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乳糖替代IPTG诱导脱色酶TpmD基因在大肠杆菌中的高效表达 被引量：24
1
作者 陈亮 任随周 +1 位作者 许玫英 孙国萍 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期551-556,共6页
本文考察了乳糖代替IPTG诱导三苯基甲烷类染料脱色酶TpmD在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性,分别对用乳糖作为诱导剂时的诱导时机、乳糖浓度、诱导持续时间和添加方式进行优化并与IPTG诱导的差异等方面进行了比较分析,确定了乳糖诱导... 本文考察了乳糖代替IPTG诱导三苯基甲烷类染料脱色酶TpmD在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性,分别对用乳糖作为诱导剂时的诱导时机、乳糖浓度、诱导持续时间和添加方式进行优化并与IPTG诱导的差异等方面进行了比较分析,确定了乳糖诱导的最佳条件。结果表明,在工程菌对数生长中期(OD600约为0.8)添加终浓度为0.4mmol/L的乳糖诱导6h的条件下能获得最大量的目的蛋白和菌体量。由于乳糖可以作为碳源被菌体利用,分批添加乳糖效果优于一次性添加。乳糖诱导条件下目的蛋白表达量占总蛋白的35.62%,与IPTG诱导条件下的35.03%无明显差异。乳糖诱导后外源蛋白的表达时间有所滞后,但收获的菌体量高于IPTG诱导,显示出了乳糖同样是一种T7启动子的廉价高效诱导剂,可以代替昂贵的IPTG用于脱色酶TpmD的规模化发酵,同时也为其他重组蛋白的生产提供了有益的参考和借鉴。 展开更多
关键词 乳糖诱导 iptg TpmD T7启动子
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IPTG诱导浓度对重组李氏溶血素表达的影响 被引量：4
2
作者 邹运明 马武龙 +2 位作者 高慎阳 任艳红 李一经 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第2期199-201,共3页
单核增生性李斯特杆菌(L.monocytogenes)的主要毒力基因hly与融合表达载体pGEX-6P-1相连,转化大肠杆菌BL-21。在摇床条件下,利用异丙基硫代-βD-半乳糖苷(IPTG)为诱导剂,分析比较不同IPTG浓度对表达产物的影响,以确定最佳的IPTG浓度。... 单核增生性李斯特杆菌(L.monocytogenes)的主要毒力基因hly与融合表达载体pGEX-6P-1相连,转化大肠杆菌BL-21。在摇床条件下,利用异丙基硫代-βD-半乳糖苷(IPTG)为诱导剂,分析比较不同IPTG浓度对表达产物的影响,以确定最佳的IPTG浓度。结果表明,在装有LB培养基的三角瓶中,在37℃情况下,当IPTG终浓度为0.6mmol.L-1时,hly基因的表达量最大。当再增加IPTG的浓度时,抑制重组蛋白的表达。Western-blot分析,所表达的蛋白具有抗原特异性。实验为重组李氏溶血素的工业化生产提供依据。 展开更多
关键词 单核增生性李斯特杆菌 李氏溶血素 诱导浓度 iptg 外源蛋白 表达
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IPTG诱导浓度、时间对AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1蛋白表达的影响 被引量：4
3
作者 魏婕 易忠 +4 位作者 魏玉荣 王海烽 胡尔玛西 符子华 冉多良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第5期63-66,共4页
将口蹄疫病毒VP1基因插入原核表达载体pET-28a中,转化至大肠杆菌BL21。用不同的IPTG浓度与不同诱导时间诱导菌株表达VP1蛋白,分析不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响,以确定最佳表达条件。结果表明,在一定范围内,随IPTG浓度... 将口蹄疫病毒VP1基因插入原核表达载体pET-28a中,转化至大肠杆菌BL21。用不同的IPTG浓度与不同诱导时间诱导菌株表达VP1蛋白,分析不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响,以确定最佳表达条件。结果表明,在一定范围内,随IPTG浓度的增高,表达量并不会随之增大;而在菌体对数生长期内,随诱导时间的延长,表达量会随之增大。最后确定当IPTG浓度为3 mmol/L,诱导表达到最长时间9 h时,VP1蛋白表达量最大。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 AsiaⅠ型 VP1蛋白 表达 iptg 诱导浓度 诱导时间
