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3种人源宿主限制因子CH25H-IFITM3-ISG15的共表达及抗病毒活性分析
1
作者 蒋嵘 李乐天 +1 位作者 崔春梅 李昌 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第1期53-58,共6页
为探索宿主限制因子(host restriction factors,HRFs)在抗病毒基因药物研发中的应用效果,本研究基于“病毒感染共有通路”及“宿主固有免疫HRFs”,将3种抗病毒HRFs,即胆固醇-25-羟化酶(cholesterol 25-hydroxylase,CH25H)、干扰素诱导... 为探索宿主限制因子(host restriction factors,HRFs)在抗病毒基因药物研发中的应用效果,本研究基于“病毒感染共有通路”及“宿主固有免疫HRFs”,将3种抗病毒HRFs,即胆固醇-25-羟化酶(cholesterol 25-hydroxylase,CH25H)、干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein,IFITM3)、干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15),利用pCK载体进行融合表达,构建抗病毒基因药物。将这3种HRFs的基因编码序列通过裂解肽编码序列连接,构建了融合表达基因序列CH25H-IFITM3-ISG15(CⅡ)。随后,通过PCR扩增CⅡ序列,并将其连接至pCK表达载体上,经转化、鉴定和提取重组质粒,获得了基于DNA表达系统的候选生物药物,命名为pCK-CⅡ。然后,将重组质粒转染至HEK 293T细胞中,通过Western blot成功检测到3种抗病毒蛋白的表达。为明确pCK-CⅡ在细胞水平上的抗病毒作用,将pCK-CⅡ分别转染至HEK 293细胞和BHK-21细胞,24 h后,在BHK-21细胞上接种表达绿色荧光蛋白的水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus expressing green fluorescent protein,VSV-GFP),12 h后在荧光显微镜下观察并进行流式细胞术检测;在HEK 293细胞上接种H3N2亚型流感病毒,12 h后利用Western blot检测H3N2亚型流感病毒核蛋白的表达。结果显示,瞬时转染pCK-CⅡ质粒能显著降低感染细胞的荧光水平和感染细胞中H3N2亚型流感病毒核蛋白的表达。以上结果表明,在细胞水平上,pCK-CⅡ对VSV-GFP和H3N2亚型流感病毒的感染具有抑制作用。 展开更多
关键词 宿主限制因子 CH25H IFITM3 isg15 抗病毒活性
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外泌体中ISG15在卵巢癌铂类药物耐药中的作用及初步机制探讨
2
作者 田亚楠 郑慧 +3 位作者 严天晴 张珩 卢仁泉 郭林 《中国癌症杂志》 北大核心 2025年第4期346-354,共9页
背景与目的:上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)患者预后较差,易对铂类药物产生耐受;目前认为外泌体可能参与卵巢癌铂类药物耐药,本研究主要探讨外泌体对卵巢癌铂类药物耐药的作用及机制。方法:通过超速离心提取外泌体,采用... 背景与目的:上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)患者预后较差,易对铂类药物产生耐受;目前认为外泌体可能参与卵巢癌铂类药物耐药,本研究主要探讨外泌体对卵巢癌铂类药物耐药的作用及机制。方法:通过超速离心提取外泌体,采用电镜、粒径分析和蛋白质印迹法(Western blot)对外泌体表征、外泌体蛋白及相关信号转导通路的表达水平进行检测。通过蛋白质组学对外泌体蛋白表达谱进行分析;通过与已有耐药数据集筛选关键差异蛋白。收集2023年8月—2024年8月在复旦大学附属肿瘤医院经病理学检查诊断为EOC并接受手术治疗符合入组标准的患者,以分析患者血清外泌体中干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)表达水平与铂类药物耐药的关系。通过酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清外泌体中相关蛋白的表达水平,采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)探究血清外泌体蛋白对卵巢癌耐药的预测价值。结果:本研究成功提取源自卵巢癌铂类药物敏感及耐药细胞的外泌体并进行蛋白组学分析,鉴定出9个与铂类药物耐药相关的差异蛋白,筛选出ISG15。与敏感细胞相比,卵巢癌耐药细胞外泌体中ISG15表达水平显著上调;外泌体示踪实验表明,外泌体能够被卵巢癌受体细胞摄取。在与耐药细胞外泌体共培养后,卵巢癌受体细胞ISG15表达水平升高。敲低细胞ISG15,外泌体中ISG15的表达下降;加入下调ISG15的外泌体后,卵巢癌细胞对铂类药物的耐受降低。