鱼源植物乳杆菌表达IPNV VP2-VP3重组蛋白及其口服免疫程序 被引量：5

1

作者 刘佳琪 高帅 +7 位作者 段可馨 郭梦婷 杜航 康海燕 张英 唐立杰 李一经 刘敏 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期622-627,共6页

为比较鱼源乳酸菌表达系统口服疫苗在不同免疫程序下诱导鱼免疫应答水平的差异,确定鱼源乳酸菌表达系统口服免疫虹鳟幼鱼的免疫程序。本研究构建了重组表达IPNV VP2-VP3蛋白的鱼源植物乳杆菌L1212,将重组菌pPG612-VP2-VP3/L1212包裹颗... 为比较鱼源乳酸菌表达系统口服疫苗在不同免疫程序下诱导鱼免疫应答水平的差异,确定鱼源乳酸菌表达系统口服免疫虹鳟幼鱼的免疫程序。本研究构建了重组表达IPNV VP2-VP3蛋白的鱼源植物乳杆菌L1212,将重组菌pPG612-VP2-VP3/L1212包裹颗粒饲料,口服免疫虹鳟幼鱼。免疫程序分为连续免疫组、免疫1 d后间隔1 d再免疫1 d组、连续免疫4 d后32 d加强免疫1次组和间隔免疫后32 d加强免疫1次组。免疫后进行尾动脉采血,间接ELISA方法检测各组血清抗体效价,免疫接种66 d后,腹腔注射IPNV,计算各组相对免疫保护率。确定颗粒饲料按照1 mL/g比例与108 CFU/mL重组菌pPG612-VP2-VP3/L1212和2.5%海藻酸钠混合,于20℃烘干制备口服疫苗。间隔免疫组血清抗体效价和攻毒保护率均显著高于其他组,并且免疫2次的间隔免疫组的血清抗体效价和攻毒保护率均显著高于免疫1次间隔免疫组。采用重组菌包被颗粒饲料饲喂虹鳟幼鱼,间隔免疫的免疫程序和免疫保护率优于连续免疫的免疫程序,对IPNV的入侵起到保护作用。 展开更多

关键词 虹鳟 植物乳杆菌 ipnv VP2-VP3 口服疫苗 免疫程序

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虹鳟传染性胰脏坏死病病毒(IPNV)的初步研究 被引量：25

2

作者 江育林 徐伯亥 +2 位作者 李伟 李正秋 胡琦 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第4期353-358,T001,共7页

山西省虹鳟试验场用从日本引进的鱼卵孵化的虹鳟稚鱼暴发流行病,死亡率高达90％以上。经组织培养分离到病毒,能在鲑鳟细胞系中产生细胞病变,形成直径0.5—1mm的空斑。感染健康虹鳟稚鱼能复制出与天然发病相同的症状和死亡率。病毒对氯... 山西省虹鳟试验场用从日本引进的鱼卵孵化的虹鳟稚鱼暴发流行病,死亡率高达90％以上。经组织培养分离到病毒,能在鲑鳟细胞系中产生细胞病变,形成直径0.5—1mm的空斑。感染健康虹鳟稚鱼能复制出与天然发病相同的症状和死亡率。病毒对氯仿不敏感,耐酸、耐热。病毒负染后电镜观察为直径55—65mm的二十面体颗粒,无囊膜,具单层衣壳。经血清学鉴定为传染性胰脏坏死病病毒(Infectious pancreatic necrosis virus简称IPNV)在血清学交叉中和反应中与抗IPN-Sp株的抗血清有强烈的交叉反应,提示可能为IPN-Sp株。 展开更多

关键词 虹鳟 鱼类病毒病 传染性胰脏坏死病病毒

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虹鳟IPNV分离株VP2蛋白的表达及免疫原性检测 被引量：9

3

作者 赵景壮 贺文斌 +4 位作者 徐黎明 纪锋 曹永生 胡朝 卢彤岩 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期179-185,共7页

