期刊文献+
共找到5篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
NF-κB p65调控IRF-8基因启动子活性及其启动子结合元件的初步鉴定 被引量:1
1
作者 王文博 钱宝梅 +6 位作者 罗灿 彭明玉 张婧 赵聃 王迎伟 邱文 季明德 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期638-644,共7页
目的:探讨大鼠核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65亚基在细胞内过表达和其活性变化对干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)基因启动的影响,并初步筛查IRF-8启动子上可能的p65结合元件。方法:采用聚合酶链式反... 目的:探讨大鼠核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65亚基在细胞内过表达和其活性变化对干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)基因启动的影响,并初步筛查IRF-8启动子上可能的p65结合元件。方法:采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增大鼠p65基因蛋白编码区(complete sequence coding,CDS)序列,将其插入到空载p IRES2-EGFP质粒中,构建大鼠野生型(wild type,WT)p65过表达质粒(pIRES2-p65 WT)。在此基础上,将p65第535位丝氨酸(serine,S)突变为天冬氨酸(aspartic,D)或丙氨酸(alanine,A),分别构建p65持续活化突变型质粒(pIRES2-p65 S535D)和p65显性负性突变型质粒(pIRES2-p65 S535A)。之后应用生物信息学软件预测IRF-8基因启动子区p65的结合元件,并据此构建IRF-8启动子全长(full-length,FL)和3个截短的荧光素酶报告质粒,即pGL3-IRF-8-FL(-1892^+174 nt)、pGL3-IRF-8-1(-1360^+174 nt)、pGL3-IRF-8-2(-752^+174 nt)和pGL3-IRF-8-3(-68^+174 nt)。将上述质粒行不同组合共转染人胚肾293T(human embryonic kidney 293T,HEK-293T)细胞,Western blot和荧光素酶实验分别检查p65的表达和IRF-8的启动子活性,并分析IRF-8启动子区可能的p65结合元件。结果:菌液PCR及测序证实上述质粒构建成功。分别将pIRES2-p65 WT、pIRES2-p65S535D、pIRES2-p65 S535A和p GL3-IRF-8-FL共转染HEK-293T,发现过表达pIRES2-p65 WT或pIRES2-p65 S535D均可明显增加IRF-8启动子活性,且以pIRES2-p65 S535D更为显著;而过表达pIRES2-p65 S535A后,IRF-8启动子活性无明显变化。将pGL3-IRF-8-FL、pGL3-IRF-8-1~3和pIRES2-p65 S535D共转染HEK-293T后发现,pGL3-IRF-8-3的启动子活性显著低于pGL3-IRF-8-FL、pGL3-IRF-8-1和p GL3-IRF-8-2,提示大鼠IRF-8启动子-752~68 nt区域可能存在p65结合元件。结论:在HEK-293T细胞内过表达野生型或持续活化突变型p65可显著促进IRF-8基因的启动,且p65与IRF-8启动子的结合元件可能位于-752^-68 nt部位。 展开更多
关键词 核因子-κB p65(NF-κB p65) 干扰素调节因子-8(irf-8) 启动子 结合元件
原文传递
大鼠MIP-1α基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其IRF-8结合元件的初步鉴定 被引量:1
2
作者 钱宝梅 王文博 +4 位作者 罗灿 张婧 赵聃 王迎伟 邱文 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期10-15,共6页
目的:构建大鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞(HEK-293T)中过表达干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)对MIP-1α... 目的:构建大鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞(HEK-293T)中过表达干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)对MIP-1α基因启动活性的影响,同时筛选其可能的IRF-8结合元件。方法:采用PCR技术,扩增出大鼠MIP-1α基因启动子序列,将MIP-1α基因启动子插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建MIP-1α基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-MIP-1α-FL)。将上述p GL3-MIP-1α-FL和本课题组已构建的大鼠IRF-8过表达质粒(pIRES2-IRF-8)共转染HEK-293T细胞,检测细胞内荧光素酶活性,确定IRF-8对MIP-1α基因的启动作用。同时,应用生物信息学软件预测MIP-1α基因启动子上IRF-8的结合元件,并据此构建3个MIP-1α基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(pGL3-MIP-1α-1~3)。将上述MIP-1α基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒和IRF-8过表达质粒共转染HEK-293T细胞,再测定荧光素酶活性,初步确定IRF-8的结合元件。