且ISG15可通过磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/核因子激活的B细胞的κ-轻链增强复合物(nuclear factor-kappalight-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)信号转导通路调控多耐药蛋白1(multidrug resistance protein 1,MDR1)的表达促进卵巢癌细胞对铂类药物耐药。对87例患者血清标本检测结果发现,与卵巢癌敏感患者相比,耐药卵巢癌患者血清外泌体中ISG15表达升高;将血清外泌体ISG15作为区别敏感和耐药的指标绘制ROC的曲线下面积为0.779(P<0.05),Cutoff值为27.35 ng/mL,灵敏度为70.2%,特异度为76.4%。结论:外泌体中的ISG15可以通过PI3K/AKT/NF-κB信号转导通路调节卵巢癌细胞中MDR1的表达,促进卵巢癌细胞对铂类药物耐药。 展开更多
关键词 卵巢癌 外泌体 isg15 铂类药物耐药
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猪源ISG15蛋白通过促进炎症因子释放和巨噬细胞死亡加剧胸膜肺炎放线杆菌感染
3
作者 甘林 文宇 +4 位作者 田岩岩 张开心 李丰阳 雷连成 李娜 《微生物学通报》 北大核心 2025年第2期713-724,共12页
【背景】猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)感染引起的一种呼吸道疾病,该病死亡率可达80%–100%。干扰素刺激基因15(interferon-stimulated genes 15,ISG15)蛋白可抑制病毒的复制,但其在APP... 【背景】猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)感染引起的一种呼吸道疾病,该病死亡率可达80%–100%。干扰素刺激基因15(interferon-stimulated genes 15,ISG15)蛋白可抑制病毒的复制,但其在APP方面的研究尚不清楚。【目的】构建猪源ISG15原核表达载体,纯化ISG15蛋白并研究其对APP感染的影响。【方法】构建pET-28a-ISG15原核表达载体,纯化获得ISG15蛋白。采用流式细胞术和实时荧光定量PCR法检测ISG15蛋白处理后肺泡巨噬细胞死亡情况和炎症因子表达水平。建立APP感染小鼠模型,鼻内给药ISG15后,检测小鼠体重、临床症状及存活情况,分析ISG15对APP致病性的影响。【结果】获得了ISG15蛋白。相较于单独攻菌组,ISG15添加组的肺泡巨噬细胞死亡率、炎症因子IL-6和IFN-γ表达水平均显著升高(P<0.05)。在小鼠试验中,相较于单独攻菌组,中剂量和高剂量ISG15组小鼠的临床症状及死亡率显著上升,肺组织IL-6、IFN-γ和IL-1β表达水平显著增加。【结论】ISG15通过促进肺泡巨噬细胞死亡和炎症因子的释放加剧APP的感染,为APP防治技术的研发提供了理论基础。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 isg15 炎症因子 巨噬细胞
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ISG15基因敲除增加小鼠对脑心肌炎病毒(EMCV)的易感性 被引量：3
4
作者 何文峰 李琛 +4 位作者 李隆熙 董靓靓 杨国庆 常洪涛 刘慧敏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1873-1880,共8页
本试验旨在通过体内、外试验探究干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)的缺失对脑心肌炎病毒(EMCV)易感性的作用。通过ISG15的过表达,分析ISG15对EMCV复制的影响;同时,通过ISG15敲除小鼠进一步验证ISG15对EMCV复制的... 本试验旨在通过体内、外试验探究干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)的缺失对脑心肌炎病毒(EMCV)易感性的作用。通过ISG15的过表达,分析ISG15对EMCV复制的影响;同时,通过ISG15敲除小鼠进一步验证ISG15对EMCV复制的影响。将ISG15敲除小鼠和野生型小鼠分别分为2组,腹腔注射EMCV后每天记录体质量、临床症状和死亡情况,病毒噬斑检测不同组织的病毒滴度;RT-qPCR和ELISA检测细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的转录和表达,HE染色分析不同组织的病理变化。结果表明,ISG15过表达后病毒基因转录水平和病毒滴度显著低于对照组细胞;ISG15敲除小鼠与野生型小鼠相比,死亡率显著提高,脑和心脏的病毒滴度也显著升高;血清中细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达量均高于对照组;ISG15-/-小鼠的心肌细胞出现大面积坏死,脑组织出血严重。ISG15敲除显著增强小鼠对EMCV的易感性,并促进小鼠病毒性脑炎发展。这一发现表明,ISG15在体外和体内均抑制EMCV复制,ISG15基因敲除可以提高对EMCV的敏感性,这些发现为EMCV感染提供了新的宿主细胞免疫治疗靶点。 展开更多
关键词 isg15 脑心肌炎病毒 isg15敲除小鼠 易感性
