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下调lnc-ISG20通过调节miR-20a-5p表达对肝炎所致肝纤维化的抑制作用
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作者 曾龙 高云 +2 位作者 吴玲 刘淮 杨晶 《激光生物学报》 2025年第5期451-458,472,共9页
为评估长链非编码RNA(lncRNA)lnc-ISG20对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肝星状细胞活化的作用,探究沉默lnc-ISG20抗肝纤维化的作用机制,本研究用GEO数据库分析lnc-ISG20在肝纤维化组织和正常肝组织中的表达差异。采用10 ng/mL的TGF-β... 为评估长链非编码RNA(lncRNA)lnc-ISG20对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肝星状细胞活化的作用,探究沉默lnc-ISG20抗肝纤维化的作用机制,本研究用GEO数据库分析lnc-ISG20在肝纤维化组织和正常肝组织中的表达差异。采用10 ng/mL的TGF-β1处理人肝星状细胞LX-2,建立肝纤维化细胞模型,并将其分为sh-NC组和sh-lnc-ISG20组,分别转染sh-NC质粒和sh-lnc-ISG20质粒。利用CCK-8试验检测各组LX-2细胞的生长曲线;利用流式细胞术检测各组LX-2细胞的周期分布和凋亡率;利用双荧光素酶报告试验验证lnc-ISG20与miR-20a-5p的靶向关系;利用GEO数据库分析lnc-ISG20与miR-20a-5p在肝纤维化组织中表达的相关性;利用qRT-PCR检测各组细胞中miR-20a-5p的表达水平;利用Western blotting检测MAPK/NF-κB信号通路蛋白p-P38、p-IκB、p-P65、p-ASK1的表达水平。试验结果表明:与正常肝组织相比,肝纤维化组织中lnc-ISG20表达升高(P<0.01);与sh-NC组相比,sh-lnc-ISG20组LX-2细胞增殖活力降低(P<0.05),细胞周期被阻滞(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.01);miR-20a-5p是lnc-ISG20的靶基因(P<0.01);肝纤维化组织中lnc-ISG20与miR-20a-5p表达呈负相关(P<0.01);与sh-NC组相比,sh-lnc-ISG20组LX-2细胞miR-20a-5p表达升高(P<0.01),MAPK/NF-κB信号通路蛋白p-P38、p-IκB、p-P65、p-ASK1表达均降低(均P<0.01);沉默lnc-ISG20通过升高miR-20a-5p表达,抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞的增殖并促进细胞凋亡。本研究表明,lnc-ISG20有望成为肝纤维化治疗的分子靶标。 展开更多
关键词 肝纤维化 lnc-isg20 miR-20a-5p 肝星状细胞 细胞凋亡
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肉牛ISG20基因编码区的克隆及其在子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达分析
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作者 姚妮 罗仍卓么 +2 位作者 包斌武 杨易 王兴平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第2期184-191,共8页
为探究干扰素刺激外切酶基因20(ISG20)在肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达及功能分析。采用RT-PCR结合测序技术获得肉牛ISG20基因的CDS区,利用生物信息学在线工具进行了ISG20基因及其所编码的蛋白质的序列分析,并利用qRT-PCR检测... 为探究干扰素刺激外切酶基因20(ISG20)在肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达及功能分析。采用RT-PCR结合测序技术获得肉牛ISG20基因的CDS区,利用生物信息学在线工具进行了ISG20基因及其所编码的蛋白质的序列分析,并利用qRT-PCR检测了ISG20基因及其相关基因在肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达量。结果显示,ISG20基因的CDS区长度为516 bp,可编码一条由176个氨基酸组成的无跨膜结构域且不稳定的碱性亲水性单体蛋白质。该蛋白质含有1个DEDD核酸外切酶超家族结构域,与ISG15和MX2等10种蛋白质相互作用,主要在细胞质中发挥作用。此外,qRT-PCR结果表明,与对照组相比,ISG20基因及其相关的ISG15和MX2在孕酮(P4)联合干扰素-tau(IFN-τ)诱导的肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达量均显著上调。ISG20可能参与肉牛子宫内膜上皮细胞容受态的形成,并在早期妊娠等生物学过程中发挥作用。 展开更多
关键词 肉牛 isg20 子宫内膜上皮细胞 细胞容受性 生物信息学分析