结果:菌液PCR及核酸测序证实,上述pGL3-MIP-1α-FL(-1 400~+94 nt)质粒构建成功。将pGL3-MIP-1α-FL和pIRES2-IRF-8共转染HEK-293T后发现,过表达IRF-8可显著增加MIP-1α基因启动子活性。应用生物信息学软件预测发现MIP-1α基因启动子上IRF-8的结合元件(-1 157~-1 144nt、-740~-734 nt、-683~-670 nt、-365~-359 nt、-249~-236 nt),并据此构建3个MIP-1α基因启动子截短的荧光素酶报告质粒,即pGL3-MIP-1α-1(-453~+94 nt)、p GL3-MIP-1α-2(-352~+94 nt)和pGL3-MIP-1α-3(-3~+94 nt)。将pGL3-MIP-1α-FL、pGL3-MIP-1α-1~3和pIRES2-IRF-8共转染HEK-293T后发现,p GL3-MIP-1α-3的启动活性显著低于pGL3-MIP-1α-FL、pGL3-MIP-1α-1和pGL3-MIP-1α-2。提示IRF-8可能结合在大鼠MIP-1α基因启动子的-352~-3 nt区域的IRF-8结合元件(-249~-236 nt)上。结论:本实验成功构建了大鼠MIP-1α基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出IRF-8在MIP-1α基因启动子上的可能结合元件,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α) 干扰素调节因子-8(irf-8) 启动子
原文传递
Cardiomyocyte pyroptosis inhibited by dental pulp-derived mesenchymal stem cells via the miR-19a-3p/IRF-8/MAPK pathway in ischemia-reperfusion
3
作者 Yi Li Xiang Wang +7 位作者 Sixian Weng Chenxi Xia Xuyang Meng Chenguang Yang Ying Guo Zuowei Pei Haiyang Gao Fang Wang 《Chinese Medical Journal》 2025年第18期2336-2346,共11页
Background:The protective effect of mesenchymal stem cells(MSCs)on cardiac ischemia-reperfusion(I/R)injury has been widely reported.Dental pulp-derived mesenchymal stem cells(DP-MSCs)have therapeutic effects on variou... Background:The protective effect of mesenchymal stem cells(MSCs)on cardiac ischemia-reperfusion(I/R)injury has been widely reported.Dental pulp-derived mesenchymal stem cells(DP-MSCs)have therapeutic effects on various diseases,including diabetes and cirrhosis.This study aimed to determine the therapeutic effects of DP-MSCs on I/R injury and elucidate the underlying mechanism.Methods:Myocardial I/R injury model mice were treated with DP-MSCs or a miR-19a-3p mimic.The infarct volume,fibrotic area,pyroptosis,inflammation level,and cardiac function were measured.Cardiomyocytes exposed to hypoxia-reoxygenation were transfected with the miR-19a-3p mimic,miR-19a-3p inhibitor,or negative control.Pyroptosis and protein expression in the interferon regulatory factor 8/mitogen-activated protein kinase(IRF-8/MAPK)pathway were measured.Results:DP-MSCs protected cardiac function in cardiac I/R-injured mice and inhibited cardiomyocyte pyroptosis.The upregulation of miR-19a-3p protected cardiac function,inhibited cardiomyocyte pyroptosis,and inhibited IRF-8/MAPK signaling in cardiac I/R-injured mice.DP-MSCs inhibited cardiomyocyte pyroptosis and the IRF-8/MAPK signaling by upregulating the miR-19a-3p levels in cardiomyocytes injured by I/R.Conclusion:DP-MSCs protected cardiac function by inhibiting cardiomyocyte pyroptosis through miR-19a-3p under I/R conditions. 展开更多
关键词 Acute myocardial infarction PYROPTOSIS Mesenchymal stem cells ISCHEMIA-REPERFUSION MiR-19a-3p Dental pulp-derived Interferon regulatory factor 8 Mitogen-activated protein kinase irf-8 MAPK