为充分了解中国鱼类传染性胰腺坏死病病毒的系统进化,对流行病学调查分离出的虹鳟Oncorhynchus mykiss传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)分离株进行了系统进化分析,利用软件综合分析了IPNV病毒表面蛋白VP2的跨膜区、亲水性、抗原性和表面可能... 为充分了解中国鱼类传染性胰腺坏死病病毒的系统进化,对流行病学调查分离出的虹鳟Oncorhynchus mykiss传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)分离株进行了系统进化分析,利用软件综合分析了IPNV病毒表面蛋白VP2的跨膜区、亲水性、抗原性和表面可能性,对其特定区段进行了原核表达,并利用表达蛋白制备鼠抗血清及免疫学鉴定。结果表明:本实验室得到的分离株与中国已报道的毒株具有不同的来源;SDS-PAGE分析显示,表达纯化的VP2蛋白为单一条带,相对分子质量约为45 000;ELISA分析显示,利用表达蛋白制备的鼠抗血清与IPNV分离株细胞培养物的效价为1∶20 000,与VP2蛋白的效价为1∶40 000;间接免疫荧光分析显示,细胞感染IPNV病毒24、48 h后,该鼠抗血清均能与IPNV毒株发生特异性反应,并呈现出特异性绿色荧光。研究表明,本研究中表达的VP2蛋白与IPNV病毒的VP2蛋白具有相近的免疫原性,这一结果为IPNV检测方法的建立及疫苗的构建提供了重要的试验依据。 展开更多

关键词 传染性胰腺坏死病病毒 蛋白表达 VP2蛋白 免疫原性

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用生物素标记寡核苷酸DNA探针快速检测鱼传染性胰脏坏死病病毒IPNV 被引量：7

4

作者 周建玲 童裳亮 宫云浩 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期310-314,共5页

研究了用生物素标记的寡核苷酸ＤＮＡ探针快速检测鱼传染性胰脏坏死病病毒ＩＰＮＶ，取得了较好的结果。对探针的灵敏度、特异性进行了测定，并与其它快速检测技术作了比较。

关键词 寡核苷酸 DNA 探针 检测 胰脏坏死病病毒 鱼病

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盐霉素钠体外抗虹鳟IHNV和IPNV的活性研究

5

作者 邵轶智 李林芳 +2 位作者 赵景壮 卢彤岩 徐黎明 《水产学杂志》 2024年第5期20-27,共8页

本研究用10.0μmol/L、5.0μmol/L、1.0μmol/L和0.5μmol/L盐霉素钠(SAL-Na)处理大鳞大麻哈鱼胚胎细胞(Chinook salmon embryo cells,CHSE-214)和胖头鱥上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum cyprini,EPC),用感染复数(Multiplicity of inf... 本研究用10.0μmol/L、5.0μmol/L、1.0μmol/L和0.5μmol/L盐霉素钠(SAL-Na)处理大鳞大麻哈鱼胚胎细胞(Chinook salmon embryo cells,CHSE-214)和胖头鱥上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum cyprini,EPC),用感染复数(Multiplicity of infection,MOI)为0.1的传染性胰脏坏死病病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)或传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopotietic necrosis virus,IHNV)感染CHSE-214或EPC细胞,用5.0μmol/L SAL-Na处理CHSE-214细胞,将MOI为0.1的IPNV和IHNV共同感染细胞,48 h后收集细胞和上清液,测量细胞中病毒载量和上清液中病毒滴度,探究IHNV和IPNV单独感染及混合感染细胞时SAL-Na对病毒增殖的影响。结果表明,IHNV感染细胞时,0.5μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L和10.0μmol/L SAL-Na均能抑制病毒增殖;IPNV感染细胞时,5.0μmol/L和10.0μmol/L SAL-Na能抑制病毒增殖;IHNV和IPNV混合感染细胞时,5.0μmol/L SAL-Na可同时抑制二者增殖。在IHNV和IPNV单独感染或者共同感染的情况下,盐霉素钠均可抑制病毒的增殖,表明其可作为IHN和IPN防治的潜在药物。 展开更多