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干扰素刺激基因ISG20真核表达载体的构建及其抗丙型肝炎病毒复制作用的研究 被引量:4
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作者 贾因棠 魏来 +2 位作者 蒋栋 丛旭 费然 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期997-1001,共5页
目的研究IFN-α抗HCV的作用机理及了解ISG20是否参与介导IFN-α对HCV的抑制作用。方法用RT-PCR法及融合PCR法分别获得野生型及突变型ISG20cDNA,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1上,转染含HCV复制子的Huh7细胞进行瞬时表达,通过Northern... 目的研究IFN-α抗HCV的作用机理及了解ISG20是否参与介导IFN-α对HCV的抑制作用。方法用RT-PCR法及融合PCR法分别获得野生型及突变型ISG20cDNA,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1上,转染含HCV复制子的Huh7细胞进行瞬时表达,通过Northernblot及Westernblot分别检测HCVRNA及NS5A蛋白水平,研究表达ISG20对HCV复制子的影响。结果构建的野生型及突变型ISG20真核表达载体在mRNA水平及蛋白水平的表达均得到证实,并且发现表达野生型ISG20对HCV复制子RNA有抑制作用。结论成功克隆及表达了ISG20,并对其抗病毒作用进行了初步研究,提示ISG20可能介导IFN-α对HCV的抑制作用。 展开更多
关键词 干扰素 isg20 克隆 表达 丙型肝炎病毒 复制子
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人ISG20基因的克隆、真核表达及其抗HBV效应的初步研究
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作者 郝友华 叶笛 +1 位作者 张正茂 杨东亮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期906-908,913,共4页
目的:克隆、体外真核表达ISG20基因并研究其抗乙肝病毒效应。方法:应用RT-PCR的方法从Hela细胞中扩增ISG20基因,构建HA-ISG20融合蛋白真核表达载体(pHA-ISG20),分别转染HepG2和HepG2·2·15细胞。Western blot检测HA-ISG20融合... 目的:克隆、体外真核表达ISG20基因并研究其抗乙肝病毒效应。方法:应用RT-PCR的方法从Hela细胞中扩增ISG20基因,构建HA-ISG20融合蛋白真核表达载体(pHA-ISG20),分别转染HepG2和HepG2·2·15细胞。Western blot检测HA-ISG20融合蛋白在HepG2细胞中的表达;ELISA方法检测转染和未转染pHA-ISG20的HepG2·2·15细胞中HBs抗原和HBe抗原的表达情况。结果:①克隆了ISG20基因,经测序与Genebank公布序列一致;②HA-ISG20融合蛋白真核表达载体经转染可在HepG2细胞中瞬时表达;③HA-ISG20融合蛋白可抑制HepG2·2·15细胞中HBs抗原和HBe抗原的表达。结论:初步证实ISG20蛋白产物可能具有抗HBV的效应。 展开更多
关键词 isg20基因 抗HBV效应 克隆 真核表达
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X射线对人外周血ISG20L1基因表达的影响 被引量:1
5
作者 马娅 侯殿俊 +6 位作者 李洁清 毛雪松 李卫国 朱伟 方连英 贾喜明 乔建维 《中国辐射卫生》 2019年第6期601-605,共5页
目的研究X射线诱导的人外周血ISG20L1基因表达变化,探究ISG20L1基因作为早期辐射生物标志物的可行性。方法以健康人群外周血作为研究对象,分别用0、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0 Gy X射线照射EDTA抗凝外周血后培养0、4、8、24和48 h后,用RT-... 目的研究X射线诱导的人外周血ISG20L1基因表达变化,探究ISG20L1基因作为早期辐射生物标志物的可行性。方法以健康人群外周血作为研究对象,分别用0、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0 Gy X射线照射EDTA抗凝外周血后培养0、4、8、24和48 h后,用RT-PCR技术检测基因转录水平,分析X射线照射外周血后的ISG20L1基因转录水平与辐射剂量之间的量效关系及时效关系;分析14名健康献血者的本底表达水平,分析基因表达的本底差异性。结果不同剂量照射组与对照组(0 Gy组)的基因表达水平在照射后0 h比较无显著性差异,而对照组样本随着培养时间的延长先下降随后上升,在去除ISG2L1基因的代谢动力学的影响后发现不同剂量点ISG20L1基因转录水平随着照后时间延长表达上调,各个照射剂量点的时间响应良好。分析不同时间点的剂量响应的时候发现,在照后4 h ISG20L1基因随着照射剂量的增加转录水平有所增加,但未能呈现良好剂量效应关系,照射后8 h、12 h和48 h在剂量范围为0~4 Gy时呈现出了良好的剂量效应关系,R2分别为0.9789,0.9083,0.9600,但当照射剂量增大为8 Gy时,ISG20L1基因转录水平反而下降。结论ISG20L1基因在0~4 Gy照射剂量范围内在照射后8 h以后呈现良好的量效关系,具有作为辐射生物标志物的潜力。 展开更多