原文传递
大鼠Caspase8基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其与IRF-1结合位点的鉴定 被引量:1
4
作者 单锴 邱文 +4 位作者 李妍 周建博 刘丽莎 赵聃 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期291-296,共6页
目的:构建大鼠Caspase 8基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞(HEK293)中,过表达干扰素调节因子-1(interferon regulatory factor-1,IRF-1)对Caspase 8基因启动活性的影响。同时,筛选其可能的IRF-1结合位点。方法... 目的:构建大鼠Caspase 8基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞(HEK293)中,过表达干扰素调节因子-1(interferon regulatory factor-1,IRF-1)对Caspase 8基因启动活性的影响。同时,筛选其可能的IRF-1结合位点。方法:采用PCR技术,扩增出大鼠Caspase 8基因启动子序列(-1136~+101 nt),将Caspase 8基因启动子插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中。将Caspase 8基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-Caspase 8-FL)和大鼠野生型IRF-1表达质粒(pcDNA3.1-IRF-1)共转染HEK293细胞,检测其荧光素酶活性,确定IRF-1对Caspase 8基因的启动作用。另用生物信息学软件预测Caspase 8基因启动子上IRF-1潜在的结合位点,并构建Caspase 8基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即pGL3-Caspase8-1~4)。将上述Caspase 8基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒和IRF-1过表达质粒共转染HEK293细胞,再行荧光素酶活性测定,筛选IRF-1的结合位点。结果:菌液PCR及核酸测序证实,上述荧光素酶报告质粒均构建成功。将pGL3-Caspase8-FL和pcDNA3.1-IRF-1共转染HEK293细胞发现,Caspase 8基因启动子活性显著增加。而将pGL3-Caspase 8-FL、pGL3-Caspase 8-1~4和pcDNA3.1-IRF-1共转染HEK293细胞后证实,pGL3-Caspase 8-4的启动活性显著低于pGL3-Caspase 8-2和pGL3-Caspase 8-3。提示IRF-1可能结合在Caspase 8基因启动子的-336~-136 nt区域。结论:本实验成功构建了大鼠Caspase 8基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出IRF-1在Caspase 8基因启动子上的结合区域。 展开更多
关键词 CASPASE8 干扰素调节因子-1 荧光素酶报告质粒 启动子活性
原文传递
miR-19a-3p对缺血再灌注心肌细胞焦亡的影响 被引量:3
5
作者 李一 夏辰兮 +4 位作者 孟旭阳 杨晨光 郭颖 王翔 汪芳 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2022年第6期5057-5064,共8页
目的 探究miR-19a-3p在心肌缺血再灌注过程中对心肌细胞焦亡情况的影响。方法 动物实验方面,将小鼠分为对照组、模型组、过表达组、抑制组。对照组小鼠仅接受开胸、关胸手术处理;模型组、过表达组、抑制组通过开胸手术方式建立心肌缺血... 目的 探究miR-19a-3p在心肌缺血再灌注过程中对心肌细胞焦亡情况的影响。方法 动物实验方面,将小鼠分为对照组、模型组、过表达组、抑制组。对照组小鼠仅接受开胸、关胸手术处理;模型组、过表达组、抑制组通过开胸手术方式建立心肌缺血再灌注动物模型,在再灌注同时分别使用腺病毒转染空载腺病毒、miR-19a-3p类似物、miR-19a-3p抑制剂转染并建立模型,模型建立后通过超声心动图、Masson染色、TUNEL染色、TTC染色评估小鼠心脏功能、心肌纤维化、心肌细胞焦亡、心肌梗死情况,并使用Western blot检测各组小鼠焦亡相关蛋白和IRF-8/MAPK信号通路相关蛋白表达情况。细胞实验方面,另取胎鼠原代心肌细胞作为研究对象,将胎鼠原代心肌细胞分为对照组、模型组、过表达组、抑制组。对照组小鼠在正常培养环境中培养且不接受腺病毒转染处理;模型组、过表达组、抑制组分别接受腺病毒转染空载腺病毒、miR-19a-3p类似物、miR-19a-3p抑制剂转染,然后在缺氧/复氧条件下培养。对各组细胞进行TUNEL染色,并使用Western blot检测焦亡相关蛋白和IRF-8/MAPK信号通路相关蛋白。结果 在动物实验中,过表达组和对照组小鼠心脏射血分数显著高于模型组,抑制组小鼠射血分数显著低于模型组;过表达组和对照组小鼠心肌梗死体积、纤维化面积显著低于模型组,抑制组小鼠心肌梗死体积和纤维化面积显著高于模型组。在动物和细胞实验中,过表达组和对照组焦亡细胞比例均显著低于模型组,抑制组焦亡细胞比例均显著高于模型组;过表达组和对照组细胞焦亡相关蛋白表达量显著低于模型组,抑制组细胞焦亡相关蛋白显著高于模型组;过表达组和对照组细胞IRF-8/MAPK信号通路相关蛋白表达量显著低于模型组,抑制组IRF-8/MAPK信号通路相关蛋白表达量显著高于模型组。结论miR-19a-3能够通过抑制IRF-8-MAPK信号通路抑制缺氧/复氧心肌细胞焦亡。 展开更多
关键词 缺氧/复氧 焦亡 irf-8 miR-19a-3p 缺血再灌注
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部