关键词 传染性造血器官坏死病毒(IHNV) 传染性胰脏坏死病毒(ipnv) 盐霉素钠 大鳞大麻哈鱼胚胎细胞(CHSE-214) 胖头鱥上皮瘤细胞(EPC)

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传染性胰腺坏死病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及应用

6

作者 吴敏 邵轶智 +2 位作者 卢彤岩 赵景壮 徐黎明 《大连海洋大学学报》 北大核心 2025年第4期575-584,共10页

为了建立传染性胰腺坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)快速诊断方法,通过对IPNV病毒VP2蛋白进行抗原表位预测,筛选出抗原性强、保守性好,且位于蛋白表面第178~191位和第380~393位的两个肽段,分别制备了针对VP2蛋白... 为了建立传染性胰腺坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)快速诊断方法,通过对IPNV病毒VP2蛋白进行抗原表位预测,筛选出抗原性强、保守性好,且位于蛋白表面第178~191位和第380~393位的两个肽段,分别制备了针对VP2蛋白的单克隆抗体VP2-178抗体和VP2-380抗体;对纯化后的抗体进行HRP标记,建立了针对IPNV病毒VP2蛋白的抗原捕获ELISA检测方法。结果表明:捕获抗体为VP2-178抗体,其最佳工作浓度为0.5μg/孔;检测抗体为VP2-380抗体,最佳稀释度为1∶2000;经检测条件优化后,该ELISA方法能够检测国内流行的1型和5型IPNV毒株,但与传染性造血器官坏死病毒、鲤春病毒血症病毒及病毒性出血性败血症病毒均无反应,表明该方法广谱性好、特异性强;灵敏度试验结果显示,该方法对IPNV的最低检测限为62.5 TCID_(50)/mL;重复性结果显示,批内和批间重复性变异系数均小于7%;利用本研究建立的抗原捕获ELISA检测方法与国标方法同时对40份临床样品进行检测,结果显示两者符合率为100%。本研究建立的ELISA检测方法可为IPNV的临床快速诊断提供技术支持。 展开更多

关键词 传染性胰腺坏死病毒 抗原表位 单克隆抗体 抗原捕获ELISA

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虹鳟传染性胰脏坏死病毒的分离鉴定及聚类分析 被引量：14

7

作者 刘淼 徐黎明 +4 位作者 赵景壮 曹永生 刘红柏 尹家胜 卢彤岩 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期56-61,共6页

为研究传染性胰脏坏死病毒(IPNV)感染虹鳟Oncorhynchus mykiss的病理特性,取云南省某养殖场大规模死亡的虹鳟稚鱼进行了病原的分离与鉴定,试验中利用鲑鳟鱼常见病毒敏感细胞大鳞大麻哈鱼胚胎细胞(Chinook salmon embryo cells,CHSE-214... 为研究传染性胰脏坏死病毒(IPNV)感染虹鳟Oncorhynchus mykiss的病理特性,取云南省某养殖场大规模死亡的虹鳟稚鱼进行了病原的分离与鉴定,试验中利用鲑鳟鱼常见病毒敏感细胞大鳞大麻哈鱼胚胎细胞(Chinook salmon embryo cells,CHSE-214)、鲤上皮瘤细胞(Epitheliaoma papulosum cyprinid,EPC)和虹鳟性腺细胞(Rainbow trout gonad cell line,RTG-2)对虹鳟稚鱼无菌组织悬液进行病毒培养,并对产生细胞病变的上清进行病毒RNA提取及鲑鳟鱼常见病毒的RT-PCR检测,利用敏感细胞进行病毒分离株的噬斑培养及滴度测定,并对病毒形态进行透射电镜观察。结果表明:细胞培养显示,该组织悬液能使CHSE-214和RTG-2细胞产生明显的细胞病变;RT-PCR结果显示,检测样本呈IPNV阳性,传染性造血器官坏死病毒(IHNV)呈阴性;该IPNV分离株(命名为Ch Rtm213)在CHSE-214、RTG-2和EPC细胞上的病毒滴度分别为10^(5.2)、10^(3.2)、10^(2.3) TCID_(50)/m L,在CHSE-214细胞上培养4 d即可形成肉眼可见的病毒噬斑;在透射电镜下清晰可见大量病毒粒子呈晶格状排列于细胞质内;Ch Rtm213分离株与西班牙毒株2310(AY489225)VP2相似度较高,核苷酸序列一致性为96.4%;聚类分析结果显示,Ch Rtm213分离株与参考毒株加拿大Jasper(ATCC:VR-1325)聚为一簇,属于Gengroup 5基因型。研究表明,Ch Rtm213分离株异于已报道的IPNV分离株,具有不同的血清型及病毒毒力,可为传染性胰脏坏死病毒的检测及防控提供参考。 展开更多