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IPTG添加时机对大肠杆菌产α-酮基丁酸的影响 被引量：4
4
作者 李娟 齐俊生 +3 位作者 王婷 毛倩 韩超 李燕军 《发酵科技通讯》 CAS 2017年第2期77-82,共6页
探究IPTG不同添加时间对大肠杆菌Escherichia coli THRD/pWSK29-ilvA发酵生产α-酮基丁酸菌体生长、产酸、代谢副产物和耗糖的影响.摇瓶发酵结果表明:在菌体处于对数生长中后期,菌体OD600值为10~15时,添加IPTG进行诱导,菌体生物量相对... 探究IPTG不同添加时间对大肠杆菌Escherichia coli THRD/pWSK29-ilvA发酵生产α-酮基丁酸菌体生长、产酸、代谢副产物和耗糖的影响.摇瓶发酵结果表明:在菌体处于对数生长中后期,菌体OD600值为10~15时,添加IPTG进行诱导,菌体生物量相对较高为6.5g/L,α-酮基丁酸积累量最高达到16g/L,同时糖酸转化率较其他诱导时间高,且副产物乙酸含量明显降低.利用7.5L发酵罐对此诱导条件进行发酵验证,α-酮基丁酸质量浓度为22g/L,高于已有报道中8g/L的生产水平. 展开更多
关键词 iptg 诱导时机 α-酮基丁酸 产量
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猪流行性腹泻病毒重组M蛋白膜外区原核表达IPTG最佳诱导条件的确定 被引量：5
5
作者 高慎阳 李一经 《中国畜禽种业》 2008年第7期75-76,共2页
将猪流行性腹泻病毒编码M蛋白囊膜外区的基因片段(M’)亚克隆后,构建重组质粒pGEX-6p-M’并转化大肠杆菌以不同浓度IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析结果表明,在以浓度为0.3～0.5mmol/L的IPTG诱导6h条件下pGEX-6p-M’获得了最高效表达。
关键词 iptg 猪流行性腹泻病毒 M蛋白膜外区
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乳糖代替IPTG诱导己糖激酶在大肠杆菌中的表达 被引量：2
6
作者 孔董俊 李玉 +3 位作者 张俊环 贾红红 路福平 杜连祥 《工业微生物》 CAS CSCD 2011年第1期15-20,共6页
构建了己糖激酶GLK高效表达的工程菌株BL21(DE3)/pET-glk,考察了乳糖代替IPTG诱导己糖激酶GLK在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性。实验结果表明,工程菌对数生长中期(OD_(600)约为1.0)添加终浓度为10g/L的乳糖于25℃的条件下诱导6h能获... 构建了己糖激酶GLK高效表达的工程菌株BL21(DE3)/pET-glk,考察了乳糖代替IPTG诱导己糖激酶GLK在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性。实验结果表明,工程菌对数生长中期(OD_(600)约为1.0)添加终浓度为10g/L的乳糖于25℃的条件下诱导6h能获得最大量的目的蛋白和菌体量,目的蛋白表达量占总蛋白的30.45%,与IPTG诱导条件下的31.12%无明显差异。同时,乳糖诱导后收获的菌体量高于IPTG诱导,显示出了乳糖同样是一种T7启动子的廉价高效诱导剂,可以代替昂贵的IPTG用于己糖激酶GLK的规模化发酵,也为其他重组蛋白的生产提供了有益的参考和借鉴。 展开更多
关键词 己糖激酶 乳糖诱导 iptg T7启动子 大肠杆菌
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乳糖代替IPTG诱导重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达 被引量：1
7
作者 罗豪晖 蒋为民 李辰生 《微生物学免疫学进展》 2010年第2期32-35,共4页