关键词 isg20L1基因 电离辐射 辐射生物标志物
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ISG20 inhibits bluetongue virus replication 被引量:5
6
作者 Di Kang Shandian Gao +6 位作者 Zhancheng Tian Guorui Zhang Guiquan Guan Guangyuan Liu Jianxun Luo Junzheng Du Hong Yin 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2022年第4期521-530,共10页
ISG20 is an interferon-inducible exonuclease that inhibits virus replication.Although ISG20 is thought to degrade viral RNA,the antiviral mechanism and specificity of ISG20 remain unclear.In this study,the antiviral r... ISG20 is an interferon-inducible exonuclease that inhibits virus replication.Although ISG20 is thought to degrade viral RNA,the antiviral mechanism and specificity of ISG20 remain unclear.In this study,the antiviral role of ovine ISG20(o ISG20)in bluetongue virus(BTV)infection was investigated.It was found that BTV infection upregulated the transcription of ovine ISG20(o ISG20)in a time-and BTV multiplicity of infection(MOI)-dependent manner.Overexpression of o ISG20 suppressed the production of BTV genome,proteins,and virus titer,whereas the knockdown of o ISG20 increased viral replication.o ISG20 was found to co-localize with BTV proteins VP4,VP5,VP6,and NS2,but only directly interacted with VP4.Exonuclease defective o ISG20 significantly decreased the inhibitory effect on BTV replication.In addition,the interaction of mutant o ISG20 and VP4 was weakened,suggesting that binding to VP4 was associated with the inhibition of BTV replication.The present data characterized the anti-BTV effect of o ISG20,and provides a novel clue for further exploring the inhibition mechanism of double-stranded RNA virus by ISG20. 展开更多
关键词 Bluetongue virus(BTV) Interferon-stimulated genes(ISGs) Ovine isg20 Virus replication Antiviral immunity
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Cloning,Eukaryotic Expression of Human ISG20 and Preliminary Study on the Effect of Its Anti-HBV 被引量:3
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作者 郝友华 杨东亮 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2008年第1期11-13,共3页