关键词 虹鳟 传染性胰脏坏死病毒(ipnv) CHSE-214 基因型

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实时荧光定量RT-PCR检测鱼类传染性胰脏坏死病病毒方法的建立 被引量：11

8

作者 徐晔 段宏安 +2 位作者 周毅 刘亭歧 姚燕林 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第31期19224-19226,共3页

[目的]建立Taqman探针荧光定量RT-PCR检测传染性胰脏坏死病病毒(IPNV)的方法。[方法]选取IPNV病毒的基因保守序列,利用Primer Express 2.0软件设计引物与探针。以梯度稀释的含有IPNV目的扩增片段的质粒作为标准品,探索定量RT-PCR反应条... [目的]建立Taqman探针荧光定量RT-PCR检测传染性胰脏坏死病病毒(IPNV)的方法。[方法]选取IPNV病毒的基因保守序列,利用Primer Express 2.0软件设计引物与探针。以梯度稀释的含有IPNV目的扩增片段的质粒作为标准品,探索定量RT-PCR反应条件。[结果]当标准品浓度在102～106 copies/μl之间时,标准品浓度(X)与Ct的关系为Ct=-3.426 lgX+4.481,相关系数R2为0.999 8。该法对病毒性出血性败血症病毒(VHSV)、传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)、鲤春病毒血症病毒(SVC)和流行性造血器官坏死病病毒(EHNV),草鱼呼肠孤病毒(GCRV),大鳞大麻哈鱼胚胎细胞(CHSE-214)和虹鳟的核酸都没有扩增反应。[结论]该检测方法灵敏度高,特异性好,可用于鱼类传染性胰脏坏死病病毒的快速定量检测。 展开更多

关键词 传染性胰脏坏死病病毒(ipnv) 荧光定量RT-PCR TAQMAN探针

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虹鳟鱼传染性胰脏坏死病病毒的分离与鉴定 被引量：11

9

作者 胡晓利 李伟 +1 位作者 肇慧君 吴斌 《中国动物检疫》 CAS 2012年第3期27-30,共4页

目的探讨传染性胰脏坏死病毒(IPNV)在虹鳟鱼中的存在与传播,为我国北方地区IPNV疫情动态监测和防控提供依据。方法从辽宁省某渔场中患传染性胰脏坏死病的虹鳟鱼中分离出1株优势毒株,对新分离出来的菌株进行培养增殖、感染试验及理化性... 目的探讨传染性胰脏坏死病毒(IPNV)在虹鳟鱼中的存在与传播,为我国北方地区IPNV疫情动态监测和防控提供依据。方法从辽宁省某渔场中患传染性胰脏坏死病的虹鳟鱼中分离出1株优势毒株,对新分离出来的菌株进行培养增殖、感染试验及理化性质的鉴定。结果新分离的IPNV在CHSE细胞上增殖良好,且可引起良好的病变,病毒滴度达10-8.5/0.1mL。分离毒对酸、碱和热均稳定,对乙醚不敏感,病毒的复制不被FUDR抑制。根据IPNV的保守基因N基因序列,设计特异性引物,结果扩增出224bp的片段。对该片段进行测序分析,发现与IPNV的参考序列有较高的相似性,表明该毒株为传染性胰脏坏死病毒。结论 IPNV已在北方虹鳟鱼中存在,可为我国北方IPNV疫情动态监测和防控提供依据。 展开更多