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泛素样蛋白ISG15抗冠状病毒感染作用的研究进展 被引量：1
5
作者 刘欣然 陈桐 +1 位作者 张煜 陈红 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期748-757,共10页
干扰素刺激基因15(ISG15,interferon-stimulated gene 15)是一种泛素样蛋白,在调节机体天然免疫和抗病毒感染过程中发挥重要作用。ISG15在针对流感病毒、乙型肝炎病毒、HIV病毒、埃博拉病毒、SARS病毒、中东呼吸综合征冠状病毒、巨细胞... 干扰素刺激基因15(ISG15,interferon-stimulated gene 15)是一种泛素样蛋白,在调节机体天然免疫和抗病毒感染过程中发挥重要作用。ISG15在针对流感病毒、乙型肝炎病毒、HIV病毒、埃博拉病毒、SARS病毒、中东呼吸综合征冠状病毒、巨细胞病毒等病毒的抗病毒研究已有文献报道。除此以外,最新的研究表明ISG15分子会在新型冠状病毒的木瓜蛋白酶样蛋白酶的作用下失活,从而抑制其抗病毒功能。因此抑制新型冠状病毒木瓜蛋白酶样蛋白酶,除能直接阻断病毒的生命周期、抑制病毒在体内的复制以外,同时也会提升ISG15分子水平,继而间接提升机体免疫能力,降低感染风险。该文介绍ISG15抗新冠病毒的过程,重点介绍ISG15抗冠状病毒作用的特异性,此外,总结新冠病毒通过木瓜蛋白酶样蛋白酶阻断ISG15介导的天然免疫实现免疫逃避的机制,并罗列了潜在的木瓜蛋白酶样蛋白酶的抑制剂。本文从ISG15抗病毒天然免疫的分子机制角度,总结抗SARS-CoV-2药物的最新进展,并对相关药物的研发前景进行展望。 展开更多
关键词 泛素样蛋白isg15 isg15修饰 木瓜蛋白酶样蛋白酶 冠状病毒
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ISG15蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用 被引量：9
6
作者 姜方配 沈文 +2 位作者 鲁海富 杨文 孙延鸣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期925-928,共4页
为研究重组绵羊ISG15蛋白(rISG15)对感染绵羊肺炎支原体后的盘羊杂交羊的免疫调节效果,本研究将18只盘羊杂交羊随机分为A、B、C 3个组,6只巴什拜羊为D组,全部人工感染绵羊肺炎支原体(CCU=106),感染5 d后A和D组肌肉每天注射生理盐水作为... 为研究重组绵羊ISG15蛋白(rISG15)对感染绵羊肺炎支原体后的盘羊杂交羊的免疫调节效果,本研究将18只盘羊杂交羊随机分为A、B、C 3个组,6只巴什拜羊为D组,全部人工感染绵羊肺炎支原体(CCU=106),感染5 d后A和D组肌肉每天注射生理盐水作为对照组;B和C组每天分别肌肉注射盘羊杂交羊和巴什拜羊的rISG15 200μg/只,并采用荧光定量PCR方法检测试验羊不同时间血液中ISG15、IL-12、IFN-γ的表达水平。结果显示,IFN-γ表达水平在感染第14 d,B组显著高于A、D组(p<0.05),第21 d,B、C组显著高于A、D组(p<0.05);ISG15的表达量在第14 d与21 d,B、C、D组的表达水平显著高于A组(p<0.05);而在此期间,A组的IL-12表达水平显著高于其它各组(p<0.05),但仅A组出现50%的死亡率。实验数据表明rISG15对易感的盘羊杂交羊具有一定的免疫调节效果,为绵羊支原体肺炎防治提供了实验依据。 展开更多
关键词 盘羊杂交羊 isg15 肺炎支原体 实时荧光定量PCR
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猪ISG15基因表达、多态性及其与繁殖性状的关联分析 被引量：4
7
作者 周泉勇 刘晨龙 +3 位作者 季华员 万明春 黄美峰 黄江南 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期662-669,共8页
【目的】明确干扰素刺激基因15(ISG15)在猪不同妊娠时期母胎界面中的表达规律,分析ISG15基因多态位点在中外猪种中的遗传多样性及与繁殖性状的关联性,拟为揭示ISG15基因在猪繁殖功能中发挥的作用提供重要数据。【方法】利用实时荧光定量... 【目的】明确干扰素刺激基因15(ISG15)在猪不同妊娠时期母胎界面中的表达规律,分析ISG15基因多态位点在中外猪种中的遗传多样性及与繁殖性状的关联性,拟为揭示ISG15基因在猪繁殖功能中发挥的作用提供重要数据。【方法】利用实时荧光定量PCR方法检测ISG15基因在大白猪妊娠15,26,50 d子宫内膜和绒毛膜中的表达水平变化,通过测序比对筛选ISG15基因多态位点,采用PCR-RFLP方法检测多态位点在大白、梅山猪、清平猪、通城猪、大花白猪中的遗传多样性,并利用SPSS19.0分析ISG15基因多态位点与繁殖性状的关联性。【结果】ISG15基因在妊娠26 d子宫内膜和绒毛膜组织中表达水平均显著高于妊娠50 d(P<0.01),并于第二外显子中存在一个NM_001128469.3:c.301A>G同义突变位点。该位点在5个猪品种群体中均处于Hardy-Weinberg平衡状态,但在地方猪种中,c.301A>G位点处于低度多态,以AA基因型为主,而在大白群体中,c.301A>G位点则处于中度多态,以AG基因型为主。进一步进行繁殖性状关联分析,结果显示,在大白经产母猪群体中,AA基因型母猪在总产仔数和产活仔数方面均显著高于AG基因型和GG基因型母猪(P<0.05)。【结论】ISG15基因在妊娠早期母胎界面中表达,其c.301A>G位点基因型在中外猪种中呈差异分布,且与产仔数性状显著性相关,暗示ISG15基因可能参与猪产仔数性状的调控。 展开更多