研究以乳糖代替IPTG作为诱导剂诱导重组人胸腺肽α1表达的可行性,对乳糖诱导的时机、乳糖浓度、诱导持续时间以及其它诱导条件进行研究,确定了乳糖诱导的最佳条件。结果表明,乳糖能有效地诱导重组人胸腺肽α1的表达,并且目的蛋白的表达... 研究以乳糖代替IPTG作为诱导剂诱导重组人胸腺肽α1表达的可行性,对乳糖诱导的时机、乳糖浓度、诱导持续时间以及其它诱导条件进行研究,确定了乳糖诱导的最佳条件。结果表明,乳糖能有效地诱导重组人胸腺肽α1的表达,并且目的蛋白的表达量略高于IPTG的诱导量。 展开更多
关键词 胸腺肽Α1 乳糖 诱导 iptg
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IPTG与乳糖联合诱导重组大肠杆菌右旋糖酐蔗糖酶表达 被引量：6
8
作者 李攀峰 张洪斌 胡雪芹 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第1期185-188,共4页
研究异丙基硫代-β-D-呋喃半乳糖苷(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)与乳糖联合诱导重组大肠杆菌右旋糖酐蔗糖酶表达的效果。在利用IPTG和乳糖分别作为诱导剂对右旋糖酐蔗糖酶工程菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET28-de... 研究异丙基硫代-β-D-呋喃半乳糖苷(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)与乳糖联合诱导重组大肠杆菌右旋糖酐蔗糖酶表达的效果。在利用IPTG和乳糖分别作为诱导剂对右旋糖酐蔗糖酶工程菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET28-dexYG进行诱导表达的基础上,尝试将此两种诱导剂联合使用,在降低成本的同时获得较好的表达效果。在获得最佳培养基的基础上,考察菌体IPTG与乳糖的联合加入量、菌体浓度、诱导时间对右旋糖酐蔗糖酶表达的影响。在菌浓(OD600 nm)达到3.0时,加入0.1 mmol/L IPTG 95μL+2.5 g/L乳糖,25℃混合诱导培养4 h,酶活力最高,达到40.44 U/mL。IPTG与乳糖联合诱导重组大肠杆菌右旋糖酐蔗糖酶表达可行。 展开更多
关键词 异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷 乳糖 右旋糖酐蔗糖酶 表达 联合诱导
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G—CSF工程菌在IPTG和乳糖诱导下表达结果比较
9
作者 李郑武 高晶 +1 位作者 李邦东 张淑萱 《黑龙江医药》 CAS 1998年第6期325-326,共2页
用5mM IPTG 或30mM 乳糖诱导 G—CSF 工程菌表达,其结果基本一致,工业生产中,采用乳糖作诱导剂,显著地降低了生产成本。
关键词 iptg 乳糖 诱导 G-CSF 工程菌
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羚牛IFN-γ基因克隆、生物信息学分析与原核表达
10
作者 柳丽 姚宇航 +4 位作者 刘晨阳 张文涛 马俊杰 昝林森 成功 《西北农业学报》 北大核心 2025年第2期319-328,共10页
旨在研究羚牛γ干扰素(IFN-γ)基因结构与功能,为进一步增强羚牛的免疫调节能力提供理论依据。通过RT-PCR方法克隆羚牛IFN-γ基因,并运用多种生物信息学分析工具对其结构与功能进行深入研究。将IFN-γ基因序列连入原核表达载体,并转化... 旨在研究羚牛γ干扰素(IFN-γ)基因结构与功能,为进一步增强羚牛的免疫调节能力提供理论依据。通过RT-PCR方法克隆羚牛IFN-γ基因,并运用多种生物信息学分析工具对其结构与功能进行深入研究。将IFN-γ基因序列连入原核表达载体,并转化大肠杆菌诱导表达。结果显示,羚牛IFN-γcDNA序列全长501 bp,编码166个氨基酸。蛋白高级结构预测结果显示,二级结构以α螺旋为主,存在13个磷酸化修饰位点,并含有1个信号肽、1个低度复杂区、1个跨膜结构域及1个IFN-γ结构域,其中IFN-γ结构域位于胞外区。序列比对分析发现其与绵羊、山羊、家牛、水牛、人、黑猩猩、小鼠、鸡的核苷酸序列同源性分别为99.0%、98.8%、97.2%、96.2%、75.8%、75.4%、64.1%、54.1%,氨基酸序列同源性分别为99.4%、99.4%、95.8%、95.8%、62.7%、62.7%、43.9%、33.5%。系统进化树分析结果显示,羚牛与山羊、绵羊的亲缘关系最近。经SDS-PAGE和Western-blot检测发现,重组IFN-γ蛋白以可溶性形式大量表达,分子质量约为34 ku。通过密码子优化及不同浓度IPTG诱导表达等原核表达优化策略发现,密码子优化能促进重组蛋白的高效表达,且最佳诱导浓度为0.9 mmol·L^(-1)。 展开更多