关键词 ipnv虹鳟鱼 分离 鉴定

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传染性胰腺坏死病病毒分离株VP2基因抗原表位区融合表达及免疫特性的分析 被引量：5

10

作者 王健楠 赵丽丽 +4 位作者 刘立月 连科迅 李一经 葛俊伟 刘敏 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1770-1775,共6页

利用RT-PCR方法扩增出IPNV-ZYX分离株主要结构蛋白VP2的抗原表位区基因(616bp),命名为IPNV VP2 COE,将其克隆到pCold TF表达载体中构建重组质粒pCold TF-VP2COE,在大肠杆菌BL21(DH5α)感受态表达,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白约78 ku,... 利用RT-PCR方法扩增出IPNV-ZYX分离株主要结构蛋白VP2的抗原表位区基因(616bp),命名为IPNV VP2 COE,将其克隆到pCold TF表达载体中构建重组质粒pCold TF-VP2COE,在大肠杆菌BL21(DH5α)感受态表达,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白约78 ku,用镍离子亲和层析柱纯化该蛋白,制备抗血清,间接ELISA结果显示,IPNV(ATCC VR-1318)细胞培养物与鼠抗VP2 COE蛋白血清发生特异性反应,效价为1∶12 800;间接免疫荧光结果显示,鼠抗VP2 COE血清可与黑龙江某渔场已知感染IPNV虹鳟肝组织产生特异性的荧光,以上两项结果表明,表达IPNV VP2 COE蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为IPNV检测方法的建立及疫苗的制备提供理论依据。 展开更多

关键词 ipnv-ZYX分离株 VP2 COE蛋白 原核表达 免疫特性

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传染性胰坏死病毒的生物学研究进展 被引量：2

11

作者 贺文斌 赵景壮 +2 位作者 卢彤岩 尹家胜 徐黎明 《水产学杂志》 CAS 2017年第6期1-6,共6页

传染性胰坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是一种危害多种水产动物的急性传染性疫病,能造成鲑鳟稚鱼大量死亡,造成世界范围内鲑鳟养殖业重大经济损失。IPN的病原为双链RNA病毒科(Birnaviridae)水生双链RNA病毒属(Aquabirnavi... 传染性胰坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是一种危害多种水产动物的急性传染性疫病,能造成鲑鳟稚鱼大量死亡,造成世界范围内鲑鳟养殖业重大经济损失。IPN的病原为双链RNA病毒科(Birnaviridae)水生双链RNA病毒属(Aquabirnavirus)的传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)。本文概述了该病原的基因组结构、生物学特征、诊断技术及免疫防治等研究进展,以期为IPN的防治提供参考。 展开更多

关键词 传染性胰坏死病毒(ipnv) 水生双链RNA病毒 基因型 血清型 鲑鳟

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一株虹鳟源传染性胰腺坏死病病毒的分离与鉴定 被引量：5

12

作者 熊权鑫 朱玲 +3 位作者 汪开毓 杨倩 贺扬 王二龙 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1132-1139,共8页