Human ISG20 gene was cloned and the effect of its anti-HBV was primarily studied. The ISG20 gene was amplified from HeLa cells by RT-PCR and recombinant vector expressing ISG20 was constructed by genetic engineering. ... Human ISG20 gene was cloned and the effect of its anti-HBV was primarily studied. The ISG20 gene was amplified from HeLa cells by RT-PCR and recombinant vector expressing ISG20 was constructed by genetic engineering. The overexpression of ISG20 in HepG2 cells was detected by Western blot and the levels of secretion of HBs antigen and HBe antigen tested by ELISA. The results showed that: (1) Sequence of ISG20 cloned was consistent to that published in Genebank; (2) Recombinant vector expressing ISG20 could be expressed in HepG2 cells by transfection; (3) The overexpression of ISG20 protein could reduce the levels of the secretion of HBs antigen and HBe antigen in transfected HepG2 cells. It was suggested that the overexpression of recombinant ISG20 in culture cells could reduce the synthesis of HBV proteins. 展开更多
关键词 human isg20 effect of anti-HBV
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干扰素刺激基因ISG20抗丙型肝炎病毒的作用研究 被引量:2
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作者 徐华 雷宇 +4 位作者 钟珊 彭凤英 周智 李奎 任红 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期33-37,共5页
目的研究干扰素刺激基因ISG20对HCV的抑制作用及其机制,为探索丙型肝炎新的治疗方法提供依据。方法将含ISG20基因,其无功能突变体ISG20m和相应空白载体的质粒pcDNA3.1瞬时转染Huh7、Huh7.5和HEK293细胞,观察ISG20对HCV单顺反子复制... 目的研究干扰素刺激基因ISG20对HCV的抑制作用及其机制,为探索丙型肝炎新的治疗方法提供依据。方法将含ISG20基因,其无功能突变体ISG20m和相应空白载体的质粒pcDNA3.1瞬时转染Huh7、Huh7.5和HEK293细胞,观察ISG20对HCV单顺反子复制子pSGRm-JFHlblaRL的抑制作用。同时将含ISG20、IsG20m基因和相应空白质粒的逆转录病毒载体pCX4Bsr转染Huh7.5细胞,建立稳定表达该基因的细胞系。将pSGRm-JFHlblaRL复制子转染ISG20细胞系,观察IsG20对该复制子的抑制作用。用细胞培养产生的HCV感染R粥20细胞系,探索其对HCV复制滴度的影响。数据比较用两因素多水平重复测量的方差分析。结果成功构建了稳定表达ISG20及其突变体的细胞系7.5-ISG20、7.5-ISG20m和质粒对照7.5-Bsr,免疫荧光证实ISG20和ISG20m表达于细胞质和细胞核。pSGRm-JFHlblaRLRNA在7.5-ISG20细胞中的复制被严重抑制,在所检测的各个时间点,其复制水平为7.5-ISG20m和7.5一Bsr细胞中的9.1%~16.7%。在Huh7、Huh7.5和HEK293细胞中,瞬时表达的ISG20对HCV复制子RNA也有明显的抑制作用,其复制水平为对照的16.7%~25.0%。HCV在7.5-ISG20细胞中扩增得到相似的结果,在感染后48~72h,HCV在7.5-ISG20细胞上清液中的滴度为7.5-ISG20m和7.5-Bsr细胞中的9.1%~12.5%。Westernblot实验结果显示,7.5-ISG20细胞中HCV杨心蛋白表达也明显减少。结论ISG20无论在瞬时转染的细胞和稳定表达的细胞系中均能抑制HCV复制子复制,并能减少HCV的扩增,这种抑制作用与ISG20的核酸外切酶作用密切相关。 展开更多
关键词 干扰素 肝炎病毒 丙型 复制子 isg20 体外研究
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猪ISG 20基因生物信息学分析及其抗PEDV感染的初步研究
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作者 王梦璐 张志杰 +8 位作者 李之晗 聂晶晶 瞿云芝 张春红 刘志成 沈海燕 张建峰 孙亚妮 李玉谷 《动物医学进展》 北大核心 2024年第10期7-14,共8页