关键词 羚牛 IFN-Γ 基因克隆 生物信息学分析 原核表达 iptg诱导
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苹果响应钙信号转录因子MdbHLH2原核表达分析
11
作者 苟莎莎 安欣 +3 位作者 张玮玮 胡康棣 张华 姚改芳 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第2期232-235,共4页
转录因子MdbHLH2能响应钙信号且影响苹果采后贮藏的性能。为进一步探究其结构和功能,文章利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增MdbHLH 2基因的编码序列(coding sequence,CDS)全长,连接至pMAL-c2X原核表达载体,并将重... 转录因子MdbHLH2能响应钙信号且影响苹果采后贮藏的性能。为进一步探究其结构和功能,文章利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增MdbHLH 2基因的编码序列(coding sequence,CDS)全长,连接至pMAL-c2X原核表达载体,并将重组质粒转入表达菌株Rosetta(DE3);利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合MBP标签的MdbHLH2重组蛋白,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术检测出MdbHLH2-MBP的重组表达蛋白。该结果为进一步研究MdbHLH2的结构和功能提供了重要依据。 展开更多
关键词 苹果 转录因子MdbHLH2 原核表达 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(iptg) 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
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阿莫西林酰化酶发酵工艺的研究
12
作者 李希平 王娟 《药物生物技术》 2025年第1期39-43,共5页
阿莫西林作为一种较为常见的抗菌类药物,是世界卫生组织(WHO)推荐的首选口服类β-内酰胺类抗生素。自1972年上市以来,阿莫西林因其抗菌高效广谱且毒副作用小,在临床医学被广泛应用,2023年中国医药工业信息中心数据显示全球阿莫西林原料... 阿莫西林作为一种较为常见的抗菌类药物,是世界卫生组织(WHO)推荐的首选口服类β-内酰胺类抗生素。自1972年上市以来,阿莫西林因其抗菌高效广谱且毒副作用小,在临床医学被广泛应用,2023年中国医药工业信息中心数据显示全球阿莫西林原料药年需求约30000吨,市场巨大。在其应用长达半个世纪后仍保持着强劲的生命力,因此优化阿莫西林的制备技术有重要意义。目前阿莫西林已经形成了相对较为成熟的工业化生产工艺,主要采用的工艺技术方法有两种,分别是化学法和酶法。其中酶法的工艺优势要高于化学法,是目前制备阿莫西林的主流制备工艺。合成阿莫西林的酰化酶因其为阿莫西林制备工艺的关键酶,其质量直接决定着成品的质量与成本。本研究根据仿制药研发注册要求,分别对合成阿莫西林的酰化酶发酵使用的培养基,发酵过程的关键参数pH、温度、IPTG添加时机、摇床转速、抗生素添加等方面进行了实验设计优化。结果显示在种子培养阶段添加抗生素,将培养基中Yeast extract、Tryptone替换成酵母粉FM902和酵母蛋白胨FP101并调节培养基初始pH值至6.60,接种培养2 h加入IPTG诱导,诱导后28℃、130 r/min继续培养14 h获得的酶活最高。优化后酶活较先前的报道[1]提高约64%,较实验室的初始发酵方法提高约95%。本研究为优化阿莫西林的制备技术提供了重要的借鉴。 展开更多