为明确引起四川石棉某养殖场饲养的虹鳟患病死亡的病原体,实验对自然发病虹鳟进行大体病变观察并对其病原体进行分离,通过人工感染实验及多重RT-PCR鉴定确定病原体WZ160509,并对病原体的主要结构蛋白VP2进行扩增分析,同时对病变组织进... 为明确引起四川石棉某养殖场饲养的虹鳟患病死亡的病原体,实验对自然发病虹鳟进行大体病变观察并对其病原体进行分离,通过人工感染实验及多重RT-PCR鉴定确定病原体WZ160509,并对病原体的主要结构蛋白VP2进行扩增分析,同时对病变组织进行组织病理学观察。结果显示,患病鱼主要临床症状表现为体表发黑,腹部膨大,挤压腹部可见肛门喷射淡黄色黏液便;剖检可见肝脏、肾脏苍白;肠道内无食物,内积黄色黏液。将患病虹鳟组织匀浆液无菌接种虹鳟鱼生殖腺细胞系(rainbow trout gonad cell line,RTG-2)细胞,盲传3代均出现典型的细胞病变。人工感染实验显示死亡率高达90%,并出现与自然患病鱼相同的症状。多重RT-PCR检测发现,自然发病鱼、人工感染鱼以及病变RTG-2细胞均为传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)阳性,其主要结构蛋白VP2基因与美国分离株基因组1型聚为一支,且同源性分析表明,WZ160509-VP2与IPNV-VP2(AY026345)的同源性最高,序列一致性为95.8%。组织病理学观察显示,患病鱼胰腺细胞空泡变性,坏死;肝细胞空泡变性,坏死;肾小球轻度炎症,毛细血管通透性增加,肾小囊腔内有红色絮状蛋白类物质渗出,肾小管上皮细胞空泡变性。研究表明,从该养殖场患病虹鳟中分离到的病毒为IPNV。 展开更多

关键词 虹鳟 传染性胰腺坏死病病毒(ipnv) 分离鉴定 组织病理学

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用酶联免疫吸附试验快速检测虹鳟的传染性胰脏坏死病病毒 被引量：15

13

作者 江育林 于平 李正秋 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第3期276-279,共4页

我国于1987年从进口的虹鳟中分离了传染性胰脏坏死病病毒(Infectious pancreatic necrosis virus简称IPNV),并进行了血清学鉴定。由于病鱼没有特有的临床症状,所以迅速查找鱼体内特异性的病毒是十分必要的。本文报道了用酶联免疫吸附试... 我国于1987年从进口的虹鳟中分离了传染性胰脏坏死病病毒(Infectious pancreatic necrosis virus简称IPNV),并进行了血清学鉴定。由于病鱼没有特有的临床症状,所以迅速查找鱼体内特异性的病毒是十分必要的。本文报道了用酶联免疫吸附试验(ELISA) 展开更多

关键词 虹鳟鱼 IPNN ELISA 鱼病

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传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的原核表达及抗原性分析 被引量：7

14

作者 赵丽丽 刘敏 +5 位作者 哈卓 刘巍巍 赵永欣 葛俊伟 乔薪瑗 李一经 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期604-610,共7页

应用RT-PCR方法扩增了IPNV编码内衣壳VP3蛋白的基因615bp,将VP3基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌BL21中得到了表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约30ku的VP3蛋白,与理论值相符,经薄层扫描分析表明目的... 应用RT-PCR方法扩增了IPNV编码内衣壳VP3蛋白的基因615bp,将VP3基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌BL21中得到了表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约30ku的VP3蛋白,与理论值相符,经薄层扫描分析表明目的蛋白表达量可占菌体总蛋白的30%。用镍离子亲和层析柱纯化可溶性的VP3蛋白,并制备抗血清。Western-blotting结果显示,VP3蛋白可被兔抗IPNV阳性血清识别;间接ELISA结果显示,IPNV细胞培养物作为抗原,兔抗VP3蛋白高免血清稀释度为1∶25600时,P/N>2,抗血清可与IPNV全病毒发生反应,以上两项结果说明,表达的VP3蛋白与天然的IPNVVP3蛋白一样具有相同的抗原性。试验利用原核表达系统成功地高效表达了IPNVVP3蛋白,融合蛋白以可溶性形式存在,并制备了高效价的抗血清。 展开更多

关键词 传染性胰腺坏死病毒 VP3基因 原核表达 抗血清

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传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白在干酪乳杆菌的表面表达 被引量：5

15

作者 刘敏 赵丽丽 +4 位作者 葛俊伟 乔薪瑗 刘巍巍 赵永欣 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期19-22,共4页