关键词 猪 isg15基因 表达水平 遗传多样性 关联分析
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泛素样蛋白ISG15抗病毒机制研究进展 被引量：3
8
作者 朱紫祥 魏建超 +2 位作者 史子学 吴开宝 马志永 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期78-83,共6页
ISG15(Interferon stimulated gene 15,ISG15)蛋白是由干扰素诱导产生的一种泛素样蛋白分子,分子量大小约为15kD。ISG15同泛素分子相类似可以被共价结合于其他蛋白分子上,这种现象称为ISG化(ISGylation)现象。ISG化系统包括ISG15、UBE1L... ISG15(Interferon stimulated gene 15,ISG15)蛋白是由干扰素诱导产生的一种泛素样蛋白分子,分子量大小约为15kD。ISG15同泛素分子相类似可以被共价结合于其他蛋白分子上,这种现象称为ISG化(ISGylation)现象。ISG化系统包括ISG15、UBE1L、UBCH8和HERC5四类蛋白分子,协同完成ISG化过程。ISG15及ISG化系统在抗病毒反应中具有重要作用。近几年对于ISG15的抗病毒作用和机制的研究已经有了很大的突破,ISG15的抗病毒作用也越来越受到人们重视,了解清楚ISG15抗病毒机制对于研制新的抗病毒药物及提出新的抗病毒策略具有重要意义。本文对ISG15在不同种病毒中的抗病毒机制研究进展进行了简要综述。 展开更多
关键词 isg15 ISG化 抗病毒作用
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ISG15蛋白促进猪源牛病毒性腹泻病毒2型对Ⅰ型IFN表达抑制的研究 被引量：2
9
作者 陶洁 廖金虎 +2 位作者 张倩 张信军 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期716-720,共5页
为研究ISG15蛋白与猪源牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)相互作用关系,本研究通过RT-PCR扩增ISG15基因并克隆于真核表达载体p EC129中,转染于MDBK细胞,经G418筛选获得稳定表达ISG15蛋白的细胞系E53。将猪源BVDV-2分别感染E53细胞和MDBK细胞... 为研究ISG15蛋白与猪源牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)相互作用关系,本研究通过RT-PCR扩增ISG15基因并克隆于真核表达载体p EC129中,转染于MDBK细胞,经G418筛选获得稳定表达ISG15蛋白的细胞系E53。将猪源BVDV-2分别感染E53细胞和MDBK细胞,收集不同时间点的细胞培养液并测定病毒的TCID50。结果显示ISG15蛋白对猪源BVDV-2复制具有明显抑制作用。利用荧光定量PCR检测猪源BVDV-2感染E53细胞内ISG15基因表达的变化,结果表明,病毒感染的E53细胞内ISG15基因的表达量明显高于对照组,表明猪源BVDV-2感染能够显著提高ISG15基因的表达。此外,利用荧光定量PCR检测经poly I:C处理后感染SH-28株的MDBK和E53细胞内IFN-α和IFN-β表达情况。结果表明MDBK细胞内IFN-α和IFN-β表达量分别下降约2.49倍和3.31倍,而在E53细胞中,IFN-α和IFN-β的表达量分别下降约6.29倍和9.71倍,表明过量表达ISG15蛋白能够促进猪源BVDV-2对Ⅰ型IFN的抑制作用。本实验为进一步研究猪源BVDV-2逃逸细胞先天免疫机制奠定了基础。 展开更多
关键词 isg15蛋白 猪源BVDV-2 I型干扰素
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绵羊ISG15基因的克隆表达与纯化 被引量：3
10
作者 崔茹鹏 沈文 +1 位作者 鲁海富 孙延鸣 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第1期39-42,共4页
为了克隆并表达绵羊ISG15,且对其表达产物进行纯化,首先从绵羊外周血单核细胞(PBMC)中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增出ISG15的基因;再通过基因克隆技术,构建ISG15在pET28a中的重组表达质粒pET28a-ISG15,在大肠杆菌BL... 为了克隆并表达绵羊ISG15,且对其表达产物进行纯化,首先从绵羊外周血单核细胞(PBMC)中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增出ISG15的基因;再通过基因克隆技术,构建ISG15在pET28a中的重组表达质粒pET28a-ISG15,在大肠杆菌BL21(DE3)用IPTG进行诱导表达,得到ISG15的原核表达蛋白;最后采用Ni 2+-NTA亲和层析方法纯化目的蛋白。结果显示:克隆的绵羊ISG15基因序列长度为541bp,编码157个氨基酸。重组表达产物通过SDS-PAGE可检测到相对分子质量为25ku的重组蛋白,且表达的目的蛋白能被Ni 2+-NTA亲和层析方法所纯化。该研究为后续深入研究绵羊ISG15奠定基础。 展开更多
