的柑橘和鲜橙样品进行喹硫磷添加回收试验。【结果】成功合成识别DPPs的人工抗原,包括包被抗原DPPs-OVA和免疫抗原DPPs-BSA。通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、广谱性最强的单克隆细胞株5G_(8)。以0.5μg/mL包被抗原DPPs-OVA、1.0μg/mL抗体5G_(8)2D_(5)为最佳工作浓度组合,将细胞株筛选过程中抗体识别率较高的有机磷农药——对硫磷选定为抑制标准物,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC_(50))为41.78 ng/mL,检测范围(IC_(20)~IC_(80))为3.21~239.59 ng/mL;所建立的ic-ELISA与5种DPPs(蝇毒磷、喹硫磷、甲拌磷、甲基对硫磷和倍硫磷)均存在不同程度的交叉反应,其中以喹硫磷的交叉反应率最高,达19.79%。比较ic-ELISA和气相色谱法(GC)对柑橘和鲜橙样品中喹硫磷的添加回收结果发现,ic-ELISA的添加回收率为75.80%~116.12%,GC的添加回收率介于92.5%~115.00%,2种方法的检测结果一致性较好。【结论】建立的ic-ELISA经GC交叉验证准确性较高,可用于快速检测农产品中的喹硫磷残留。 展开更多
关键词 二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs) 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-elisa) 气相色谱法(GC) 农药残留检测
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