为获得传染性胰腺坏死病毒(IPNV)VP3蛋白在菌体表面表达,本研究将IPNV VP3基因定向插入乳酸杆菌表面表达型载体pPG1,构建的重组质粒pPG1-VP3电转化干酪乳杆菌,获得了重组干酪乳杆菌表达系统pPG1-VP3/Lactobacillus casei393。经1%糖诱... 为获得传染性胰腺坏死病毒(IPNV)VP3蛋白在菌体表面表达,本研究将IPNV VP3基因定向插入乳酸杆菌表面表达型载体pPG1,构建的重组质粒pPG1-VP3电转化干酪乳杆菌,获得了重组干酪乳杆菌表达系统pPG1-VP3/Lactobacillus casei393。经1%糖诱导表达后,SDS-PAGE和western blot检测表明,有约31ku蛋白得到了表达,其大小与理论值相符;诱导表达的菌体进行间接免疫荧光试验表明,重组蛋白在菌体表面获得了表达。该病毒VP3蛋白在乳酸菌的表面表达为进一步探讨传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白免疫原性及相关功能奠定了基础。 展开更多

关键词 传染性胰腺坏死病毒 VP3蛋白 干酪乳杆菌 表面表达

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传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统构建 被引量：3

16

作者 刘敏 赵丽丽 +5 位作者 葛俊伟 欧笛 王相清 刘弈 张伟 李一经 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2008年第5期30-34,共5页

根据传染性胰腺坏死病毒(IPNV)VP3蛋白的全基因序列,设计并合成引物,以IPNV(ATCC VR-1318)细胞培养毒提取的核酸为模板,对传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统进行了构建研究。结果显示:进行RT-PCR扩增得到截短的VP3基因约61... 根据传染性胰腺坏死病毒(IPNV)VP3蛋白的全基因序列,设计并合成引物,以IPNV(ATCC VR-1318)细胞培养毒提取的核酸为模板,对传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统进行了构建研究。结果显示:进行RT-PCR扩增得到截短的VP3基因约615 bp目的片段,将其克隆到pMD18-T Simple载体,经酶切、PCR扩增和序列测定后显示目的片段正确;将目的片段分别亚克隆到乳酸菌细胞表面表达型载体和分泌表达型载体,电转化于干酪乳杆菌,获得了阳性重组菌株。结果表明,通过本实验方法可构建表达传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统,为实现IPNV VP3蛋白在乳酸菌中的表达及免疫原性研究奠定了基础。 展开更多

关键词 传染性胰腺坏死病毒 VP3基因 干酪乳杆菌(Lactobacillus casei) 表达载体系统

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传染性胰脏坏死病毒逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)的研究 被引量：5

17

作者 吴斌 肇慧君 +1 位作者 李叶 胡晓利 《中国动物检疫》 CAS 2012年第9期46-48,共3页

本文针对IPNVA片段VP5基因和VP3基因分别设计了两对特异性引物,同时优化了反应体系和反应条件,建立了检测IPNV逆转录聚合酶链式反应法。并用优化好的反应条件对从人工感染的斑马病鱼中提取的核酸进行扩增,分别扩增出了224bp和206bp的目... 本文针对IPNVA片段VP5基因和VP3基因分别设计了两对特异性引物,同时优化了反应体系和反应条件,建立了检测IPNV逆转录聚合酶链式反应法。并用优化好的反应条件对从人工感染的斑马病鱼中提取的核酸进行扩增,分别扩增出了224bp和206bp的目的条带。 展开更多

关键词 传染性胰脏坏死病毒 逆转录PCR

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虹鳟(Salmo gairdneri)传染性胰脏坏死病的研究 被引量：2

18

作者 童裳亮 F.M.Hetrick 《青岛海洋大学学报（自然科学版）》 CSCD 1990年第2期119-122,共4页

1988年4月,山东省临朐县养殖的虹鳟暴发传染病,稚鱼死亡率在80％以上。用虹鳟脾细胞系RTS已分离出鱼病毒。用血清中和法已确认此病毒为“鱼传染性胰脏坏死病毒(IPNV-VR299)”。该病毒为双段双股RNA病毒,直径约60nm。