关键词 绵羊 isg15基因 克隆 表达
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新疆野生盘羊ISG15基因的克隆表达 被引量：1
11
作者 鲁海富 沈文 +4 位作者 刘恺 崔茹鹏 杨文 姜方配 孙延鸣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1023-1029,共7页
本研究旨在克隆表达新疆野生盘羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。首先,利用RT-PCR和RACE技术克隆盘羊ISG15基因的cDNA全长序列,再将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni 2+螯合... 本研究旨在克隆表达新疆野生盘羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。首先,利用RT-PCR和RACE技术克隆盘羊ISG15基因的cDNA全长序列,再将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni 2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,最后通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明:克隆得到的新疆野生盘羊ISG15基因cDNA全长为642bp,开放阅读框为474bp,编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33ku,表达的蛋白可用Ni 2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性。 展开更多
关键词 野生盘羊 isg15 克隆表达 活性检测
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乌鳢(Channa argus)干扰素刺激基因Viperin和ISG15及其启动子的克隆与特征分析 被引量：3
12
作者 贾伟章 周秀霞 +1 位作者 黄容 郭琼林 《自然科学进展》 北大核心 2007年第11期1481-1491,共11页
应用抑制差减杂交、末端快速扩增和基因步移技术,克隆并鉴定了乌鳢干扰素刺激基因Viperin和ISG15及其启动子序列.Viperin cDNA全长1474nt,包含1059nt的开放阅读框,编码352个氨基酸.除N末端70个氨基酸外,Viperin蛋白氨基酸序列在鱼类和... 应用抑制差减杂交、末端快速扩增和基因步移技术,克隆并鉴定了乌鳢干扰素刺激基因Viperin和ISG15及其启动子序列.Viperin cDNA全长1474nt,包含1059nt的开放阅读框,编码352个氨基酸.除N末端70个氨基酸外,Viperin蛋白氨基酸序列在鱼类和哺乳类具有高度的保守性.ISG15 cDNA全长758nt,包含468nt的开放阅读框,编码155个氨基酸,含有两个泛素样(UBL)结构域,C末端具有保守的UB偶联结构(LRGG).Viperin和ISG15启动子区存在保守的干扰素刺激反应元件(ISRE)和γ-干扰素激活序列(GAS).ISRE是干扰素刺激基因启动子区的重要特征,并与干扰素调控因子(IRF)1和IRF2的识别序列(IRF-E)部分重复;GAS参与介导II型干扰素激活基因的诱导转录.Viperin启动子区还包含保守的NF-κB结合位点,这是保守的NF-κB结合位点以一致的序列模式(GGGRNNYYCC)出现在鱼类干扰素刺激基因启动子区的首次报道.此外,Viperin和ISG15启动子尚存在TATA,CAAT,Sp1等转录因子结合位点.乌鳢ISG15基因5′非编码区含有单一的内含子,而Viperin基因5′非编码区未发现内含子.Viperin和ISG15mRNA主要表达在头肾、后肾、脾脏和鳃,肝脏中也有少量表达.体内干扰素诱导剂polyI:C刺激后,Viperin和ISG15基因在肝脏的表达水平明显增加. 展开更多
关键词 干扰素 干扰素刺激基因(ISG) Viperin isg15 乌鳢
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猪ISG15基因的克隆表达与多克隆抗体的制备 被引量：1
13
作者 李双双 李新果 +6 位作者 石昂 时庆贺 杨利 王玉国 陈陆 李永涛 王川庆 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期375-380,共6页