关键词 阿莫西林 酰化酶 培养基 温度 PH 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 转速 酶活
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重组大肠杆菌高密度发酵中乳糖诱导表达hBLyS 被引量：23
13
作者 李兆鹏 张栩 +2 位作者 徐斌 宋礼华 谭天伟 《过程工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第4期446-449,共4页
研究了乳糖代替异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大肠杆菌表达重组人B淋巴细胞刺激因子(hBLyS).结果表明,乳糖不仅能够作为诱导剂诱导外源蛋白的合成,而且能作为碳源促进菌体的生长.通过对诱导条件进行优化,乳糖诱导外源蛋白的表达量约占... 研究了乳糖代替异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大肠杆菌表达重组人B淋巴细胞刺激因子(hBLyS).结果表明,乳糖不仅能够作为诱导剂诱导外源蛋白的合成,而且能作为碳源促进菌体的生长.通过对诱导条件进行优化,乳糖诱导外源蛋白的表达量约占菌体总蛋白的14.3%,达到IPTG的诱导水平(26%)的55%.在5L发酵罐中hBLyS的表达量达到16%,同时生物量OD600=62. 展开更多
关键词 大肠杆菌 乳糖 iptg hBLyS 发酵
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RGD-蜘蛛拖丝蛋白聚合物的生物合成与纯化 被引量：16
14
作者 李敏 黄建坤 +1 位作者 涂桂云 黄曦 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2004年第6期1006-1010,共5页
蜘蛛拖丝是自然界性能最好的蛋白质纤维之一 ,其独特的机械性能 ,良好的生物相容性和缓慢的可降解性 ,作为生物材料在组织工程领域有着潜在的应用前景。本文根据蜘蛛拖丝蛋白序列高度重复的特点 ,引入与细胞黏附有关的精氨酸 甘氨酸 ... 蜘蛛拖丝是自然界性能最好的蛋白质纤维之一 ,其独特的机械性能 ,良好的生物相容性和缓慢的可降解性 ,作为生物材料在组织工程领域有着潜在的应用前景。本文根据蜘蛛拖丝蛋白序列高度重复的特点 ,引入与细胞黏附有关的精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 (RGD)三肽 ,化学合成RGD 蜘蛛拖丝蛋白基因单体 ,通过头尾相连倍加构建策略 ,首次得到RGD 蜘蛛拖丝蛋白基因 8聚体和 16聚体。分别将这两种多聚体与原核高效表达载体 pET 30a(+)连接 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) pLysS ,用IPTG诱导表达。SDS PAGE图谱显示表达产物分子量分别为 35KD和 6 0KD ,与理论值基本相吻合 ;蛋白质印迹分析这两种表达产物均显示特异性。文中对表达产物的纯化方法进行了初步的摸索。 展开更多
关键词 RGD 蜘蛛拖丝蛋白 表达产物 基因 多聚体 吻合 首次 iptg 诱导表达 纯化
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用乳糖作为诱导剂进行重组蛋白的表达 被引量：11
15
作者 郝淑美 王宣军 +3 位作者 张秀霞 方勇 关晓峰 盛军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期409-411,共3页
目的研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行重组蛋白的表达。方法以表达SARS刺突蛋白片段的工程菌BL21(DE3)/S为模型菌株,采用葡萄糖、甘油作为碳源,不同浓度的乳糖和异乳糖作为诱导剂,在摇瓶中进行表达实验。在40L发酵罐中进行验证。结果... 目的研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行重组蛋白的表达。方法以表达SARS刺突蛋白片段的工程菌BL21(DE3)/S为模型菌株,采用葡萄糖、甘油作为碳源,不同浓度的乳糖和异乳糖作为诱导剂,在摇瓶中进行表达实验。在40L发酵罐中进行验证。结果在摇瓶实验中,乳糖浓度大于0.5mmol/L即可以很好地诱导目的蛋白的表达,表达量与IPTG诱导时相当;葡萄糖的存在可以抑制乳糖,但不能抑制异乳糖的诱导作用;使用甘油作为碳源,既不抑制乳糖,也不抑制异乳糖的诱导作用。在发酵罐实验中,诱导初始阶段葡糖糖的存在抑制乳糖的诱导作用。结论在以乳糖操纵子为调控手段的工程菌表达系统中,可以使用乳糖作为诱导剂,诱导阶段应采用非葡萄糖碳源。 展开更多