为了研究猪干扰素刺激基因20(interferon-stimulated gene 20,ISG20)的序列信息及其表达情况,并探讨其对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)增殖的影响,以提取的猪小肠上皮细胞IPEC-J2总RNA为模板扩增猪ISG 20基因... 为了研究猪干扰素刺激基因20(interferon-stimulated gene 20,ISG20)的序列信息及其表达情况,并探讨其对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)增殖的影响,以提取的猪小肠上皮细胞IPEC-J2总RNA为模板扩增猪ISG 20基因的CDS区序列,并应用生物信息学进行分析,进而构建pcDNA3.1-3×Flag-ISG20重组质粒转染入IPEC-J2细胞鉴定表达情况。此外,在转染重组质粒的细胞中感染PEDV分析ISG20对PEDV增殖的影响。结果表明,猪ISG 20基因CDS区的大小为516 bp,编码171个氨基酸,理论等电点(pI)为8.84;猪ISG20存在2个N-糖基化位点和23个磷酸化位点,主要定位于细胞骨架和细胞质中,以α-螺旋和无规则卷曲构成;构建的pcDNA3.1-3×Flag-ISG20重组质粒能够在IPEC-J2细胞中表达,蛋白大小约为19.6 ku,而且可以明显抑制PEDV的增殖;克隆了猪ISG 20基因,并且在IPEC-J2细胞中重组质粒pcDNA3.1-3×Flag-ISG20能够表达且发挥抑制PEDV增殖的作用,研究结果为深入探讨PEDV与ISG20的相互作用,以及以此为靶点筛选抗PEDV生物制剂提供了思路。 展开更多
关键词 干扰素刺激基因20 生物信息学分析 真核表达 猪流行性腹泻病毒
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干扰素刺激基因20的研究进展
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作者 沈海燕 王梦璐 +6 位作者 王松祺 聂晶晶 瞿云芝 刘志成 张春红 廖明 张建峰 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第8期121-124,共4页
干扰素刺激基因20(interferon-stimulated gene 20,ISG20)属于DEDDh外切核酸酶家族,具有3′-5′端外切核酸酶活性,能降解RNA和DNA。ISG20在宿主抗病毒天然免疫应答中起着重要作用。此外,ISG20在特定疾病中的作用以及将其作为疾病的生物... 干扰素刺激基因20(interferon-stimulated gene 20,ISG20)属于DEDDh外切核酸酶家族,具有3′-5′端外切核酸酶活性,能降解RNA和DNA。ISG20在宿主抗病毒天然免疫应答中起着重要作用。此外,ISG20在特定疾病中的作用以及将其作为疾病的生物标志物等方面的研究同样具有重要生物学意义。本文综述了ISG20的概况,阐述了近些年来ISG20的抗病毒研究进展及其在疾病标记中的潜在用途,以期为ISG20抗病毒免疫研究和治疗疾病药物的开发提供参考。 展开更多
关键词 干扰素刺激基因20 核酸外切酶 抗病毒机制 生物标志物
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Host Interferon-Stimulated Gene 20 Inhibits Pseudorabies Virus Proliferation 被引量:9
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作者 Xiaoyong Chen Dage Sun +7 位作者 Sujie Dong Huanjie Zhai Ning Kong Hao Zheng Wu Tong Guoxin Li Tongling Shan Guangzhi Tong 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2021年第5期1027-1035,共9页
Host interferon-stimulated gene 20(ISG20)exerts antiviral effects on viruses by degrading viral RNA or by enhancing IFN signaling.Here,we examined the role of ISG20 during pseudorabies virus(PRV)proliferation.We found... Host interferon-stimulated gene 20(ISG20)exerts antiviral effects on viruses by degrading viral RNA or by enhancing IFN signaling.Here,we examined the role of ISG20 during pseudorabies virus(PRV)proliferation.We found that ISG20 modulates PRV replication by enhancing IFN signaling.Further,ISG20 expression was upregulated following PRV infection and poly(I:C)treatment.Ectopic expression of ISG20 inhibited PRV proliferation in PK15 cells,whereas