本研究从家猪外周血淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR克隆出家猪ISG 15基因,经测序和序列分析,将ISG 15片段与p ET28a质粒连接,构建重组原核表达载体p ET28a-ISG15;经IPTG诱导表达后,通过Ni柱纯化,以获得ISG15蛋白。用纯化的ISG15蛋白免... 本研究从家猪外周血淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR克隆出家猪ISG 15基因,经测序和序列分析,将ISG 15片段与p ET28a质粒连接,构建重组原核表达载体p ET28a-ISG15;经IPTG诱导表达后,通过Ni柱纯化,以获得ISG15蛋白。用纯化的ISG15蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果显示,家猪ISG 15基因CD S区长504 bp,编码167个氨基酸,包括两个泛素样结构域(N端第3~75位和C端第81~156位氨基酸肽段)及C末端保守序列为LRLRGG;W estern-blot分析表明重组ISG15蛋白的免疫原性良好;经ELISA测定血清中抗体的效价为1∶102 400。上述研究结果为进一步揭示家猪ISG15蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪 isg15基因 蛋白表达 多克隆抗体
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HIV-1感染上调细胞系中泛素样蛋白ISG15表达 被引量：1
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作者 吴还梅 孙俊 +2 位作者 孟哲峰 张晓燕 徐建青 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期480-487,共8页
利用体外细胞感染模型,分别检测HIV-1感染的细胞系中转录和翻译水平ISG15的表达及细胞上清中p24蛋白水平,探讨HIV-1感染对ISG15表达的影响及后者对前者的抑制效应。6种HIV-1易感细胞系中,以IFN-α 2b刺激作为阳性对照,利用HIV-1感染性克... 利用体外细胞感染模型,分别检测HIV-1感染的细胞系中转录和翻译水平ISG15的表达及细胞上清中p24蛋白水平,探讨HIV-1感染对ISG15表达的影响及后者对前者的抑制效应。6种HIV-1易感细胞系中,以IFN-α 2b刺激作为阳性对照,利用HIV-1感染性克隆pNL4-3转染293T、TZM-bl和HeLa细胞;HIV-1假病毒感染Jurkat、MT-4和THP-1细胞,24h收细胞提取RNA,利用荧光定量PCR(qPCR)的方法检测转录水平ISG15的表达情况。48h后收细胞提取总蛋白,Western blot检测蛋白水平ISG15的表达情况。HIV-1感染或转染后明显上调ISG15转录水平,且THP-1和TZM-bl细胞中上调尤为显著。但除了TZM-bl细胞,其他5种细胞系中没有表现出ISG15蛋白水平的上调。ISG15真核表达质粒与HIV-1感染性克隆pNL4-3共转染结果显示,293T细胞中ISG15能直接抑制HIV-1子代病毒颗粒的产生和成熟,并且这种抑制作用具有时间剂量依赖性;TZM-bl中虽然也有显著的抑制作用,但是趋势不同。HIV-1感染明显上调ISG15转录但却无ISG15蛋白产生,预示该病毒能对抗固有免疫细胞的识别活化及其效应功能,具体机制还有待进一步阐明。 展开更多
关键词 HIV一1 isg15 感染
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巴什拜羊ISG15基因的克隆与序列分析 被引量：1
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作者 崔茹鹏 沈文 +1 位作者 鲁海富 孙延鸣 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期93-97,共5页
本研究旨在了解新疆巴氏拜羊类泛素蛋白ISG15基因的序列特征。采集巴什拜羊外周血液,从中分离得到淋巴细胞并提取RNA,设计特异性引物进行RT-PCR,克隆出巴什拜羊ISG15基因序列,回收PCR产物与pMD18-T载体连接后转化DH5α,检测阳性克隆、... 本研究旨在了解新疆巴氏拜羊类泛素蛋白ISG15基因的序列特征。采集巴什拜羊外周血液,从中分离得到淋巴细胞并提取RNA,设计特异性引物进行RT-PCR,克隆出巴什拜羊ISG15基因序列,回收PCR产物与pMD18-T载体连接后转化DH5α,检测阳性克隆、测序并进行序列分析。结果表明,克隆的巴什拜羊ISG15基因编码区全长为522bp,编码172个氨基酸。BLAST结果表明,巴什拜羊ISG15基因与绵羊、山羊、小尾寒羊、水牛、牛和野猪的ISG15基因序列同源性分别为99%、98%、95%、94%、94%和82%。构建基因进化树分析结果显示,巴什拜羊与绵羊先聚为一类,再与小尾寒羊聚为一类,然后和牛聚为一类。该聚类结果与生物学上的分类一致。 展开更多
关键词 巴什拜羊 isg15基因 克隆 序列分析
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新疆巴什拜羊ISG15基因的克隆表达及活性检测 被引量：1
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作者 鲁海富 沈文 +3 位作者 崔茹鹏 杨文 姜方配 孙延鸣 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第7期26-29,共4页