关键词 乳糖操纵子 葡萄糖 诱导 重组蛋白 诱导剂 乳糖 诱导作用 SARS 目的蛋白 iptg
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几丁质酶基因表达载体pET-chiB的构建及其在大肠杆菌中的诱导表达(英文) 被引量：7
16
作者 叶辉 冯春 +2 位作者 程郢 朱苏文 程备久 《激光生物学报》 CAS CSCD 2008年第3期384-390,共7页
几丁质酶在降解几丁质的过程中起着重要作用,目前人们已从不同微生物体中分离并克隆出了多种几丁质酶基因。实验以pET-22b(+)为载体,利用从粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)克隆出的chiB基因,构建出原核生物表达载体pET-chiB。通过表... 几丁质酶在降解几丁质的过程中起着重要作用,目前人们已从不同微生物体中分离并克隆出了多种几丁质酶基因。实验以pET-22b(+)为载体,利用从粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)克隆出的chiB基因,构建出原核生物表达载体pET-chiB。通过表达载体pET-chiB的诱导表达,实验结果显示该基因表达的蛋白为可溶性蛋白,其分子量约为52 kD。利用不同参数包括时间、IPTG浓度和温度诱导表达载体pET-chiB表达并对表达产物进行SDS-PAGE分析,结果显示其诱导表达的最佳参数分别为4 h,0.5 mmol/L和25℃。这些结果为几丁质酶基因的进一步研究和几丁质酶工程菌生产奠定了良好的工作基础。 展开更多
关键词 几丁质酶基因 pET-chiB 构建 表达 iptg诱导
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乳糖诱导D塔格糖3差向异构酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量：5
17
作者 贾敏 江波 +4 位作者 张晓鸣 沐万孟 张涛 缪铭 周榴明 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期143-146,152,共5页
以D-塔格糖3-差向异构酶高效表达菌株BL21(DE3)/pET22b-cbdte为研究对象,考察乳糖作为诱导剂诱导D-塔格糖3-差向异构酶在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性。在摇瓶发酵条件下,从诱导时机、诱导剂浓度、诱导时间及诱导温度等四个方面,研... 以D-塔格糖3-差向异构酶高效表达菌株BL21(DE3)/pET22b-cbdte为研究对象,考察乳糖作为诱导剂诱导D-塔格糖3-差向异构酶在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性。在摇瓶发酵条件下,从诱导时机、诱导剂浓度、诱导时间及诱导温度等四个方面,研究诱导条件对目的蛋白表达的影响。结果表明,工程菌培养至对数生长中期OD值为1.0左右后,加入终浓度为5g/L的乳糖,于20℃的条件下诱导7h,可获得最大酶活。与异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)最适诱导条件相比,优化后的乳糖诱导酶活提高82.7%,可溶性目的蛋白的表达量提高99.5%,菌体生物量提高30.5%。研究结果为乳糖作为诱导剂应用于D-塔格糖3-差向异构酶的工业化生产提供有益的参考和借鉴。 展开更多
关键词 D-塔格糖3-差向异构酶 乳糖 iptg 诱导表达
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实时荧光定量PCR技术在实验教学中的应用 被引量：6
18
作者 赵玉红 李欣 +5 位作者 赵立青 李小菊 石建党 李登文 张金红 周浩 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2018年第4期61-64,68,共5页