knockdown of ISG20 promoted PRV proliferation.In addition,ISG20 expression upregulated IFN-βexpression and enhanced IFN downstream signaling during PRV infection.Notably,PRV UL24 suppressed the transcription of ISG20,thus antagonizing its antiviral effect.Further domain mapping analysis showed that the N terminus(amino acids 1-90)of UL24 was responsible for the inhibition of ISG20 transcription.Collectively,these findings characterize the role of ISG20 in suppressing PRV replication and increase the understanding of host-PRV interplay. 展开更多
关键词 Interferon-stimulated gene 20(isg20) INTERFERON Pseudorabies virus(PRV) UL24
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基于CRISPR/Cas9系统Ⅰ型干扰素受体亚单位1基因敲除的Caco-2细胞系的构建 被引量:1
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作者 刘欣奕 安妮 +5 位作者 章青 王宏 孔翔羽 王铭月 庞立丽 段招军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期145-150,157,共7页
目的利用成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palinmic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)系统在人结肠腺癌细胞Caco-2中敲除Ⅰ型干扰素受体亚单位1(interferon alpha... 目的利用成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palinmic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)系统在人结肠腺癌细胞Caco-2中敲除Ⅰ型干扰素受体亚单位1(interferon alpha/beta receptor subunit 1,IFNAR1)基因,构建IFNAR1基因敲除Caco-2细胞系。方法利用CRISPR/Cas9技术设计特异性识别IFNAR1基因外显子区的sgRNA(single guide RNA)序列,构建LentiCRISPRv2-IFNAR1-sgRNA重组质粒,慢病毒包装后感染Caco-2细胞,嘌呤霉素抗性筛选,有限稀释法培养单克隆细胞系。通过靶基因测序和Western blot法验证IFNAR1基因敲除情况;通过加入外源性IFNβ检测IFNAR1基因敲除细胞CXC趋化因子配体10(CXC chemokine ligand 10,CXCL10)和干扰素刺激基因20(interferon-stimulatd gene 20,ISG20)mRNA水平。结果质粒LentiCRISPRv2-IFNAR1-sgRNA测序结果显示插入位置均位于BsmBⅠ酶切黏性末端。共获得2株IFNAR1基因敲除单克隆细胞株,测序结果显示Caco-2-IFNAR1-KO1的IFNAR1第6个外显子发生5 bp缺失,Caco-2-IFNAR1-KO2的第7个外显子发生18 bp缺失,同时有1 bp增加。与野生型Caco-2细胞相比,Caco-2-IFNAR1-KO1和Caco-2-IFNAR1-KO2细胞IFNAR1蛋白未见表达。相比于0 ng/mL IFNβ,在50 ng/mL外源IFNβ刺激下,Caco-2-IFNAR1-KO1和Caco-2-IFNAR1-KO2细胞CXCL10基因mRNA水平(t分别为0.566和1.268,P>0.05)和ISG20基因mRNA水平(t分别为1.522和1.733,P>0.05)均无明显升高;与野生型Caco-2细胞相比,在50 ng/mL外源IFNβ刺激下,Caco-2-IFNAR1-KO1和Caco-2-IFNAR1-KO2细胞CXCL10基因mRNA水平(t分别为6.763和6.777,P<0.05)和ISG20基因mRNA水平(t分别为5.664和5.653,P<0.05)均显著降低。结论利用CRISPR/Cas9技术成功获得了IFNAR1基因敲除的Caco-2细胞株,该细胞系依赖Ⅰ型IFN受体(interferon alpha/beta receptor,IFNAR)激活的下游分子被明显抑制,为进一步探讨病毒感染Caco-2细胞后的天然免疫反应及复制包装机制提供了有力的工具。 展开更多
关键词 人结肠腺癌细胞 CRISPR/Cas9系统 Ⅰ型干扰素受体亚单位1基因 基因编辑 干扰素Β CXC趋化因子配体10 干扰素刺激基因20
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