关键词 虹鳟 传染性胰脏坏死病毒

原文传递

传染性胰脏坏死病毒VP3抗血清的制备及应用 被引量：2

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作者 陈桂花 贺文斌 +5 位作者 徐黎明 赵景壮 任广明 邵轶智 段凯越 卢彤岩 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期573-579,共7页

为丰富传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreas necrosis virus,IPNV)的检测方法,以GenogroupⅠ型的IPNV ChRtm213分离株基因组RNA为模板,利用一步法RT-PCR扩增获得了编码IPNV VP3基因序列(711 bp),将其克隆至pET-32a原核表达载体,利... 为丰富传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreas necrosis virus,IPNV)的检测方法,以GenogroupⅠ型的IPNV ChRtm213分离株基因组RNA为模板,利用一步法RT-PCR扩增获得了编码IPNV VP3基因序列(711 bp),将其克隆至pET-32a原核表达载体,利用大肠杆菌Rosetta进行VP3蛋白表达,以纯化的VP3蛋白为免疫原制备鼠抗血清,利用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对抗血清效价进行测定,并利用间接免疫荧光抗体法(indirect immunofluorescent antibody test,IFAT)和中国不同地区的IPNV分离株,对抗血清识别中国现行IPNV分离株的能力进行免疫学鉴定。结果表明:SDS-PAGE分析显示,表达纯化的VP3蛋白条带单一,相对分子质量约为45000,与理论值相符;抗血清效价分析显示,所制备的鼠抗IPNV VP3血清与IPNV的反应效价为16000,与纯化的IPNV VP3蛋白的反应效价为32000;间接免疫荧光抗体法分析显示,制备的鼠抗血清能够特异性识别中国不同地区的GenogroupⅠ和GenogroupⅤIPNV分离株,且该血清不与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)发生交叉反应,具备较好的特异性。研究表明,本研究中利用原核表达系统表达的IPNV VP3蛋白具有良好的免疫原性,所制备的IPNV VP3抗血清能够特异性识别中国不同地区的IPNV分离株。 展开更多

关键词 传染性胰脏坏死病毒 蛋白表达 VP3蛋白 免疫原性

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传染性胰脏坏死病毒VP2蛋白酵母表面展示系统的建立 被引量：2

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作者 贺文斌 徐黎明 +4 位作者 赵景壮 刘淼 任广明 卢彤岩 尹家胜 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期662-667,共6页

为了将传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virous,IPNV)的主要保护性抗原及IPNV检测和疫苗开发的主要靶基因——VP2蛋白展示于酵母细胞表面,本研究中基于IPNV VP 2基因序列设计引物,以IPNV ChRtm213的RNA为模板进行PC... 为了将传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virous,IPNV)的主要保护性抗原及IPNV检测和疫苗开发的主要靶基因——VP2蛋白展示于酵母细胞表面,本研究中基于IPNV VP 2基因序列设计引物,以IPNV ChRtm213的RNA为模板进行PCR扩增,然后将扩增产物连接到酵母表面展示载体pYD1上构建了重组质粒pYD1-VP 2,将重组质粒转化至酵母EBY100感受态细胞中,得到含有重组质粒的酵母菌EBY100/pYD1-VP2,再向EBY100/pYD1-VP2中加入半乳糖进行VP2蛋白的诱导表达,并采用蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光技术对VP2蛋白的酵母表面展示情况进行了分析。结果表明:经半乳糖诱导后VP2蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;细胞免疫荧光分析显示,重组酵母诱导表达后出现特异性绿色荧光,并且在一定时间内荧光强度与诱导时间成正相关,诱导24、36、48 h组及对照组(48 h)各组之间荧光酵母比例有显著性差异(P<0.05)。研究表明,IPNV VP2蛋白已经被酵母细胞高效表达并且成功展示于酵母细胞表面,本研究结果可为IPNV口服活载体疫苗的研制奠定基础。 展开更多

关键词 传染性胰脏坏死病毒 VP2 酵母表面展示 细胞免疫荧光

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