设计了"实时荧光定量PCR分析IPTG诱导EGFP基因在大肠杆菌中的异源表达"实验,研究IPTG诱导浓度和温度对EGFP基因表达的影响。结果表明,IPTG浓度为270μmol/L、诱导温度为16℃、诱导时间为18h的条件下,EGFP mRNA的表达量最大。... 设计了"实时荧光定量PCR分析IPTG诱导EGFP基因在大肠杆菌中的异源表达"实验,研究IPTG诱导浓度和温度对EGFP基因表达的影响。结果表明,IPTG浓度为270μmol/L、诱导温度为16℃、诱导时间为18h的条件下,EGFP mRNA的表达量最大。通过该实验的学习,使学生掌握实时荧光定量PCR的相关实验原理、技术以及实时荧光定量PCR仪的使用,培养学生的科研能力和综合素质。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 核酸定量 iptg
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大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体的构建及内皮抑素基因的表达 被引量：14
19
作者 韩庆旺 徐叶芬 +4 位作者 傅更锋 张洪英 樊燕蓉 刘新卷 徐根兴 《生物技术通讯》 CAS 2006年第1期18-21,共4页
目的:构建大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭表达载体,并通过此载体使人内皮抑素基因在大肠杆菌和长双歧杆菌中得到表达。方法:以质粒pDG7、pBCSK(+)、pET-9C为基础,构建大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭表达载体pET-1128,并将人内皮抑素基因插入到新构... 目的:构建大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭表达载体,并通过此载体使人内皮抑素基因在大肠杆菌和长双歧杆菌中得到表达。方法:以质粒pDG7、pBCSK(+)、pET-9C为基础,构建大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭表达载体pET-1128,并将人内皮抑素基因插入到新构建的表达载体中,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和长双歧杆菌NQ-1501。诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和WesternBlot鉴定。结果:成功构建了大肠杆菌-双歧杆菌穿梭载体,人内皮抑素基因在大肠杆菌和长双歧杆菌中均可表达。结论:构建的穿梭载体为今后用双歧杆菌作为生理菌载体进行肿瘤的基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 双歧杆菌 大肠杆菌 穿梭载体 内皮抑素 表达载体 iptg
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乳糖诱导基因工程菌产β-葡聚糖酶及其酶学特性的研究 被引量：4
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作者 戴易兴 王洪新 +2 位作者 吕文平 孙军涛 秦晓娟 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期206-209,共4页
考察了乳糖替代IPTG诱导重组大肠杆菌产β-葡聚糖酶的可行性,分别对乳糖作为诱导剂时的终浓度、诱导时机、诱导时间和温度等方面进行了研究。结果表明,工程菌培养6h(OD600达到0.7左右)后,加入终浓度为10mmol/L的α-乳糖,升温至41℃,诱导... 考察了乳糖替代IPTG诱导重组大肠杆菌产β-葡聚糖酶的可行性,分别对乳糖作为诱导剂时的终浓度、诱导时机、诱导时间和温度等方面进行了研究。结果表明,工程菌培养6h(OD600达到0.7左右)后,加入终浓度为10mmol/L的α-乳糖,升温至41℃,诱导6h,酶活可达到830.7U/mL。与IPTG相比,酶活提高2倍左右,发酵周期缩短70%。该酶pH稳定范围较宽,热稳定性良好,在生理温度(70℃左右)下活性高,说明乳糖可以作为基因工程菌的高效诱导剂。 展开更多
关键词 基因工程菌 Β-葡聚糖酶 乳糖 iptg 酶学特性
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