克隆表达新疆巴什拜羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。利用RT-PCR和RACE技术克隆了巴什拜羊ISG15基因的cDNA全长序列,将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni2+螯合亲和层析法对... 克隆表达新疆巴什拜羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。利用RT-PCR和RACE技术克隆了巴什拜羊ISG15基因的cDNA全长序列,将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明:克隆得到的巴什拜羊ISG15基因cDNA全长为646 bp,开放阅读框为474 bp,编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33 ku,表达的蛋白可用Ni2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性。 展开更多
关键词 巴什拜羊 isg15 克隆表达 活性检测
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鞍带石斑鱼isg15基因cDNA克隆及其在虹彩病毒感染下的表达分析 被引量：1
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作者 马腾 王磊 +5 位作者 赵玉柱 吴垚磊 周茜 陈张帆 朱春华 陈松林 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2021年第5期31-39,共9页
本研究利用PCR和RACE技术首次获得了鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)干扰素刺激基因15(interferon stimulated gene 15,isg15)全长序列。isg15基因序列长为910 bp,包含一个468 bp的开放阅读框,可编码155个氨基酸,预测分子量为17.09... 本研究利用PCR和RACE技术首次获得了鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)干扰素刺激基因15(interferon stimulated gene 15,isg15)全长序列。isg15基因序列长为910 bp,包含一个468 bp的开放阅读框,可编码155个氨基酸,预测分子量为17.09 kDa,理论等电点为9.33。保守结构域分析显示,鞍带石斑鱼ISG15蛋白包含2个类似泛素结构域,且C末端具有高度保守的“Leu Arg Leu Arg Gly Gly(LRLRGG)”结构域。序列分析和系统发育分析显示,鞍带石斑鱼与斜带石斑鱼(E.coioides)isg15的相似性最高,为88.24%,与大菱鲆(Scophthalmus maximus)和大黄鱼(Larimichthys crocea)isg15的相似性分别为61.18%和60.59%。采用实时荧光定量PCR技术检测了鞍带石斑鱼健康组织中的isg15表达,以及虹彩病毒(iridovirus)感染后不同时间脾脏和肾脏中的isg15表达变化。结果显示,isg15在血液中的表达量最高,在肝脏、肾脏等组织中的表达量较高。经虹彩病毒感染后,isg15在脾脏和肾脏中的表达显著升高,在72 h到达最高水平,说明isg15在鞍带石斑鱼防御虹彩病毒的过程中发挥着重要作用。对鞍带石斑鱼isg15基因的分析和表达模式的研究,有助于进一步了解isg15基因在硬骨鱼体内的抗病毒调控机制,为鞍带石斑鱼抗病分子育种提供基础数据。 展开更多
关键词 鞍带石斑鱼 虹彩病毒 isg15 抗病毒功能基因 免疫反应
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ISG15蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义 被引量：1
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作者 王军武 夏天 伍晓汀 《西南国防医药》 CAS 2016年第9期988-991,共4页
目的研究ISG15蛋白在乳腺癌中的表达及其与临床病理参数的相关性和临床意义。方法收集105例手术切除的乳腺癌组织标本,采用Envision免疫组化法检测ISG15蛋白的表达,并进行组织评分,统计分析ISG15表达水平与患者临床病理参数的相关性。结... 目的研究ISG15蛋白在乳腺癌中的表达及其与临床病理参数的相关性和临床意义。方法收集105例手术切除的乳腺癌组织标本,采用Envision免疫组化法检测ISG15蛋白的表达,并进行组织评分,统计分析ISG15表达水平与患者临床病理参数的相关性。结果 ISG15蛋白在乳腺癌组织中呈高表达,免疫组化评分为5.17±1.07;其中Basal-like型"三阴性"乳腺癌在4种分子病理分型乳腺癌中评分最高6.20±1.13(P<0.05);ISG15的表达与TNM肿瘤分期呈正相关,与抑癌基因HER-2的表达水平呈负相关(P<0.05),而与患者年龄、是否绝经、淋巴结转移、肿瘤大小、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达均无明显相关(P>0.05)。结论 ISG15蛋白表达与乳腺癌组织TNM分期及抑癌基因HER-2表达水平相关,ISG15蛋白水平对患者乳腺癌的病情评估和预后有一定的临床价值。 展开更多
关键词 乳腺癌 isg15 免疫组化 预后
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干扰素刺激基因ISG15、OAS1和RSAD2在奶牛早期妊娠诊断中的应用 被引量：1
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作者 陈洪波 程蕾 +4 位作者 向敏 胡修忠 王定发 刘晓华 凌明湖 《家畜生态学报》 北大核心 2015年第5期18-24,共7页
研究旨在探讨干扰素刺激基因15(Interferon stimulated gene 15,ISG15)、2′-5′寡腺苷酸合成酶1(2′-5′-oligoadenylate Synthetase 1,OAS1)和S-腺苷甲硫氨酸基区域蛋白2(Radical S-adenosyl methionine domain containing 2,RSAD2)... 研究旨在探讨干扰素刺激基因15(Interferon stimulated gene 15,ISG15)、2′-5′寡腺苷酸合成酶1(2′-5′-oligoadenylate Synthetase 1,OAS1)和S-腺苷甲硫氨酸基区域蛋白2(Radical S-adenosyl methionine domain containing 2,RSAD2)对奶牛早期妊娠诊断的价值,为其在奶牛早期妊娠诊断中的应用提供理论依据。36头青年母牛分别于人工授精(artificial insemination,AI)后0d、18d、21d、28d采集外周血,利用荧光定量PCR技术对ISG15、OAS1和RSAD2在18d外周血总白细胞中的相对表达量(相对于0d)进行了分析;分别利用化学发光法和ELISA技术对血清孕酮(18d、21d)和牛妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoprotein,PAG),(28d)进行了检测。通过建立受试者工作特征曲线(ROC曲线)综合评估了三个候选生物标志物单独或联合检测在奶牛早期妊娠诊断中的统计学指标,并与孕酮检测和PAG检测的诊断效能进行了同步比较分析。对ISG15、OAS1和RSAD2三者的分析结果表明,ISG15与RSAD2联合检测的敏感性和特异性分别为94.7%和100%,具有最优的诊断价值;以血清中孕酮含量作为参考指标时,AI后21d妊娠诊断的敏感性和特异性与18d相比较优,分别为88.9%和94.1%,但诊断效能不及ISG15、RSAD2二者联用;PAG ELISA最早于AI后28d可做出诊断,且相对于ISG15-RSAD2联用其诊断的特异性较低,为94.12%。综上所述,利用ISG15和RSAD2基因不仅可望在AI后18d成功实现妊娠诊断而且具有最高的灵敏度和特异性,研究结果为下一步建立奶牛新型早期妊娠诊断技术奠定了基础。 展开更多
关键词 奶牛 isg15 OAS1 RSAD2 ROC曲线 妊娠诊断
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牛源ISG15蛋白的原核表达及抗血清的制备
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作者 陶洁 廖金虎 +2 位作者 张倩 张信军 朱国强 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第2期68-73,共6页
本研究利用人重组干扰素IFNα-2A刺激牛肾细胞(Mardin-Darby bovine kidney cells,MDBK),并提取细胞总RNA。RT-PCR扩增牛源干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG 15),将其克隆入p Cold-TF表达载体中,转化大肠杆菌BL21(D... 本研究利用人重组干扰素IFNα-2A刺激牛肾细胞(Mardin-Darby bovine kidney cells,MDBK),并提取细胞总RNA。RT-PCR扩增牛源干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG 15),将其克隆入p Cold-TF表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导表达后,获得约70 k Da可溶性ISG15重组蛋白。用试剂盒对重组蛋白ISG15进行纯化回收,经BCA法测定其蛋白浓度为1 mg/m L。用纯化的ISG15重组蛋白免疫ICR小鼠,制备多克隆抗体血清,用间接ELISA方法测定多抗血清效价为1:102 400。利用Western blot进一步鉴定ISG15多抗血清,结果发现其与纯化的ISG15重组蛋白能发生特异性反应,可用于后续研究。 展开更多
关键词 isg15 蛋白表达 多抗血清
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